一種倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用，所述倍半萜類化合物是從傣族藥用植物豆科臘腸樹（Cassia fistula）的干燥樹皮中分離得到，化合物命名為2?羥基?6?(羥甲基)?4?異丙基?7?甲氧基?1?萘甲酸甲酯，英文名為：methyl 2?hydroxy?6?(hydroxymethyl)?4?isopropyl?7?methoxy?1?naphthoate，其分子式為C17H20O5，具有下述結(jié)構(gòu)：所述倍半萜類化合物制備方法是以傣族藥用植物豆科臘腸樹（Cassia fistula）的干燥樹皮為原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶劑萃取、MCI脫色、硅膠柱層析、高壓液相色譜分離得到。所述倍半萜類化合物經(jīng)細胞毒活性實驗，對部分腫瘤細胞株具有較好的細胞毒活性。本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)新穎，具有較好的生物活性，可作為抗癌藥物的先導(dǎo)化合物。
【專利說明】
一種倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于民族特色藥用植物有效成分提取、分離和結(jié)構(gòu)鑒定技術(shù)領(lǐng)域，具體涉 及一種倍半萜類化合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 豆科決明屬植物臘腸樹(Chssifl! /isiw/fl!)，是泰國的國花，原產(chǎn)于南亞南部，分布 在緬甸、斯里蘭卡、印度以及中國大陸的南部、西南部等地，生長于海拔1，〇〇〇米的地區(qū)。在 中國傣族民間廣泛用于皮膚感染、肥胖癥、周期性發(fā)熱以及腫瘤病等的治療。而臘腸樹在傣 語中又叫"鍋攏良"，在云南省西雙版納州主治止血，通便，退熱。據(jù)報道，該植物的不同部位 具有抗糖尿病、抗腫瘤、抗炎、抗病毒、抗菌、抗氧化的活性。本發(fā)明從臘腸樹中分離得到一 個倍半萜類化合物，且該化合物具有顯著的細胞毒活性和抗病毒活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種倍半萜類化合物;第二目的在于提供所述倍半萜 類化合物的制備方法;第三目的在于提供所述倍半萜類化合物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
[0004] 本發(fā)明的第一目的是這樣實現(xiàn)的，所述的倍半萜類化合物是從豆科植物臘腸樹 /i'S/il/fl!)的干燥樹皮中分離得到，其分子式為C17H2QO5,具有下述結(jié)構(gòu)：
該化合物為淺黃色膠狀物，命名為2-羥基-6-(羥甲基)-4-異丙基-7-甲氧基-1-萘甲酸 甲酯，英文名為：methyl 2-hydroxy-6-(hydroxymethyl )-4-isopropyl-7- methoxy-1-naphthoate。
[0005] 本發(fā)明的第二目的是這樣實現(xiàn)的，所述倍半萜類化合物的制備方法，是以豆科植 物臘腸樹(Gwsk /?s/m)的干燥樹皮為原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶劑萃取、MCI脫色、硅膠 柱層析、高效液相色譜制分離步驟，具體為： A、 浸膏提取:將豆科植物臘腸樹(Gws k /& ?μk)的樹皮粉碎到20~40目，用有機溶劑 超聲提取2~5次，每次30~60分鐘，合并提取液、過濾，減壓濃縮提取液，靜置，濾除沉淀物，濃 縮成浸膏a; B、 有機溶劑萃取:在浸膏a中加入重量比1~2倍量的水，然后用與水等體積的有機溶劑 萃取3~5次，合并有機溶劑萃取相，減壓濃縮成浸膏b; C、 MCI脫色:在浸膏b加入重量比3~5倍量的甲醇水溶解，上MCI柱，用80%-90%甲醇水洗 脫，合并有機相，減壓濃縮成浸膏C; D、 硅膠柱層析:浸膏c上硅膠柱層析，裝柱硅膠為160~200目，用量為浸膏c重量6~10倍 量；以體積配比為1:0~0:1的氯仿和丙酮混合有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng) TLC監(jiān)測，合并相同的部分； E、 高效液相色譜分離:將以體積含量將8:2的氯仿-丙酮洗脫得到的洗脫液經(jīng)高效液相 色譜分離純化，即得所述的倍半萜類化合物。
