一種具有抗氧化活性的大菱鲆魚(yú)皮發(fā)酵產(chǎn)物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種具有抗氧化活性的大菱鲆魚(yú)皮發(fā)酵產(chǎn)物，是用米曲霉發(fā)酵大菱鲆魚(yú)皮勻漿液制成的。本發(fā)明可以有效的降解魚(yú)皮蛋白，具有工藝簡(jiǎn)單，成本消耗低，容易產(chǎn)業(yè)化的優(yōu)點(diǎn)，為深入利用大菱鲆魚(yú)皮提高其附加值提供了新途徑。同時(shí)，獲得水解度為30～50％的低分子量魚(yú)皮發(fā)酵液，該產(chǎn)物含有豐富的氨基酸，其中甘氨酸、谷氨酸、丙氨酸、脯氨酸含量較高，具有高的營(yíng)養(yǎng)性，是良好的氨基酸和蛋白質(zhì)的補(bǔ)充劑。在體外抗氧化試驗(yàn)中，發(fā)酵產(chǎn)物顯示出了高DPPH清除率和Fe2+螯合力，這說(shuō)明該物質(zhì)具有螯合微量元素的功能，可作為新型微量元素氨基酸營(yíng)養(yǎng)添加劑加入到食品和保健品中。
【專利說(shuō)明】
-種具有抗氧化活性的大菱鐘魚(yú)皮發(fā)酵產(chǎn)物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于天然抗氧化物質(zhì)制備技術(shù)領(lǐng)域，具體設(shè)及一種具有抗氧化活性的大菱 解魚(yú)皮發(fā)酵產(chǎn)物。
【背景技術(shù)】
[0002] 海洋作為生命孕育的搖籃，蘊(yùn)藏著豐富的生物、化學(xué)、礦物、能源等多種資源，其中 蛋白資源是海洋生物資源的重要組成成分，由于海洋存用在許多極端環(huán)境，所W其生物蛋 白資源在種類和數(shù)量上都遠(yuǎn)遠(yuǎn)大于陸地。近些年，隨著人們對(duì)水產(chǎn)品的需求增大，海洋漁業(yè) 得到了迅猛發(fā)展，隨之也產(chǎn)生了許多加工副產(chǎn)物，例如魚(yú)皮，魚(yú)頭，魚(yú)骨，內(nèi)臟等，運(yùn)些副產(chǎn) 物的隨意丟棄不僅會(huì)造成資源浪費(fèi)而且也帶來(lái)了極大的環(huán)境問(wèn)題。隨著科技的進(jìn)步，越來(lái) 越多的研究表明運(yùn)些副產(chǎn)物是良好的海洋蛋白來(lái)源，可作為活性膚及酶制劑的提取原料。
[0003] 大菱解，屬于硬骨魚(yú)綱蝶形目解科，俗稱歐洲比目魚(yú)，是世界性解蝶主養(yǎng)品種之 一，廣泛分布于亞洲、歐洲和南美洲，自1992年引入中國(guó)后，工廠化養(yǎng)殖主要集中在環(huán)勸海 =省一市沿岸，W年產(chǎn)量超過(guò)60000噸的產(chǎn)值，成為我國(guó)主要的水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)。大菱解常用于 魚(yú)排和魚(yú)片的工廠化生產(chǎn)，加工過(guò)程中會(huì)產(chǎn)生大量的魚(yú)皮副產(chǎn)物，魚(yú)皮中含有豐富的蛋白 質(zhì)，因此尋找一種將其轉(zhuǎn)化為有活性多膚的生物轉(zhuǎn)化技術(shù)，不僅可W增加大菱解附加值提 高經(jīng)濟(jì)效益，同時(shí)也可W減輕環(huán)境壓力。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種從大菱解魚(yú)皮中制備具有抗氧化活性物質(zhì)的制備方法 和應(yīng)用，從而彌補(bǔ)現(xiàn)在技術(shù)的不足。
