結(jié)構(gòu)鑒定：采用實(shí)施例1相同ESI/MS/MS分析方法，檢測(cè)茶皂苷CSB中的皂 苷成分。經(jīng)和文獻(xiàn)報(bào)道已知物[李夏，油茶根化學(xué)成分研究（II)，蘇州大學(xué)碩士學(xué) 位論文，2014]水解產(chǎn)物對(duì)比，確定CSB中茶皂苷5a、5b、6a依次為16α，21β，22α， 28-四羥基齊墩果-12-烯-23-醛-3β-Ο-β-D-葡萄糖-(1 - 2)-α-L-吡喃阿拉伯 糖-(1 - 3)-[i3_D-半乳糖-(1 - 2)]-i3_D-葡萄糖醛酸苷（5a)、16a，21β，22α， 28-四羥基齊墩果-12-烯-23-醛-3β-Ο-β-D-木糖-(1 - 2)-a-L-吡喃阿拉伯 糖-(1 - 3)-[i3_D-半乳糖-(1 - 2)]-i3_D-葡萄糖醛酸苷（5b)、16a，21β，22α， 28-四羥基齊墩果-12-烯-23-醛-3β-0-a-L-吡喃鼠李糖-(1 - 2) -a-L-吡喃阿拉伯 糖-(1 - 3)-[i3_D-半乳糖-(1 - 2)]-i3_D-葡萄糖醛酸苷（6a)，CSB中皂苷5a、5b、6a含 量總和為42. 7%。
[0050] 實(shí)驗(yàn)例1:茶皂苷的抗炎作用考察
[0051] 選用實(shí)施例1茶皂苷CSB和化合物2a、實(shí)施例2組分M、實(shí)施例3組分B5進(jìn)行 抗炎實(shí)驗(yàn)。取20-25g小鼠80只，雌雄各半，分為CSB低/中/高劑量組（50、100、200mg/ kg)、皂苷2a組（100mg/kg)、組分Μ組（100mg/kg)、組分B5組（100mg/kg)、吲哚美辛對(duì)照 組（20mg/kg)和模型組8組，預(yù)灌胃給藥一周。最后一次灌藥2小時(shí)后，用二甲苯25微升 均勻涂于小鼠右耳，半小時(shí)后處死小鼠，用直徑6_打孔器，取小鼠的左右耳相同部位，用 分析天平稱重。取下的右耳減去左耳重量為腫脹度，計(jì)算對(duì)照組和給藥組的均值與標(biāo)準(zhǔn)差， t檢驗(yàn)比較組間差異顯著性。按下式求出腫脹抑制率：
[0052] 腫脹抑制率（％) =[1-給藥組平均腫脹度/模型組平均腫脹度]X 100%
[0053] 結(jié)果：CSB中 / 高劑量（100、200mg/kg)、皂苷 2a組（100mg/kg)、組分B4 組（100mg/ kg)、組分B5組（100mg/kg)對(duì)二甲苯所致小鼠耳廓急性炎癥均有抑制作用，腫脹抑制率依 次為 41. 2、73. 5、56. 4、6L3、64. 7(% )。
[0054] 實(shí)驗(yàn)例2 :茶皂苷的降血脂作用考察
[0055] 選用實(shí)施例1茶皂苷CSB和化合物2a、實(shí)施例2組分M、實(shí)施例3組分B5進(jìn)行降 血脂實(shí)驗(yàn)。取雄性昆明種小鼠100只，隨機(jī)分成二組，正常對(duì)照組10只和造模組90只。造 模組小鼠于每天上午灌服高脂乳劑0. 2ml/10g體重，正常對(duì)照組給予等體積的生理鹽水。 2周后，根據(jù)測(cè)得的TC水平再將造模組小鼠進(jìn)一步分為：CSB低/中/高劑量組（50、100、 200mg/kg)、阜苷 2a組（100mg/kg)、組分Μ組（100mg/kg)、組分B5 組（100mg/kg)、陽性藥 物非諾貝特組（40mg/kg)和模型組8組，每組10只，繼續(xù)給予高脂乳劑灌胃。各給藥物組小 鼠于每天下午分別灌服受試藥物，正常對(duì)照組和高脂模型組小鼠給予等量的〇. 5 %CMC-Na2 溶液灌服，連續(xù)6周。在給藥期間，每2周測(cè)定一次血清TC和TG水平，最后一次測(cè)定血中 下列各項(xiàng)觀察指標(biāo)：血清總膽固醇（TC)、甘油三酯（TG)、高密度脂蛋白（HDL-C)和LDL-C， 其中LDL-C按下列公式計(jì)算：LDL-C=TC-(TG/2. 2+HDL-C)。結(jié)果見表3。
[0056] 結(jié)果表明：茶皂苷對(duì)小鼠的掇食量和體重?zé)o明顯不良影響。從表3可以看出，和 高脂模型組相比，高劑量的CSB組、2a組、B4組、B5組均可顯著降低血清中TC、TG、HDL-C、 LDL-C水平，表明所述茶皂苷提取物均有調(diào)血脂作用。
[0057] 表3茶皂苷提取物對(duì)高脂小鼠血脂指標(biāo)的影響（η= 10)
[0058]
[0059] 注：與正常對(duì)照組相K#P<0. 05，##P< 0. 01 ;與高脂模型組相比樸< 0. 05，**P < 0. 01〇
