一種氯磺丙脲的藥物組合物及其醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種氯磺丙脲的藥物組合物及其醫(yī)藥用途，本發(fā)明提供的氯磺丙脲的藥物組合物中含有氯磺丙脲和一種從巴戟天的干燥塊根中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，氯磺丙脲、化合物(Ⅰ)可保護(hù)大鼠的抗氧化酶活性、清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，提示抗氧化是氯磺丙脲、化合物(Ⅰ)保護(hù)DM大鼠腎臟的機(jī)制之一。氯磺丙脲和化合物(Ⅰ)聯(lián)合使用后，對(duì)2型糖尿病大鼠的血脂調(diào)節(jié)作用和腎臟保護(hù)作用進(jìn)一步提高，早期應(yīng)用可有效地延緩糖尿病腎臟病變的發(fā)生和發(fā)展，可以開發(fā)成治療糖尿病腎臟病變的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說明】
一種氯磺丙脲的藥物組合物及其醫(yī)藥用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及氯磺丙脲的新用途，具體涉及一種氯磺丙脲的藥 物組合物及其醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 氯磺丙脲適應(yīng)癥為適用于單用飲食控制療效不滿意的輕、中度Π 型糖尿病，病人 胰島辟田胞有一定的分泌胰島素功能，并且無嚴(yán)重的并發(fā)癥。本品還可用于中樞性尿崩癥。
[0003] 迄今為止，尚未見氯磺丙脲及其藥物組合物與糖尿病心肌病的相關(guān)性報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供一種氯磺丙脲的藥物組合物，該藥物組合物中含有氯磺丙 脲和一種天然產(chǎn)物，氯磺丙脲和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療糖尿病腎病。
[0005] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0006] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物a)，
[0007]
[0008] -種氯磺丙脲的藥物組合物，包括氯磺丙脲、如權(quán)利要求1所述的化合物（I)和藥 學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0009] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0010] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0011] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將巴戟天的干燥塊根粉碎，用 75~85 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和 的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正 丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用1 〇 %乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70 %乙醇洗脫10個(gè)柱體 積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物 用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4 個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1、4:1和2:1的二氯 甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分 離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~15個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減 壓濃縮得到化合物(I)。
[0012] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用80%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0013] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為DlOl型大孔吸附樹脂。
[0014]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0015] 上述化合物(I)在制備治療糖尿病腎病的藥物中的應(yīng)用。
[0016] 上述氯磺丙脲的藥物組合物在制備治療糖尿病腎病的藥物中的應(yīng)用。
[0017]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0018] 本發(fā)明提供的氯磺丙脲的藥物組合物中含有氯磺丙脲和一種從巴戟天的干燥塊 根中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，氯磺丙脲和該天然產(chǎn)物單獨(dú)作用時(shí)，具有治療糖尿 病腎病作用;二者聯(lián)合作用時(shí)，治療糖尿病腎病作用更強(qiáng)，可以開發(fā)成治療糖尿病腎病的藥 物。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0020] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0021] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0022] 分離方法：（a)將巴戟天的干燥塊根（2kg)粉碎，用80%乙醇熱回流提取（15LX 3 次），合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽 和的正丁醇(3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇萃取物用DlOl型大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用70% 乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中 70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1 (10個(gè)柱體積）、30:1 (8個(gè)柱體 積）、15:1(10個(gè)柱體積)和5:1(8個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步 驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為8:1(10個(gè)柱體積）、4:1(8個(gè)柱體積） 和2:1(6個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷 基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~15 個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I)(285mg，HPLC歸一化純度大于98% )。 [0023] 結(jié)構(gòu)確證:針狀結(jié)晶，HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z 327.1556,結(jié)合核磁特征可得 分子式為C2QH22〇4，不飽和度為10。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ρρπι，CDCl 3，500MHz):H-2(2 · 34，dd， J=15.3,7.8Hz)，H-3(2.93，m，2H)，H-7(6.32，dd，J = 3.5，1.6Hz)，H-8(2.28，m)，H-9(2.75， m)，H-12(6.13，d，J = 10.9Hz)，H-13(6.68，dd，J=10.9,6.4Hz)，H-14(2.34，dd，J = 9.8， 6.4Hz)，H-16a(4.87，s)，H-16b(4.84，s)，H-17(1.62，s)，H-18a(4.27，d，J=9.8Hz)，H-18b (3.90，(1，了 = 9.8泡），!1-19(1.05，(1，了 = 7.3他），!1-20(1.84,8);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)6。(卯111， CDCl3，125MHz):109·2(C，1-C)，39·3(CH，2-C)，37.2(CH2,3-C)，136.3(C，4-C)，190.8(C，5-C)，138.4(C，6-C)，140.3(CH，7-C)，39.3(CH，8-C)，42.2(CH，9-C)，149.9(C，10-C)，79.8(C， 11-C)，131.8(CH，12-C)，133.4(CH，13-C)，49.4(CH，14-C)，146.2(C，15-C)，112.8(CH2，16-C)，19.2(CH 3，17-C)，74.6(CH2，18-C)，11.3(CH3，19-C)，20.7(CH3,20-C)。紅外波譜表明該 化合物含有羰基（17420^1與1677CHT1)和烯烴（16080^1)基團(tuán)；且其在242nm有紫外吸收，表 明含有α，β_不飽和羰基單元。 13C-NMR、DEPT和HSQC譜中顯示有20個(gè)碳信號(hào)，包括三個(gè)甲基， 三個(gè)亞甲基(一個(gè)烯烴碳和一個(gè)連氧碳），七個(gè)次甲基(三個(gè)烯烴碳），以及七個(gè)季碳(一個(gè)羰 基碳、兩個(gè)連氧碳和四個(gè)烯烴碳），以上功能結(jié)構(gòu)再結(jié)合不飽和數(shù)表明該化合物為五環(huán)結(jié) 構(gòu)。 1H-NMR譜結(jié)合HSQC譜顯示三個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)δΗ1.62 (3H，s)、1.05(3H，d，J = 7.3Hz)、1.84 (3!1，8)，一組連氧亞甲基質(zhì)子信號(hào)5114.27(2!1，(1，1 = 9.8他）與3.90(2!1，(1，1 = 9.8泡），一對(duì) 亞甲基質(zhì)子信號(hào)知2.93(2山!11)，一組端烯烴質(zhì)子信號(hào)3114.87(1!1， 8)與4.84(1!1，8)，一對(duì)烯烴 質(zhì)子信號(hào)知6.13(1!1，(1，1=10.9抱）與6.68(1!1，(1(1，1=10.9,6.4泡），一個(gè)孤烯烴質(zhì)子信號(hào)6 此.32(1!1，(1(1，了 = 3.5，1.6!^)，四個(gè)次甲基質(zhì)子信號(hào)5[12.34(1!1，(1(1，了=15.3,7.8!^)、2.28 (lH，m)、275( lH，m)，2.34(lH，dd，J = 9 ·8,6·4Ηζ) C31H-1H COSY譜中存在H-12/H-13/H-14/H-8，Η-8/Η-9以及Η2-3/Η-2/Η3-19相關(guān)信號(hào)，同時(shí)HMBC譜中顯示有Η2-3與C-l、C-4和C-10，H-13 與 C-8、C-12、C-13 和 C-14，H2-16 與 C-14、C-15 和 C-17，H3-17 與 C-14，H2-18 與 01、09、011和 C-12，H3-19與C-l、C-2和C-3，H3-20與C-5、C-6和C-7相關(guān)信號(hào)，通過上述NMR譜中的相關(guān)信息 可以構(gòu)建該化合物的連接方式。通過H-12與H-13的偶合常數(shù)J= 10.2Hz以及碳化學(xué)位移δ C129.5與137.2可以確證012和013之間為雙鍵。此外，1?(^￥譜中!1-9與!1 2-18的交叉峰表明 C-I與C-Il的過氧鍵為β構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核 磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn) 值基本一致。該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：
[0024]
[0025] 實(shí)施例2:藥理作用 [0026] 1、材料與方法
[0027] 1.1動(dòng)物
[0028] 3~4月齡Wistar大鼠40只，雌雄各半，體重210g~250g，由佳木斯大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中 心提供。動(dòng)物飼養(yǎng)在溫度（22 ± I) °C、相對(duì)濕度55%~65 %、12h光照周期的通風(fēng)干燥環(huán)境 中，采用大小鼠維持料1022飼養(yǎng)。
[0029] 1.2試劑與樣品
[0030]氯磺丙脲購自中國食品藥品檢定研究院?；衔铮↖)自制，制備方法見實(shí)施例1。鏈 脲佐菌素(STZ)購自美國Sigma公司；SOD、考馬斯亮蘭蛋白測定等試劑盒均購自南京建成生 物工程研究所。甘油三酯試劑盒購自長春匯力工程技術(shù)開發(fā)中心。
[0031] 1.3儀器
[0032] 高速低溫離心機(jī)(5810R，美國Eppendorf公司），高效液相色譜庫侖電化學(xué)分析系 統(tǒng)（HPLC-ECD Coulchemm，ESA，美國）。
[0033] 1.4大鼠分組及模型制備
[0034] 其中50只用于模型組，10只用于正常對(duì)照組。禁食8h~16h(自由飲水)后，模型組 大鼠經(jīng)尾靜脈注射STZ 25mg/kg(0. lmol/L枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液，pH4.4)。注射2周后，進(jìn) 行葡萄糖耐量試驗(yàn)，挑選糖耐量減退（IGT)共40只，隨機(jī)分為模型對(duì)照組、氯磺丙脲組 (60mg · kg-1 · d)、化合物（I)組(60mg · kg-1 · d)、氯磺丙脲與化合物（I)組合物組【30mg · kg< · d氯磺丙脲+30mg · kg< · d化合物（I)】，喂以高糖-高脂肪飼料，由基礎(chǔ)飼料加鹿糖、 煉豬油、鮮雞蛋等混合而成，其總熱量20.08J/g。正常對(duì)照組大鼠喂以基礎(chǔ)飼料(含蛋白質(zhì) 20%、碳水化合物53%、脂肪9%、總熱量為15,42J/g)。正常對(duì)照組及糖尿病組每日灌服等 量生理鹽水，持續(xù)喂養(yǎng)及灌胃8周。實(shí)驗(yàn)結(jié)束前一天做葡萄糖耐量試驗(yàn)。