[0005] 本發(fā)明首先提供一種具有抗氧化活性的大菱解魚(yú)皮發(fā)酵產(chǎn)物，是用米曲霉 (Aspergillus cxryzae)發(fā)酵大菱解魚(yú)皮勻漿液制成的；
[0006] 所述的大菱解魚(yú)皮勻漿液，是將大菱解魚(yú)皮原料加水后進(jìn)行蒸煮，冷卻至室溫后 進(jìn)行勻漿制成魚(yú)皮發(fā)酵原液；
[0007] 本發(fā)明的大菱解魚(yú)皮發(fā)酵產(chǎn)物，其具體制備方法包括如下的步驟：
[000引1)將大菱解魚(yú)皮原料加水后進(jìn)行蒸煮，冷卻至室溫后進(jìn)行勻漿制成魚(yú)皮發(fā)酵原 液；
[0009] 2)使用按照步驟1)方法制備的魚(yú)皮發(fā)酵原液作為培養(yǎng)基，加入活化的菌種進(jìn)行培 養(yǎng)，獲得種子培養(yǎng)基；
[0010] 3)將步驟2)中制備的種子培養(yǎng)基接種到按照步驟1)方法制備的魚(yú)皮發(fā)酵原液中， 接種量為10~30 %，在菌種最適溫度下培養(yǎng)5~8d;
[0011] 4)將步驟3)獲得的發(fā)酵液過(guò)濾，離屯、得到發(fā)酵多膚液，將所得液體凍干后得到的 黃色粉末狀物質(zhì)即為大菱解魚(yú)皮抗氧化發(fā)酵產(chǎn)物；
[0012] 所述的步驟1)中魚(yú)皮原料與水的質(zhì)量比優(yōu)選為1:3;
[OOU]所述的步驟2)中的菌種活化條件是:30°C，180rmp，培養(yǎng)時(shí)間為2d;
[0014] 所述的步驟3)最優(yōu)接種量為10%和最優(yōu)發(fā)酵時(shí)間為7d。
[0015] 本發(fā)明還提供一種抗氧化效果更好的大菱解魚(yú)皮發(fā)酵產(chǎn)物，是將上述的大菱解魚(yú) 皮發(fā)酵液凍干濃縮后，用超純水復(fù)溶，配置濃度為Ig/血的溶液，過(guò)0.45WI1的無(wú)機(jī)水膜，上G-15凝膠色譜柱進(jìn)行分離，上樣量為2mL，W蒸饋水為洗脫液，流速為ImL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為 220nm，收集洗脫時(shí)間為17~23.5min和24.75~34.3min的洗脫液；
[0016] 本發(fā)明可W有效的降解魚(yú)皮蛋白，具有工藝簡(jiǎn)單，成本消耗低，容易產(chǎn)業(yè)化的優(yōu) 點(diǎn)，為深入利用大菱解魚(yú)皮提高其附加值提供了新途徑。同時(shí)，獲得水解度為30~50%的低 分子量魚(yú)皮發(fā)酵液，該產(chǎn)物含有豐富的氨基酸，其中甘氨酸、谷氨酸、丙氨酸、脯氨酸含量較 高，具有高的營(yíng)養(yǎng)性，是良好的氨基酸和蛋白質(zhì)的補(bǔ)充劑。在體外抗氧化試驗(yàn)中，發(fā)酵產(chǎn)物 顯示出了高DPPH清除率和化h馨合力，運(yùn)說(shuō)明該物質(zhì)可W馨合微量元素，可W作為新型微量 元素氨基酸營(yíng)養(yǎng)添加劑加入到食品和保健品中，從而預(yù)防微量元素缺乏引起的疾病(缺鐵 性貧血、何僕病等）。此外，通過(guò)本技術(shù)的處理，得到的產(chǎn)物不僅具有良好的色澤(淡黃色）， 還可W脫除原料腥味，有效改善魚(yú)皮風(fēng)味，提高產(chǎn)品的消費(fèi)者可接受性，為其更好應(yīng)用于食 品和保健品行業(yè)奠定了基礎(chǔ)。
【附圖說(shuō)明】
[0017] 圖1:大菱解魚(yú)皮制備抗氧化物質(zhì)工藝流程圖；
[0018] 圖2:大菱解魚(yú)皮發(fā)酵前后分子量分布液相圖；
[0019] 圖3:大菱解魚(yú)皮發(fā)酵前后體外抗氧化活性變化圖；
