一種己酸培養(yǎng)基及其己酸菌酯化液的制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種己酸培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基原料按重量份包括以下組分：牛肉膏2～5份、NaCl 1～3份、葡萄糖1～3份、乙酸鉀10～20份、CaCO3 5～10份、無水乙醇20～30份；材料易得，成本低廉，工藝簡(jiǎn)單易操作，生產(chǎn)設(shè)備簡(jiǎn)單，僅僅需要電熱加熱桶等最常見的簡(jiǎn)易設(shè)備，就能完成己酸的生產(chǎn)發(fā)酵過程，生產(chǎn)的己酸產(chǎn)量高，菌液己酸含量經(jīng)氣相色譜檢測(cè)平均到12～18g/L；可用于濃香型白酒企業(yè)進(jìn)行窖外產(chǎn)酸和窖內(nèi)生香，提高濃香型白酒品質(zhì)。
【專利說明】
一種己酸培養(yǎng)基及其己酸菌酯化液的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及微生物發(fā)酵領(lǐng)域，特別涉及一種己酸培養(yǎng)基及其己酸菌酯化液的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002]己酸是濃香型白酒中最重要的有機(jī)酸，有增強(qiáng)濃香型白酒的后味綿甜感作用，其與濃香型白酒泥窖發(fā)酵糟醅產(chǎn)生的乙醇，通過酯化作用生成的己酸乙酯是濃香型白酒的主體香物質(zhì)，己酸乙酯在乙醇中的濃度，決定著濃香型白酒的質(zhì)量品質(zhì)，因此，如何提高濃香型白酒發(fā)酵窖糟醅的己酸濃度，進(jìn)而提高己酸乙酯濃度，成為固態(tài)發(fā)酵濃香型白酒生產(chǎn)企業(yè)的主要課題。目前，濃香型企業(yè)提高白酒己酸乙酯方法包括:1.使用老窖進(jìn)行濃香型白酒的生產(chǎn);2.篩選高效發(fā)酵己酸菌，通過制備富含己酸菌的人工窖泥，進(jìn)行新窖老熟或加沙生產(chǎn)發(fā)酵濃香型白酒;3.篩選高效發(fā)酵己酸菌，窖外培養(yǎng)高濃度己酸溶液進(jìn)行灌窖，進(jìn)行窖外和窖內(nèi)生香;4.直接在濃香型原酒中添加己酸乙酯。其中，1、2、3三種方法是目前固態(tài)法白酒生產(chǎn)中較為通用的方法，第4中方法在液態(tài)法白酒中廣為應(yīng)用。方法I中要獲得高產(chǎn)的乙酸，進(jìn)而要提高白酒中己酸乙酯濃度，需要I年以上的老窖才可能達(dá)到生產(chǎn)目的，嚴(yán)重制約濃香型白酒品質(zhì)的提高;方法2，可以加快窖泥的老熟，但要獲得己酸菌及其相關(guān)菌(如產(chǎn)甲烷細(xì)菌、丁酸菌、醋酸)共棲息的窖泥配方及其通過制備生產(chǎn)實(shí)用型窖池，其窖泥配方的篩選及其后的建窖或夾沙發(fā)酵工藝較為復(fù)雜，難以為普通中小型濃香型白酒企業(yè)采用;方法4主要通過在濃香型白酒的勾調(diào)環(huán)節(jié)直接添加己酸乙酯，其成品酒中缺少濃香型白酒的固態(tài)感，僅僅用于濃香型白酒的低端產(chǎn)品中，且為廣大消費(fèi)者所排斥。由于己酸菌為嚴(yán)格厭氧或微氧的土壤微生物，其發(fā)酵培養(yǎng)基成分及其己酸生產(chǎn)方法較為復(fù)雜，嚴(yán)重影響了廣大中小型白酒企業(yè)的生產(chǎn)應(yīng)用。現(xiàn)有技術(shù)中，申請(qǐng)?zhí)朇N201310145627.1公開一種濃縮己酸菌液的制備方法:采用乙酸鈉5?8g/L，氯化鋅0.0I?0.02g/L，磷酸二氫鉀0.2?0.4g/L，麩皮乙醇發(fā)酵原液200?280mL/L，玉米蛋白粉水解液20?60mL/L，水定容至IL，pH6.5?7.0;起存在的缺點(diǎn)是工藝復(fù)雜；申請(qǐng)?zhí)朷CN200510047125.0公開窖泥己酸菌培養(yǎng)技術(shù):將乙酸鈉培養(yǎng)基在0.1Mpa，30min條件下高壓滅菌，待溫度降到30_40°C時(shí)在無菌操作條件下添加0.6 %木糖和0.1 %的L-抗壞血酸，并將其搖勻，然后加入碳酸鈣和乙醇，在10%—33°C，該發(fā)明需要進(jìn)行無菌操作；中國(guó)釀酒研究院提供的培養(yǎng)基:蛋白胨5.0g/L，牛肉膏10g/L，酵母膏5.0g/L，葡萄糖5.0g/L，NaCl 5.0g/L;酵母膏1.0g/10L，醋酸鈉0.5g/100L，MgS04 7H20 0.02g/100mL，K2HP04 0.04g/100mL，CaC03 0.5g/100mL，(NH4)2S04 0.05g/100mL。