[0006] 以上述方法制備得到的倍半萜類化合物的結(jié)構(gòu)通過以下方法進行測定;化合物為 淺黃色膠狀物；紫外光譜（溶劑為甲醇），λΜΧ (logs) 210 (4·31)、232 (3.84)、336 (3.62) nm;紅外光譜（溴化鉀壓片）vmax 3423、3060、2940、1712、1646、1614、1542、1457、 1359、1250、1218、1146、976、818 cm-S 高分辨質(zhì)譜（HRESIMS)給出準分子離子峰m/z 327.1215 [1+他]+(計算值327.1208)。結(jié)合1!1和130匪1?譜給出一個分子式(： 17112()〇4，不飽 和度為8。紅外光譜數(shù)據(jù)證實化合物中存在羥基3423 cnf1)、羰基（1712、1646 cnf1)和芳 環(huán)（1614、1542、1457 cnf1)功能團，紫外光譜在336和232 nm處有強吸收也證實化合物中 存在芳環(huán)結(jié)構(gòu)。從1Η和13CNMR譜（數(shù)據(jù)歸屬見表1)信號可以看出化合物中有一個1，2,4,6， 7-五取代的萘環(huán)（C-1~C-10;H-3，H-6和H-8)、一個異丙基（C-11~C-13;H-11，H6-12，13)、一 個甲酸酯基(C-14、-0Me-14)、l個羥甲基(C-15，H2-15)、1個甲氧基(-0Me-7)，以及1個酚羥 基(Ar-〇H-2);這些信號表明化合物為芳構(gòu)化的倍半砲（JoMrafl/ /Voiftic/s.， 2013, 76(6): 1058-1063)?；衔锏哪负说玫酱_認后，剩余的甲基、異丙基、甲氧基和酚羥 基為母核上的取代基。根據(jù)Η-ll和〇3、〇4、(：-10，!1-12，13和(：-4，以及!1-3和(：-11的圓8(：(圖 3)相關(guān)可證實異丙基取代在萘環(huán)的C-4位；根據(jù)羥甲基（H 2-15)和C-5、C-6、C-10的HMBC相 關(guān)，可證實該甲基取代在母核的C-6位;根據(jù)羥甲氧基氫3.84 s)和C-7有HMBC相關(guān)，可 證實甲氧基分別取代在母核的C-7位;根據(jù)酚羥基氫(rfH 11.93)和(：-1、(：-2、(：-3的腿8(：相 關(guān)，可證實酚羥基取代在母核的C-2位;根據(jù)H-8和C-1有HMBC相關(guān)，以及H-3和酯羰基(C-14) 沒有HMBC相關(guān)，可推測酯羰基取代在母核的C-1位。至此化合物的結(jié)構(gòu)得以確定，該化合物 命名為:2_羥基-6-(羥甲基)-4-異丙基-7-甲氧基-1-萘甲酸甲酯。
[0007] 本發(fā)明的第三目的是這樣實現(xiàn)的，所述的倍半萜類化合物在制備抗癌藥物中的應(yīng) 用。
[0008] 本發(fā)明化合物是首次從臘腸樹樹皮中分離出來的，通過核磁共振和質(zhì)譜測定方法 確定為倍半萜類化合物，并表征了其具體結(jié)構(gòu)。以本發(fā)明化合物為原料，對NB4、A549、 SHSY5Y、PC3和MCF7細胞株進行了細胞毒活性測試;結(jié)果表明化合物具有較好的細胞毒活 性，其IC5〇值分別達0.58、0.74、1.5、0.85、0.63 μΜ。本發(fā)明化合物結(jié)構(gòu)簡單活性較好，可作 為抗癌藥物研發(fā)的先導(dǎo)性化合物。
【附圖說明】
[0009] 圖1本發(fā)明倍半萜類化合物的核磁共振碳譜(13C NMR); 圖2為本發(fā)明倍半萜類化合物的核磁共振氫譜(? NMR); 圖3本發(fā)明倍半萜類化合物的關(guān)鍵HMBC相關(guān)。
【具體實施方式】
[0010]下面結(jié)合實施例和附圖對本發(fā)明作進一步的說明，但不以任何方式對本發(fā)明加以 限制，基于本發(fā)明教導(dǎo)所作的任何變換或改進，均落入本發(fā)明的保護范圍。
[0011 ]本發(fā)明所述的倍半砲類化合物，是從豆科植物臘腸樹(Chss?α /is???/?!)的干燥樹 皮中分尚得到，其分子式為C17H20O5，
