香豆素類化合物，并表征了其具體結(jié)構(gòu)。經(jīng)卷煙添加實(shí)驗(yàn)表明：該化合物具有改善卷煙抽吸 品質(zhì)的用途，且可與保潤劑聯(lián)合使用，既能柔和卷煙煙氣、提高煙氣的圓潤感和舒適性，還 具有賦予卷煙煙氣清香的效果。本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)簡單，能明顯改善卷煙抽吸品質(zhì)，可作為 煙用香料研發(fā)的先導(dǎo)性化合物以及與保潤劑聯(lián)合使用改善卷煙抽吸品質(zhì)的新添加劑制備。
[0028] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明，但不以任何方式對(duì)本發(fā)明 加以限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換或改進(jìn)，均落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0029] 本發(fā)明所用原料不受地區(qū)和品種限制，任何來源地的煙草均可以實(shí)現(xiàn)本發(fā)明，下 面以來源于云南中煙工業(yè)有限責(zé)任公司不同產(chǎn)地的煙草原料對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步說明。除非 另有說明，本發(fā)明中所采用的百分?jǐn)?shù)均為重量百分?jǐn)?shù)。實(shí)施例中未注明具體技術(shù)或條件者， 按照本領(lǐng)域內(nèi)的文獻(xiàn)所描述的技術(shù)或條件或者按照產(chǎn)品說明書進(jìn)行。所用試劑或儀器未注 明生產(chǎn)廠商者，均為可以通過購買獲得的常規(guī)產(chǎn)品。本發(fā)明中的溶液如果只給出了溶質(zhì)，沒 有公開溶劑，則本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)該知曉溶劑為水。本發(fā)明中純甲醇指100 %甲醇，純乙醇 是指100 %乙醇，純丙酮是指100 %丙酮。
[0030] 實(shí)施例1
[0031] 一種異香豆素類化合物&出18〇4的制備方法，具體包括以下步驟：
[0032] (1)制備煙草提取物浸膏：以晾曬煙葉為原料，將煙葉粉碎或切成小段，并用第一 溶劑浸泡并提取所述煙葉4次，每次54h，將提取液合并、過濾并濃縮后得到所述煙草提取物 浸膏;其中所述第一溶劑是選自甲醇、乙醇或丙酮的有機(jī)溶劑與水的混合物，當(dāng)所述第一溶 劑為甲醇或乙醇與水的混合物時(shí)，其中甲醇或乙醇占該第一溶劑的95wt%，當(dāng)所述第一溶 劑為丙酮與水的混合物時(shí)，其中丙酮占該第一溶劑的70wt%;且第一溶劑:煙草= 3:5,重量 比；
[0033] (2)硅膠柱層析:將所述煙草提取物浸膏用其2.5重量倍的選自純甲醇、純乙醇或 純丙酮的第二溶劑溶解后與為煙草提取物浸膏的1.2重量倍的80~100目硅膠拌樣，再與煙 草提取物浸膏3重量倍的250目硅膠混合后干法裝柱，然后用體積比依次為1:0、20:1、9:1、 8:2、7:3、6:4、1:1和1:2的氯仿-丙酮溶液進(jìn)行梯度洗脫，將其中體積比為8:2的氯仿-丙酮 溶液洗脫時(shí)得到的洗脫液稱為第一洗脫液；
[0034] (3)高壓液相色譜分離純化:將上述第一洗脫液通入高壓液相色譜進(jìn)行分離純化， 該高壓液相色譜采用21.2mmX 250mm、5ym的Ci8色譜柱，流動(dòng)相流速為20mL/min，流動(dòng)相為 55 %的甲醇，紫外檢測器檢測波長為315nm，第一洗脫液每次進(jìn)樣200yL，每次進(jìn)樣后色譜峰 保留時(shí)間為28.2min時(shí)所對(duì)應(yīng)的洗脫液，稱為第二洗脫液，將該第二洗脫液脫除溶劑后即得 所述異香豆素類化合物。
[0035] 所述制備方法還包括以下進(jìn)一步提純的步驟:將在所述高壓液相色譜分離之后得 到的所述異香豆素類化合物再次溶于純甲醇，并以純甲醇為流動(dòng)相，通過凝膠柱進(jìn)行層析 分離，得到進(jìn)一步提純的異香豆素類化合物。
[0036] 實(shí)施例2