[0020] 圖4:大菱解魚(yú)皮發(fā)酵后G-15純化圖；
[0021 ]圖5:大菱解魚(yú)皮發(fā)酵前后風(fēng)味變化雷達(dá)圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 本發(fā)明的抗氧化物質(zhì)主要是利用微生物對(duì)大菱解魚(yú)皮進(jìn)行生物降解，通過(guò)將魚(yú)皮 中無(wú)活性蛋白降解為小膚或氨基酸水解液獲得相應(yīng)的抗氧化活性。本發(fā)明選用了常用食品 級(jí)菌種，通過(guò)直接發(fā)酵大菱解魚(yú)皮獲得抗氧化活性物質(zhì)，主要包括魚(yú)皮培養(yǎng)基制備、菌種培 養(yǎng)、菌種活化、接種發(fā)酵、產(chǎn)物分離。如圖1所示，本發(fā)明的制備方法步驟如下：
[0023] 一、魚(yú)皮培養(yǎng)基制備：
[0024] 1.魚(yú)皮預(yù)煮條件:將料液比為1:3~3:2魚(yú)皮液置于沸水浴中煮沸30min;
[0025] 2.預(yù)煮魚(yú)皮液降溫至室溫后，轉(zhuǎn)移到勻漿機(jī)中破碎，破碎條件為:4000rmp，40s;
[0026] 3.魚(yú)皮勻漿液分裝到立角瓶中，高壓滅菌，條件為:m°C，20min。
[0027] 二、菌種活化：
[0028] 4.發(fā)酵菌種在各自最適培養(yǎng)條件下培養(yǎng)2d，進(jìn)行菌種活化；
[0029] S、抗氧化活性物質(zhì)制備：
[0030] 5.發(fā)酵:將10%~30%種子液接種到25%~60%魚(yú)皮發(fā)酵液中，發(fā)酵5~8d，發(fā)酵 溫度30°C~37°C，轉(zhuǎn)數(shù)ISOrmp;
[0031] 7.抗氧化物質(zhì)分離；將發(fā)酵液經(jīng)4層紗布過(guò)濾，濾液離屯、，離屯、條件為：轉(zhuǎn)數(shù) SOOOrmp、溫度4°C，離屯、時(shí)間為15min。離屯、所得溶液，冷凍干燥2d后所得淡黃色粉末即為所 得大鱗解魚(yú)皮抗氧化物質(zhì)。
[0032] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)的描述。
[0033] 實(shí)施例1:大菱解魚(yú)皮發(fā)酵菌種的篩選
[0034] 乳酸菌作為大菱解魚(yú)皮發(fā)酵菌種，菌種活化條件分別為；37 °C，厭氧靜置培養(yǎng)，培 養(yǎng)時(shí)間為2d。將活化好的菌種接入大菱解魚(yú)皮培養(yǎng)基中，接種量為10%，料液比為40%，發(fā) 酵時(shí)間為5d。發(fā)酵液經(jīng)4層紗布過(guò)濾，濾液離屯、，得發(fā)酵產(chǎn)物凍干，測(cè)定結(jié)果表明：該產(chǎn)物水 解度為5.19% ,DPPH清除率為10.83%。
[0035] 實(shí)施例2:大菱解魚(yú)皮發(fā)酵菌種的篩選
[0036] 酵母菌作為大菱解魚(yú)皮發(fā)酵菌種，菌種活化條件分別為;30 °C，ISOrmp，培養(yǎng)時(shí)間 為2d。將活化好的菌種接入大菱解魚(yú)皮培養(yǎng)基中，接種量為10%，料液比為40%，發(fā)酵時(shí)間 為5d。發(fā)酵液經(jīng)4層紗布過(guò)濾，濾液離屯、，得發(fā)酵產(chǎn)物凍干，測(cè)定結(jié)果表明：水解度為3.44%， DPPH清除率為38.89 %。
[0037] 實(shí)施例3:大菱解魚(yú)皮發(fā)酵菌種的篩選
