一種磷脂酸的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于磷脂技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種磷脂酸的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]磷脂酸(PA )是一種簡單的磷脂，是動植物細胞膜、核膜、質(zhì)體膜的基本成分，是生命的基礎(chǔ)物質(zhì)。脂酸是一種酸性磷脂，是由甘油基、脂肪酸基團、磷酸基組成。脂肪酸基團常為棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸、亞麻酸、花生四烯酸等。從化學(xué)結(jié)構(gòu)上看，PA為兩性化合物，脂肪酸基團的一端具有強的親油性，而磷酸基團的一端具有強的親水性。磷脂酸在生物體內(nèi)含量雖然很少，但卻是甘油酯和大多數(shù)磷脂的合成的中間體，同時磷脂酸是細胞內(nèi)重要的第二信使。磷脂酸廣泛應(yīng)用于在食品、藥品、化妝品中。
[0003]現(xiàn)有關(guān)于磷脂酸的制備方法比較多，有薄層色譜分離、溶劑提取、酶轉(zhuǎn)化以及化學(xué)合成等方法。薄層色譜分離、溶劑提取、酶轉(zhuǎn)化法等均以天然磷脂為原料，天然磷脂主要從大豆、花生、葵花子、油菜籽、紅化籽、芥籽、芝麻仁、橄欖仁、玉米、棉籽等提取，或是從蛋黃提取。上述現(xiàn)有的方法普遍存在制備量少，工藝繁瑣，成本高等缺點。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種磷脂酸的制備方法，該制備方法工藝簡潔、能耗和成本較低，易于實現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)，且可大量制備磷脂酸。
[0005]本發(fā)明的上述目的是通過采取如下技術(shù)手段來實現(xiàn)的:一種磷脂酸的制備方法，包括以下步驟:取粗卵磷脂溶于有機溶劑中制成粗卵磷脂溶液，取磷脂酶D制成磷脂酶D水溶液，將粗卵磷脂溶液與磷脂酶D水溶液混合進行酶催化反應(yīng)，反應(yīng)完畢分離出有機相，將有機相濃縮干，得濃縮物，將濃縮物采用萃取劑萃取并低溫沉淀，保溫后取萃取劑不溶物濃縮干后過層析柱，采用洗脫溶劑洗脫后將洗脫液干燥，即獲得較高純度的磷脂酸。
[0006]在上述磷脂酸的制備方法中:
本發(fā)明所述的粗卵磷脂的來源優(yōu)選為大豆粗卵磷脂或葵花籽粗卵磷脂，所述的粗卵磷脂中磷脂酰膽堿含量不低于10%。
[0007]本發(fā)明所述的有機溶劑優(yōu)選為乙酸乙酯、乙酸丁酯或正己烷；所述的粗卵磷脂溶液的濃度優(yōu)選為100~200g/L。
[0008]本發(fā)明所述的磷脂酶D水溶液中磷脂酶D的酶活優(yōu)選為4~5U/mL，其pH優(yōu)選為5.6?6.5o
[0009]本發(fā)明所述的粗卵磷脂溶液與所述的磷脂酶D水溶液的體積比優(yōu)選為1~4:1。
[0010]本發(fā)明酶催化反應(yīng)的溫度優(yōu)選為30~37°C，時間優(yōu)選為30~40小時。
[0011]本發(fā)明所述的萃取劑優(yōu)選為甲醇，其體積百分含量優(yōu)選為90~95%，甲醇的用量優(yōu)選為粗卵磷脂總質(zhì)量的5~10倍，體積質(zhì)量比。
[0012]本發(fā)明萃取時的溫度優(yōu)選為40~50°C，萃取時間優(yōu)選為3~5小時；低溫沉淀時的溫度優(yōu)選為_10~5°C，保溫時間優(yōu)選為8~16小時。
[0013]本發(fā)明所述的層析柱為硅膠層析柱，硅膠與萃取劑不溶物的質(zhì)量份配比優(yōu)選為10-20:1，所述硅膠的目數(shù)優(yōu)選為200~300目。
[0014]本發(fā)明所述的洗脫溶劑優(yōu)選為正己烷、環(huán)己烷或二氯甲烷。
[0015]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果:
(1)本發(fā)明所用的原料為大豆粗卵磷脂或葵花籽粗卵磷脂，因磷脂酰膽堿含量較低而價格低廉；