[0037]所用晾曬煙樣品來源于云南玉溪，品種為玉溪江川煙。將煙葉取樣2.0kg粉碎以 95%的甲醇提取5次，每次提取24h，提取液合并，過濾，減壓濃縮得煙草提取物浸膏95g。將 上述煙草提取物浸膏用其2.0重量倍數(shù)的純甲醇溶解后用120g的100目粗硅膠拌樣，再與 0.6kg的160目硅膠混合后裝柱進(jìn)行硅膠柱層析，用體積配比為1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6: 4、1:1、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脫，TLC監(jiān)測合并相同的部分，得到8個(gè)部分，其中體積配比為 8:2的氯仿-丙酮洗脫部分用安捷侖1100半制備高效液相色譜分離，以55%的甲醇為流動(dòng) 相，Zorbax SB-C18(21.2X250mm，5ym)制備柱為固定相，流動(dòng)相流速為20ml/min，紫外檢測 器檢測波長為315nm，每次進(jìn)樣200yL，收集每次進(jìn)樣后色譜峰保留時(shí)間為28.2min時(shí)所對(duì)應(yīng) 的洗脫液，多次累加后脫除溶劑；所得產(chǎn)物再次用純甲醇溶解，再以純甲醇為流動(dòng)相，用 Sephadex LH-20凝膠柱層析分離，即得進(jìn)一步提純的異香豆素類化合物。
[0038]其中，梯度洗脫時(shí)，每個(gè)比例的混合溶劑洗脫時(shí)，洗脫到?jīng)]有成分洗下為止，然后 換下一個(gè)比例的混合溶劑。
[0039] 實(shí)施例3
[0040] 所用晾曬煙樣品來源于云南大理，品種為云龍?zhí)斓菬?。將煙葉取樣3.5kg切碎，以 95 %的乙醇提取4次，每次提取48h，提取液合并，過濾，減壓濃縮得煙草提取物浸膏245g。將 上述煙草提取物浸膏用其2.0重量倍的純甲醇溶解后用250g的80目粗硅膠拌樣，再與1.2kg 的200目硅膠混合后裝柱進(jìn)行硅膠柱層析，用體積配比為1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、6:4、1:1、 1:2的氯仿-丙酮梯度洗脫，TLC監(jiān)測合并相同的部分，得到8個(gè)部分，其中體積配比為8:2的 氯仿-丙酮洗脫部分用安捷侖1100半制備高效液相色譜分離，以55%的甲醇為流動(dòng)相， Zorbax 38-(：18(21.2\25〇111111，5以111)制備柱為固定相，流動(dòng)相流速為2〇1111/1^11，紫外檢測器 檢測波長為315nm，每次進(jìn)樣200yL，收集每次進(jìn)樣后色譜峰保留時(shí)間為28.2min時(shí)所對(duì)應(yīng)的 洗脫液，多次累加后脫除溶劑；所得產(chǎn)物再次用純甲醇溶解，再以純甲醇為流動(dòng)相，用 Sephadex LH-20凝膠柱層析分離，即得進(jìn)一步提純的異香豆素類化合物。
[0041] 其中，梯度洗脫時(shí)，每個(gè)比例的混合溶劑洗脫時(shí)，洗脫到?jīng)]有成分洗下為止，然后 換下一個(gè)比例的混合溶劑。
[0042] 實(shí)施例4
[0043]所用晾曬煙樣品來源于云南昆明，品種為嵩明紅花煙。將煙葉取樣5kg粉碎，以 75 %的丙酮用超聲提取3次，每次提取72h，提取液合并，過濾，減壓濃縮得煙草提取物浸膏 385g。將上述煙草提取物浸膏用其1.6重量倍的純甲醇溶解后用400g的90目粗硅膠拌樣，再 與2.4kg的180目硅膠混合后裝柱進(jìn)行硅膠柱層析，用體積配比為1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、 6:4、1:1、1:2的氯仿-丙酮梯度洗脫，TLC監(jiān)測合并相同的部分，得到8個(gè)部分，其中體積配比 為8:2的氯仿-丙酮洗脫部分用安捷侖1100半制備高效液相色譜分離，以55%的甲醇為流動(dòng) 相，Zorbax SB-C18(21.2 X 250mm，5μπι)制備柱為固定相，流速為20ml/min，紫外檢測器檢測 波長為315nm，每次進(jìn)樣200yL，收集每次進(jìn)樣后色譜峰保留時(shí)間為28.2min時(shí)所對(duì)應(yīng)的洗脫 液，多次累加后脫除溶劑；所得產(chǎn)物再次用純甲醇溶解，再以純甲醇為流動(dòng)相，用 S印hadexLH-20凝膠柱層析分離，即得進(jìn)一步提純的異香豆素類化合物。
[0044] 其中，梯度洗脫時(shí)，每個(gè)比例的混合溶劑洗脫時(shí)，洗脫到?jīng)]有成分洗下為止，然后 換下一個(gè)比例的混合溶劑。
[0045] 實(shí)施例5-化合物結(jié)構(gòu)的鑒定
[0046] 取實(shí)施例1制備的化合物，以上述方法制備得到的異香豆素類化合物的結(jié)構(gòu)通過 以下方法進(jìn)行測定。本發(fā)明化合物為淺黃色膠狀物;紫外光譜(溶劑為甲醇），A max(l〇ge)210 (3.65) ,270(3.36),292(3.14) ,315(3.27)nm;紅外光譜（溴化鉀壓片）vmax 3422,3068， 2963,2856,1612,1573,1463,1354,1165,1054cm-1;高分辨質(zhì)譜(HRESIMS)給出準(zhǔn)分子離子 峰m/z 285.1109 [M+Na] + (計(jì)算值285.1103)。結(jié)合1Η和13C NMR譜給出一個(gè)