一種影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及細(xì)胞工程技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物。
【背景技術(shù)】
[0002]紫杉醇(paclitaxel)是從紅豆杉科紅豆杉屬(Taxus)植物的樹(shù)皮中提取得到的二萜類(lèi)化合物。它是一種新型的微管穩(wěn)定劑，具有獨(dú)特抗癌活性，被美國(guó)國(guó)立癌癥研究所認(rèn)為是近15?20年來(lái)腫瘤化療的最重要的進(jìn)展。作為晚期卵巢癌的二線治療藥，至今已在40多個(gè)國(guó)家獲準(zhǔn)上市，并在乳腺癌、肺癌、白血病、胃腸道癌及介入治療后的血管再狹窄等治療上顯示了令人鼓舞的療效。紫杉醇由于資源匱乏和水溶性低的問(wèn)題而限制了它的臨床應(yīng)用。
[0003]紫杉醇及其類(lèi)似物迄今為止僅存在于裸子植物紅豆杉科的紅豆杉屬和澳洲紅豆杉屬中，紅豆杉屬植物全世界共有11種，廣泛分布于歐亞大陸和北美的寒帶、溫帶及亞熱帶地區(qū)，但分布零散且生長(zhǎng)緩慢。澳洲紅豆杉屬僅分布于南半球，數(shù)量稀少，紫杉醇在紅豆杉植物中含量普遍很低，即使當(dāng)前公認(rèn)含量最高的短葉紅豆杉樹(shù)皮中也不到0.1%。
[0004]如果直接通過(guò)植物組織提取紫杉醇，則需要大量的紅豆杉樹(shù)木實(shí)體，其種植周期和種植成本過(guò)高；若采取組織培養(yǎng)的方式，雖然可以適當(dāng)降低成本，但由于紫杉醇在紅豆杉樹(shù)木不同細(xì)胞中的分布不均勻，因此其產(chǎn)率較低。如果能直接針對(duì)高產(chǎn)紫杉醇的紅豆杉細(xì)胞系進(jìn)行純培養(yǎng)，則有可能提升紫杉醇的生產(chǎn)效率。為實(shí)現(xiàn)紫杉醇的高產(chǎn)率，僅僅提升細(xì)胞培養(yǎng)密度是不夠的，紫杉醇分泌量的提升往往低于生物量的提升，因此應(yīng)當(dāng)依據(jù)細(xì)胞自身特性匹配適宜的培養(yǎng)條件，以促進(jìn)其定向分泌紫杉醇。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明旨在針對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的技術(shù)缺陷，提供一種影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，以解決紅豆杉細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中紫杉醇分泌量較低的技術(shù)問(wèn)題。
[0006]為實(shí)現(xiàn)以上技術(shù)目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案:
[0007]—種影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，包括以下重量份的成分:花生四烯酸8?10份，氯化鈉4?6份，亞硝酸鈉2?3份，吲哚丁酸1?2份，6-芐基腺嘌呤1?2份，激動(dòng)素1?2份，乙二胺四乙酸1?2份，玉米素1?2份，氯化鈣1?2份，乙酸乙酯1?2份，水50?60份。
[0008]作為優(yōu)選，還包括1?2重量份的蜂蠟。
[0009]作為優(yōu)選，還包括1?2重量份的羧甲基纖維素鈉。
[0010]作為優(yōu)選，還包括1?2重量份的白藜蘆醇。
[0011]作為優(yōu)選，還包括1?2重量份的麥芽糖。
[0012]作為優(yōu)選，所述組合物由以下重量份的成分組成:花生四烯酸9份，氯化鈉5份，亞硝酸鈉2.5份，吲哚丁酸1.5份，6-芐基腺嘌呤1.5份，激動(dòng)素1.5份，乙二胺四乙酸1.5份，玉米素1.5份，氯化鈣1.5份，乙酸乙酯1.5份，水55份。
[0013]作為優(yōu)選，所述組合物由以下重量份的成分組成:花生四烯酸8.5份，氯化鈉5.5份，亞硝酸鈉2.1份，吲哚丁酸1.3份，6-芐基腺嘌呤1.7份，激動(dòng)素1.6份，乙二胺四乙酸1.2份，玉米素1.1份，氯化鈣1.4份，乙酸乙酯1.5份，蜂蠟1.4份，羧甲基纖維素鈉1.1份，白藜蘆醇1.5份，麥芽糖1.8份，水57份。
