。
[0119] 這些試驗結(jié)果列于附表3中。這些結(jié)果表明，喂食濃度5.0X109cfu/mL的植物乳桿 菌CCFM737未對小鼠造成明顯影響，體重明顯上升，無死亡現(xiàn)象產(chǎn)生。小鼠外觀無明顯病理 癥狀。
[0120] 表3喂食植物乳桿菌CCFM737對小鼠體重及存活率的影響
[0121]
[0122] 注：-:小鼠無死亡
[0123]實施例4:植物乳桿菌CCFM7 37對PF0S暴露小鼠血液指標(biāo)的恢復(fù)作用
[0124] 取20-25g健康雄性C57BL/6J小鼠30只，隨機(jī)分為3組，每組含小鼠10只：陰性對照 組，PF0S暴露模型組與植物乳桿菌CCFM737干預(yù)組。試驗第一天，陰性對照組與PF0S暴露模 型組灌胃0.5mL脫脂乳;植物乳桿菌CCFM737干預(yù)組灌胃0.5mL按本說明書實施例3制備的濃 度2.0X109CFU/mLCCFM737脫脂乳懸液。持續(xù)灌胃10天。第11天，陰性對照組灌胃0.5mL普通 飲用水;PF0S暴露模型組和植物乳桿菌CCFM737干預(yù)組分別灌胃0.5mL0.4gPF0S/kgBW的 PF0S溶液。在第11天灌胃結(jié)束24小時后處死所有小鼠，眼眶取血后血液在3,000g離心 15min，血清用于測定小鼠的血液生化參數(shù)包括谷丙轉(zhuǎn)氨酶(alanineaminotransferase， ALT)，谷草轉(zhuǎn)氨酶（aspartateaminotransferase,AST)，喊性磷酸酶（alkaline phosphatase,ALP),γ-谷氨酰轉(zhuǎn)移酶（gamma-glutamyltranspeptidase,γ-GT)，結(jié)果列 于附圖2中。炎癥因子11^-2，幾-4，11^-6，了即-|3，正^丫這些測定結(jié)果列于附圖3中。
[0125] 通過對PF0S暴露模型組及植物乳桿菌CCFM737干預(yù)組小鼠血液學(xué)指標(biāo)比較，發(fā)現(xiàn) 本發(fā)明植物乳桿菌CCFM737能夠緩解由PFOS攝入導(dǎo)致的小鼠血清中ALT，AST，ALP，γ-GT活 性異常，對PF0S造成的肝損傷起到了緩解作用。通過炎癥因子IL-2，IL-4，IL-6，TNF-β，IFN-丫的測定表明，植物乳桿菌(1^1737能夠部分恢復(fù)小鼠血清炎癥因子11^-2，幾-4，11^-6，了即-β，IFN-γ的水平，表明植物乳桿菌CCFM737對PFOS造成的炎癥反應(yīng)起到了緩解作用。
[0126]實施例5:植物乳桿菌CCFM737是通過降低氧化應(yīng)激水平減輕PF0S毒害作用
[0127]取20-25g健康雄性C57BL/6J小鼠30只，隨機(jī)分為3組，每組含小鼠10只：陰性對照 組，PF0S暴露模型組與植物乳桿菌CCFM737干預(yù)組。試驗第一天，陰性對照組與PF0S暴露模 型對照組灌胃0.5mL脫脂乳;植物乳桿菌CCFM737干預(yù)組灌胃0.5mL按本說明書實施例3制備 的濃度2.0X109CFU/mLCCFM737脫脂乳懸液。持續(xù)灌胃10天。第11天，陰性對照組灌胃0.5mL 普通飲用水;PF0S暴露模型組和植物乳桿菌CCFM737干預(yù)組分別灌胃0.5mL0.4gPF0S/kgBW 的PF0S溶液。在第11天灌胃結(jié)束24小時后處死所有小鼠，肝臟勻漿后測定超氧化物歧化酶 (superoxidedismutase，S0D)，過氧化氫酶（catalase，CAT)，丙二酸（malondialdehyde， MDA)，谷脫甘肽（glutathione，GSH)and中抗氧化能力（thetotalantioxidative capacity，T-A0C)的水平。這些測定結(jié)果列于附圖4中。