(2)本發(fā)明整體工藝簡潔，能耗和成本較低，易于實現(xiàn)規(guī)?；I(yè)化，制得的磷脂酸含量60%以上，純度較高，對我國磷脂工業(yè)，保健食品以及藥品工業(yè)都將具有重要意義。
【具體實施方式】
[0016]以下實施例僅用于闡述本發(fā)明，而本發(fā)明的保護范圍并非僅僅局限于以下實施例。所述技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員依據(jù)以上本發(fā)明公開的內(nèi)容和各參數(shù)所取范圍，均可實現(xiàn)本發(fā)明的目的。
[0017]實施例1
取100g粗大豆卵磷脂原料(磷脂酰膽堿含量為10%)，加入1000mL乙酸丁酯中攪拌溶解，再配置含酶水溶液1000mL，其中酶液中磷脂酶D的酶活為4U/mL，調(diào)節(jié)pH為5.6?；旌嫌袡C相和水相，于37°C反應(yīng)30小時。反應(yīng)完畢分離出有機相，50°C減壓脫去有機溶劑得到85克濃縮物。濃縮物用500mL 90%甲醇40°C溶解攪拌3小時，隨后冷卻至_10°C，保溫8小時后分出不溶物，不溶物減壓干燥得到甲醇不溶物60克。甲醇不溶物通過600克200目硅膠柱分離純化，使用正己烷為洗脫劑，TLC追蹤監(jiān)測至洗脫液不含磷脂酸為止，合并洗脫液，正己烷洗脫液干燥即制得磷脂酸產(chǎn)品18g，經(jīng)過HPLC檢測磷脂酸含量約為65%。
[0018]實施例2
200g粗葵花籽卵磷脂原料(磷脂酰膽堿含量為15%)，加入1000mL乙酸丁酯中攪拌溶解，再配置含酶水溶液1000mL，其中酶液中磷脂酶D的酶活為5U/mL，調(diào)節(jié)pH為6.5。混合有機相和水相，于30°C反應(yīng)40小時。反應(yīng)完畢分離出有機相，50°C減壓脫去有機溶劑得到178克濃縮物。濃縮物用2000mL95%甲醇48°C溶解攪拌4小時，隨后冷卻至_10°C，保溫16小時后分出不溶物，不溶物減壓干燥得到甲醇不溶物128克。甲醇不溶物通過2600克300目硅膠柱分離純化，使用正己烷為洗脫機，TLC追蹤監(jiān)測至洗脫液不含磷脂酸為止，合并洗脫液，環(huán)己烷洗脫液干燥即制得磷脂酸產(chǎn)品37g，經(jīng)過HPLC檢測磷脂酸含量約為67%。
[0019]實施例3
100g粗大豆卵磷脂原料(磷脂酰膽堿含量為16%)，加入1000mL乙酸乙酯中攪拌溶解，再配置含酶水溶液500mL，其中酶液中磷脂酶D的酶活為4U/mL，調(diào)節(jié)pH為5.6?；旌嫌袡C相和水相，于37°C反應(yīng)30小時。反應(yīng)完畢分離出有機相，50°C減壓脫去有機溶劑得到87克濃縮物。濃縮物用700mL95%甲醇45°C溶解攪拌3.5小時，隨后冷卻至0°C，保溫12小時后分出不溶物，不溶物減壓干燥得到甲醇不溶物70克。甲醇不溶物通過1050克200目硅膠柱分離純化，使用正己烷為洗脫機，TLC追蹤監(jiān)測至洗脫液不含磷脂酸為止，合并洗脫液，正己烷洗脫液干燥即制得磷脂酸產(chǎn)品20g，經(jīng)過HPLC檢測磷脂酸含量約為62%。
[0020]實施例4
150g粗大豆卵磷脂原料(磷脂酰膽堿含量為18%)，加入1000mL正己烷中攪拌溶解，再配置含酶水溶液300mL，其中酶液中磷脂酶D的酶活為4.5U/mL，調(diào)節(jié)pH為5.8。混合有機相和水相，于35°C反應(yīng)30小時。反應(yīng)完畢分離出有機相，50°C減壓脫去有機溶劑得到90克濃縮物。濃縮物用800mL92%甲醇50°C溶解攪拌5小時，隨后冷卻至_10°C，保溫10小時后分出不溶物，不溶物減壓干燥得到甲醇不溶物69克。甲醇不溶物通過1400克300目娃膠柱分離純化，使用正己烷為洗脫機，TLC追蹤監(jiān)測至洗脫液不含磷脂酸為止，合并洗脫液，二氯甲烷洗脫液干燥即制得磷脂酸產(chǎn)品21g，經(jīng)過HPLC檢測磷脂酸含量約為65%。
[0021]實施例5
