低溫季節(jié)利用恒溫水浴鍋培養(yǎng)紫海膽幼體餌料微藻的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于水產(chǎn)養(yǎng)殖領(lǐng)域，尤其涉及一種低溫季節(jié)利用恒溫水浴鍋培養(yǎng)紫海膽幼體餌料微藻的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]海膽是一種食用價值、藥用價值、科研與教學(xué)價值都較高海洋經(jīng)濟(jì)動物，部分種類生殖腺味道極鮮美，營養(yǎng)豐富。其殼可入藥治療胃潰瘍，有的種類因繁殖期長、成熟卵易獲得，被應(yīng)用于生理學(xué)和胚胎學(xué)研究。海膽屬棘皮動物門、游在亞門、海膽綱。全世界發(fā)現(xiàn)的海膽約有850種，其中經(jīng)濟(jì)種類不超過30種，主要產(chǎn)地有中國、日本、美國、加拿大、智利等。目前，我國已發(fā)現(xiàn)的海膽約有100種，但重要經(jīng)濟(jì)種類不足10種，主要有光棘球海膽、紫海膽、馬糞海膽、海刺猬、白棘三列海膽。1989年我國從日本引進(jìn)蝦夷馬糞海膽，它和光棘球海膽目前已成為中國北方最主要的養(yǎng)殖種類，而我國南方養(yǎng)殖品種以紫海膽為主。隨著我國人民生活水平不斷提高及國際市場的需求上升，近年來海膽?zhàn)B殖逐步引起了人們的重視，現(xiàn)已成為我國沿海水產(chǎn)增養(yǎng)殖業(yè)的一個新品種。大連紫海膽與馬糞海膽都具有較高經(jīng)濟(jì)價值，其生殖腺營養(yǎng)極豐富，是加工名貴食品海膽醬(云丹)的原料，還可提取二十烷酸等貴重藥物。過去海膽的獲取主要依靠捕撈自然資源，隨著生產(chǎn)發(fā)展，其自然資源已遠(yuǎn)不能滿足人民生活需要。因此，如何進(jìn)行其資源增殖已成為開發(fā)利用海膽的重要課題。
[0003]紫海膽Anthocidaris crassispina隸屬棘皮動物門，海膽綱，拱齒目，長海膽科，紫海膽屬，主要分布在我國浙江、福建、廣東、廣西和海南沿海，是我國東南沿海重要捕撈品種，營養(yǎng)價值和藥用價值高。生活在水深3-7米、大型海藻類生長繁盛的巖礁區(qū)，喜棲息于巖礁背光處或石縫間，常在棲息處鉆洞并藏于其中。借助管足和棘刺的運(yùn)動在海底匍匐，每5分鐘移動幾厘米。再生能力強(qiáng)，棘刺和其它外部器官損傷后都能再生，殼的裂痕和斷口也能很快恢復(fù)。畏光，晝伏夜出。適宜生長水溫15-23°C，適宜生長鹽度25-30%。。雜食性，幼體攝食角毛藻、單角刺藻等浮游藻類，稚海膽和幼海膽攝食底棲硅藻、幼嫩的大型海藻和有機(jī)碎肩等，成海膽主要攝食馬尾藻、裙帶菜、羊棲菜、石花菜等大型藻類(對海藻的吸收率為30%-40% )。以管足和鉗棘搜集食物，以咀嚼器內(nèi)的齒將食物磨碎后再吞咽下去。
[0004]關(guān)于海膽的養(yǎng)殖方法，過去蘇延明等發(fā)明了一種可提高生長速度的海膽活體餌料及制備方法(申請?zhí)朇N200810010564)。海膽活體餌料由附著在附著基上的石莼幼孢子和底棲硅藻組成，石莼幼孢子與底棲硅藻的數(shù)量比是1:40-80。具體制備方法如下:將石莼種菜投入到布有附著基的海水池中，培育至附著基上有密度為1500-2500個/mm2的附著物，將附著基倒入新池；向新池海水中加入營養(yǎng)鹽NaN03 20g/m3、KH2P04 2g/m3，光照強(qiáng)度3800-470011?，水溫18-23°(34冊.8-8.5，充氣培育附著物至生成石莼幼孢子;附著基上采底棲硅藻，石藥幼孢子與底棲娃藻的數(shù)量比是1:2_6，向海水中加入NaN03 30g/m3、KH2P04 3.5g/m3、NaSi03 0.2g/m3，光照強(qiáng)度2800-36001ux，培育至石莼幼孢子與底棲硅藻的數(shù)量比是1:40-80。該法優(yōu)點是迎合新的養(yǎng)殖模式，價格低廉，原料來源穩(wěn)定，使用方便，缺點是制作工藝流程復(fù)雜，基建投資大。