[注]0.5kgf/cm2滅菌30min，然后無菌操作加入乙醇(總濃度達(dá)2 %?2.5 % )，其幾乎不產(chǎn)己酸；另外，還有采用乙酸鉀 10.00g/L，K2HP04 0.31g/L，KH2P04 0.23g/L，NH4Cl 0.25g/L，MgS04x 7H200.20g/L，微量元素SL-10 1.00ml/L，亞砸酸鈉-媽酸鹽溶液I.00ml/L，Yeast extract1.00g Na-忍天青(0.l%w/v)0.50ml/L，乙醇20.00ml/L，NaHC032.50ml/L，七種維生素溶液1.00ml/L,L-Cysteine-HCl x H20 0.25g/L，Na2S x 9H20 0.25g/L,水 1000mL，該培養(yǎng)基需要在厭氧條件下無菌培養(yǎng);還有一種乙醇醋酸鈉培養(yǎng)基(Ethanol-acetate Medium,EAM):乙醇2.0%(滅菌后使用前加入)、NaAc 0.5%、酵母膏0.1%、MgS04.7H20 0.02%、Κ2ΗΡ04
0.04%、(NH4)2S04 0.05%、CaC03 I %，自然ρΗ;0.12MPa高壓蒸汽滅菌30min。固體培養(yǎng)基加入3.0%的瓊脂，該培養(yǎng)基成分較為復(fù)雜，需要高壓滅菌鍋、超凈工作臺(tái)等設(shè)備多數(shù)白酒生產(chǎn)企業(yè)幾乎沒有的設(shè)備，不可能被濃香型企業(yè)，尤其是中小型濃香型釀酒企業(yè)大規(guī)模采用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]有鑒于此，本發(fā)明的目的在于提供一種己酸培養(yǎng)基及其己酸菌酯化液的制備方法，材料易得，成本低廉，工藝簡(jiǎn)單易操作，生產(chǎn)設(shè)備簡(jiǎn)單，生產(chǎn)的己酸產(chǎn)量高，可用于濃香型白酒企業(yè)進(jìn)行窖外產(chǎn)酸和窖內(nèi)生香，提高濃香型白酒品質(zhì)。
[0004]本發(fā)明的己酸培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基原料按重量份包括以下組分:牛肉膏2?5份、NaCl I?3份、葡萄糖I?3份、乙酸鉀10?20份、CaC03 5?10份、無水乙醇20?30份；
[0005]進(jìn)一步，所述培養(yǎng)基原料按重量份包括以下組分:牛肉膏3份、NaCl2份、葡萄糖2份、乙酸鉀15份、CaCO3 8份、無水乙醇25份。
[0006]本發(fā)明還公開一種利用己酸培養(yǎng)基制備己酸菌酯化液的方法，包括以下步驟:
[0007]將牛肉膏、NaCl、葡萄糖、乙酸鉀、CaCO3的混合水溶液煮沸并保持5?15分鐘后降溫至溫度為85?95°C，然后加入己酸菌菌種液后降溫至溫度為60?80°C，最后加入無水乙醇在溫度為32?35°C下培養(yǎng)15?20天；
[0008]進(jìn)一步，煮沸并保持10分鐘后降溫至溫度為90°C，然后加入己酸菌菌種液后降溫至溫度為70°C，最后加入無水乙醇在溫度為33°C下培養(yǎng)18天；
[0009]進(jìn)一步，將牛肉膏、NaCl、葡萄糖、乙酸鉀、CaCO3的混合水溶液采用電加熱煮沸；
[0010]進(jìn)一步，所述己酸菌菌種液為DSM555、CICC20860、CICC8022中的一種或兩種以上混合物；
[0011]進(jìn)一步，所述己酸菌菌種液的接種比為5-10%;
[0012]進(jìn)一步，所述己酸菌菌種液的接種比為7%;
[0013]進(jìn)一步，采用電熱加熱桶煮沸。