100g粗葵花籽卵磷脂原料(磷脂酰膽堿含量為19%)，加入1000mL乙酸丁酯中攪拌溶解，再配置含酶水溶液250mL，其中酶液中磷脂酶D的酶活為5U/mL，調(diào)節(jié)pH為5.9?；旌嫌袡C相和水相，于35°C反應(yīng)35小時。反應(yīng)完畢分離出有機相，50°C減壓脫去有機溶劑得到92克濃縮物。濃縮物用900mL95%甲醇42°C溶解攪拌3小時，隨后冷卻至5°C，保溫10小時后分出不溶物，不溶物減壓干燥得到甲醇不溶物80克。甲醇不溶物通過1500克300目娃膠柱分離純化，使用環(huán)己烷為洗脫機，TLC追蹤監(jiān)測至洗脫液不含磷脂酸為止，合并洗脫液，環(huán)己烷洗脫液干燥即制得磷脂酸產(chǎn)品20g，經(jīng)過HPLC檢測磷脂酸含量約為63%。
【主權(quán)項】
1.一種磷脂酸的制備方法，其特征是包括以下步驟:取粗卵磷脂溶于有機溶劑中制成粗卵磷脂溶液，取磷脂酶D制成磷脂酶D水溶液，將粗卵磷脂溶液與磷脂酶D水溶液混合進行酶催化反應(yīng)，反應(yīng)完畢分離出有機相，將有機相濃縮干，得濃縮物，將濃縮物采用萃取劑萃取并低溫沉淀，保溫后取萃取劑不溶物濃縮干后過層析柱，采用洗脫溶劑洗脫后將洗脫液干燥，即獲得較高純度的磷脂酸。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:所述的粗卵磷脂的來源為大豆粗卵磷脂或葵花籽粗卵磷脂，所述的粗卵磷脂中磷脂酰膽堿含量不低于10%。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:所述的有機溶劑為乙酸乙酯、乙酸丁酯或正己烷；所述的粗卵磷脂溶液的濃度為100~200g/L。4.根據(jù)權(quán)利要求1或3所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:所述的磷脂酶D水溶液中磷脂酶D的酶活為4~5U/mL，其pH為5.6-6.5。5.根據(jù)權(quán)利要求1、3或4所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:所述的粗卵磷脂溶液與所述的磷脂酶D水溶液的體積比為1~4:1。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:酶催化反應(yīng)的溫度為30-37°C，時間為30~40小時。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:所述的萃取劑為甲醇，其體積百分含量為90~95%，甲醇的用量為粗卵磷脂總質(zhì)量的5~10倍，體積質(zhì)量比。8.根據(jù)權(quán)利要求1或7所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:萃取時的溫度為40~50°C，萃取時間為3~5小時；低溫沉淀時的溫度為_10~5°C，保溫時間為8~16小時。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:所述的層析柱為硅膠層析柱，硅膠與萃取劑不溶物的質(zhì)量份配比為10~20:1，所述硅膠的目數(shù)為200~300目。10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的磷脂酸的制備方法，其特征是:所述的洗脫溶劑為正己烷、環(huán)己烷或二氯甲烷。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種磷脂酸的制備方法，包括以下步驟：取粗卵磷脂溶于有機溶劑中制成粗卵磷脂溶液，取磷脂酶D制成磷脂酶D水溶液，將粗卵磷脂溶液與磷脂酶D水溶液混合進行酶催化反應(yīng)，反應(yīng)完畢分離出有機相，將有機相濃縮干，得濃縮物，將濃縮物采用萃取劑萃取并低溫沉淀，保溫后取萃取劑不溶物濃縮干后過層析柱，采用洗脫溶劑洗脫后將洗脫液干燥，即獲得較高純度的磷脂酸。本發(fā)明所用的原料為大豆粗卵磷脂或葵花籽粗卵磷脂，因磷脂酰膽堿含量較低而價格低廉；該方法整體工藝簡潔，能耗和成本較低，易于實現(xiàn)規(guī)?；I(yè)化，制得的磷脂酸含量60%以上，純度較高，對我國磷脂工業(yè)，保健食品以及藥品工業(yè)都將具有重要意義。
【IPC分類】C12P9/00
【公開號】CN105420301
【申請?zhí)枴緾N201510773773
【發(fā)明人】杜陽吉, 梁麗敏, 劉春鳳, 衛(wèi)娜
【申請人】廣東省食品工業(yè)研究所
【公開日】2016年3月23日
【申請日】2015年11月13日