沈建明公開了一種海膽的養(yǎng)殖方法(申請?zhí)朇N201410104574)，具體步驟包括:1)選擇水流清澈，含有豐富的藻類，冬季無冰凍水層的海區(qū)；2)將幼海膽放入大型網(wǎng)箱中并放入所選海區(qū)進(jìn)行飼養(yǎng);3)對于幼海膽來說，一般喂其底棲硅藻、海帶等藻類;4)隨著幼海膽的慢慢長大，要逐步降低海膽的養(yǎng)殖密度，直至接近商品規(guī)格，這時每個網(wǎng)箱可減少海膽個數(shù);5)對于成年海膽來說，一般喂其海帶、裙帶菜等大型藻類;6)投喂餌料要根據(jù)苗種大小、生長速度以及水溫升降靈活掌握，每次投餌要適量，以免堵塞網(wǎng)衣，影響箱內(nèi)水體交換。該發(fā)明采用科學(xué)的養(yǎng)殖技術(shù)，養(yǎng)殖出來的海膽具有生長速度快、肉質(zhì)鮮美、出肉率高、不易發(fā)病、成本低等優(yōu)點。缺點是操作麻煩，生產(chǎn)不穩(wěn)定，易受季節(jié)影響和限制。
[0005]牟氏角毛藻Chaetocerosmueller1、三角褐指藻Phaeodactylum tricornutum、波形馬鞍藻Campylodiscus undulates是紫海膽幼蟲最喜食的三種t耳料娃藻，其質(zhì)量和數(shù)量直接影響紫海膽幼體體質(zhì)和成活率。傳統(tǒng)上硅藻的培養(yǎng)只能在春、夏等溫度較高季節(jié)，冬季和早春因溫度較低無法培養(yǎng)，直接限制了硅藻培養(yǎng)并嚴(yán)重影響了紫海膽育苗。為了克服目前技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種低溫季節(jié)利用恒溫水浴鍋培養(yǎng)紫海膽幼體餌料微藻的方法，技術(shù)核心是先配制紫海膽幼體餌料微藻培養(yǎng)液，然后采用光照培養(yǎng)箱進(jìn)行海膽?zhàn)D料硅藻的一級培養(yǎng)，最后采用恒溫水浴鍋進(jìn)行海膽?zhàn)D料微藻的二級培養(yǎng)。研究和實驗表明，本技術(shù)培養(yǎng)微藻生長速度快，成本低，易于操作，不易污染，易于掌控，靈活多樣，工藝流程簡單，用以投喂紫海膽幼蟲生長快，體檢健壯、活潑，不受季節(jié)限制，全年皆可生產(chǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]為了克服目前技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種低溫季節(jié)利用恒溫水浴鍋培養(yǎng)紫海膽幼體餌料微藻的方法，具體技術(shù)方案如下:
[0007]步驟1紫海膽幼體餌料微藻培養(yǎng)液的配制，培養(yǎng)液配方如下:(NH4)2S040.8-1.2份，NH4H2PO4 0.5-0.8份，謂03 0.2-0.4份，檸檬酸鐵銨0.02-0.05份，MgS04 0.4-0.8份，酒石酸鉀鈉0.06-0.09份，琥珀酸鈉0.5-0.9份，D-葡萄糖0.1_0.3份，蔗糖0.2-0.3份，硫胺素
0.001-0.003份，Na2S203 0.1-0.3份，丙二酸鈉0.04-0.08份，麥飯石粉0.05-0.08份，人尿
0.3-0.5份，鈦溶液0.2-0.4份，煮沸冷卻后磁化海水1000份。用來培養(yǎng)紫海膽的三種餌料微藻:牟氏角毛藻、三角褐指藻、波形馬鞍藻。三種微藻的培養(yǎng)液成分相同。
[0008]步驟2紫海膽?zhàn)D料微藻的一級培養(yǎng)，采用光照培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng)。取3個250毫升的三角燒瓶，洗刷干凈后，各加入80毫升蒸餾水放在電爐上煮沸3分鐘消毒，倒掉蒸餾水，每個瓶加入步驟1所述培養(yǎng)液120毫升，用處于指數(shù)生長期、無污染、純種的牟氏角毛藻、三角褐指藻、波形馬鞍藻分別接種，進(jìn)行單種純種培養(yǎng)，接種密度2.5萬/毫升，搖勻，用干凈的報紙和橡皮筋封口，放進(jìn)光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。共培養(yǎng)9天，前5天設(shè)置溫度為18-20°C，光照強(qiáng)度800-12001ux，后4天溫度設(shè)為22-24°C，光照強(qiáng)度1500-20001ux，每天手動搖瓶6次，每個瓶每次搖30秒鐘。培養(yǎng)9天后，3種微藻密度可達(dá)60萬/毫升以上，將此藻液作為下一級培養(yǎng)的藻種。
