一種富馬酸比索洛爾的藥物組合物及其醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種富馬酸比索洛爾的藥物組合物及其醫(yī)藥用途，本發(fā)明提供的富馬酸比索洛爾的藥物組合物中含有富馬酸比索洛爾和一種從干燥的枇杷葉中分離得到的結構新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，富馬酸比索洛爾與化合物(Ⅰ)組合物具有明顯的抗炎止咳作用，且優(yōu)于富馬酸比索洛爾或化合物(Ⅰ)單獨的抗炎止咳作用，可以開發(fā)成抗炎止咳的藥物，與現(xiàn)有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【專利說明】
一種富馬酸比索洛爾的藥物組合物及其醫(yī)藥用途
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領域，涉及富馬酸比索洛爾的新用途，具體涉及富馬酸比索 洛爾的藥物組合物及其在抗炎止咳中的應用。
【背景技術】
[0002] 富馬酸比索洛爾為β受體阻滯劑，對支氣管和血管平滑肌的β?-受體有高親和力， 從而使血管擴張，血壓降低。適用于高血壓、冠心病、及中度至重度慢性穩(wěn)定性心力衰竭等 癥。
[0003] 富馬酸比索洛爾是一種高選擇性的m-腎上腺受體拮抗劑，無內在擬交感活性和 膜穩(wěn)定活性。富馬酸比索洛爾對支氣管和血管平滑肌的m-受體有高親和力，對支氣管和血 管平滑肌和調節(jié)代謝的β2-受體僅有很低的親和力。因此，富馬酸比索洛爾通常不會影響呼 吸道阻力和β2-受體調節(jié)的代謝效應。富馬酸比索洛爾在超出治療劑量時仍具有m-受體選 擇性作用。
[0004] 迄今為止，尚未見富馬酸比索洛爾及其藥物組合物與抗炎止咳的相關性報道。

【發(fā)明內容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種富馬酸比索洛爾的藥物組合物，該藥物組合物中含有 富馬酸比索洛爾和一種天然產(chǎn)物，富馬酸比索洛爾和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同抗炎止咳。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術方案得以實現(xiàn)的：
[0007] 一種具有下述結構式的化合物（I)，
[0009] -種富馬酸比索洛爾的藥物組合物，包括富馬酸比索洛爾、如權利要求1所述的化 合物(I)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0010] 進一步地，藥學上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0011] 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0012] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將干燥的枇杷葉粉碎，用70~ 80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正 丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇 萃取物用大孔樹脂除雜，先用15%乙醇洗脫6個柱體積，再用70%乙醇洗脫10個柱體積，收 集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙醇洗脫濃縮物用正 相硅膠分離，依次用體積比為80:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組 分；（d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為25:1、15:1和2:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離， 用體積百分濃度為72 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃 縮得到純的化合物(I)。
