OHz)和4.46(1H，m)，綜合以上信息可以得出該化合物為一個三萜類化合物。HMBC譜中OH-6與C-6的相關(guān)性說明C-6位連接一個羥基，而C-9位碳信號向高場位移說明乙?；奈恢迷?C-9位。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和R0ESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該 化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。該化合物 化學(xué)式及碳原子編號如下：
[0025] 實(shí)施例2:藥理作用
[0026] 1、材料與方法
[0027] 1.1動物
[0028] 3~4月齡Wistar大鼠40只，雌雄各半，體重210g~250g，由佳木斯大學(xué)實(shí)驗(yàn)動物中 心提供。動物飼養(yǎng)在溫度（22 ± 1) °C、相對濕度55%~65 %、12h光照周期的通風(fēng)干燥環(huán)境 中，采用大小鼠維持料1022飼養(yǎng)。
[0029] 1.2試劑與樣品
[0030] 環(huán)吡酮胺購自中國食品藥品檢定研究院?；衔铮↖)自制，制備方法見實(shí)施例1。鏈 脲佐菌素(STZ)購自美國Sigma公司；S0D、考馬斯亮蘭蛋白測定等試劑盒均購自南京建成生 物工程研究所。甘油三酯試劑盒購自長春匯力工程技術(shù)開發(fā)中心。
[0031] 1.3儀器
[0032] 高速低溫離心機(jī)(5810R，美國Eppendorf公司），高效液相色譜庫侖電化學(xué)分析系 統(tǒng)（HPLC-ECD Coulchemm，ESA，美國）。
[0033] 1.4大鼠分組及模型制備
[0034] 其中50只用于模型組，10只用于正常對照組。禁食8h~16h(自由飲水)后，模型組 大鼠經(jīng)尾靜脈注射STZ 25mg/kg(0. lmol/L枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液，pH4.4)。注射2周后，進(jìn) 行葡萄糖耐量試驗(yàn)，挑選糖耐量減退（IGT)共40只，隨機(jī)分為模型對照組、環(huán)吡酮胺組 (60mg ? kg-1 ? d-M、化合物（I)組（60mg ? kg-1 ? d-i)、環(huán)吡酮胺與化合物（I)組合物組 【30mg ? kg< ? (T1環(huán)吡酮胺+30mg ? kg< ? (T1化合物（I)】，喂以高糖-高脂肪飼料，由基礎(chǔ)飼 料加蔗糖、煉豬油、鮮雞蛋等混合而成，其總熱量20.08J/g。正常對照組大鼠喂以基礎(chǔ)飼料 (含蛋白質(zhì)20 %、碳水化合物53%、脂肪9 %、總熱量為15，42J/g)。正常對照組及糖尿病組每 日灌服等量生理鹽水，持續(xù)喂養(yǎng)及灌胃8周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前一天做葡萄糖耐量試驗(yàn)。
[0035] 1.5血液樣本的采集
[0036] 大鼠空腹在乙醚麻醉下，內(nèi)目此靜脈取血約6ml，2000rpm/min離心15min分離，取血 清，測血脂。
[0037] 1.6腎臟組織勻漿的制備
[0038]取腎皮質(zhì)，去除表面粘膜，用預(yù)冷生理鹽水反復(fù)蕩洗3次，濾紙吸干，稱重后置于玻 璃勻漿器中，用冷凍處理的生理鹽水將此標(biāo)本制成1:10的組織勻漿，4000~6000rpm/min離 心15min，取上清液備用。
[0039] 1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0040]實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(x土s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差 分析和t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0041 ] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0042] 2.1對2型糖尿病模型大鼠血脂的影響
[0043]用藥第8周時(shí)，與正常對照組比較，模型對照組大鼠血清中甘油三酯、膽固醇含量 及低密度脂蛋白含量增高(P〈〇.05)，說明造模成功。與模型對照組比較，環(huán)吡酮胺組、化合 物（I)組甘油三酯、膽固醇、低密度脂蛋明顯下降(P〈〇.05)，與模型對照組比較，環(huán)吡酮胺與 化合物（I)組合物組甘油三酯、膽固醇、低密度脂蛋白明顯下降(P<〇.01)。
[0044] 結(jié)果見表1。
[0045] 2.2對2型糖尿病模型大鼠腎臟組織中超氧化物歧化酶(S0D)活性的影響
[0046] 與正常對照組比較，模型對照組大鼠腎臟組織中超氧化物歧化酶(S0D)活性降低 (P<0.05)。與模型對照組比較，環(huán)吡酮胺與化合物（I)組合物組S0D顯著提高(P<0.01);與 模型對照組比較，環(huán)吡酮胺組、化合物（I)組大鼠腎臟組織中超氧化物歧化酶（S0D)活性提 高(P<0.05)。結(jié)果見表2。
[0047]表1甘油三酯、膽固醇、低密度脂蛋白含量(mmol/L，X±s)
[0049] 表2腎組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性(nmo 1 /mgpro t) (x 土 s)