[0009]步驟3紫海膽?zhàn)D料微藻的二級培養(yǎng)，采用恒溫水浴鍋進(jìn)行培養(yǎng)。取3個1500毫升的三角燒瓶，洗刷干凈后各加入300毫升蒸餾水放在電爐上煮沸3-5分鐘消毒，倒掉蒸餾水，每個瓶加入步驟1所述微藻培養(yǎng)液750毫升，用步驟2所述培養(yǎng)后的藻液做種用進(jìn)行接種，接種密度3-4萬/毫升，進(jìn)行單種純種培養(yǎng)，用干凈報紙和橡皮筋封口，搖勻，放在恒溫水浴鍋中培養(yǎng)，溫度由水浴鍋來調(diào)節(jié)，節(jié)能燈提供照明。共培養(yǎng)7天，前4天，水浴鍋溫度設(shè)為20°C，光照強(qiáng)度設(shè)為1500-18001uX，后3天水浴鍋溫度設(shè)為22°C，光照強(qiáng)度設(shè)為2000-24001uX，每天手動搖瓶5次，每次每個瓶搖動45秒鐘，到第5天，每個瓶補(bǔ)充添加步驟1所述培養(yǎng)液120毫升，以補(bǔ)充營養(yǎng)鹽的消耗，到第7天，微藻密度可達(dá)75萬/毫升以上，停止培養(yǎng)，可用此藻液直接投喂紫海膽幼體。
[0010]所述的一種低溫季節(jié)利用恒溫水浴鍋培養(yǎng)紫海膽幼體餌料微藻的方法，、步驟2可以替換為:步驟2紫海膽?zhàn)D料微藻的一級培養(yǎng)，采用光照培養(yǎng)箱進(jìn)行培養(yǎng);取3個250毫升的三角燒瓶，洗刷干凈后，各加入80毫升蒸餾水放在電爐上煮沸3分鐘消毒，倒掉蒸餾水;然后使用中藥復(fù)合物在此消毒后，再每個瓶加入步驟1所述培養(yǎng)液120毫升，用處于指數(shù)生長期、無污染、純種的牟氏角毛藻、三角褐指藻、波形馬鞍藻分別接種，進(jìn)行單種純種培養(yǎng)，接種密度2.5萬/毫升，搖勻。用干凈的報紙和橡皮筋封口，放進(jìn)光照培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng);共培養(yǎng)9天，前5天設(shè)置溫度為18-20°C，光照強(qiáng)度800-12001uX，后4天溫度設(shè)為22-24°C，光照強(qiáng)度1500-20001ux，每天手動搖瓶6次，每個瓶每次搖30秒鐘；培養(yǎng)9天后，3種微藻密度可達(dá)60萬/毫升以上，將此藻液作為下一級培養(yǎng)的藻種;所述中藥復(fù)合物為，由以下28味中草藥重量份數(shù)組成:千屈菜5份、大黃3份、紅背菜0.4份、紅天葵5-10份、錦燈籠5-10份、鴉膽子5份、蟲癭5份、泥炭蘚5份、翠云草5份、荊芥穗5份、羌活3份、藁本3份、帝王花3份、黑及草2份、蛇床子2份、淫羊霍2份、吳茱萸2份。所述中藥復(fù)合物是按照配比將所有原料混合后用粉碎機(jī)粉碎至20目的混合藥粉，加入所述混合藥粉的體積的3-5倍的去離子水，之后微波時間5-lOmin，微波功率800W-1000W，沉淀5-10分鐘，取上清液即為所述中藥復(fù)合物。
[0011]有益效果
[0012]牟氏角毛藻、三角褐指藻、波形馬鞍藻是紫海膽幼蟲最喜食的三種餌料硅藻，硅藻質(zhì)量和數(shù)量直接影響紫海膽幼體體質(zhì)和成活率。傳統(tǒng)上硅藻培養(yǎng)只能在春、夏等溫度較高季節(jié)，冬季和早春因溫度較低無法培養(yǎng)，直接限制了硅藻培養(yǎng)并嚴(yán)重影響了紫海膽育苗生產(chǎn)。為了克服目前技術(shù)的不足，本發(fā)明提供了一種低溫季節(jié)利用恒溫水浴鍋培養(yǎng)紫海膽幼體餌料微藻的方法，技術(shù)核心是先配制微藻培養(yǎng)液，然后采用光照培養(yǎng)箱進(jìn)行微藻的一級培養(yǎng)，最后采用恒溫水浴鍋進(jìn)行微藻的二級培養(yǎng)。研究和實驗表明，本技術(shù)培養(yǎng)微藻生長速度快，成本低，易于操作，不易污染，易于掌控，靈活多樣，工藝流程簡單，用以投喂紫海膽幼蟲生長快，體檢健壯、活潑，不受季節(jié)限制，全年皆可生產(chǎn)。
【附圖說明】
[0013]圖1利用恒溫水浴鍋培養(yǎng)紫海膽幼體餌料微藻的裝置示意圖。
[0014]附圖標(biāo)記1為利用恒溫水浴鍋培養(yǎng)紫海膽幼體餌料微藻的裝置。
[0015]利用恒溫水浴鍋培養(yǎng)紫海膽幼體餌料微藻的裝置1為長沙匯一儀器有限公司銷售的分析儀器，屬于常規(guī)設(shè)備。
【具體實施方式】
[0016]—種低溫季節(jié)利用恒溫水浴鍋培養(yǎng)紫海膽幼體餌料微藻的方法，具體技術(shù)方案如下:
[0017]步驟1紫海膽幼體餌