一種硫酸魚(yú)精蛋白的制備方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領(lǐng)域，其涉及一種硫酸魚(yú)精蛋白的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]硫酸魚(yú)精蛋白具有廣譜抗菌活性，是一種天然防腐劑。目前，硫酸魚(yú)精蛋白在臨床醫(yī)學(xué)上有重要的作用，且應(yīng)用于制藥行業(yè)已有多年。從魚(yú)類精巢提取的魚(yú)精蛋白硫酸鹽是體外循環(huán)心臟手術(shù)中唯一對(duì)抗肝素鈉的藥物，能抵消肝素鈉或人工合成抗凝血?jiǎng)┑目鼓饔?，在臨床上可用作這些抗凝血?jiǎng)┑慕舛緞?br>[0003]硫酸魚(yú)精蛋白是一種多聚陽(yáng)離子天然肽類，是一種堿性蛋白質(zhì)，主要在魚(yú)類成熟精子細(xì)胞核中作為和DNA結(jié)合的核精蛋白存在。核蛋白結(jié)合鍵不牢固，所以現(xiàn)有的提取技術(shù)通常采用硫酸使其與核酸分離，制得魚(yú)精蛋白的硫酸鹽，即硫酸魚(yú)精蛋白，后采用有機(jī)溶劑進(jìn)行純化。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種利用硫酸提取、有機(jī)溶劑純化與鹽解相結(jié)合的對(duì)硫酸魚(yú)精蛋白進(jìn)行制備的方法，該方法克服了硫酸魚(yú)精蛋白生產(chǎn)周期長(zhǎng)、乙醇用量大、活性收率低等不足。
[0005]本發(fā)明采用的技術(shù)方案如下:
一種硫酸魚(yú)精蛋白的制備方法，包括以下步驟:
(1)預(yù)處理:取解凍的鋳魚(yú)魚(yú)精置于搗碎機(jī)中搗碎，加入NaCl緩沖液，用6層紗布過(guò)濾得漿液。5000-8000 r/min離心20-30分鐘，除去上清液，收集沉淀；
(2)提取:向沉淀中加入硫酸進(jìn)行提取。過(guò)濾，收集濾液；
(3 )鹽解:在濾液中加入NaCl溶液，攪拌1 -2小時(shí)。過(guò)濾，收集沉淀。加入5_6倍量的水，復(fù)溶；
(4 )用乙醇進(jìn)行沉淀、脫水、干燥。
[0006]本次技術(shù)方案中，步驟(1)預(yù)處理中，NaCl緩沖液的濃度為70-80 mmol/L;NaCl緩沖液中含有20-30 mmol/L乙二胺四乙酸二鈉及0.5 -1.0 mmol/L氫氧化鈉，且pH在7.5-9.0之間；可有效去除鋳魚(yú)魚(yú)精中的脂肪等雜質(zhì)。
[0007]本技術(shù)方案中，步驟(2)中硫酸溶液濃度為1%_3%;硫酸溶液用量為樣品量的2-3倍;提取時(shí)間為0.5-1小時(shí);提取次數(shù)為2-3次;提取溫度為50-60°C ；可使提取效率及提取量得到提高。
[0008]本技術(shù)方案中，步驟(3)中所加NaCl溶液的濃度為20%_30%;NaCl溶液用量為樣品溶液的2-3倍?？捎行У柠}解魚(yú)精蛋白中去除其他蛋白的影響。
[0009]本發(fā)明的有益效果為通過(guò)采用硫酸提取、有機(jī)溶劑純化與氯化鈉鹽解相結(jié)合的方式對(duì)魚(yú)精蛋白進(jìn)行提取，降低生產(chǎn)成本的同時(shí)縮短了生產(chǎn)周期，且產(chǎn)品純度高，活性收率尚ο
【具體實(shí)施方式】
[0010]下面對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說(shuō)明:
(1)取解凍的鋳魚(yú)魚(yú)精100g置于搗碎機(jī)中搗碎，加入NaCl緩沖液300 mL，勻漿2次，每次30分鐘。用6層紗布過(guò)濾得漿液。5000 r/min離心20分鐘，除去上清液，收集沉淀；