命名為：2_羥基-6-(羥甲基)-4-異丙基-7-甲氧基-1-萘甲酸甲酯，英文名為:methyl 2-hydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-isopropyl-7-methoxy-l_naphthoate〇
[0012]本發(fā)明所述倍半砲類化合物的制備方法，是以豆科植物臘腸樹(Cassia fistula) 的干燥樹皮為原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶劑萃取、MCI脫色、硅膠柱層析、高效液相色譜分離 步驟，具體為： A、 浸膏提取:將豆科植物臘腸樹(Gws k /& ?μk)的樹皮粉碎到20~40目，用有機溶劑 超聲提取2~5次，每次30~60分鐘，合并提取液、過濾，減壓濃縮提取液，靜置，濾除沉淀物，濃 縮成浸膏a; B、 有機溶劑萃取:在浸膏a中加入重量比卜2倍量的水，然后用與水等體積的有機溶劑 萃取3~5次，合并有機溶劑萃取相，減壓濃縮成浸膏b; C、 MCI脫色:在浸膏b加入重量比3~5倍量的甲醇水溶解，上MCI柱，用80%-90%甲醇水洗 脫，合并有機相，減壓濃縮成浸膏c; D、 硅膠柱層析:浸膏c上硅膠柱層析，裝柱硅膠為160~200目，用量為浸膏c重量6~10倍 量；以體積配比為1:0~0:1的氯仿和丙酮混合有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng) TLC監(jiān)測，合并相同的部分； E、高效液相色譜分離:將以體積含量為將8:2的氯仿-丙酮洗脫得到的洗脫液經(jīng)高效液 相色譜分離純化，即得所述的倍半萜類化合物。
[0013] 所述A步驟的有機溶劑為70~100%的丙酮、90~100%的乙醇或90~100%的甲醇。
[0014]所述B步驟的有機溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯乙醚或石油醚。
[0015] 所述D步驟中浸膏c在經(jīng)硅膠柱層析前，用重量比1.5~3倍量的丙酮或者甲醇溶解， 然后用浸膏重0.8~1.2倍的80~100目硅膠拌樣。
[0016] 所述D步驟的氯仿和丙酮混合有機溶劑的體積配比為20:1，9:1，8:2，7:3, 6:4 和 1:1〇
[0017] 所述E步驟的高效液相色譜分離純化是以30~60%的甲醇為流動相，流速10~14ml/ 111；[11，以21.2\2501]1111，5以1]1的2〇1^31?16口!^16?反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波 長為336 nm，每次進樣10~100yL，收集10~40min的色譜峰，多次累加后蒸干。
[0018] 本發(fā)明倍半萜類化合物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
[0019] 本發(fā)明所述的決明屬植物不受地區(qū)和品種限制，均可以實現(xiàn)本發(fā)明。
[0020] 實施例1 取干燥豆科植物決明屬臘腸樹的樹皮4.4 kg，粗粉碎至30目，用70% 的丙酮超聲提取4次，每次60分鐘，提取液合并;提取液過濾，減壓濃縮至體積的1/4;靜置， 濾除沉淀物，濃縮成120g的浸膏a;在浸膏a中加入250g水，用與水等體積的氯仿萃取5次，合 并萃取相，減壓濃縮成80g浸膏b;浸膏b用MCI裝柱，在浸膏b中加入240g的80%甲醇水溶解， 然后上柱，用90%甲醇水2至6升洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得到62g浸膏c;浸膏c在浸膏c中 加入120g的丙酮溶解，然后加入100目硅膠62g拌樣，拌樣后，用200目硅膠400g裝柱；用體積 比分別為20:1，9:1，8:2，7:3, 6:4和1:1的氯仿-丙酮混合有機溶劑梯度洗脫，收集梯 度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分，得到6個部分A-F，其中，對收集到的樣品C (8:2)部分 12g，再以48%的甲醇為流動相，流速 15 ml/min，21.2X250mm，5 μπι 的Zorbax 卩代?取'6?反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為336 11111，每次進樣50以1^收集38.2 min的色譜峰，多次累加后蒸干，即得所述新化合物。
