5mg、蔗糖10.0g、葡萄糖20g、L-脯氨酸0.7g、植物凝膠3.5g、酪蛋白水解物0.2mg、甘氨酸0.04g、肌醇0.1Omg和雙丙氨膦3.0mg，其余為水；
[0039]八2)蔗糖30.(^、1^-脯氨酸0.78、植物凝膠3.58、題03283011^、(順4)230446311^、KH2P04400mg、MgS04.7H20 185mg、CaCl2.2H20 166mg、MnS04.H2O 7.6mg、ZnS04.7H202mg、H3BO33.0mg、KI 0.75mg、Na2Mo04.2H2O 0.25mg、C11SO4.5H2O 0.025mg、CoCl 2.6H2O0.025mg、乙二胺四乙酸鈉鐵鹽36.6mg、氯化膽堿0.098mg、VB20.049mg、D_生物素0.1011^、煙酸0.211^、葉酸0.048511^、￥810.47211^、0-泛酸鈣0.1011^、￥860.211^、￥8120.001511^、對(duì)氨基苯甲酸0.049mg、酪蛋白水解物0.2mg、甘氨酸0.04g、肌醇0.1Omg和雙丙氨膦3.0mg，其余為水。
[0040]所述分化培養(yǎng)基的pH值具體可為5.7。
[0041 ] 所述步驟(8)中，每IL所述生根培養(yǎng)基可包括:MS鹽1.949?2.382g(例如1.949?2.1658或2.165?2.3828或1.9498或2.1658或2.3828)、蔗糖27.0?33.(^(例如27.0?30.0g或30.0?33.0g或27.0g或30.0g或33.0g)、植物凝膠3.15?3.85g(例如3.15?3.5g或3.5?3.858或3.158或3.58或3.858)和雙丙氨膦2.7?3.311^(例如2.7?3.011^或3.0?3.3mg或2.7mg或3.0mg或3.3mg)。所述生根培養(yǎng)基的溶劑可為水。所述生根培養(yǎng)基的pH值可為5.4?6.0(例如5.4?5.7或5.7?6.0或5.4或5.7或6.0)。
[0042]所述步驟(8)中，每IL所述生根培養(yǎng)基具體可由如下組分組成:MS鹽2.165g、蔗糖30.0g、植物凝膠3.5g和雙丙氨膦3.0mg，其余為水。所述生根培養(yǎng)基的pH值具體可為5.7。
[0043]所述步驟(I)中，所述“含有目的基因的重組表達(dá)載體”可為質(zhì)粒PCAMBIA3301或質(zhì)粒PCAMBIA3300。所述質(zhì)粒pCAMBIA3300中含有的目的基因可為EPSPS基因。
[0044]所述步驟(I)中，所述“含有目的基因的重組表達(dá)載體”具體可為質(zhì)粒PCAMBIA3301。所述質(zhì)粒pCAMBIA3301中含有的目的基因具體可為bar基因。
[0045]所述步驟(I)中，所述農(nóng)桿菌具體可為根癌農(nóng)桿菌。所述根癌農(nóng)桿菌可為根癌農(nóng)桿菌EHA105、根癌農(nóng)桿菌EHAlOl或根癌農(nóng)桿菌LBA4404。
[0046]所述步驟(I)中，所述“重組農(nóng)桿菌”具體可為將所述質(zhì)粒PCAMBIA3301轉(zhuǎn)化所述根癌農(nóng)桿菌EHA105獲得的重組農(nóng)桿菌。
[0047]所述步驟(2)中，所述玉米自交系的外植體可為玉米自交系的幼胚。
[0048]所述步驟(2)中，所述玉米自交系的幼胚的長度可為1.5mm±0.5mm。
[0049]所述步驟(2)中，所述“侵染”的方法可如下:將所述玉米自交系的幼胚置于農(nóng)桿菌侵染液中10?20min(例如1min或12min或15min或20min)。所述農(nóng)桿菌侵染液是將所述重組農(nóng)桿菌懸浮于侵染培養(yǎng)基得到的。
[0050]每IL所述侵染培養(yǎng)基可包括:蔗糖61.6?75.2g(例如61.6?68.4g或68.4?75.2g或61.6g或68.4g或75.2g)、(NH4)2S04417?509mg(例如417?463mg或463?509mg或417mg或463mg 或 509mg)、KN032547 ?3113mg(例如 2547 ?2830mg 或 2830 ?3113mg 或 2547mg 或 2830mg或3113mg)、KH2P04360?440mg(例如360?400mg或400?440mg或360mg或400mg或440mg)、MgSCU.7H2O 167?204mg(例如 167?185mg或 185?204mg或 167mg或 185mg或204mg)、CaCl2.2H2O 149?183mg(例如 149?166mg或 166?183mg或 149mg或 166mg或 183mg)、MnSCU.H2O 6.8?8.4mg(例如6.8?7.6mg或7.6?8.4mg或6.8mg或7.6mg或8.4mg)、ZnS04.7H2O 