[0014]本發(fā)明的有益效果:本發(fā)明的一種己酸培養(yǎng)基及其己酸菌酯化液的制備方法，材料易得，成本低廉，工藝簡(jiǎn)單易操作，生產(chǎn)設(shè)備簡(jiǎn)單，僅僅需要電熱加熱桶等最常見的簡(jiǎn)易設(shè)備，就能完成己酸的生產(chǎn)發(fā)酵過程，生產(chǎn)的己酸產(chǎn)量高，菌液己酸含量經(jīng)氣相色譜檢測(cè)平均到12?18g/L;可用于濃香型白酒企業(yè)進(jìn)行窖外產(chǎn)酸和窖內(nèi)生香，提高濃香型白酒品質(zhì)。
【附圖說明】
[0015]下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述:
[0016]圖1為己酸菌的產(chǎn)量圖。
【具體實(shí)施方式】
[0017]實(shí)施例一
[0018]本實(shí)施例的己酸培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基原料按重量份包括以下組分:牛肉膏3份、NaCl 2份、葡萄糖2份、乙酸鉀15份、CaCO3 5份、無水乙醇20份。
[0019]利用本實(shí)施例的己酸培養(yǎng)基制備己酸菌酯化液的方法包括以下步驟:將牛肉膏、NaCl、葡萄糖、乙酸鉀、CaCO3和自來水混合加入至100L電熱開水桶中，攪拌均勻，加熱至沸騰，并保持10分鐘后降溫至溫度為90°C，然后加入接種比為5%的己酸菌菌種液DSM555后降溫至溫度為80 °C，最后加入無水乙醇在溫度為34 °C下培養(yǎng)I 5天；發(fā)酵液己酸濃度1797.45mg/Lo
[0020]實(shí)施例二
[0021]本實(shí)施例的己酸培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基原料按重量份包括以下組分:牛肉膏5份、NaCl 3份、葡萄糖3份、乙酸鉀20份、CaCO3 10份、無水乙醇20?30份。
[0022]利用本實(shí)施例的己酸培養(yǎng)基制備己酸菌酯化液的方法包括以下步驟:將牛肉膏、NaCl、葡萄糖、乙酸鉀、CaCO3和自來水混合加入至100L電熱開水桶中，攪拌均勻，加熱至沸騰，并保持5分鐘后降溫至溫度為95°C，然后加入接種比為10% (1L)的己酸菌菌種液CICC20860后降溫至溫度為70°C，最后加入無水乙醇在溫度為32°C下培養(yǎng)20天；己酸濃度1801.0461mg/100mLo
[0023]實(shí)施例三
[0024]本實(shí)施例的己酸培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基原料按重量份包括以下組分:牛肉膏4份、NaCl 2.5份、葡萄糖2.5份、乙酸鉀18份、CaCO3 7份、無水乙醇25份。
[0025]利用本實(shí)施例的己酸培養(yǎng)基制備己酸菌酯化液的方法包括以下步驟:將牛肉膏、NaCl、葡萄糖、乙酸鉀、CaCO3和自來水混合加入至100L電熱開水桶中，攪拌均勻，加熱至沸騰，并保持8分鐘后降溫至溫度為85 °C，然后加入接種比為7% (7L)的己酸菌菌種液CICC8022后降溫至溫度為60°C，最后加入無水乙醇在溫度為35°C下培養(yǎng)15天;發(fā)酵液己酸濃度 1647.87mg/100mL。
[0026]實(shí)施例四
[0027]本實(shí)施例的己酸培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基原料按重量份包括以下組分:牛肉膏2份、NaCl I份、葡萄糖I份、乙酸鉀10份、CaCO3 5份、無水乙醇20份。
[0028]利用本實(shí)施例的己酸培養(yǎng)基制備己酸菌酯化液的方法包括以下步驟:將牛肉膏、NaCl、葡萄糖、乙酸鉀、CaCO3和自來水混合加入至100L電熱開水桶中，攪拌均勻，加熱至沸騰，并保持5分鐘后降溫至溫度為85°C，然后加入接種比為5%的己酸菌菌種液后降溫至溫度為60°C，最后加入無水乙醇在溫度為32°C下培養(yǎng)15天。
[0029]實(shí)施例五
[0030]本實(shí)施例的己酸培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基原料按重量份包括以下組分:牛肉膏5份、NaCl 3份、葡萄糖3份、乙酸鉀20份、CaCO3 10份、無水乙醇30份。