[0021] 實施例2 取干燥豆科植物決明屬臘腸樹(Gw s ?α /i s ? μ /a )的樹皮10kg，粗粉碎至40目，用80%的 甲醇冷浸提取4次，每次3分鐘，提取液合并;提取液過濾，減壓濃縮至體積的1/4;靜置，濾除 沉淀物，濃縮成300g浸膏a;在浸膏a中加入350g水，用與水等體積的乙酸乙酯萃取5次，合并 萃取相，減壓濃縮成210g浸膏b;浸膏b用MCI裝柱，在浸膏b中加入600g的80%甲醇水溶解，然 后上柱，用90%甲醇水5至15升洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮得到150g浸膏c;浸膏c中加入 300g的丙酮溶解，然后加入100目硅膠150g拌樣，用200目硅膠lKg裝柱，拌樣后上柱；用體積 比分別為20:1，9:1，8:2，7:3, 6:4和1:1的氯仿-丙酮混合有機溶劑梯度洗脫，收集梯 度洗脫液、濃縮，經(jīng)TLC監(jiān)測，合并相同的部分，得到6個部分A-F，其中，對收集到的樣品C (8:2)部分32g，再以48%的甲醇為流動相，流速15 ml/min，21.2X250mm，5ym的Zorbax 卩代?取'6?反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為336 11111，每次進樣80以1^收集38.2 min的色譜峰，多次累加后蒸干，即得所述新化合物。
[0022] 實施例3 取實施例1制備的化合物，為黃色膠狀物； 測定方法為:用核磁共振，結(jié)合其它波譜技術(shù)鑒定結(jié)構(gòu)。
[0023] 化合物的紫外光譜（溶劑為甲醇），Amax (l〇ge) 210 (4.31)、232 (3.84)、336 (3.62) nm;紅外光譜（溴化鉀壓片）vmax 3423、3060、2940、1712、1646、1614、1542、1457、 1359、1250、1218、1146、976、818 cm-S 高分辨質(zhì)譜（HRESIMS)給出準分子離子峰m/z 327.1215 [1+他]+(計算值327.1208)。結(jié)合1!1和130匪1?譜給出一個分子式(： 17112()〇4，不飽 和度為8。紅外光譜數(shù)據(jù)證實化合物中存在羥基3423 cnf1)、羰基（1712、1646 cnf1)和芳 環(huán)（1614、1542、1457 cnf1)功能團，紫外光譜在336和232 nm處有強吸收也證實化合物中 存在芳環(huán)結(jié)構(gòu)。從1Η和13CNMR譜（數(shù)據(jù)歸屬見表1)信號可以看出化合物中有一個1，2,4,6， 7-五取代的萘環(huán)（C-1~C-10;H-3，H-6和H-8)、一個異丙基（C-11~C-13;H-11，H6-12，13)、一 個甲酸酯基(C-14、-0Me-14)、l個羥甲基(C-15，H2-15)、1個甲氧基(-0Me-7)，以及1個酚羥 基(Ar-〇H-2);這些信號表明化合物為芳構(gòu)化的倍半砲（JoMrafl/ /Voiftic/s.， 2013, 76(6): 1058-1063)。化合物的母核得到確認后，剩余的甲基、異丙基、甲氧基和酚羥 基為母核上的取代基。根據(jù)Η-ll和〇3、〇4、(：-10，!1-12，13和(：-4，以及!1-3和(：-11的圓8(：(圖 3)相關(guān)可證實異丙基取代在萘環(huán)的C-4位；根據(jù)羥甲基（H 2-15)和C-5、C-6、C-10的HMBC相 關(guān)，可證實該甲基取代在母核的C-6位;根據(jù)羥甲氧基氫3.84 s)和C-7有HMBC相關(guān)，可 證實甲氧基分別取代在母核的C-7位;根據(jù)酚羥基氫(rfH 11.93)和(：-1、(：-2、(：-3的腿8(：相 關(guān)，可證實酚羥基取代在母核的C-2位;根據(jù)H-8和C-1有HMBC相關(guān)，以及H-3和酯羰基(C-14) 沒有HMBC相關(guān)，可推測酯羰基取代在母核的C-1位。至此本化合物的結(jié)構(gòu)得以確定，該化合 物命名為:2_羥基-6-(羥甲基)-4-異丙基-7-甲氧基-1-萘甲酸甲酯。
