間苯三酚駢松香烷二萜類化合物及其制備方法和藥物用圖
【專利摘要】本發(fā)明屬醫(yī)藥技術領域，涉及間苯三酚駢松香烷二萜類化合物及其制備方法和藥物用途，尤其是在制備蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制劑的用途。本發(fā)明從金粟蘭科(Chloranthaceae)金粟蘭屬植物東南金粟蘭(Chloranthus oldhami，又名臺灣金粟蘭，四葉金)的全草或根部提取、分離獲得的、具有蛋白酪氨酸磷酸酶1B(PTP1B)抑制活性的新型間苯三酚駢松香烷二萜類化合物(結(jié)構如下式)，其中R1、R2為甲基或羥甲基；R3為長鏈烯烴。經(jīng)體外生物活性測試，結(jié)果表明，所述化合物具有顯著的PTP1B抑制活性，可用于制備預防、延緩或治療糖尿病、肥胖癥及其并發(fā)癥和其他PTP1B介導的疾病藥物。。
【專利說明】
間苯三酚駢松香烷二萜類化合物及其制備方法和藥物用途
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬醫(yī)藥技術領域，涉及間苯三酚駢松香烷二萜類化合物及其制備方法和藥 物用途，尤其是在制備蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制劑的用途。
【背景技術】
[0002] 目前已知，蛋白酪氨酸磷酸酶（protein tyrosine phosphatase, PTP)是調(diào)節(jié)細 胞內(nèi)蛋白酪氨酸殘基磷酸化水平的酶家族，與細胞增殖和胞內(nèi)多種信號轉(zhuǎn)導過程密切相 關（Fischer等，Science 1991，253, 401-406)。作為PTP家族中最早被純化和確定生物 學特征的成員，所述蛋白酪氨酸磷酸酶lB(protein tyrosine phosphatase ΙΒ,ΡΤΡΙΒ)廣 泛分布于多種人體組織中；其全長約50KDa(Charbonneau等，Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1989, 86, 5252 - 5256)。有研究發(fā)現(xiàn)，所述PTP1B表達的改變，與人類多種疾病相關，主要包 括糖尿病、肥胖癥和癌癥等。
[0003] 糖尿?。╠iabetes mellitus)和肥胖癥（obesity)是嚴重威脅人類身體健康的內(nèi) 分泌紊亂性代謝類疾病，常伴隨著外周組織細胞對胰島素敏感性的降低（即胰島素抵抗）， 引起肌肉、肝臟及脂肪組織中的糖脂代謝平衡失調(diào)。根據(jù)糖尿病的發(fā)病機制，目前一般將糖 尿病分為I型糖尿?。ㄒ葝u素依賴型，IDDM)與II型糖尿?。ǚ且葝u素依賴型，NIDDM); 而據(jù)國際糖尿?。↖DF)聯(lián)盟資料，糖尿病中90%以上是II型糖尿病，而胰島素抵抗則是 II型糖尿病發(fā)生、發(fā)展過程中的關鍵因素。有研究表明，所述PTP1B可使激活的胰島素受 體和胰島素受體底物去磷酸化，在胰島素和瘦素的信號傳導過程中起著重要的負調(diào)控作用 (Kenndy等，Science 1999, 283, 1544 - 1548)，即所述PTP1B的過度表達將會導致胰島素和 瘦素信號的變化，從而導致糖尿病和肥胖癥的發(fā)生。因此，PTP1B已成為治療糖尿病和肥胖 癥等相關疾病的重要的藥物祀點（Johnson等，NatRevDrug Discov 2002,1,696 - 709);尋 找PTP1B的特異性抑制劑，通過抑制PTP1B的活性來提高外周組織對胰島素的敏感性，對糖 尿病和肥胖癥治療有著重要的應用前景。
[0004] 此外，有研究發(fā)現(xiàn)PTP1B在包括慢性髓細胞性白血病、乳腺癌、卵巢癌和前 列腺癌在內(nèi)的若干癌細胞中都有過量表達和水平提高現(xiàn)象（Liu等，J Biol Chem 1996, 271，31290 - 31295 ;Kenneth 等，Mol Cell Biol 1998, 18, 2965 - 2975 ;Weiner 等，J Natl Cancer Inst 1996, 86, 372 - 378)，表明PTP1B在上述癌癥細胞中起著調(diào)控激酶活性 的作用；因此，PTP1B的抑制劑可用于治療或預防癌癥或在癌癥發(fā)展時用于減緩其進展。還 有研究表明PTP1B抑制劑可用于治療或預防神經(jīng)退行性疾病。