[0038] 米曲霉作為大菱解魚(yú)皮發(fā)酵菌種，菌種活化條件分別為；30 °C，ISOrmp，培養(yǎng)時(shí)間 為2d。將活化好的菌種接入大菱解魚(yú)皮培養(yǎng)基中，接種量為10%，料液比為40%，發(fā)酵時(shí)間 為5d。發(fā)酵液經(jīng)4層紗布過(guò)濾，濾液離屯、，得發(fā)酵產(chǎn)物凍干，測(cè)定結(jié)果表明：水解度為 37.43%，DPPH清除率為58.35%。
[0039] 從實(shí)施例1-3中可W看出，在相同發(fā)酵條件下，米曲霉對(duì)大菱解有最好的降解能 力，獲得的產(chǎn)物具有高的水解度和DPPH清除能力。
[0040] 實(shí)施例4大菱解魚(yú)皮抗氧化物質(zhì)的制備
[0041] 將魚(yú)皮剪碎，稱取25g，加入75mL蒸饋水，預(yù)煮30min后，勻漿高壓滅菌，接入已活化 2d的米曲霉進(jìn)行發(fā)酵，接種量為10%，發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵時(shí)間6d，將獲得的發(fā)酵液凍干， 測(cè)定DPPH清除率為67.5%。
[0042] 實(shí)施例5大菱解魚(yú)皮抗氧化物質(zhì)的制備
[0043] 將魚(yú)皮剪碎，稱取40g，加入60mL蒸饋水，預(yù)煮30min后，勻漿高壓滅菌，接入已活化 2d的米曲霉進(jìn)行發(fā)酵，接種量為10%，發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵時(shí)間7d，將獲得的發(fā)酵液凍干， 測(cè)定DPPH清除率為69.18%。
[0044] 實(shí)施例6大菱解魚(yú)皮抗氧化物質(zhì)的制備
[0045] 將魚(yú)皮剪碎，稱取60g，加入40mL蒸饋水，預(yù)煮30min后，勻漿高壓滅菌，接入已活化 2d的米曲霉進(jìn)行發(fā)酵，接種量為10%，發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵時(shí)間8d，將獲得的發(fā)酵液凍干， 測(cè)定DPPH清除率為50.12%。
[0046] 實(shí)施例7大菱解魚(yú)皮抗氧化物質(zhì)的制備
[0047] 將魚(yú)皮剪碎，稱取40g，加入60mL蒸饋水，預(yù)煮30min后，勻漿高壓滅菌，接入已活化 2d的米曲霉進(jìn)行發(fā)酵，接種量為20%，發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵時(shí)間6d，將獲得的發(fā)酵液凍干， 測(cè)定DPPH清除率為68.67%。
[0048] 實(shí)施例8大菱解魚(yú)皮抗氧化物質(zhì)的制備
[0049] 將魚(yú)皮剪碎，稱取60g，加入40mL蒸饋水，預(yù)煮30min后，勻漿高壓滅菌，接入已活化 2d的米曲霉進(jìn)行發(fā)酵，接種量為20%，發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵時(shí)間7d，將獲得的發(fā)酵液凍干， 測(cè)定DPPH清除率為41.38%。
[0050] 實(shí)施例9大菱解魚(yú)皮抗氧化物質(zhì)的制備
[0051 ]將魚(yú)皮剪碎，稱取25g，加入75mL蒸饋水，預(yù)煮30min后，勻漿高壓滅菌，接入已活化 2d的米曲霉進(jìn)行發(fā)酵，接種量為20%，發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵時(shí)間8d，將獲得的發(fā)酵液凍干， 測(cè)定DPPH清除率為64.78%。
