正丙醇萃取法降低肝素鈉中的半乳糖胺含量的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，具體地說(shuō)涉及從肝素鈉中降低半乳糖胺含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]肝素鈉是從豬小腸粘膜中提取的一種生化藥品，是手術(shù)中不可替代的、挽救生命的、市場(chǎng)不能斷檔的首選藥物。自二十世紀(jì)四十年代用于臨床以來(lái)，其應(yīng)用范圍不斷擴(kuò)大，尤其是二十世紀(jì)九十年代以來(lái)，該產(chǎn)品臨床主要用于防止血栓形成，治療心血管病、血液病、尿毒癥等。西方國(guó)家已開(kāi)始研究肝素鈉對(duì)癌癥的防治作用，其新用途不斷增加。
[0003]進(jìn)入二十世紀(jì)七十年代以來(lái)，我國(guó)肝素鈉生產(chǎn)工藝不斷改進(jìn)，成為世界肝素鈉產(chǎn)量最大的國(guó)家。國(guó)際市場(chǎng)的肝素鈉產(chǎn)品有70%以上來(lái)自中國(guó)。肝素鈉精品生產(chǎn)已由高錳酸鉀氧化法發(fā)展到雙氧水氧化法，結(jié)合醇洗分離法，將大量的雜質(zhì)用乙醇帶走。2008年2月11日，美國(guó)因注射肝素鈉出現(xiàn)4例死亡，350多例不良反應(yīng)，成為轟動(dòng)世界的“肝素鈉事件”。經(jīng)過(guò)專家論證，上述死亡和不良反應(yīng)是由于肝素鈉中含有“多硫酸軟骨素”所致。自“肝素鈉事件”以來(lái)，美國(guó)FDA不斷加強(qiáng)肝素鈉產(chǎn)品的質(zhì)量，美國(guó)專家認(rèn)為“半乳糖胺”的存在會(huì)影響肝素鈉的療效，因此，將“半乳糖胺”的含量列入藥典的標(biāo)準(zhǔn)，要求小于1%。
[0004]中國(guó)和歐洲其他國(guó)家還未要求此標(biāo)準(zhǔn)，至今也還未有報(bào)道含量小于1%，目前國(guó)際上有許多廠家用熱處理或冷處理的方法，但所用溶劑不同，含量只能降到5%左右，因此，我公司經(jīng)研發(fā)后半乳糖胺的含量降到1%以下。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供了一種萃取法降低肝素鈉中的半乳糖胺的方法，是為了攻克國(guó)內(nèi)外專家關(guān)于降低肝素鈉中的半乳糖胺含量，利用半乳糖胺的性質(zhì)，使其溶解在正丙醇中，然后將帶有半乳糖胺的正丙醇去掉，留底部沉淀的肝素鈉，從而實(shí)現(xiàn)用正丙醇萃取法降低肝素鈉與半乳糖胺含量。
[0006]為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn):
一種萃取法降低肝素鈉中的半乳糖胺含量的方法，其特征在于:采用正丙醇萃取法將肝素鈉中的半乳糖胺降低。
[0007]在發(fā)明的技術(shù)方案中，還具有以下技術(shù)特征:所述正丙醇萃取法包括如下步驟:
(1)、用水溶解肝素鈉半成品，水與肝素鈉半成品的重量比為1:(10-15)，將溶液PH值調(diào)至10.0-12.0，然后加入溶液體積的0.2-2%過(guò)氧化氫，氧化8-14小時(shí)；
(2)、步驟(I)所得溶液中若有核酸和不溶性雜質(zhì)析出，則先用離心機(jī)去除核酸和不溶性雜質(zhì)，再進(jìn)行后續(xù)步驟；若沒(méi)有核酸和不溶性雜質(zhì)析出，則按每升溶液加入氯化鈉20-30g，將溶液PH值調(diào)至5.0-8.0后，再將溶液冷凍至-5°C以下，邊攪拌邊加入_10°C以下的丙酮，使得丙酮占溶液的40-45質(zhì)量％，-5-0°C保溫24-30小時(shí)，然后將廢正丙醇棄去；QA取樣，檢測(cè)測(cè)吸光度:260nm <0.1； 400nm < 0.02可進(jìn)行步驟(3)；
(3)、棄去上層丙酮溶液后，下層固體肝素鈉用水按固體體積1:(10-15)溶解，溶解后將溶液PH值調(diào)至10.0-12.0，然后加入溶液體積的0.2-2%過(guò)氧化氫，氧化8-14小時(shí)；