[0005] 綜上所述，PTP1B作為新的藥用靶點已成為近年來生物學及創(chuàng)新藥物研究的一個 熱點；隨著高通量篩選技術的廣泛運用，目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)較多種類的PTP1B抑制劑。然而迄今 為止，尚未有任何PTP1B抑制劑得以成功通過臨床前實驗，限制其成藥的首要原因是PTP1B 與PTP家族中其他的酶具有相同的催化中心，在抑制PTP1B活性的同時提高其針對PTP1B 的選擇性極其重要；另外，目前發(fā)現(xiàn)的活性比較高的抑制劑多帶有磷酸、羧酸、磺酸等極性 基團，具有較高的負電荷，不利于透過細胞膜，導致生物利用度差。因此，尋找高效、高選擇 性，同時兼具良好藥代動力學性質(zhì)的小分子PTP1B抑制劑具有重要意義，對于糖尿病和肥 胖癥等疾病的治療有著廣闊的應用前景。
[0006] 中草藥預防或治療糖尿病在中國有著悠久的歷史，療效穩(wěn)定，不良反應少，具有多 成分、多靶點、低毒性的獨特優(yōu)勢；同時，天然產(chǎn)物往往具有結(jié)構復雜性和多樣性的特點，是 新藥創(chuàng)制的重要來源。因此從中草藥活性成分中尋找開發(fā)新型、高效的PTP1B抑制劑具有 重要的研究價值。
[0007] 東南金粟蘭（Chloranthus oldhami Solms-Laub.，又名臺灣金粟蘭，四葉金）為 金粟蘭科（Chloranthaceae)金粟蘭屬植物，主要分布于我國東南部如福建、廣東等地，在 民間以全草入藥，具有活血化瘀、解毒消腫等功效，其化學成分尚未有任何報道。本申請的 發(fā)明人擬從東南金粟蘭中分離具有全新結(jié)構的間苯三酚駢二萜類化合物，進一步提供新的 PTP1B抑制劑。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0008] 本發(fā)明目的是提供一種間苯三酚駢松香烷二萜類化合物及其制備方法和藥物用 途，尤其是在制備蛋白酪氨酸磷酸酶1B抑制劑的用途。本發(fā)明從藥用植物東南金粟蘭提取 分離得到的間苯三酚駢松香烷二萜類化合物用于制備蛋白酪氨酸磷酸酶PTP1B抑制劑，經(jīng) 藥理試驗研究表明，該類化合物具有抑制PTP1B的顯著活性，可用于制備治療糖尿病、肥胖 癥及其他PTP1B介導的疾病的藥物。
[0009] 本發(fā)明從藥用植物東南金粟蘭（Chloranthus oldhami，又名臺灣金粟蘭，四葉金） 中提取分離到新的結(jié)構的間苯三酚駢松香烷二萜類化合物，并經(jīng)生物活性測試表明，該類 化合物可顯著抑制蛋白酪氨酸磷酸酶ΙΒ(ΡΤΡΙΒ)，可用于制備預防或治療PTP1B介導的疾 病（特別是II型糖尿病、肥胖癥及其并發(fā)癥）的藥物或該類藥物的先導化合物。
[0010] 本發(fā)明所述的間苯三酚駢并松香烷二萜類化合物，以帶有多烯長鏈的?；g苯三 酚與對映-松香烷二萜為主要結(jié)構片段，兩者以2, 3-二氫呋喃環(huán)相駢聯(lián)，其具有如下化學 結(jié)構式：
[0011]
[0012] 其中Ri、R2為甲基或羥甲基；R3為長鏈烯烴
[0013] 其中，
[0014] 當札為甲基，R 2為羥甲基，R 3為-(CH 2) 6CH2 (CH = CH-CH2) 3CH3時，為化合物1 ;
[0015] 當&為羥甲基，R 2為甲基，R 3為-(CH 2) 6CH2 (CH = CH-CH2) 3CH3時，為化合物2 ;
[0016] 當札為羥甲基，R 2為甲基，R 3為-(CH 2) 7CH2 (CH = CH-CH2) 2CH2CH3時，為化合物3。
[0017] 本發(fā)明的另一目的是提供該類化合物的制備方法。
[0018] 本發(fā)明所述的化合物可通過從東南金粟蘭全草或其根部植物中分離純化得到；也 可經(jīng)本領域技術人員熟知的化學方法合成獲得。