[0031]利用本實(shí)施例的己酸培養(yǎng)基制備己酸菌酯化液的方法包括以下步驟:將牛肉膏、NaCl、葡萄糖、乙酸鉀、CaCO3和自來水混合加入至100L電熱開水桶中，攪拌均勻，加熱至沸騰，并保持15分鐘后降溫至溫度為95°C，然后加入接種比為10%的己酸菌菌種液后降溫至溫度為80°C，最后加入無水乙醇在溫度為35°C下培養(yǎng)20天。
[0032]實(shí)施例六
[0033]本實(shí)施例的己酸培養(yǎng)基，所述培養(yǎng)基原料按重量份包括以下組分:牛肉膏3份、NaCl 2份、葡萄糖2份、乙酸鉀15份、CaCO3 8份、無水乙醇25份。
[0034]利用本實(shí)施例的己酸培養(yǎng)基制備己酸菌酯化液的方法包括以下步驟:將牛肉膏、NaCl、葡萄糖、乙酸鉀、CaCO3和自來水混合加入至10L電熱開水桶中，攪拌均勻，加熱至沸騰，并保持10分鐘后降溫至溫度為90°C，然后加入接種比為7%的己酸菌菌種液后降溫至溫度為70°C，最后加入無水乙醇在溫度為33°C下培養(yǎng)18天。
[0035]最后說明的是，以上實(shí)施例僅用以說明本發(fā)明的技術(shù)方案而非限制，盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的宗旨和范圍，其均應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的權(quán)利要求范圍當(dāng)中。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.一種己酸培養(yǎng)基，其特征在于:所述培養(yǎng)基原料按重量份包括以下組分:牛肉膏2?5份、NaCl I?3份、葡萄糖I?3份、乙酸鉀10?20份、CaC03 5?10份、無水乙醇20?30份。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的己酸培養(yǎng)基，其特征在于:所述培養(yǎng)基原料按重量份包括以下組分:牛肉膏3份、NaCl 2份、葡萄糖2份、乙酸鉀15份、CaCO3 8份、無水乙醇25份。3.—種利用己酸培養(yǎng)基制備己酸菌酯化液的方法，其特征在于:包括以下步驟: 將牛肉膏、NaCl、葡萄糖、乙酸鉀、CaCO3的混合水溶液煮沸并保持5?15分鐘后降溫至溫度為85?95°C，然后加入己酸菌菌種液后降溫至溫度為60?80°C，最后加入無水乙醇在溫度為32?35°C下培養(yǎng)15?20天。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的己酸菌酯化液的制備方法，其特征在于:煮沸并保持10分鐘后降溫至溫度為90°C，然后加入己酸菌菌種液后降溫至溫度為70°C，最后加入無水乙醇在溫度為33°C下培養(yǎng)18天。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的利用己酸培養(yǎng)基制備己酸菌酯化液的方法，其特征在于:將將牛肉膏、NaCl、葡萄糖、乙酸鉀、CaCO3的混合水溶液采用電加熱煮沸。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用己酸培養(yǎng)基制備己酸菌酯化液的方法，其特征在于:所述己酸菌菌種液為DSM555、CICC20860、CICC8022中的一種或兩種以上混合物。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的利用己酸培養(yǎng)基制備己酸菌酯化液的方法，其特征在于:所述己酸菌菌種液的接種比為5-10%。8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的利用己酸培養(yǎng)基制備己酸菌酯化液的方法，其特征在于:所述己酸菌菌種液的接種比為7%。9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的利用己酸培養(yǎng)基制備己酸菌酯化液的方法，其特征在于:采用電熱加熱桶煮沸。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK105820983SQ201610285994
【公開日】2016年8月3日
【申請(qǐng)日】2016年5月3日
【發(fā)明人】薛正楷
【申請(qǐng)人】瀘州職業(yè)技術(shù)學(xué)院