1.8?2.2mg(例如1.8?2mg或2?2.2mg或1.8mg或2mg或2.2mg)、H3B〇32.7?3.3mg(例如2.7?3.0mg或3.0?3.3mg或2.7mg或3.0mg或3.3mg)、KI 0.68?0.83mg(例如0.68?0.75mg或0.75?0.83mg或0.68mg或0.75mg或0.83mg)、Na2Mo04.2H2O 0.23?0.28mg(例如0.23?0.25mg或0.25?0.28mg或0.23mg或0.25mg或0.28mg)、CuS〇4.5H2O 0.023?0.028mg(例如0.023?0.025mg或0.025?0.028mg或0.023mg或0.025mg或0.028mg)、CoCl2.6H2O0.023 ?0.028mg (例如0.023 ?0.025mgS0.025?0.028mg 或 0.023mg或0.025mg 或0.028mg)、乙二胺四乙酸鈉鐵鹽32.9?40.1mg(例如32.9?36.6mg或36.6?40.1mg或32.9mg或36.6mg或40.1mg)、氣化膽喊0.088?0.108mg(例如0.088?0.098mg或0.098?0.108mg或0.088mg或0.098mg或0.108mg)、VB20.044?0.054mg(例如0.044?0.049mg或0.049?0.054mg或0.044mg或0.049mg或0.054mg)、D-生物素0.09?0.I Img (例如0.09?0.1 Omg 或 0.10 ?0.llmg 或 0.09mg 或 0.1 Omg 或 0.1 lmg)、煙酸0.18?0.22mg (例如0.18?0.2mg或0.2?0.22mg或0.18mg或0.2mg或0.22mg)、葉酸0.0437?0.0534mg (例如0.0437?
0.0485mg或0.0485?0.0534mg或0.0437mg或0.0485mg或0.0534mg)、VB1.425?0.519mg(例如0.425?0.472mg或0.472?0.519mg或0.425mg或0.472mg或0.519mg)、D_泛酸鈣0.09?0.I Img(例如0.09?0.1mg或0.10?0.I Img或0.09mg或0.1Omg或0.1 lmg)、VB60.18?0.22mg (例如0.18?0.2mg或0.2?0.22mg或0.18mg或0.2mg或0.22mg)、VBi20.0014?0.0017mg (例如0.0014 ?0.0015mg 或0.0015 ?0.0017mg 或 0.0014mg或 0.0OlSmgS0.0017mg)、對(duì)氛基苯甲酸0.044?0.054mg(例如0.044?0.049mg或0.049?0.054mg或0.044mg 或0.049mg 或 0.054mg)和90?I 1ymol (例如90?10ymol或 100?I 1ymol或90ymo I或ΙΟΟμπιοI或11OymoI)乙酰丁香酮。所述侵染培養(yǎng)基的溶劑可為水。所述侵染培養(yǎng)基的pH值可為4.9?5.5(例如4.9?5.2或5.2?5.5或4.9或5.2或5.5)。
[0051 ] 每11^所述侵染培養(yǎng)基可由如下組分組成:蔗糖68.48、(顯4)2304463!1^、KN032830mg、KH2P04400mg、MgS04.7H20 185mg、CaCl2.2H20 166mg^MnSO4.H2O 7.6mg、ZnSCU.7H2O 2mg、H3B033.0mg、KI 0.75mg、Na2Mo04.2H2O 0.25mg、CuS04.5H2O 0.025mg、CoCl2.6H2O 0.02511^、乙二胺四乙酸鈉鐵鹽36.611^、氯化膽堿0.09811^、￥820.04911^、0-生物素0.1mg、煙酸0.2mg、葉酸0.0485mg、VB1.472mg、D-泛酸鈣0.I Omg、VB60.2mg、VB120.0015mg、對(duì)氨基苯甲酸0.049mg和ΙΟΟμηιοΙ乙酰丁香酮，其余為水。所述侵染培養(yǎng)基的pH值具體可為5.2。
[0052]所述農(nóng)桿菌侵染液的OD55tom值為0.3?0.4(例如0.3?0.35或0.35?0.4或0.3或0.35 或 0.4)。
[0053]所述步驟(3)中，所述共培養(yǎng)的條件可為18?22°C(例如18?20°C或20?22°C或18°(:或20°(:或22°C)、暗培養(yǎng)24?48h(例如24?36h或36?48h或24h或36h或48h)。
[0054]所述步驟(3)中，所述共培養(yǎng)的條件具體可為20°C、暗培養(yǎng)36h。
[0055]所述步驟(4)中，所述初次恢復(fù)培養(yǎng)的條件可為28°C?31°C(例如28?29°C或29?31°C或28°C或29°C或31°C)，暗培養(yǎng)7?14天(例如7?10天或10?14天或7天或10天或14天)O
[0056]所述步驟(4)中，所述初次恢復(fù)培養(yǎng)的條件具體可為29°C、暗培養(yǎng)10天。