[0019] 本發(fā)明中所述的化合物通過下述方法制備：晾干粉碎的東南金粟蘭全草或其根 部用乙醇室溫浸泡提取，提取液減壓回收溶劑，合并后得浸膏。浸膏用水分散后依次用石 油醚和乙酸乙酯萃取，得石油醚部分、乙酸乙酯部分和水溶性部分。乙酸乙酯部分經(jīng)硅膠、 Sephadex LH-20、MCI柱層析及反相半制備HPLC分離，得化合物1 - 3。
[0020] 本發(fā)明對所得的間苯三酚駢松香烷二萜類化合物進行了蛋白酪氨酸磷酸酶 IB (PTP1B)抑制活性實驗，結(jié)果表明，該類化合物均顯示有顯著的抑制活性，可用于制成預 防、延緩或治療由PTP1B介導的疾病，特別是制備預防或治療II型糖尿病和肥胖癥的藥物 或是作為該類藥物的先導化合物。
[0021] 本發(fā)明所述的化合物可單獨應用或者合用，亦可與藥學上可接受的載體或賦形劑 結(jié)合，按照常規(guī)方法制成口服或者非口服劑型。
[0022] 本發(fā)明具有如下優(yōu)點：
[0023] 所述目標化合物為首次發(fā)現(xiàn)的具有獨特新骨架結(jié)構的化合物，其化學結(jié)構新穎， 迄今尚未發(fā)現(xiàn)有任何文獻報道；該類化合物具有顯著的PTP1B酶抑制活性，對現(xiàn)代人群中 高發(fā)的糖尿病、肥胖癥等具有應用前景。
【具體實施方式】
[0024] 下面結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步闡述，但這些實施例絕非對本發(fā)明有任何限 制。本領域技術人員在本說明書的啟示下對本發(fā)明實施中所作的任何變動都將落在權利要 求書的范圍內(nèi)。
[0025] 下述制備例中，比旋光測試通過JASCO P-1020旋光儀完成；紫外和紅外光譜數(shù)據(jù) 分別通過Shimadzu UV-2550紫外光譜儀和Nicolet AVATAR 360型紅外光譜儀獲得；NMR 用 Bruker Avance II 400 型儀測定；LR-MS 由 Agilent llOOSeries LC/MSD G1946D 型儀 測定，HR-MS由AB Sciex TripleTOF 5600型儀測定；所使用的硅膠和薄層板為煙臺康比諾 公司生產(chǎn)，Sephadex LH-20 凝膠為瑞士 GE Healthcare Bio-Sciences 公司生產(chǎn)，MCI Gel CHP 20Ρ(75-150 μπι)為日本三菱公司生產(chǎn)；半制備HPLC為Waters e2695,配備2998PDA和 2424蒸發(fā)光散射雙檢測器以及SunFire 0DS (5 μ m，250X 10mm)半制備柱；所有試劑均為上 海國藥集團化學試劑有限公司生產(chǎn)。
[0026] 實施例1 :制備間苯三酚駢松香烷二萜類化合物
[0027] 取東南金粟蘭根7kg，粉碎后用95 %乙醇室溫冷浸提取3次，合并提取液，減壓濃 縮，得浸膏550g ;浸膏用水分散后依次用石油醚與乙酸乙酯萃取，得乙酸乙酯部分71. 5g ; 乙酸乙酯部分經(jīng)100-200目硅膠柱層析，以石油醚：乙酸乙酯20:1-0:1梯度洗脫，得到16 個組分（F1-F16);組分Fll(4.1g)又經(jīng)MCI柱層析，以80%-100%甲醇梯度洗脫，得到9 個亞組分（Flla-lli)，其中亞組分Flli(330.6mg)再依次經(jīng)硅膠柱層析（洗脫劑為二氯甲 烷：甲醇25:1)和凝膠S印hadex LH-20柱層析（洗脫劑為甲醇）得到化合物2和3的混合 物；對上述混合物采用半制備型HPLC進一步分離，以90%甲醇等度洗脫（流速：3ml/min)， 分別得到化合物 2 (14. 2mg, tR= 22. 9min)和 3 (3. 4mg, t R= 25. 4min)。組分 F13 (1. 7g)經(jīng) S印hadex LH-20以純甲醇洗脫，得到9個亞組分（F13a-13i)，其中亞組分F13h(260.0mg) 依次進一步經(jīng)MCI柱層析（80% -100%甲醇梯度洗脫）及半制備HPLC純化（以98%甲醇 等度洗脫，流速3ml/min)得化合物1 (6. 25mg, tR= 29. 5min)。