(4)、步驟(3)所得溶液中若有核酸和不溶性雜質(zhì)析出，則先用離心機(jī)去除核酸和不溶性等雜質(zhì)，再進(jìn)行后續(xù)步驟;若沒(méi)有核酸和不溶性雜質(zhì)析出，則按每升溶液加入氯化鈉20-30g，然后將溶液PH值調(diào)至10.0-12.0，再將溶液冷凍至-10°〇以下，邊攪拌邊加入-10°〇以下的正丙醇，使得正丙醇占溶液的35-50質(zhì)量％，-3--6°C保溫18-24小時(shí)，然后將廢正丙醇棄去，半乳糖胺隨正丙醇帶走，沉淀物即為肝素鈉產(chǎn)品;QA取樣，高效液相檢測(cè)DS含量<1%;
在發(fā)明的技術(shù)方案中，還具有以下技術(shù)特征:沉淀后的溶液進(jìn)行QA取樣化驗(yàn)，測(cè)吸光度:260nm<0.1 ； 400nm<0.02 ；DS含量< 1%，若不合格，繼續(xù)重復(fù)上述過(guò)程，若合格移交下一工序。
[0008]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和積極效果是:
本發(fā)明的肝素鈉精品生產(chǎn)采用過(guò)氧化氫氧化法，將大量的雜質(zhì)用丙酮帶走，再用正丙醇萃取法降低肝素鈉中的半乳糖胺含量，其精品活性效價(jià)在ISOusp/mg以上，折合WHO國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)在200 iu/mg，Xa/ Π a的比例在0.95-1.05之間，其他質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)均符合中國(guó)藥典、美國(guó)藥典、英國(guó)藥典及西歐藥典所規(guī)定的各項(xiàng)指標(biāo)。
【具體實(shí)施方式】
[0009]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
[0010]實(shí)施例1
(1)、用水溶解肝素鈉半成品10kg，用純化水100kg溶解，將溶液PH值調(diào)至10.0，然后加入過(guò)氧化氫3L，氧化9小時(shí)；
(2)、步驟(I)所得溶液中有核酸和不溶性雜質(zhì)析出，用離心機(jī)去除核酸和不溶性雜質(zhì)，按溶液體積加入氯化鈉22kg，將溶液PH值調(diào)至8.0后，再將溶液冷凍至-8°C，邊攪拌邊加入-10°C的丙酮，使得丙酮占溶液的40-45質(zhì)量％，-5°C保溫24小時(shí)，然后將廢正丙醇棄去；QA取樣，檢測(cè)測(cè)吸光度:260nm = 0.06 ； 400nm=0.02 ；
(3)、棄去上層丙酮溶液后，下層固體肝素鈉用純化水700溶解，溶解后將溶液PH值調(diào)至12.0，然后加入溶液體積的1.6L過(guò)氧化氫，氧化10小時(shí)；
(4)、步驟(3)所得溶液沒(méi)有核酸和不溶性雜質(zhì)析出，將溶液加入氯化鈉14kg，然后將溶液PH值調(diào)至10.0后冷凍，將冷凍至-11°C溶液，邊攪拌邊加入_13°C的正丙醇，正丙醇占溶液的40質(zhì)量％，-3°C保溫18小時(shí)，然后將廢正丙醇棄去，半乳糖胺隨正丙醇帶走，沉淀物即為肝素鈉產(chǎn)品;QA取樣，高效液相檢測(cè)DS含量< 1%。
[0011]以上所述，僅是本發(fā)明的較佳實(shí)施例而已，并非是對(duì)本發(fā)明作其它形式的限制，任何熟悉本專業(yè)的技術(shù)人員可能利用上述揭示的技術(shù)內(nèi)容加以變更或改型為等同變化的等效實(shí)施例。但是凡是未脫離本發(fā)明技術(shù)方案內(nèi)容，依據(jù)本發(fā)明的技術(shù)實(shí)質(zhì)對(duì)以上實(shí)施例所作的任何簡(jiǎn)單修改、等同變化與改型，仍屬于本發(fā)明技術(shù)方案的保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種降低肝素鈉中的半乳糖胺含量的方法，其特征在于包括如下步驟: (1)、用水溶解肝素鈉半成品，水與肝素鈉半成品的重量比為1:(10-15)，將溶液PH值調(diào)至10.0-12.0，然后加入溶液體積的0.2-2%過(guò)氧化氫，氧化8-14小時(shí)； (2)、步驟(I)所得溶液中若有核酸和不溶性雜質(zhì)析出，則先用離心機(jī)去除核酸和不溶性雜質(zhì)，再進(jìn)行后續(xù)步驟；若沒(méi)有核酸和不溶性雜質(zhì)析出，則按每升溶液加入氯化鈉20-30g，將溶液PH值調(diào)至5.0-8.0后，再將溶液冷凍至-5°C以下，邊攪拌邊加入_10°C以下的丙酮，使得丙酮占溶液的40-45質(zhì)量％，-5-0°C保溫24-30小時(shí)，然后將廢正丙醇棄去；QA取樣，檢測(cè)測(cè)吸光度:260nm <0.1； 400nm < 0.02可進(jìn)行步驟(3)； (3)、棄去上層丙酮溶液后，下層固體肝素鈉用水按固體體積1:(10-15)溶解，溶解后將溶液PH值調(diào)至10.0-12.0，然后加入溶液體積的0.2-2%過(guò)氧化氫，氧化8-14小時(shí)； (4)、步驟(3)所得溶液中若有核酸和不溶性雜質(zhì)析出，則先用離心機(jī)去除核酸和不溶性等雜質(zhì)，再進(jìn)行后續(xù)步驟;若沒(méi)有核酸和不溶性雜質(zhì)析出，則按每升溶液加入氯化鈉20-30g，然后將溶液PH值調(diào)至10.0-12.0，再將溶液冷凍至-10°〇以下，邊攪拌邊加入-10°〇以下的正丙醇，使得正丙醇占溶液的35-50質(zhì)量％，-3--6°C保溫18-24小時(shí)，然后將廢正丙醇棄去，半乳糖胺隨正丙醇帶走，沉淀物即為肝素鈉產(chǎn)品;QA取樣，高效液相檢測(cè)DS含量<1%。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(I)和(3)的溶液pH值為10.0-12.0，過(guò)氧化氫的用量為溶液體積的0.2-2%。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(I)和(3)過(guò)氧化氫的用量為溶液體積的0.2-2%ο4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(2)丙酮占所述溶液的40-45質(zhì)量％，-5-0°C保溫24-30小時(shí)。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(2)QA取樣，檢測(cè)測(cè)吸光度:260nm<0.1;400nm < 0.02o6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(4)正丙醇占所述溶液的35-50質(zhì)量％，-3—6°(3保溫18-24小時(shí)。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(4)QA取樣，高效液相檢測(cè)DS含量<1%。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(4)后的肝素鈉回收率在85%以上，肝素鈉精品活性效價(jià)在180usp/mg以上。9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于:步驟(4)后的肝素鈉精品的Xa/IIa的比例在0.95-1.05之間。
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種正丙醇萃取法降低肝素鈉中半乳糖胺含量（肝素鈉中的一種雜質(zhì)）的方法，攻克了美國(guó)藥典標(biāo)準(zhǔn)中含量規(guī)定小于1%，技術(shù)方案是將肝素鈉半成品用純化水溶解后，加入雙氧水進(jìn)行氧化后離心雜質(zhì)，再冷凍，加入正丙醇低溫萃取來(lái)降低肝素鈉中的半乳糖胺含量，其他質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)均符合中國(guó)藥典、美國(guó)藥典、英國(guó)藥典及西歐藥典所規(guī)定的各項(xiàng)指標(biāo)。
【IPC分類】C08B37/10
【公開(kāi)號(hào)】CN105504096
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201511000529
【發(fā)明人】遲培升, 夏襯來(lái), 陸玉梅
【申請(qǐng)人】青島九龍生物醫(yī)藥有限公司
【公開(kāi)日】2016年4月20日
【申請(qǐng)日】2012年12月8日
【公告號(hào)】CN103145877A, CN103145877B