[0024] 實施例4 取實施例2制備的化合物，為黃色膠狀物。測定與實施3相同，確認實施2制備的化合物 為所述倍半萜類化合物一一2-羥基-6-(羥甲基)-4-異丙基-7-甲氧基-1-萘甲酸甲酯。 [0025] 實施例5 取實施例1和2所制備的任一倍半萜類化合物進行細胞毒活性檢測試驗，試驗情況如 下： 細胞株：白血病細胞(NB4)、肺癌細胞(A549)、人神經(jīng)母細胞瘤細胞(SHSY5Y)、前列腺 癌細胞(PC3)、乳腺癌細胞(MCF7)均由中國科學(xué)院上海藥物研究所提供。
[0026]實驗設(shè)計：以上細胞與不同濃度化合物溫育72小時，每株細胞的實驗均重復(fù)一 次，用兩次實驗的結(jié)果進行數(shù)據(jù)處理，采用改良MTT法及SRB法評價化合物對細胞增殖 的抑制程度，計算抑制率，根據(jù)抑制率采用Logit方法計算IC 5Q，比較化合物的體外抗腫 瘤活性。
[0027]細胞的增殖抑制率=(空白對照0D值-加藥孔的0D值）/空白對照0D值X100%。 [0028] (a)改良MTT 法 取處于對數(shù)生長期的懸浮細胞，將細胞濃度調(diào)整為4 X104/ml，加入96孔培養(yǎng)板， 90 μL7孔。陽性對照為順鉑，用生理鹽水溶解。每孔分別加入10μ1不同濃度的樣品（1號試 液-5號試液）。加樣組及對照組均設(shè)4個復(fù)孔，加樣組、陽性對照組的高濃度組還設(shè)培養(yǎng)基 的加藥平行孔，每塊板均設(shè)有4個空白對照孔（僅加培養(yǎng)基）。樣品的終濃度分別為10- 2、 10-^UlO 及 102 yg/mL,相應(yīng)DMS0的終濃度分別為0·1%、0·01%、0·001%、0·0001%、 0.00001%。樣品在終濃度10 2狀/1^時，用0.1%01^0作為溶劑對照，其余濃度均用生理鹽 水作陰性對照。陽性對照藥順鉑的終濃度為l〇'l、l〇 yg/mL。細胞在37°C，5% C02培養(yǎng)箱 中分別孵育48h后，加入MTT (5 mg/ml，Sigma)，10 uL/孔。繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，加入三聯(lián) 液[10% SDS - 5%異丁醇-(h012mol/L HCL (w/v/v)]，100 uL/孔，放置過夜后用酶標 儀在570 nm、630 nm雙波長下測定各孔的OD值。
[0029] (b) SRB 法 取處于對數(shù)生長期的貼壁細胞株，用25%胰酶常規(guī)消化后，再用15%小牛血清完全 RPMI-1640培養(yǎng)基將細胞濃度調(diào)整為5X104/mL，加入96孔培養(yǎng)板，90 μ!7孔。細胞在37 °C，5% C02培養(yǎng)箱中分別孵育24h后加入陽性對照、陰性對照以及受試樣品（各受試濃度 同上MTT法，10 μ!7孔），樣品的終濃度分別為10-2、10-^UloVg/mL，相應(yīng)DMS0的終濃 度分別為〇 · 1 %、〇 · 〇 1 %、〇 · 〇〇 1 %、〇 · 〇〇〇 1 %、〇 · 〇〇〇〇 1 %。樣品在終濃度 1 〇\g/mL時用0 · 1%DMS0 作為溶劑對照，其余濃度均用生理鹽水作陰性對照。陽性對照藥順鉑的終濃度為ΠΓ1、1、10 yg/mL，陰性對照為等體積的生理鹽水。加樣組及對照組均設(shè)4復(fù)孔，加樣組、陽性對照組 的高濃度組還設(shè)培養(yǎng)基的加藥平行孔，每塊板均設(shè)有4個空白對照孔（僅加培養(yǎng)基）。將96 孔培養(yǎng)板置于37°C，5% C02培養(yǎng)箱中孵育（細胞與樣品作用）48h后，加入4°C、50%的 TCA (三氯乙酸）50 μ!7孔。加完TCA后，將96孔培養(yǎng)板置于4°C孵育1小時，取出培養(yǎng)板， 輕輕傾去板內(nèi)液體。用自來水輕輕沖洗5遍（將自來水由燒杯中輕輕倒入板中，輕晃后再 將水倒去），置于空氣中風(fēng)干至不見水痕。然后加入配制好的0.4% SRB (用1%乙酸稀釋）， 50 yL/孔，于室溫下靜置染色30分鐘后傾去SRB溶液，用1%乙酸沖洗4遍，以除去未與蛋 白質(zhì)結(jié)合的染料。置于空氣中風(fēng)干至無水痕后，加入10 mM未緩沖Tris (緩血氨酸）溶液 150 μ!7孔（PH10,用三蒸水配制），將染料溶解后，于振蕩器上振蕩5分鐘，用酶標儀在 570nm波長下讀取各孔0D值。