(2)向沉淀中加入3%的硫酸溶液100mL在60°C下提取1小時(shí)。過(guò)濾，收集濾液，將沉淀再加80mL在60°C下硫酸溶液提取0.5小時(shí)，過(guò)濾，合并濾液。
[0011](3)在濾液中加入30%的NaCl溶液300mL，攪拌1小時(shí)。過(guò)濾，收集沉淀。加入500mL水，復(fù)溶；
(4)用95%乙醇進(jìn)行沉淀，使得乙醇度為60%左右，脫水、干燥，得硫酸魚(yú)精蛋白。
[0012]對(duì)提取的硫酸魚(yú)精蛋白進(jìn)行分析，得收率為85.6%，其中蛋白質(zhì)含量達(dá)91%，且喊性氨基酸含量較高，為28.2%，約占所測(cè)氨基酸總量的1/3。
[0013]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種硫酸魚(yú)精蛋白的制備方法，其特征包括如下步驟: (1)預(yù)處理:取解凍的鋳魚(yú)魚(yú)精置于搗碎機(jī)中搗碎，加入NaCl緩沖液，用6層紗布過(guò)濾得漿液，5000-8000 r/min離心20-30分鐘，除去上清液，收集沉淀； (2 )提取:向沉淀中加入硫酸進(jìn)行提取;過(guò)濾，收集濾液； (3)鹽解:在濾液中加入NaCl溶液，攪拌1-2小時(shí);過(guò)濾，收集沉淀;加入5_6倍量的純水，復(fù)溶； (4 )用乙醇進(jìn)行沉淀、脫水、干燥。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述步驟，其特征在于:步驟(1)中NaCl緩沖液的濃度為70-80mmol/L;NaCl緩沖液中含有20-30 mmol/L乙二胺四乙酸二鈉及0.5-1.0 mmol/L氫氧化鈉，且pH在7.5-9.0之間；離心轉(zhuǎn)速為5000-8000 r/min，離心時(shí)間為20-30分鐘。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述步驟，其特征在于:步驟(2)中硫酸溶液濃度為1%-3%;硫酸溶液用量為樣品量的2-3倍;提取時(shí)間為0.5-1小時(shí);提取次數(shù)為2-3次;提取溫度為50-60°C。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述步驟，其特征在于:步驟(3)中所加NaCl溶液的濃度為20%-30%;NaCl溶液用量為樣品溶液的2-3倍。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述步驟，其特征在于:步驟(4)中所用乙醇的量為使得沉淀后的乙醇度為50%_70%，沉淀5-7小時(shí)。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種硫酸魚(yú)精蛋白的制備方法，包括（1）預(yù)處理：取解凍的鱘魚(yú)魚(yú)精置于搗碎機(jī)中搗碎，加入NaCl緩沖液溶解，用紗布過(guò)濾得漿液，5000-8000r/min離心20-30分鐘，除去上清液，收集沉淀；（2）提?。合虺恋碇屑尤肓蛩徇M(jìn)行提取。過(guò)濾，收集濾液；（3）鹽解：在濾液中加入NaCl溶液，攪拌1-2小時(shí)，微濾，收集沉淀，加入5-6倍量的純水，復(fù)溶；（4）用乙醇進(jìn)行沉淀、脫水、干燥。
【IPC分類】C07K1/12, C07K1/30
【公開(kāi)號(hào)】CN105440100
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510880057
【發(fā)明人】劉冠男, 江崇云, 遲培升
【申請(qǐng)人】青島九龍生物醫(yī)藥有限公司
【公開(kāi)日】2016年3月30日
【申請(qǐng)日】2015年12月6日