[0052] 實(shí)施例10大菱解魚(yú)皮抗氧化物質(zhì)的制備
[0053] 將魚(yú)皮剪碎，稱取60g，加入40mL蒸饋水，預(yù)煮30min后，勻漿高壓滅菌，接入已活化 2d的米曲霉進(jìn)行發(fā)酵，接種量為30%，發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵時(shí)間6d，將獲得的發(fā)酵液凍干， 測(cè)定DPPH清除率為47.5%。
[0054] 實(shí)施例11大菱解魚(yú)皮抗氧化物質(zhì)的制備
[0055] 將魚(yú)皮剪碎，稱取25g，加入75mL蒸饋水，預(yù)煮30min后，勻漿高壓滅菌，接入已活化 2d的米曲霉進(jìn)行發(fā)酵，接種量為30%，發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵時(shí)間7d，將獲得的發(fā)酵液凍干， 測(cè)定DPPH清除率為51.1%。
[0056] 實(shí)施例12大菱解魚(yú)皮抗氧化物質(zhì)的制備
[0057] 將魚(yú)皮剪碎，稱取40g，加入60mL蒸饋水，預(yù)煮30min后，勻漿高壓滅菌，接入已活化 2d的米曲霉進(jìn)行發(fā)酵，接種量為30%，發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵時(shí)間8d，將獲得的發(fā)酵液凍干， 測(cè)定DPPH清除率為63.5%。
[0058] 實(shí)施例13大菱解魚(yú)皮抗氧化物質(zhì)的制備
[0059] 將魚(yú)皮剪碎，稱取25g，加入75mL蒸饋水，預(yù)煮30min后，勻漿高壓滅菌，接入已活化 2d的米曲霉進(jìn)行發(fā)酵，接種量為10%，發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵時(shí)間7d，將獲得的發(fā)酵液凍干， 測(cè)定DPPH清除率為77.1%。
[0060] 實(shí)施例14大菱解抗氧化物質(zhì)的基本指標(biāo)分析
[0061] 由實(shí)施例4-13所制得的發(fā)酵液都具有一定的抗氧化活性，其中，實(shí)施例13中產(chǎn)物 的抗氧化活性最好，清除率可達(dá)77.1%，因此對(duì)該實(shí)施例產(chǎn)物的基本指標(biāo)進(jìn)行分析，主要包 括：
[0062] 1)水解度測(cè)定:分別采用甲醒滴定法和凱氏定氮法測(cè)定游離氨基態(tài)氮含量和總氮 含量。水解度測(cè)定結(jié)果顯示大菱解魚(yú)皮經(jīng)該發(fā)明技術(shù)降解后水解度可達(dá)到50.45%，運(yùn)說(shuō)明 該過(guò)程可W有效利用魚(yú)皮中的蛋白，從而提高其附加值。
[0063] 2)分子量分布:采用高效液相排阻層析法測(cè)定。將樣品稀釋10倍后，經(jīng)0.22WI1濾器 過(guò)濾，取10化樣液進(jìn)行分析(表1)。
[0064] 表1大菱解魚(yú)皮原液和抗氧化物質(zhì)分子量分布
[00 化]
[0066] 從該表中可W看出，大菱解魚(yú)皮主要由分子量大于IOkDa的大蛋白組成，分子量小 的多膚(< 化化)僅占8.37%，經(jīng)過(guò)本發(fā)明方法處理后，分子量大幅降低，最終，小分子膚含量 可達(dá)84.68%(圖 2)。