[0030] (C)實驗結(jié)果 實驗結(jié)果表明：經(jīng)對白血病急性早幼粒NB4細胞、肺腺癌A549細胞、人骨髓神經(jīng)母細胞 瘤SHSY5Y細胞、人前列腺癌PC3細胞、人乳腺癌MCF7細胞的細胞毒活性實驗，臘腸樹堿A對 NB4, A549和PC3細胞株具有較好的細胞毒活性，IC5Q值分別達8.2、5.6、和6.8 μΜ。
[0031] 表2化合物臘腸樹堿Α的細胞毒活性
【主權(quán)項】
1. 一種倍半萜類化合物，其特征在于所述倍半萜類化合物是從豆科植物臘腸樹 (Gwsk 的干燥樹皮中分離得到，命名為2-羥基-6-(羥甲基)-4-異丙基-7-甲氧 基_1_萘甲酸甲酯，英文名為methyl 2_hydroxy-6- (hydroxymethyl )-4_isopropyl-7-methoxy-1 -naphthoate，其分子式為C17H2QO5，具有下述結(jié)構(gòu)：2. -種權(quán)利要求1所述倍半萜類化合物的制備方法，其特征在于以豆科植物臘腸樹 (Chss?α /is/?/?!)的干燥樹皮為原料，經(jīng)浸膏提取、有機溶劑萃取、MCI脫色、硅膠柱層析、 高效液相色譜分離步驟，具體為： Α、浸膏提取:將豆科植物臘腸樹(Gwsk 的樹皮粉碎到20~40目，用有機溶劑 超聲提取2~5次，每次30~60分鐘，合并提取液、過濾，減壓濃縮提取液，靜置，濾除沉淀物，濃 縮成浸膏a; B、 有機溶劑萃取:在浸膏a中加入重量比1~2倍量的水，然后用與水等體積的有機溶劑 萃取3~5次，合并有機溶劑萃取相，減壓濃縮成浸膏b; C、 MCI脫色：在浸膏b加入重量比3~5倍量的甲醇水溶解，上MCI柱，用80%-90%甲醇水洗 脫，合并有機相，減壓濃縮成浸膏c; D、 硅膠柱層析:浸膏c上硅膠柱層析，裝柱硅膠為160~200目，用量為浸膏c重量6~10倍 量；以體積配比為1:0~0:1的氯仿和丙酮混合有機溶劑梯度洗脫，收集梯度洗脫液、濃縮，經(jīng) TLC監(jiān)測，合并相同的部分； E、 高效液相色譜分離:將8:2的氯仿-丙酮洗脫得到的洗脫液，經(jīng)高效液相色譜分離純 化，即得所述的倍半萜類化合物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的倍半萜類化合物的制備方法，其特征在于所述A步驟的有機溶 劑為70~100%的丙酮、90~100%的乙醇或90~100%的甲醇。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的倍半萜類化合物的制備方法，其特征在于所述B步驟的有機溶 劑為二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯乙醚或石油醚。5. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的倍半萜類化合物的制備方法，其特征在于所述D步驟中浸膏c 在經(jīng)硅膠柱層析前，用重量比1.5~3倍量的丙酮或者甲醇溶解，然后用浸膏重0.8~1.2倍的 80400目硅膠拌樣。6. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的倍半萜類化合物的制備方法，其特征在于所述D步驟的氯仿和 丙酮混合有機溶劑的體積配比為20:1，9:1，8:2，7:3, 6:4和1:1。7. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的倍半萜類類化合物的制備方法，其特征在于所述E步驟的高效 液相色譜分離純化是以30~60%的甲醇為流動相，流速10~14 ml/min，以21.2X 250 mm，5 μ m的Zorbax PrepHT GF反相制備柱為固定相，紫外檢測器檢測波長為336 nm，每次進樣10~ 100 yL，收集10~40 min的色譜峰，多次累加后蒸干。8. -種權(quán)利要求1所述的倍半萜類化合物在制備抗癌藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】C07C69/94GK105884621SQ201610242142
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月19日
【發(fā)明人】秦瑞欣
【申請人】秦瑞欣