[0051]超氧化物歧化酶(SOD)活性能反映機(jī)體的抗脂質(zhì)過氧化能力，是體內(nèi)清除氧自由 基抗氧化酶系統(tǒng)的成員之一。S0D的主要作用是強(qiáng)過氧化能力，是體內(nèi)清除氧自由基抗氧化 酶系統(tǒng)的成員之一。S0D的主要作用是將超氧陰離子反應(yīng)生成過氧化氫，后者在過氧化氫酶 (CAT)和谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)的作用下轉(zhuǎn)變成水，從而減少氧自由基在體內(nèi)蓄積過 多而導(dǎo)致的脂質(zhì)過氧化加劇，維護(hù)組織細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)與功能。糖尿病(DM)早期就存在著 較明顯的脂代謝紊亂。
[0052] DM大鼠腎臟發(fā)生明顯氧化應(yīng)激，腎組織過氧化損傷顯著。環(huán)吡酮胺、化合物（I)可 保護(hù)大鼠的抗氧化酶活性、清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，提示抗氧化是環(huán)吡酮胺、化 合物（I)保護(hù)DM大鼠腎臟的機(jī)制之一。環(huán)吡酮胺和化合物（I)聯(lián)合使用后，對2型糖尿病大鼠 的血脂調(diào)節(jié)作用和腎臟保護(hù)作用進(jìn)一步提高，早期應(yīng)用可有效地延緩糖尿病腎臟病變的發(fā) 生和發(fā)展，可以開發(fā)成防治糖尿病腎臟病變的藥物。
[0053]上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物α)， _02. -種環(huán)吡酮胺的藥物組合物，其特征在于:包括環(huán)吡酮胺、如權(quán)利要求1所述的化合 物(I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的環(huán)吡酮胺的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可以接受的載體 包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體 或潤滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的環(huán)吡酮胺的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、膠 囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將紫 苑粉碎，用75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯 和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步 驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個柱體積，再用70%乙醇洗脫 10個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、4:1和2: 1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相 硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~15個柱體積洗脫液，洗 脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用80%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為D101型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療糖尿病腎病的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的環(huán)吡酮胺的藥物組合物在制備治療糖尿病腎病的藥物中 的應(yīng)用。
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種環(huán)吡酮胺的藥物組合物及其醫(yī)藥用途，本發(fā)明提供的環(huán)吡酮胺的藥物組合物中含有環(huán)吡酮胺和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，環(huán)吡酮胺、化合物(Ⅰ)可保護(hù)大鼠的抗氧化酶活性、清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，提示抗氧化是環(huán)吡酮胺、化合物(Ⅰ)保護(hù)DM大鼠腎臟的機(jī)制之一。環(huán)吡酮胺和化合物(Ⅰ)聯(lián)合使用后，對2型糖尿病大鼠的血脂調(diào)節(jié)作用和腎臟保護(hù)作用進(jìn)一步提高，早期應(yīng)用可有效地延緩糖尿病腎臟病變的發(fā)生和發(fā)展，可以開發(fā)成治療糖尿病腎臟病變的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【IPC分類】A61K31/366, A61P3/10, A61P13/12, A61K31/4412, C07D407/06
【公開號】CN105712983
【申請?zhí)枴緾N201610258201
【發(fā)明人】吳珺
【申請人】吳珺
【公開日】2016年6月29日
【申請日】2016年4月23日