[0014]本發(fā)明提供的組合物，用于促進(jìn)紅豆杉細(xì)胞定向分泌紫杉醇，其使用方法是直接添加至細(xì)胞培養(yǎng)液中，可以在培養(yǎng)開(kāi)始階段添加也可以在細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)穩(wěn)定期后添加。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，添加本發(fā)明組合物后雖然不會(huì)直接提升細(xì)胞培養(yǎng)密度，但是同等生物量的細(xì)胞培養(yǎng)液中紫杉醇產(chǎn)率顯著提升，這表明本發(fā)明組合物對(duì)紅豆杉細(xì)胞代謝特性產(chǎn)生了一定的影響。本發(fā)明以創(chuàng)新性的技術(shù)手段實(shí)現(xiàn)了突出的技術(shù)效果，通過(guò)本發(fā)明的組合物有望全面提升紫杉醇的規(guī)?；a(chǎn)現(xiàn)狀，帶來(lái)廣闊的應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】
[0015]以下將對(duì)本發(fā)明的【具體實(shí)施方式】進(jìn)行詳細(xì)描述。為了避免過(guò)多不必要的細(xì)節(jié)，在以下實(shí)施例中對(duì)屬于公知的結(jié)構(gòu)或功能將不進(jìn)行詳細(xì)描述。除有定義外，以下實(shí)施例中所用的技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有與本發(fā)明所屬領(lǐng)域技術(shù)人員普遍理解的相同含義。
[0016]實(shí)施例1
[0017]—種影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，由以下重量份的成分組成:花生四烯酸8份，氯化鈉4份，亞硝酸鈉2份，卩引哚丁酸1份，6-芐基腺嘌呤1份，激動(dòng)素1份，乙二胺四乙酸1份，玉米素1份，氯化鈣1份，乙酸乙酯1份，水50份。
[0018]實(shí)施例2
[0019]—種影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，由以下重量份的成分組成:花生四烯酸10份，氯化鈉6份，亞硝酸鈉3份，卩引哚丁酸2份，6-芐基腺嘌呤2份，激動(dòng)素2份，乙二胺四乙酸2份，玉米素2份，氯化鈣2份，乙酸乙酯2份，水60份。
[0020]實(shí)施例3
[0021]—種影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，由以下重量份的成分組成:花生四烯酸9份，氯化鈉5份，亞硝酸鈉2.3份，吲哚丁酸1.8份，6-芐基腺嘌呤1.5份，激動(dòng)素1.6份，乙二胺四乙酸1.7份，玉米素1.8份，氯化鈣1.2份，乙酸乙酯1.8份，水55份。
[0022]實(shí)施例4
[0023]—種影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，由以下重量份的成分組成:花生四烯酸
8.8份，氯化鈉5.4份，亞硝酸鈉2.7份，吲哚丁酸1.2份，6-芐基腺嘌呤1.2份，激動(dòng)素1.2份，乙二胺四乙酸1.5份，玉米素1.6份，氯化鈣1.4份，乙酸乙酯1.7份，蜂蠟1份，麥芽糖
1.1份，水52份。
[0024]實(shí)施例5
[0025]—種影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，由以下重量份的成分組成:花生四烯酸
9.4份，氯化鈉4.2份，亞硝酸鈉2.1份，吲哚丁酸1.3份，6-芐基腺嘌呤1.1份，激動(dòng)素1份，乙二胺四乙酸2份，玉米素1.9份，氯化鈣1.2份，乙酸乙酯1.9份，羧甲基纖維素鈉1.3份，白藜蘆醇1.2份，麥芽糖1.6份，水58份。
[0026]實(shí)施例6
[0027]—種影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，由以下重量份的成分組成:花生四烯酸8.8份，氯化鈉5.4份，亞硝酸鈉2.7份，吲哚丁酸1.2份，6-芐基腺嘌呤1.2份，激動(dòng)素1.2份，乙二胺四乙酸1.5份，玉米素1.6份，氯化鈣1.4份，乙酸乙酯1.7份，蜂蠟1.5份，水55份。
[0028]實(shí)施例7
[0029]—種影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，由以下重量份的成分組成:花生四烯酸
9.2份，氯化鈉5.7份，亞硝酸鈉2.4份，吲哚丁酸1.5份，6-芐基腺嘌呤1.5份，激動(dòng)素1.7份，乙二胺四乙酸1.7份，玉米素1.2份，氯化鈣1.9份，乙酸乙酯2份，白藜蘆醇1.8份，水59份。