[0028] 化合物1 - 3均為新化合物，其光譜及理化數(shù)據(jù)如下：
[0029] 化合物 1 :白色無定形粉末，[a ]D25+43. l(c 0· 51，Me0H) ;UV(MeOH) λΜΧ(1〇8ε)231(3·76)，285(3·73)ηπι;ΙΚ(?·?1πι)ν nax:3 39 7 (0H)，3009 (C = C-H), 2962, 2927, 2854, 1618 (C = 0), 1507,1431,1372,1262,1184,1017,896, 821, 716, 679cm S NMR(400MHz, CDC13) : δ 〇. 88 (3H, s, Me-18), 0. 89 (1H, m, H-3 a)，0· 90 (1H, m, H-la), 0· 95 (3H, d, J = 6. 8Hz, Me-17), 0· 97 (3H, s, Me-20), 0· 98 (3H, t,J = 7. 5Hz, Me-18"), 1. 02 (3H, d, J = 6. 8Hz, Me-16), 1. 21 (1H, br d, J = 12. 8Hz, H-5)，1. 33 (8H, m, H2-4〃 ~7")，1. 43 (2H, m, H2-2)，1. 58 (2H, m, H-12a, H-15 )，1. 64-1. 66 (4H，m，H-9, H-12b，H2-3")，1. 76 (1H，m，H-lb)，1. 78 (1H，m，H-6b)，1. 81 (1H, br d, J = 13. 7Hz, H-3b), 1. 96 (1H, m, H-lla), 1. 98(1H, m, H-llb), 2. 06(2H, m ，H2-8")，2.08(2H，m，H2-17")，2.42(lH，br d，J = 13.8Hz，H-6a)，2.81(4H，t，J = 6. 6Hz，Η2-1Γ，14")，2. 88(1H，dt，J = 15. 1，7. 5Hz，H-2"a)，2. 93(1H，s，H-14)，3. 01 ( lH，dt，J = 15.1，7.8Hz，H-2"b)，3.52(lH，d，J = 10.7Hz，H-19a)，3.71(lH，br d，J = 6. 0Hz，H-7)，3. 88 (1H，d，J = 10. 7Hz，H-19b)，5. 31-5. 41 (6H，m，H-9"，10"，12"，13"，15"，1 6")，5.87(lH，s，H-5'），13.5(lH，s，0H-6'）；13C NMR(100MHz，CDC13): δ41·0(Ο1)，18.3(C -2)，35. 1 (C-3)，38. 1 (C-4)，49. 0 (C-5)，22. 7 (C-6)，44. 3 (C-7)，91. 8 (C-8)，53. 6 (C-9)，36 ? 4 (C-10)，21. 9 (C-ll)，18. 1 (C-12)，64. 5 (C-13)，62. 9 (C-14)，34. 1 (C-15)，17. 6 (C-16)，1 8.1(C-17)，26.9(C-18)，65.2(C-19)，17.3(C-20)，101.9(C-1'），160.7(C-2'），108.3(C- 3'），159. 7 (C-4,），96. 5 (C-5,），165. 2 (C-6,），204. 3 (C-l")，42. 9 (C-2")，24. 4 (C-3")，29 ? 3 (C-4")，29. 5 (C-5")，29. 6 (C-6")，29. 7 (C-7")，27. 3 (C-8")，130. 3 (C-9")，127. 1 (C-10 ")，25. 6 (C-l Γ)，128. 2 (C-12")，128. 3 (C-13")，25. 5 (C-14")，127. 8 (C-15")，132. 0 (C-l 6")，20.5(C-17")，14.3(C-18");(+)ESIMS m/z 689[M+H]+，711[M+Na]+;(+)HRESMS m/z 689. 4767 [M+H] + (calcd for C44H6506, 689. 4776, Δ = -1.2ppm).；