[0013] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用75%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0014] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0015]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制備抗炎止咳的藥物中的應用。
[0017] 上述富馬酸比索洛爾的藥物組合物在制備抗炎止咳的藥物中的應用。
[0018] 本發(fā)明的優(yōu)點：
[0019] 本發(fā)明提供的富馬酸比索洛爾的藥物組合物中含有富馬酸比索洛爾和一種從干 燥的枇杷葉中分離得到的結構新穎的天然產(chǎn)物，富馬酸比索洛爾和該天然產(chǎn)物單獨作用 時，具有抗炎止咳作用;二者聯(lián)合作用時，抗炎止咳效果更好，可以開發(fā)成抗炎止咳的藥物。 本發(fā)明與現(xiàn)有技術相比具有突出的實質性特點和顯著的進步。
【具體實施方式】
[0020] 下面結合實施例進一步說明本發(fā)明的實質性內容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。盡管參照較佳實施例對本發(fā)明作了詳細說明，本領域的普通技術人員應當理解，可以對 本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術方案的實質和范圍。
[0021 ]實施例1:化合物(I)分離制備及結構確證
[0022] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學試劑有限公司。
[0023]分離方法：（a)將干燥的枇杷葉（2kg)粉碎，用75 %乙醇熱回流提取(20L X 3次），合 并提取液，濃縮至無醇味(4L)，依次用石油醚(4L X 3次）、乙酸乙酯(4L X 3次)和水飽和的正 丁醇（4LX 3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中正丁醇萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用15%乙醇洗脫6個柱體積，再用70%乙醇 洗脫10個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中70%乙 醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1 (8個柱體積）、30:1 (8個柱體積）、15:1 (8個柱體積)和5:1(10個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組 分3用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為25:1(8個柱體積）、15:1(10個柱體積)和2:1(5 個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵 合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為72 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱體積洗 脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (259mg，HPLC歸一化純度大于98% )。
[0024] 結構確證:冊431-]\^顯示[]\?1]+為111/2 405.2027，結合核磁特征可得分子式為 C26H28〇5，不飽和度為 13。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ρρπι，CD30D，500MHz): H-6 (6.62，s)，H-7 (7.95，d，J=15.4Hz)，H-8(6.84，d，J=15.4Hz)，H-10(7.52，d，J = 7.1Hz)，H-ll(7.33，t，J = 7.3Hz)，H-12(7.24，t，J = 7.3Hz)，H-13(7.33，t，J = 7.3Hz)，H-14(7.52，d，J = 7.1Hz)，H-Γ (3.18，d，J = 9.8Hz)，H-2'（2.62，dd，J = 9.8,7.6Hz)，H-4'（1.42，s)，H-5'（1.67， overlap)，H_5'(1·97，m)，H_6'(1.68，overlap)，H_6'(1·70，overlap)，H_7 '(2.45，m)，H_9' (1 · 42，s)，H-10 '（0 · 83，s)，3-0Me(3 · 85，s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)(ppm，CD30D，125MHz): 141.6(C3-C)，103.7(C，2-C)，160.4(C，3-C)，112.1(C，4-C)，158.4(C，5-C)，109.3(CH，6-C)，131.2(CH，7-C)，130.4(CH，8-C)，139.3(C，9-C)，127.4(CH，10-C)，129.5(CH，n-C)， 128.2(CH，12-C)，129.5(CH，13-C)，127.4(CH，14-C)，175.3(C，15-C)，37.3(CH，1，-C)，38.2 (CH，2'-C)，85.6(C，3'-C)，27.2(CH 3,4'-C)，39.5(CH2,5'-C)，26.3(CH2,6'-C)，47.5(C，7'-C)，39.8(C，8'-C)，33.6(CH3,9'-C)，17.8(CH 3，10'-C)，63.1(CH3,3-0Me)。紅外波譜表明該 化合物含有羰基（1748cm-芳香環(huán)（1618cm- 1,1557m-1,1445cm-1)基團。13C-匪R、DEPT 和 HSQC譜中顯示有26個碳信號，包括四個甲基(一個甲氧基），兩個亞甲基，十一個次甲基（二 個烯烴碳，六個芳烴碳），以及九個季碳(六個芳烴碳，一個烯烴碳，兩個羰基）；以上功能結 構再結合不飽和數(shù)表明該化合物為五環(huán)結構。 1H-NMR譜存在一組無取代苯環(huán)質子信號δΗ 7.52(2!1，(1，1 = 7.1抱）、7.33(2!1，^ = 7.3抱）與7.24(1!1，^ = 7.3抱）與一組反式烯烴質 子信號知7.95(1!1，(1，1=15.4泡）與6.84(1!1，(1，1=15.4泡）暗示結構中有反式二苯乙烯片 段，三個次甲基質子信號知 3.18(lH，d，J = 9.8Hz)，2.62(lH，d，J = 9.8,7.6Hz)&2.45(lH， m)，兩個亞甲基質子信號1 ·67(lH，overlap)與 1.97(lH，m)以及δΗ 1.68(lH，overlap)與 1.70(1!1，(^64&口），三個甲基質子信號5[11.42(3!1，8)，1.42(3!1，8)與0.83(3!1，8)，一個甲 氧基質子信號δ Η 3.85(3H，s)。由13C_NMR譜中C-3與C-5的化學位移δ。-3160.9與5。- 5158.6可 知C-3、C-5皆為連氧碳，另HMBC譜中，甲氧基質子與C-3的相關信號表明了C-3位連有甲氧 基，而Η-Γ、H-2 '、H3-4 '、H2-5 '與C-3 '存在相關信號，C-3 '的化學位移為δ。-3,80.7提示C-3 ' 也為連氧碳。HMBC譜中Η3-9'和Η3-10'與C-l'、C-7'和C-8'的相關信號以及 1H-1!! COSY譜中 Η-Γ與H-2 '以及H-2 '與H-7 '相關信號暗示化合物含有二甲基環(huán)丁烷結構，而Η-Γ與C-4相 關信號確認了二甲基環(huán)丁烷與反式二苯乙烯通過C-4-C-1'鍵相連。另HMBC譜中存在Η-Γ與 C-4、C-2 '和C-3 '，H3-4 '與C-2 '和C-3 '相關信號以及COSY譜中Η-Γ與H-2 '相關信號， 結合C-5，C-3 '皆為連氧碳可以推測C-Γ -C-2 ' -C-3 '鏈與反式二苯乙烯單元中的苯環(huán)C-4， C-5位分別通過碳-碳直接相連和碳-氧-碳相連環(huán)化為苯并吡喃結構。此外，1H-1!! COSY譜中 H2-57H2-6'/H-7'/H-2'相關信號，及HMBC譜中H-2' 與C-3'和C-7'，H2-5' 與(：-2'、(：-3'、(：-4 '、C-6 '和C-7 '相關信號可知C-2 ' -C-3 ' -C-5 ' -C-6 ' -C-7 '形成一個環(huán)戊烷結構單元。HMBC 譜中還確證了H-6與C-7以及H-8與C-1的相關信號，從而可知與反式二苯乙烯單元連接方 式。HMBC譜中H-6與C-2和C-15的相關信號則確知了結構中羧基與C-2相連。綜合氫譜、碳譜、 HMBC譜和R0ESY譜，以及文獻關于相關類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下式所示，立 體構型進一步通過ECD試驗確定，理論值與實驗值基本一致。該化合物化學式及碳原子編號 如下：
[0026] 實施例2:藥理作用 [0027] 1、材料與方法
[0028] 1.1藥物和試劑