[0030]實(shí)施例8
[0031]—種影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，由以下重量份的成分組成:花生四烯酸
8.5份，氯化鈉5.5份，亞硝酸鈉2.1份，吲哚丁酸1.3份，6-芐基腺嘌呤1.7份，激動(dòng)素1.6份，乙二胺四乙酸1.2份，玉米素1.1份，氯化鈣1.4份，乙酸乙酯1.5份，蜂蠟1.4份，羧甲基纖維素鈉1.1份，白藜蘆醇1.5份，麥芽糖1.8份，水57份。
[0032]以上對(duì)本發(fā)明的實(shí)施例進(jìn)行了詳細(xì)說(shuō)明，但所述內(nèi)容僅為本發(fā)明的較佳實(shí)施例，并不用以限制本發(fā)明。凡在本發(fā)明的申請(qǐng)范圍內(nèi)所做的任何修改、等同替換和改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，其特征在于包括以下重量份的成分:花生四烯酸8?10份，氯化鈉4?6份，亞硝酸鈉2?3份，吲哚丁酸1?2份，6-芐基腺嘌呤1?2份，激動(dòng)素1?2份，乙二胺四乙酸1?2份，玉米素1?2份，氯化鈣1?2份，乙酸乙酯1?2份，水50?60份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，其特征在于還包括1?2重量份的蜂蠟。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，其特征在于還包括1?2重量份的羧甲基纖維素鈉。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，其特征在于還包括1?2重量份的白藜蘆醇。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，其特征在于還包括1?2重量份的麥芽糖。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，其特征在于所述組合物由以下重量份的成分組成:花生四烯酸9份，氯化鈉5份，亞硝酸鈉2.5份，吲哚丁酸1.5份，6-芐基腺嘌呤1.5份，激動(dòng)素1.5份，乙二胺四乙酸1.5份，玉米素1.5份，氯化鈣1.5份，乙酸乙酯1.5份，水55份。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，其特征在于所述組合物由以下重量份的成分組成:花生四烯酸8.5份，氯化鈉5.5份，亞硝酸鈉2.1份，吲哚丁酸1.3份，6-芐基腺嘌呤1.7份，激動(dòng)素1.6份，乙二胺四乙酸1.2份，玉米素1.1份，氯化鈣1.4份，乙酸乙酯1.5份，蜂蠟1.4份，羧甲基纖維素鈉1.1份，白藜蘆醇1.5份，麥芽糖1.8份，水57份。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種影響植物細(xì)胞代謝調(diào)控的組合物，該組合物優(yōu)選了激動(dòng)素、氯化鈉、亞硝酸鈉、吲哚丁酸、6-芐基腺嘌呤、激動(dòng)素、乙二胺四乙酸、玉米素、氯化鈣、乙酸乙酯等成分并對(duì)其用量配比進(jìn)行了合理化設(shè)計(jì)，其使用方法是直接添加至細(xì)胞培養(yǎng)液中，可以在培養(yǎng)開(kāi)始階段添加也可以在細(xì)胞進(jìn)入培養(yǎng)穩(wěn)定期后添加。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，添加本發(fā)明組合物后雖然不會(huì)直接提升細(xì)胞培養(yǎng)密度，但是同等生物量的細(xì)胞培養(yǎng)液中紫杉醇產(chǎn)率顯著提升，這表明本發(fā)明組合物對(duì)紅豆杉細(xì)胞代謝特性產(chǎn)生了一定的影響。本發(fā)明以創(chuàng)新性的技術(shù)手段實(shí)現(xiàn)了突出的技術(shù)效果，通過(guò)本發(fā)明的組合物有望全面提升紫杉醇的規(guī)?；a(chǎn)現(xiàn)狀，帶來(lái)廣闊的應(yīng)用前景。
【IPC分類(lèi)】C12P17/02, C12N5/04
【公開(kāi)號(hào)】CN105420178
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510969066
【發(fā)明人】夏雪城, 裘先臨
【申請(qǐng)人】天津市博愛(ài)生物藥業(yè)有限公司
【公開(kāi)日】2016年3月23日
【申請(qǐng)日】2015年12月18日