[0030] 化合物 2 :白色無定形粉末，[a]D25+18.7(c 0.08，Me0H) ;UV(MeOH)λΜΧ(1〇8 ε ) 232 (3. 34)，284(3. 15)nm ;IR(film) vnax:3400, 3011，2962, 2924, 285 2, 1620, 1507, 1432, 1374, 1262, 1183, 1017, 822, 723and 680cm S NMR(400MHz, CDC13) : δ 〇· 80 (3H, s, Me-19), 0· 89 (1H, dd, J = 12. 3, 12. 0Hz, H-la), 0· 98 (3H, d, J =7. 2Hz,Me-17), 0. 98(3H, t, J = 7. 5Hz, Me-18"), 1. 05 (3H, d, J = 7. 2Hz,Me-16) ，1. 09 (3H, s, Me-20), 1. 19 (1H, m, H-3a), 1. 33 (8H, m, H2-4〃 ~7"), 1. 42 (1H, br d, J =12.9Hz, H-5) ,1.49 (lH，m，H-2a), 1.50 (lH，dd，J = 12. 0,10.8Hz, H-3b) ,1.58( 2H，m，H-12a，H-15)，1. 59 (1H，m，H-2b)，1. 62-1. 66 (5H，m，H-9, H2-12, H2-3")，1. 68 ( 1H，m，H-lb)，1. 76(1H，ddd，J = 14. 7, 12. 9, 5. 2Hz，H-6b)，1. 96 (1H，m，H-lla)，2. 0 4(lH，br d，J = 12.0Hz，H-llb) ,2.06 (2H，m，H2-8") ,2.07 (2H，m，H2-17") ,2.47 (1H ，br d，J = 14.7Hz，H-6a)，2.82(4H，t，J = 6.6Hz，H2-ir，14")，2.90(lH，dt，J = 15. 1，7. 9Hz，H-2"a)，2. 99 (1H，dt，J = 15. 1，7. 8Hz，H-2"b)，3. 03 (1H，s，H-14)，3. 03 (1H，d ，J = 11.7Hz，H-18a)，3.60(lH，d，J = 11.7Hz，H-18b)，3.71(lH，br d，J = 5.2Hz，H-7)， 5. 31-5. 41 (6H，m，H-9"，10"，12"，13"，15"，16")，5. 88 (1H，s，H-5'），13. 4 (1H，s，OH-6'）；13C NMR(100MHz, CDC13) : δ 39. 9 (C-l)，17. 8 (C-2)，35. 2 (C-3)，37. 6 (C-4)，41. 0 (C-5)，20. 7 (C-6)，46. 6 (C-7)，92. 7 (C-8)，51. 6 (C-9)，37. 3 (C-10)，21. 6 (C-l 1)，18. 0 (C-12)，64. 0 (C- 13)，62. 3 (C-14)，34. 5 (C-15)，17. 5 (C-16)，18. 0 (C-17)，71. 8 (C-18)，18. 0 (C-19)，16. 8 (C -20)，102. 8 (C-Γ )，161. 4 (C-2,），107. 3 (C-3,），158. 9 (C-4,），96. 9 (C-5,），165. 0 (C-6,）， 204. 3 (C-l")，43. 0 (C-2")，24. 1 (C-3")，29. 3 (C-4")，29. 4 (C-5")，29. 7 (C-6")，29. 7 (C-7" )，27. 3 (C-8")，130. 3 (C-9")，127. 1 (C-10")，25. 6 (C-ΙΓ)，128. 2 (C-12")，128. 3 (C-13") ，25. 5 (C-14")，127. 7 (C-15")，132. 0 (C-16")，20. 5 (C-17")，14. 3 (C-18") ; (+) ESIMS m/z 689[M+H]+, 711[M+Na]+； ( - )ESIMS m/z 687[M-H] _；(-)HRESIMS m/z 687. 4615[M - H] ^ (calcd for C44H6306, 687. 4625, Δ = -1.5ppm).；