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種式（I)所示的三萜皂苷類化合物：其藥學(xué)上可接受的鹽，其水合物，其藥物前體，或上述任一種的溶劑合物及其組合物， 特征在于其中=R1選自CHO、CH2OH或CH35R2選自H或OH ;R3選自a-L-吡喃阿拉伯糖、 β -D-吡喃木糖、a -L-吡喃鼠李糖、β -D-吡喃葡萄糖、β -D-吡喃半乳糖中的任意1-2個(gè) 糖基。2. 根據(jù)權(quán)利要求1的三萜皂苷類化合物及其組合物，特征在于其中R 3選自任意2個(gè)通 過（2 - 1)苷鍵連接的糖基。3. 根據(jù)權(quán)利要求1和2的三萜皂苷類化合物及其組合物的制備方法，包括以下步驟： (1) 選取山茶屬植物原料，采用水、醇或含水-醇混合溶媒進(jìn)行提取，濃縮，過濾，提 取液加適量水稀釋，過濾，上大孔樹脂柱進(jìn)行吸附，先用水洗，再用30-95 %乙醇洗脫，收集 30-95 %洗脫液，濃縮，干燥，得茶皂苷提取物CSA ; (2) 由（1)所得茶皂苷提取物CSA，溶解于pH 10-13溶液中，水解反應(yīng)2-8小時(shí)，用酸 調(diào)節(jié)pH至4-7,加適量水稀釋，上大孔樹脂柱，依次用水、10-40%乙醇、60-95%乙醇洗脫， 收集60-95 %乙醇洗脫液，濃縮，干燥，得茶皂苷提取物CSB ; (3) 由（2)所得茶皂苷提取物CSB，采用反相硅膠柱層析技術(shù)分離，得所述三萜皂苷化 合物及其組合物。4. 根據(jù)權(quán)利要求3的三萜皂苷類化合物及其組合物的制備方法，特征在于所述步驟 (1)中山茶屬植物選自茶、油茶、山茶、阿薩姆茶、茶梅中的任意一種，所述原料選自其種子、 花、葉、根的任意一個(gè)或多個(gè)部位。5. 根據(jù)權(quán)利要求4的三萜皂苷類化合物及其組合物的制備方法，特征在于所述步 驟⑴中山茶屬植物原料選自油茶種子，所述化合物中R 3選自：3-0-a-L-R比喃阿拉 伯糖-(2 - l)-i3-D-吡喃葡萄糖基，3-〇-i3-D-吡喃半乳糖-(2 - l)-i3-D-吡喃葡 萄糖基，3-0- β -D-吡喃半乳糖-(2 - 1) - β -D-吡喃半乳糖基，3-0- β -D-吡喃半乳 糖-(2 - I) - a -L-吡喃阿拉伯糖基，3-0- β -D-吡喃半乳糖-(2 - 1) - β -D-吡喃木糖基中 的任意一種寡糖基。6. 根據(jù)權(quán)利要求5的三萜皂苷類化合物及其組合物的制備方法，特征在于所述化合物 為油茶皂苷2a，其在CSB中含量大于10 %。7. 根據(jù)權(quán)利要求4的三萜皂苷類化合物及其組合物的制備方法，特征在于所述步驟 (1)中山茶屬植物原料選自油茶根，所述化合物為油茶皂苷4a和4b，二者在CSB中含量總 和大于20%。8. 根據(jù)權(quán)利要求4的三萜皂苷類化合物及其組合物的制備方法，特征在于所述步驟 (1)中山茶屬植物原料選自茶種子，所述化合物為茶皂苷5a、5b和5c，三者在CSB中含量總 和大于20%。9. 根據(jù)權(quán)利要求1至8的三萜皂苷類化合物及其組合物在制備抗炎保健食品或藥品中 的應(yīng)用。10. 根據(jù)權(quán)利要求1至8的三萜皂苷類化合物及其組合物在制備降血脂保健食品或藥 品中的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種如式(I)所示三萜皂苷類化合物及其制備方法，所述三萜皂苷類化合物主要制備步驟如下：選取山茶屬植物原料，采用水或醇-水混合溶劑提取，大孔樹脂柱富集獲得茶皂苷提取物CSA；CSA在pH10-13堿溶液中水解反應(yīng)，用酸中和后再經(jīng)大孔樹脂柱精制獲得茶皂苷提取物CSB；CSB采用反相硅膠柱層析技術(shù)分離，即得所述三萜皂苷化合物及其組合物。本發(fā)明同時(shí)公開了所述茶皂苷提取物在制備藥品和保健食品方面的應(yīng)用，特征在于所述茶皂苷提取物具有抗炎、降血脂等藥理作用。本發(fā)明所述茶皂苷有效成分明確、質(zhì)量穩(wěn)定可控，制備工藝簡潔、易于實(shí)現(xiàn)產(chǎn)業(yè)化放大，具有良好的應(yīng)用價(jià)值。
【IPC分類】A61K31/704, C07H1/08, A23L33/11, C07H15/256, A61P29/00, A61P3/06, C07J63/00
【公開號(hào)】CN105418723
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510896126
【發(fā)明人】劉江云, 王增尚, 陸昊, 許瓊明, 郝麗莉
【申請(qǐng)人】蘇州大學(xué)
【公開日】2016年3月23日
【申請(qǐng)日】2015年12月3日