[0128] 通過對PF0S暴露模型組及植物乳桿菌CCFM737干預(yù)組小鼠肝臟氧化指標(biāo)比較，發(fā) 現(xiàn)本發(fā)明植物乳桿菌CCFM737能夠部分恢復(fù)小鼠肝臟中SOD，CAT，GSH，T-A0C以及MDA酶的活 性，肝臟是PF0S的主要靶器官，而氧化應(yīng)激是PF0S引起毒性損傷的重要機(jī)理，植物乳桿菌 CCFM737通過吸附PF0S緩解由PF0S引起的氧化應(yīng)激，對PF0S造成的肝損傷起到了緩解作用。
[0129] 以上這些動物實驗表明，本發(fā)明植物乳桿菌CCFM737能夠通過吸附PF0S，抗氧化， 起到緩解小鼠PF0S毒性損傷的作用。
[0130]應(yīng)用實施例1:使用本發(fā)明植物乳桿菌CCFM738制備發(fā)酵劑[0131]按照下述步驟制備發(fā)酵劑：
[0132]A、培養(yǎng)基的制備：使用以所述培養(yǎng)基總重量計87.7 %水將10 %酶水解脫脂乳、 0.5%葡萄糖、1.5%胰蛋白胨與0.3%酵母浸膏溶解，然后調(diào)整其pH為6.8,這樣得到所述的 培養(yǎng)基;所述的酶水解脫脂乳、葡萄糖、胰蛋白胨與酵母浸膏都是目前市場上銷售的產(chǎn)品。
[0133]B、保護(hù)劑的制備:使用水與保護(hù)劑原料制備得到含有100g/L脫脂奶粉、30mlVL甘 油、l〇〇g/L麥芽糊精、150g/L海藻糖、10g/LL-谷氨酸鈉的保護(hù)劑。
[0134]C、植物乳桿菌CCFM737按照以所述培養(yǎng)基的重量計3%接種量接種到在溫度110-120°C下滅菌8-12min的所述培養(yǎng)基中，然后在溫度37°C下培養(yǎng)18h，用pH7.2磷酸鹽緩沖液 清洗3次，用所述保護(hù)劑重懸達(dá)到濃度101()CFU/ml;接著，讓該懸浮液在溫度37°C下預(yù)培養(yǎng) 60min，再采用凍干法制成所述的發(fā)酵劑。
[0135]應(yīng)用實施例2:制備含有本發(fā)明植物乳桿菌CCFM737的膠囊制品
[0136]將本發(fā)明的植物乳桿菌CCFM737在MRS培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h，在溫度4°C與4000r/min的條件下離心20min，用pH7.2磷酸鹽緩沖液沖洗兩次，使用脫脂乳重懸菌體使最終菌體濃 度達(dá)到2X101()CFU/mL。將菌懸液加入到3重量％海藻酸鈉溶液中，充分?jǐn)嚢?，使得?xì)胞均勻 地分散于海藻酸鈉溶液中，然后將此混合液擠壓到2重量％氯化鈣溶液中形成膠粒，靜止固 化30min，過濾收集膠粒，將收集得到的膠粒進(jìn)行冷凍干燥48h，得到含本發(fā)明植物乳桿菌 CCFM737的粉劑，把這種粉劑裝入到在目前市場上銷售的藥用膠囊中，得到所述的膠囊制 品。
[0137]應(yīng)用實施例3:利用本發(fā)明植物乳桿菌CCFM7 37制備片劑
[0138]分別稱取采用冷凍干燥方法制備的本發(fā)明植物乳桿菌CCFM737菌粉制劑25.7重量 份、淀粉55.0重量份、纖維素衍生物4.5重量份、羧甲基淀粉鈉12.0重量份、滑石粉0.8重量 份、蔗糖1.0重量份與水1.0重量份，混合，采用常規(guī)方法制成濕顆粒，然后使用中南制藥機(jī) 械廠生產(chǎn)的壓片機(jī)進(jìn)行壓片，然后使用青州市益康中藥機(jī)械有限公司生產(chǎn)的小型藥物干燥 機(jī)中進(jìn)行干燥，再包裝得到本發(fā)明的片劑。
【主權(quán)項】
1. 一種植物乳桿菌(1^(：1：(^&(3；[11118口1&1^&1'11111)(]0?]\1737，該菌株已于2015年10月8日在 北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號中國科學(xué)院微生物研究所中國微生物菌種保藏管理委員 會普通微生物中心保藏，其保藏號為CGMCCNo. 11472。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌CCFM737，其特征在于它具有下述性質(zhì)： ⑴具有耐酸性，在PH3.0-9.0環(huán)境條件下生長良好，在pH2.5環(huán)境下存活良好； ⑵在體外含有PF0S的培養(yǎng)基中培養(yǎng)，對PF0S有良好的耐受能力； (3)在體外含有PF0S的水溶液中孵育，對PF0S有良好的吸附能力； ⑷具有緩解PF0S暴露小鼠中毒癥狀，改善PF0S暴露小鼠肝損傷程度的作用。