堿解-酶解法結合絮凝沉淀法提取硫酸軟骨素鈉的制作方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明所屬領域為生化制藥領域，涉及一種硫酸軟骨素鈉的提取方法，特別是一種硫酸軟骨素鈉生產(chǎn)工藝方法。
【背景技術】
[0002]硫酸軟骨素鈉是從動物軟骨組織中提取制備的一種酸性粘多糖類物質(zhì)，屬糖胺聚糖。臨床主要用于調(diào)血脂藥、關節(jié)炎、滴眼液等。硫酸軟骨素鈉是目前市場上較為重要的一種生化藥物，被收載在《中國藥典(2010版)》中。近年來，硫酸軟骨素鈉作為保健品消費的趨勢逐漸升溫，使其應用領域越來越廣泛。
[0003]傳統(tǒng)的提取工藝方法采取堿解、酶解、鹽解及離子交換樹脂或其組合的方法進行提取，提取效率低，操作繁瑣，提取液中仍含有大量蛋白質(zhì)和核酸等雜質(zhì)，給進一步純化帶來一定的難題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的提供一種提取硫酸軟骨素鈉的方法，即堿解-酶解法結合絮凝沉淀法，可有效去除提取液中殘存的雜質(zhì)，有效簡化精制工序，節(jié)約沉淀步驟中乙醇用量，可在更短的時間里生產(chǎn)出雜質(zhì)含量低、收率好的硫酸軟骨素鈉產(chǎn)品。
[0005]本發(fā)明的目的通過以下技術方案來達到，依次通過以下幾個步驟來實現(xiàn)。
[0006](I)軟骨浸泡:將豬鼻骨干骨加入到反應罐中用水完全浸沒，浸泡3-5小時后，放干浸泡水；
(2)堿解:加入堿液，干骨重量與堿液重量的比為1:2-1:3，攪拌提取3-5小時后，用100目尼龍網(wǎng)過濾；
(3)酶解:調(diào)節(jié)pH8-9后，升溫至45°C，加入豬源胰酶和氯化鈉，45-50°C保溫3-5小時；
(4)急升溫:升溫至80-85°C，靜置15-20min，用濾袋過濾；
(5 )按體積比20%-30%的比例向過濾液中加入95%乙醇；
(6)絮凝沉降:控制溫度40-50°C，調(diào)節(jié)pHl1-12，按0.3%_0.5% (質(zhì)量/體積)比例加入絮凝沉淀劑，靜置直至分層，虹吸上清，沉淀物離心后合并母液至上清液中，棄去離心渣；
(7)經(jīng)脫色處理、乙醇沉淀后，脫水烘干，即得分離純化的硫酸軟骨素鈉。
[0007]本技術方案的有益效果是:經(jīng)堿解-酶解法結合絮凝沉淀法制得的硫酸軟骨素鈉，含量在90%以上，收率2 30%ο
[0008](I)本技術方案中，酶解步驟(3)中加入氯化鈉，其重量與干骨的重量比為3%_5%?？稍鰪娒附庑Ч?，使硫酸軟骨素鈉與蛋白等雜質(zhì)有效分離。
[0009](2)本技術方案中，堿解步驟(2)中所用堿液的濃度為1-2moI/L，可降低堿液對硫酸軟骨素鈉的破壞，提高收率。
[0010](3)本技術方案中，酶解步驟(3)中加入的豬源胰酶重量與干骨的重量比為1%_2%，保溫時間為3-5小時，可減少胰酶對硫酸軟骨素鈉的破壞，提高收率。
[0011](4)本技術方案中，絮凝沉降前向濾液中加入乙醇，該乙醇濃度為95%，且與濾夜的體積比為20%-30%。這樣可增加蛋白核酸等雜質(zhì)與絮凝沉淀劑的結合，增加顆粒度，有助于沉降。
[0012](5)本技術方案中，絮凝沉淀劑選自羥基磷灰石(HAP)和十二烷基磺酸鈉(SDBS)或其混合物，可有效結合蛋白核酸等雜質(zhì)并形成沉淀物，經(jīng)離心后去除。
【具體實施方式】
[0013]以下實例詳細說明了本發(fā)明:
(1)軟骨浸泡:將10Kg豬鼻骨干骨加入到反應罐中用水完全浸沒，浸泡4小時后，放干浸泡水；
(2)堿解:加入lmol/L堿液250L，攪拌提取4小時后，用100目尼龍網(wǎng)過濾；
(3 )酶解:調(diào)節(jié)pH8.5后，升溫至45°C，加入胰酶IKg，加入氯化鈉3Kg，45_50°C條件下保溫4小時；
(4)急升溫:升溫至80°C，靜置20min后，用濾袋過濾；
(5 )向過濾液中加入95%乙醇80L ；
(6)絮凝沉降:控制溫度45°C，調(diào)節(jié)PH=Il，加入絮凝沉淀劑1.2Kg，靜置分層后虹吸上清，沉淀物離心，合并母液至上清液中，棄去離心渣；
(7)經(jīng)脫色處理、乙醇沉淀后，脫水烘干，得分離純化的硫酸軟骨素鈉32.5Kg，含量為95%，收率為 32.5%。
【主權項】
1.堿解-酶解法結合絮凝沉淀法提取硫酸軟骨素鈉，其特征是: (1)軟骨浸泡:將豬鼻骨干骨加入到反應罐中用水完全浸沒，浸泡3-5小時后，放干浸泡水； (2)堿解:加入堿液，干骨重量與堿液重量的比為1:2-1:3，攪拌提取3-5小時后，用100目尼龍網(wǎng)過濾； (3)酶解:調(diào)節(jié)?!18-9后，升溫至45°(3，加入豬源胰酶和氯化鈉，45-50°(3保溫3-5小時； (4)急升溫:升溫至80-85°C，靜置15-20min，用濾袋過濾； (5 )按體積比20%-30%的比例向過濾液中加入95%乙醇； (6)絮凝沉降:控制溫度40-50°C，調(diào)節(jié)pHl1-12，按0.3%_0.5% (質(zhì)量/體積)比例加入絮凝沉淀劑，靜置直至分層，虹吸上清，沉淀物離心后合并母液至上清液中，棄去離心渣； (7)經(jīng)脫色處理、乙醇沉淀后，脫水烘干，即得分離純化的硫酸軟骨素鈉。2.按照權利要求1所述的方法，其特征為:堿解步驟中所用堿液的濃度為l-2mol/L。3.按照權利要求1所述的方法，其特征為:酶解步驟(3)中加入的氯化鈉重量與干骨的重量比為3%-5% ；加入的豬源胰酶重量與干骨的重量比為1%_2% ；保溫時間為3-5小時。4.按照權利要求1所述的方法，其特征為:絮凝沉降步驟前須向濾液中加入乙醇，該乙醇濃度為95%，且與濾夜的體積比為20%-30%。5.按照權利要求1所述的方法，其特征為:絮凝沉淀劑選自羥基磷灰石(HAP)和十二烷基磺酸鈉(SDBS)或其混合物。6.按照權利要求1所述的方法，其特征為:按照本發(fā)明方法制備的硫酸軟骨素鈉滿足中國藥典(2010年版)要求。
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種硫酸軟骨素鈉的提取方法。硫酸軟骨素鈉是自豬鼻骨等動物軟骨中提取制得的一種黏多糖類物質(zhì)。傳統(tǒng)的工藝方法采取堿解、酶解、鹽解及離子交換樹脂或其組合的方法進行提取，提取液中仍含有大量蛋白質(zhì)和核酸等雜質(zhì)，給進一步純化帶來一定的難題。本發(fā)明采用堿解-酶解法結合絮凝沉淀法去除硫酸軟骨素鈉提取液中殘留的雜質(zhì)，工藝設計合理，去除效率高，縮短了后續(xù)精制工時，提高了產(chǎn)品收率，藥品符合《中國藥典2010版》標準。
【IPC分類】C08B37/08
【公開號】CN105504090
【申請?zhí)枴緾N201511000950
【發(fā)明人】劉乃山, 夏襯來, 遲培升, 陸玉梅
【申請人】青島九龍生物醫(yī)藥有限公司
【公開日】2016年4月20日
【申請日】2013年10月21日
【公告號】CN103601815A, CN103601815B