[0067] 3)水解氨基酸測(cè)定:樣品加入一定量6mol/L鹽酸水解液，充入氮?dú)?0s后，水解22h 后取出，冷卻至室溫。將水解樣品在50°C的氮吹儀上濃縮，加入ImLO.02mol/L鹽酸稀釋液， 經(jīng)0.22WI1濾器過(guò)濾，濾液即為待測(cè)液。取待測(cè)液20iiL用氨基酸分析儀進(jìn)行分析。氨基酸分析 結(jié)果顯示，大菱解魚(yú)皮是良好的蛋白質(zhì)資源，含有豐富的氨基酸，具有高的營(yíng)養(yǎng)價(jià)值，其中 甘氨酸、丙氨酸、谷氨酸、徑脯氨酸、精氨酸含量較高。本發(fā)明獲得的抗氧化活性物質(zhì)含有更 多氨基酸，其中必需氨基酸提高了 30.86%，總氨基酸提高了 11.76%，此外，發(fā)酵前后與抗 氧化活性氨基酸含量也有所提高，從發(fā)酵前41.18%提高到了45.15%。運(yùn)說(shuō)明本發(fā)明的制 備方法不僅可W提高魚(yú)皮的抗氧化活性，同時(shí)能夠?qū)Ⅳ~(yú)皮中不溶蛋白轉(zhuǎn)化為可溶蛋白，從 而提高魚(yú)皮蛋白可利用率及營(yíng)養(yǎng)功能(表2)。
[0068] 表2:大菱解魚(yú)皮原液和抗氧化物質(zhì)水解氨基酸分析
[0069]
[0070] 4)游離氨基酸組成：樣品前處理:取2mL樣品，加入SmL無(wú)水乙醇，充分混勻，于4°C 冰箱靜置30min，6000 X g離屯、5min，取上清液2mL，40°C氮吹儀吹干，加2mL樣品稀釋液，充分 溶解后，經(jīng)0.22皿濾器過(guò)濾，進(jìn)樣檢測(cè)。結(jié)果表明，魚(yú)皮原液中幾乎不含游離氨基量酸，經(jīng)發(fā) 酵工藝處理后游離氨基酸含量顯著增加。發(fā)酵前的游離氨基酸只有40mg/g，發(fā)酵后游離氨 基酸含量提高到2190mg/g;必需氨基酸含量為440mg/g，其中蛋氨酸、脯氨酸、蘇氨酸含量較 高；同時(shí)含有豐富的抗氧化氨基酸（占總游離氨基酸量的44.29%)，特別是谷氨酸、脯氨酸 和蛋氨酸;游離氨基酸是構(gòu)成調(diào)味品獨(dú)特風(fēng)味的重要因素，在本產(chǎn)品中呈味氨基酸也較豐 富，鮮味氨基酸和甜味氨基酸分別占總游離氨基酸含量的13.7%和41.6%。W上數(shù)據(jù)都說(shuō) 明該工藝可W有效降解魚(yú)皮，獲得的產(chǎn)物是良好的氨基酸營(yíng)養(yǎng)補(bǔ)充劑，同時(shí)該產(chǎn)物還具有 良好的風(fēng)味特性(表3)。
[0071 ]表3大菱解魚(yú)皮原液和抗氧化物質(zhì)游離氨基酸分析
[0072]
[0073] 實(shí)施例15大鱗解抗氧化物質(zhì)抗氧化活性分析
[0074] 抗氧化活性機(jī)理的多樣性，要求評(píng)價(jià)物質(zhì)抗氧化活性液需要多方面的考慮，因此 選用DPPH Je2+馨合力和還原力對(duì)本發(fā)明實(shí)施例13獲得的產(chǎn)物進(jìn)行抗氧化活性的評(píng)價(jià)。
[0075] 1)DPPH清除率:不同濃度的樣品中加入SmL濃度為0.06mmo 1 /L DPPH乙醇溶液，混 勻后，避光反應(yīng)30min，測(cè)定517nm處吸光值，用蒸饋水代替樣品做空白對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照為 BHA.
[0076] 2)Fe2+馨合力：稀釋得到不同濃度的樣品后，分別加入2mmol/L FeCb和O.lmL 5mmol/L菲咯嗦，反應(yīng)10min后，測(cè)定562nm處吸光值，蒸饋水代替樣品做空白對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照 為 BHA.