[0035] 1.5血液樣本的采集
[0036] 大鼠空腹在乙醚麻醉下，內(nèi)目此靜脈取血約6ml，2000rpm/min離心15min分離，取血 清，測血脂。
[0037] 1.6腎臟組織勻漿的制備
[0038]取腎皮質(zhì)，去除表面粘膜，用預(yù)冷生理鹽水反復(fù)蕩洗3次，濾紙吸干，稱重后置于玻 璃勻漿器中，用冷凍處理的生理鹽水將此標(biāo)本制成1:10的組織勻漿，4000~6000rpm/min離 心15min，取上清液備用。
[0039] 1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0040]實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差 分析和t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0041 ] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0042] 2.1對(duì)2型糖尿病模型大鼠血脂的影響
[0043]用藥第8周時(shí)，與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠血清中甘油三酯、膽固醇含量 及低密度脂蛋白含量增高(P〈〇.05)，說明造模成功。與模型對(duì)照組比較，氯磺丙脲組、化合 物（I)組甘油三酯、膽固醇、低密度脂蛋明顯下降(P〈〇.05)，與模型對(duì)照組比較，氯磺丙脲與 化合物（I)組合物組甘油三酯、膽固醇、低密度脂蛋白明顯下降(P<〇.01)。
[0044] 結(jié)果見表1。
[0045] 2.2對(duì)2型糖尿病模型大鼠腎臟組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性的影響
[0046] 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組大鼠腎臟組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性降低 (P<0.05)。與模型對(duì)照組比較，氯磺丙脲與化合物（I)組合物組SOD顯著提高(P<0.01);與 模型對(duì)照組比較，氯磺丙脲組、化合物（I)組大鼠腎臟組織中超氧化物歧化酶(SOD)活性提 高(P<0.05)。結(jié)果見表2。
[0047]表1甘油三酯、膽固醇、低密度脂蛋白含量(mmol/L，X±s)

[0051]超氧化物歧化酶(SOD)活性能反映機(jī)體的抗脂質(zhì)過氧化能力，是體內(nèi)清除氧自由 基抗氧化酶系統(tǒng)的成員之一。SOD的主要作用是強(qiáng)過氧化能力，是體內(nèi)清除氧自由基抗氧化 酶系統(tǒng)的成員之一。SOD的主要作用是將超氧陰離子反應(yīng)生成過氧化氫，后者在過氧化氫酶 (CAT)和谷胱甘肽過氧化酶(GSH-Px)的作用下轉(zhuǎn)變成水，從而減少氧自由基在體內(nèi)蓄積過 多而導(dǎo)致的脂質(zhì)過氧化加劇，維護(hù)組織細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)與功能。糖尿病(DM)早期就存在著 較明顯的脂代謝紊亂。
[0052] DM大鼠腎臟發(fā)生明顯氧化應(yīng)激，腎組織過氧化損傷顯著。氯磺丙脲、化合物（I)可 保護(hù)大鼠的抗氧化酶活性、清除自由基、抑制脂質(zhì)過氧化反應(yīng)，提示抗氧化是氯磺丙脲、化 合物（I)保護(hù)DM大鼠腎臟的機(jī)制之一。氯磺丙脲和化合物（I)聯(lián)合使用后，對(duì)2型糖尿病大鼠 的血脂調(diào)節(jié)作用和腎臟保護(hù)作用進(jìn)一步提高，早期應(yīng)用可有效地延緩糖尿病腎臟病變的發(fā) 生和發(fā)展，可以開發(fā)成防治糖尿病腎臟病變的藥物。
[0053]上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物α)，2. -種氯磺丙脲的藥物組合物，其特征在于:包括氯磺丙脲、如權(quán)利要求1所述的化合 物(I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的氯磺丙脲的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可以接受的載體 包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體 或潤滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的氯磺丙脲的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、膠 囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將巴 戟天的干燥塊根粉碎，用75~85%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石 油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇 萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用10%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用 70%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b) 中70 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為60:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比 為8:1、4:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基 硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為75%的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~15個(gè) 柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用80%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為D101型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療糖尿病腎病的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的氯磺丙脲的藥物組合物在制備治療糖尿病腎病的藥物中 的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P13/12GK105859743SQ201610297145
【公開日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年5月5日
【發(fā)明人】周飛燕
【申請(qǐng)人】周飛燕