[0031] 化合物 3 :白色無定形粉末，[a ]D25+11.6(c 0.06，Me0H) ;UV(MeOH)λΜΧ(1〇8 ε ) 232 (3. 50)，284(3. 33)nm ;IR(film) vnax:3400, 3010, 2962, 2920, 2854 ，1619, 1521，1457, 1376, 1258, 1184, 1015, 820, 718and 690cm N 4 匪R(400MHz，CD Cl3) : δ 〇. 80 (3H, s, Me-19), 0. 89 (1H, dd, J = 12. 3, 12. 0Hz, H-la), 0. 89 (3H, t, J = 6. 8Hz, Me-18")，0· 99 (3H, d, J = 7.0Hz, Me-17) ,1.05(3? d，J = 7.0Hz, Me-16), 1.09 (3H ，s，Me-20)，1. 19 (1H，m，H-3a)，1. 33-1. 36 (14H，m，H2-4〃 ~8"，16"，17")，1. 42 (1H，br d，J =12.5Hz, H-5), 1.49 (lH，m，H-2a), 1.50 (lH，dd，J = 12. 0, 10.8Hz, H-3b), 1.58 (2H，m， H-12a，H-15)，1. 59 (1H，m，H-2b)，1. 62-1. 67 (5H，m，H-9, H2-12, H2-3")，1. 68 (1H，m，H-lb ),1. 76(1H, ddd, J = 14. 7, 12. 5, 5. 2Hz, H-6b), 1. 96 (1H, m, H-l la), 2. 04 (1H, br d, J = 12.0Hz，H-llb)，2.06(4H，m，H2-9"，15")，2.46(lH，br d，J = 14.7Hz，H-6a)，2.81(2H，t，J =6.6Hz，H2-12")，2.90(lH，dt，J = 15.1，7.7Hz，H-2"a)，3.00(lH，dt，J = 15·1，7·8Ηζ ，H-2"b)，3.03(lH，s，H-14)，3.03(lH，d，J = 11.9Hz，H-18a)，3.60(lH，d，J = 11. 9Hz，H-18b)，3. 72 (1H，br d，J = 5. 0Hz，H-7)，5. 33-5. 41 (4H，m，H-10"，11"，13"，14")，5 ? 89(lH，s，H-5'），13.3(lH，s，0H-6'）；13C NMR(100MHz，CDC13): S39.9(C-l)，17.9(C-2)，35 ? 1 (C-3)，37. 6 (C-4)，40. 9 (C-5)，20. 6 (C-6)，46. 6 (C-7)，92. 7 (C-8)，51. 6 (C-9)，37. 3 (C-10 )，21. 6 (C-ll)，18. 1 (C-12)，64. 0 (C-13)，62. 3 (C-14)，34. 5 (C-15)，17. 6 (C-16)，18. 0 (C-17 )，71. 7 (C-18)，18. 0 (C-19)，16. 8 (C-20)，102. 8 (C-Γ )，161. 4 (C-2,），107. 1 (C-3,），158. 7 (C-4,），96. 9 (C-5,），165. 0 (C-6,），204. 3 (C-l")，43. 1 (C-2")，24. 0 (C-3")，29. 3 (C-4")，2 9. 3 (C-5")，29. 4 (C-6")，29. 7 (C-7")，29. 7 (C-8")，27. 2 (C-9")，130. 1 (C-10")，130. 2 (C-l Γ)，25. 6 (C-12")，128. 0 (C-13")，127. 9 (C-14")，27. 2 (C-15")，31. 5 (C-16")，22. 6 (C-17" ),14.1 (C-18") ;(+)ESIMS m/z 691 [M+H]+，711 [M+Na]+;(-)ES 頂 S m/z 689 [M-H]、（-) HRESIMS m/z 689. 4778 [M - H] ^ (calcd for C44H6506, 689. 4781, Δ = - 0. 4ppm). 〇