[0077] 3)還原力：不同濃度的樣品中加入2.5mL PBS(0.2mol/L，pH 6.6)和2.5mL 1%鐵 氯化鐘溶液，將混合物50°C水浴20min后加入2.5mL 10 % =氣乙酸，室溫靜置IOmin，然后取 2.5血反應(yīng)液加入2. SmL蒸饋水和0.5mL 0.1 %化C13，反應(yīng)10min，測(cè)定700皿處吸光值，蒸饋 水代替樣品做空白對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照為巧樣酸。
[0078] 測(cè)定結(jié)果表明，發(fā)酵產(chǎn)物抗氧化活性遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于魚(yú)皮原液，其中DPPH清除率由1.2% 提高到67%，馨合力由0.32 %提高到67.62,還原力變化最小吸光值由0.05提高到0.69(圖 2)。
[0079] 表4抗氧化物質(zhì)活性分結(jié)果
[00801
[0081 ]實(shí)施例16發(fā)酵液G-15凝膠層析初步分離
[0082] 將實(shí)施例13得到的大菱解發(fā)酵液凍干濃縮后，用超純水復(fù)溶，配置濃度為Ig/mL的 溶液，過(guò)0.45郵的無(wú)機(jī)水膜，上G-15凝膠色譜柱進(jìn)行分離，上樣量為2mL，W蒸饋水為洗脫 液，流速為ImL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，收集不同組分測(cè)定馨合活性。
[0083] 如圖4所示，通過(guò)G-15凝膠層析柱后樣品分成四個(gè)洗脫峰，洗脫時(shí)間分別為8.5~ 12min(Pl峰）、12.5~16.5min(P2峰）、17~23.5min(P3峰），24.75 ~34.3min(P4峰），對(duì)四個(gè) 峰的馨合活性進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果表明P3和P4活性較高的Fe2+馨合活力，分別為65.57%和 70.12 %，而Pl、P2具有低的馨合活性，分別為2.25 %和33.38 %。采用高效液相凝膠柱測(cè)定 P3、P4分子量，分布主要集中在400DW下。
[0084] 實(shí)施例17大鱗解抗氧化物質(zhì)風(fēng)味分析
[0085] 采用電子鼻對(duì)抗氧化物質(zhì)與魚(yú)皮液進(jìn)行氣味分析。電子鼻主要由十個(gè)分別代表不 同物質(zhì)敏感性的金屬氧化物傳感器組成，主要操作過(guò)程如下:取ImL待測(cè)樣品裝入頂空采樣 瓶中，然后將電子鼻進(jìn)樣針插入頂空采樣瓶中開(kāi)始測(cè)定定，測(cè)定條件是傳感器自清洗時(shí)間 200s，傳感器歸零10s，采樣時(shí)間為60s，每個(gè)樣品重復(fù)3次。眾所周知，魚(yú)及其制品中特有的 腥味一直是降低水產(chǎn)品的消費(fèi)者可接受性的主要原因，運(yùn)種風(fēng)味主要來(lái)源于水產(chǎn)品養(yǎng)殖過(guò) 程中體內(nèi)蓄積W及膽藏加工過(guò)程中的微生物、酶及脂肪氧化等過(guò)程，大大限制了水產(chǎn)品深 加工產(chǎn)業(yè)的發(fā)展，因此，尋求水產(chǎn)品中不良風(fēng)味的去除方法，成為今年來(lái)研究熱點(diǎn)。從雷達(dá) 圖峰面積中可W看出，魚(yú)皮液風(fēng)味發(fā)生了顯著變化，其中1、2、3、5、6、8六個(gè)傳感器響應(yīng)值顯 著降低，運(yùn)說(shuō)明經(jīng)過(guò)本技術(shù)轉(zhuǎn)化后，有效改善了魚(yú)皮液風(fēng)味，使各項(xiàng)氣味分布更均勻，風(fēng)味 更柔和，提高了消費(fèi)者可接受度（圖5)。將其作為風(fēng)味物質(zhì)添加到醬油等調(diào)味品中，除了能 夠增添產(chǎn)品的感官特性外，還可帶入保健功能，增加產(chǎn)品附加值。