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物乳桿菌CCFM737在制備具有緩解PF0S毒害功能的藥物組 合物與/或發(fā)酵劑中的應(yīng)用。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于所述的藥物組合物是由植物乳桿菌CCFM737 菌劑與在藥學(xué)上可接受的載體組成的。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于所述的植物乳桿菌CCFM737菌劑是將含有所 述植物乳桿菌CCFM737的菌液通過常規(guī)冷凍干燥工藝制備或其它工藝制備所得到的粉劑， 它含有106CFU/g以上的活性植物乳桿菌CCFM737。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的用途，其特征在于在藥學(xué)上可接受的載體是一種或多種選自 在藥學(xué)上通常使用的填充劑、粘合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑或矯味劑的載體。7. 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述的用途，其特征在于所述的藥物組合物是顆粒劑、膠囊劑、片 劑、丸劑或口服液劑型。8. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于所述的發(fā)酵劑是通過下述制備步驟得到的： A、 培養(yǎng)基的制備:使用以所述培養(yǎng)基總重量計87.7 %的水將10%酶水解脫脂乳、0.5 % 葡萄糖、1.5%胰蛋白胨與0.3%酵母浸膏溶解，然后調(diào)整其pH為6.8,這樣得到所述的培養(yǎng) 基； B、 保護(hù)劑的制備:使用水與保護(hù)劑原料混合制備得到含有100g/L脫脂奶粉、30mL/L甘 油、l〇〇g/L麥芽糊精、150g/L海藻糖、10g/LL-谷氨酸鈉的保護(hù)劑； C、 植物乳桿菌CCFΜ7 3 7菌種按照以所述培養(yǎng)基的重量計1 - 5 %接種量接種到在溫度 110-120°C下滅菌8-12min的所述培養(yǎng)基中，然后在溫度37°C下培養(yǎng)18h，用ρΗ7.2磷酸鹽緩 沖液清洗2-4次，用所述的保護(hù)劑重懸達(dá)到濃度101()CFU/ml;接著，讓該懸浮液在溫度37°C下 預(yù)培養(yǎng)60min，再進(jìn)行冷凍干燥得到所述的發(fā)酵劑。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有緩解PFOS毒害功能的植物乳桿菌及其應(yīng)用，屬于微生物技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明的植物乳桿菌CCFM737具有耐酸性，在體外對PFOS有良好的耐受能力和吸附能力，能改善PFOS暴露小鼠的血液指標(biāo)、炎癥因子水平和肝臟氧化指標(biāo)。所述的植物乳桿菌CCFM737用于具有緩解PFOS毒害作用功能的藥物組合物與發(fā)酵劑，具有非常廣泛的應(yīng)用前景。CGMCC No. 1147220151008
【IPC分類】C12R1/25, A61K35/747, C12N1/20, A61P39/02
【公開號】CN105462899
【申請?zhí)枴緾N201510982361
【發(fā)明人】陳衛(wèi), 王剛, 邢家溧, 田豐偉, 張秋香, 劉小鳴, 范大明, 趙國忠, 張白曦, 翟齊嘯, 毛丙永, 郭敏, 趙建新, 張灝
【申請人】江南大學(xué)
【公開日】2016年4月6日
【申請日】2015年12月23日