[0057]所述步驟(5)中，所述培養(yǎng)的條件可為28?31°C (例如28?29°C或29?31°C或28°C或29°C或31°C)、暗培養(yǎng)10?18天(例如10?14天或14?18天或10天或14天或18天)。
[0058]所述步驟(5)中，所述培養(yǎng)的條件具體可為29°C、暗培養(yǎng)14天。
[0059]所述步驟(6)中，所述二次恢復(fù)培養(yǎng)的條件可為28?31°C(例如28?29°C或29?31°(:或28°(:或29°C或31°C)、暗培養(yǎng)7?14天(例如7?10天或10?14天或7天或10天或14天)。
[0060]所述步驟(6)中，所述二次恢復(fù)培養(yǎng)的條件具體可為29°C、暗培養(yǎng)10天。
[0061 ] 所述步驟(7)中，所述培養(yǎng)的條件可為25?29°C (例如25?27°C或27?29°C或25°C或27°C或29°C)、光照培養(yǎng)7?14天(例如7?10天或10?14天或7天或10天或14天)。
[0062]所述步驟(7)中，所述培養(yǎng)的條件具體可為27°C、光照培養(yǎng)10天。
[0063]所述步驟(8)中，所述培養(yǎng)的條件可為25?29°C (例如25?27°C或27?29°C或25°C或 27°C 或 29°C)。
[0064]所述步驟(8)中，所述培養(yǎng)的條件具體可為27°C。
[0065]所述光照培養(yǎng)具體可為光暗交替培養(yǎng)。
[0066 ]所述光暗交替培養(yǎng)的周期具體可為18小時(shí)光照培養(yǎng)/6小時(shí)黑暗培養(yǎng)。
[0067]所述光暗交替培養(yǎng)時(shí)的光照強(qiáng)度可為80?ΙΟΟμΕ/V/s(例如80?90yE/m2/s或90?100yE/m2/s 或 80yE/m2/s 或 90yE/m2/s 或 100yE/m2/s)。
[0068]上述方法中，所述玉米自交系具體可為X178或綜31。
[0069]所述MS鹽可為Sigma公司產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號(hào)為M5524。
[0070]為解決上述問題，本發(fā)明還提供了一種用于玉米自交系遺傳轉(zhuǎn)化的試劑盒。
[0071]本發(fā)明所提供的用于玉米自交系遺傳轉(zhuǎn)化的試劑盒含有所述共培養(yǎng)培養(yǎng)基和/或所述恢復(fù)培養(yǎng)基I和/或所述篩選培養(yǎng)基I和/或所述篩選培養(yǎng)基Π和/或所述恢復(fù)培養(yǎng)基Π和/或所述分化培養(yǎng)基和/或所述生根培養(yǎng)基。
[0072]上述試劑盒，所述玉米自交系具體可為X178或綜31。
[0073]利用本發(fā)明提供的一種玉米自交系遺傳轉(zhuǎn)化方法進(jìn)行兩組試驗(yàn)，每組試驗(yàn)中設(shè)置三個(gè)重復(fù)處理，每個(gè)重復(fù)處理中對(duì)100個(gè)玉米幼胚進(jìn)行遺傳轉(zhuǎn)化，結(jié)果表明，轉(zhuǎn)化效率在
0.1-5%之間?？梢姡瑢⒈景l(fā)明提供的玉米自交系遺傳轉(zhuǎn)化的方法應(yīng)用在玉米自交系遺傳轉(zhuǎn)化中，可獲得較高的轉(zhuǎn)化率，對(duì)玉米育種工作具有重要意義。
【附圖說明】
[0074]圖1為質(zhì)粒pCAMBIA3301載體示意圖。
[0075]圖2為轉(zhuǎn)bar基因植株的生長狀態(tài)。
[0076]圖3為轉(zhuǎn)bar基因植株P(guān)CR檢測結(jié)果。
[0077]圖4為bar蛋白快速檢測。
[0078]圖5為擬轉(zhuǎn)bar基因植株蛋白快速檢測結(jié)果。
【具體實(shí)施方式】
[0079]下面結(jié)合【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)描述，給出的實(shí)施例僅為了闡明本發(fā)明，而不是為了限制本發(fā)明的范圍。
[0080]下述實(shí)施例中的實(shí)驗(yàn)方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。
[0081]下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。
[0082]以下實(shí)施例中的定量試驗(yàn)，均設(shè)置三次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，結(jié)果取平均值。
[0083]自交系X178記載于如下文獻(xiàn)中:許啟鳳.優(yōu)質(zhì)