[0086] 表5電子鼻傳感器性能結(jié)果表
[0087]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種大菱鮮魚(yú)皮發(fā)酵產(chǎn)物，其特征在于，所述的發(fā)酵產(chǎn)物是用米曲霉(Aspergillus oryzae)發(fā)酵大菱鮮魚(yú)皮勾楽:液制成的。2. 如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵產(chǎn)物，其特征在于，所述的大菱鲆魚(yú)皮勻漿液，是將大菱鲆 魚(yú)皮加水后進(jìn)行蒸煮，冷卻至室溫后進(jìn)行勻漿制成的。3. 如權(quán)利要求1所述的發(fā)酵產(chǎn)物，其特征在于，所述的發(fā)酵產(chǎn)物，其一種制備方法如下： 1) 將大菱鲆魚(yú)皮原料加水后進(jìn)行蒸煮，冷卻至室溫后進(jìn)行勻漿制成魚(yú)皮發(fā)酵原液； 2) 使用按照步驟1)方法制備的魚(yú)皮發(fā)酵原液作為培養(yǎng)基，加入活化的菌種進(jìn)行培養(yǎng)， 獲得種子培養(yǎng)基； 3) 將步驟2)中制備的種子培養(yǎng)基接種到按照步驟1)方法制備的魚(yú)皮發(fā)酵原液中進(jìn)行 發(fā)酵； 4) 將步驟3)獲得的發(fā)酵液過(guò)濾，離心得到發(fā)酵多肽液，將所得液體凍干后得到的黃色 粉末狀物質(zhì)即為大菱鲆魚(yú)皮抗氧化發(fā)酵產(chǎn)物。4. 如權(quán)利要求4所述的發(fā)酵產(chǎn)物，其特征在于，所述的步驟1)中魚(yú)皮原料與水的質(zhì)量比 為 1:3〇5. 如權(quán)利要求3所述的發(fā)酵產(chǎn)物，其特征在于，所述的步驟2)中的菌種活化條件是:30 °C，180rmp，培養(yǎng)時(shí)間為2d。6. 如權(quán)利要求3所述的發(fā)酵產(chǎn)物，其特征在于，所述的步驟3)中發(fā)酵接種量為10%。7. 如權(quán)利要求3所述的發(fā)酵產(chǎn)物，其特征在于，所述的步驟3)中發(fā)酵溫度為30°C，發(fā)酵 時(shí)間7d。8. 權(quán)利要求1或權(quán)利要求4所述的大菱鲆魚(yú)皮發(fā)酵產(chǎn)物在制備抗氧化物質(zhì)中的應(yīng)用。9. 一種具有抗氧化性的大菱鲆魚(yú)皮發(fā)酵產(chǎn)物，其特征在于，所述的發(fā)酵產(chǎn)物是將權(quán)利 要求1或權(quán)利要求4所述的大菱鲆魚(yú)皮發(fā)酵產(chǎn)物用超純水復(fù)溶，過(guò)濾后用G-15凝膠色譜柱進(jìn) 行分離，以蒸餾水為洗脫液，流速為lmL/min，檢測(cè)波長(zhǎng)為220nm，收集洗脫時(shí)間為17~ 23.5min 和 24.75 ~34.3min 的洗脫液。10. 如權(quán)利要求9所述的發(fā)酵產(chǎn)物，其特征在于，所述的過(guò)濾是過(guò)0.45μπι的無(wú)機(jī)水膜。
【文檔編號(hào)】C12P1/02GK105861565SQ201610390378
【公開(kāi)日】2016年8月17日
【申請(qǐng)日】2016年6月4日
【發(fā)明人】毛相朝, 方波歡, 孫建安, 張魯嘉, 李鈺金
【申請(qǐng)人】中國(guó)海洋大學(xué)