[0032] 實施例2 :測定蛋白酪氨酸磷酸酶IB抑制活性
[0033] 實驗方法：采用分子生物學的方法，構建基因重組的hGST-PTP 1B-BL2 IE. co 1 i 人類PTP1B工程菌，經(jīng)純化后的hGST-PTPlB重組蛋白能水解底物para-Nitrophenyl Phosphate (pNPP)的磷脂鍵，得到的脫磷酸產(chǎn)物pNP在波長405nm處有很強的光吸收，因 此可通過直接檢測405nm處光吸收的變化以觀察酶活性變化以及化合物對酶活性的抑制 情況；初篩選擇所述化合物濃度為100 μ Μ時對PTP1B酶活性的百分抑制率進行考察，實 驗結(jié)果表明，所述的化合物1 - 3抑制率均高于95% ;進一步測定IC5。值：樣品臨用前溶于 DMS0配成合適濃度，3倍稀釋，7個稀釋度，三復孔，取2 μ L樣品溶液加入到標準的測活體系 (30nM GST-hPTPlB, 2mM pNPP, 50mM 3-嗎啉丙磺酸（MOPS)，ρΗ 6. 5, 2mM DTT, ImM EDTA, 2% DMS0);反應溫度為30°C，在VERSAmax上動態(tài)測量405nm處的光吸收，時間為3min，其動 力學曲線一級反應的斜率作為酶的活性指標；以相對活性對化合物濃度作圖，經(jīng)公式v/v。 =10(V(l+b*[I]/IC5。）擬合得到IC5。值；陽性對照齊墩果酸（oleanolic acid)IC5。值為 3. 18 μ Μ ;如表1所示，
[0034] 表1.測試化合物抑制ΡΤΡ1Β活性數(shù)據(jù)
[0035]
[0036] 化合物1 - 3抑制ΡΤΡ1Β的IC5。值如表1所示，測試結(jié)果表明，上述3個化合物均 表現(xiàn)出顯著的抑制活性，其作用強度與陽性對照基本相當，表明本發(fā)明所述化合物可用于 制備治療糖尿病、肥胖癥及其并發(fā)癥的藥物或是作為該類藥物的先導化合物。
【主權項】
1. 間苯Ξ酪拼松香燒二祗類化合物，其特征在于，所述化合物W帶有多締長鏈的酷基 間苯Ξ酪與對映-松香燒二祗為主要結(jié)構片段，兩者W 2, 3-二氨巧喃環(huán)相拼聯(lián)，其具有如 下化學結(jié)構式：其中Ri、R2為甲基或徑甲基；R3為長鏈締控。2. 如權利要求1所述的間苯Ξ酪拼松香燒二祗類化合物，其特征在于，所述的化合物 為化合物1，其中Rl為甲基，R2為徑甲基，Rs為-畑2)6邸2畑=邸-邸2)3邸3。3. 如權利要求1所述的間苯Ξ酪拼松香燒二祗類化合物，其特征在于，所述的化合物 為化合物2，其中Ri為徑甲基，R 2為甲基，R 3為-(CH 2) 6邸2 (CH =邸-邸2) 3邸3。4. 如權利要求1所述的間苯Ξ酪拼松香燒二祗類化合物，其特征在于，所述的化合物 為化合物3，其中Ri為徑甲基，R 2為甲基，R 3為-(CH 2) 7邸2 (CH =邸-邸2) 2邸2邸3。5. 權利要求1所述的間苯Ξ酪拼松香燒二祗類化合物的制備方法，其特征在于，其包 括步驟： 采用干燥藥用植物東南金粟蘭全草或根部位，粉碎后用乙醇提取，提取液濃縮，加水懸 浮，分別用石油酸和乙酸乙醋萃?。灰宜嵋掖滋崛∥锝?jīng)硅膠、S巧hadex LH-20凝膠、MCI樹 脂柱層析及反相半制備HPLC色譜分離，制得化合物1 - 3。6. 權利要求1所述的間苯Ξ酪拼松香燒二祗類化合物在制備蛋白酪氨酸憐酸酶1B抑 制劑藥物中的用途。7. 權利要求1所述的間苯Ξ酪拼松香燒二祗類化合物在制備預防、延緩或治療糖尿 病、肥胖癥及其他與PTP1B介導相關疾病藥物中的用途。8. 按權利要求6或7所述的用途，其特征在于，所述的間苯Ξ酪拼松香燒二祗類化合物 單獨應用或者合用，或與藥學上可接受的載體或賦形劑結(jié)合，制成口服或者非口服劑型。
【文檔編號】A61K31/343GK105837592SQ201510014881
【公開日】2016年8月10日
【申請日】2015年1月11日
【發(fā)明人】胡金鋒, 熊娟, 洪志來, 楊國勛
【申請人】復旦大學