[0029] 富馬酸比索洛爾購自中國藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實施 例1。冰醋酸，廣西南寧化學試劑廠生產(chǎn);二甲苯，中國醫(yī)藥集團上海化學試劑公司生產(chǎn);伊 文思蘭，上海化學試劑采購供應站分裝廠生產(chǎn)。阿司匹林片（l〇〇mg/片），拜爾制藥公司生 產(chǎn);桂龍咳喘寧膠囊，山西桂龍醫(yī)藥有限公司生產(chǎn);橘紅沖劑，南昌康正德制藥有限公司生 產(chǎn)。
[0030] 1.2實驗動物
[0031]昆明種小白鼠90只，體質量（20±2)g，雌雄各半;Wistar大鼠60只，體質量（200± 20) g，雌雄各半，均由湖北省實驗動物中心提供。
[0032] 1.3 器材
[0033] 1.80-2型離心機，上海手術器械廠生產(chǎn)；721型分光光度計，上海第三分析儀器廠 生產(chǎn);AEU-210型電子天平，日本島津生產(chǎn)。
[0034] 1.4抗炎實驗
[0035] 1.4.1對二甲苯致小鼠耳廓腫脹度的影響
[0036] 取小鼠50只，隨機分為5組，每組10只，分別為：生理鹽水組，阿司匹林組（300mg/ kg)，富馬酸比索洛爾組(80mg/kg)、化合物（I)組(80mg/kg)、富馬酸比索洛爾與化合物（I) 組合物組【40mg/kg富馬酸比索洛爾+40mg/kg化合物（I)】各組按相應劑量給藥，生理鹽水組 灌服等量生理鹽水。各組均灌胃給藥，每天1次，連續(xù)5d。末次給藥lh后，各組小鼠右耳涂以 二甲苯0.05ml/只，左耳不涂作自身空白對照。涂抹二甲苯30min后，將小鼠頸椎脫位處死， 用內徑6mm的打孔器打下左、右雙耳相同部位的圓片，分別稱質量，以右耳質量與左耳質量 差為腫脹度，比較各組的腫脹度。
[0037] 1.4.2對醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加的作用
[0038] 取小鼠50只，分組及給藥同1.4.1。各組給予藥物每天1次，連續(xù)3d。末次給藥lh后， 小鼠尾靜脈注射0.5%伊文思蘭的生理鹽水0.1ml/10g后，立即于小鼠腹腔注射0.6%醋酸 0.2ml/只，20min后，斷頭放血處死小鼠，用5ml生理鹽水沖洗腹腔3次，收集洗滌液，離心 (1000rpm)5min，在721型分光光度計590nm處測定吸收度(0D值）。
[0039] 1.5止咳實驗
[0040] 1.5.1對S02致咳小鼠的影響
[0041 ] 取小鼠50只，隨機分為5組，每組10只，即生理鹽水組、富馬酸比索洛爾組（80mg/ kg)、化合物（I)組(80mg/kg)、富馬酸比索洛爾與化合物（I)組合物組【40mg/kg富馬酸比索 洛爾+40mg/kg化合物（I)】、桂龍咳喘寧組(5g/kg)。各組按相應劑量給藥，生理鹽水組灌服 等量生理鹽水，每天1次，共7d。末次給藥后lh，將小鼠放入500ml的廣口瓶中，通入S0 26ml引 咳，以小鼠出現(xiàn)明顯的張口喘息為咳嗽指標，觀察并記錄小鼠放入瓶中到咳嗽發(fā)生的潛伏 期和3min內咳嗽次數(shù)。
[0042] 1.5.2對大鼠排痰量的影響
[0043] 取Wistar大鼠50只，隨機分為5組，每組10只，即生理鹽水組、富馬酸比索洛爾組 (80mg/kg)、化合物（I)組(80mg/kg)、富馬酸比索洛爾與化合物（I)組合物組【40mg/kg富馬 酸比索洛爾+40mg/kg化合物（I)】、橘紅沖劑組(5g/kg)。各組按相應劑量給藥，生理鹽水組 灌服等量生理鹽水，每天1次，共7d。實驗前禁食不禁水12h，末次給藥30min后，用戊巴比妥 鈉30mg/kg麻醉，仰臥位固定，剪開頸正中皮膚，分離氣管，在甲狀軟骨下緣正中兩軟骨環(huán)之 中，用注射針頭扎一小孔，然后插入直徑0.5ml的已知質量(G1)的毛細管一根，長10cm。使毛 細玻管剛好接觸氣管部表面，以吸取氣管中的痰液，若一支玻管吸滿，馬上換一支玻管，收 集大鼠60min的排痰量，然后用電子稱稱量收集有痰液的玻管的重量(G2)，G2_G1即為大鼠 60min的排痰量，計算60min/100g的引流mg數(shù)作為祛痰指標。
[0044] 1.6統(tǒng)計學方法
[0045] 應用SPSS11.5軟件包進行數(shù)據(jù)處理。計量資料以x±s表示，組間比較采用t檢驗。P 〈0.05為差異有統(tǒng)計學意義。
[0046] 2、實驗結果
[0047] 2.1對二甲苯致小鼠耳廓腫脹及對醋酸致小鼠腹腔毛細血管滲透性增加的作用 的影響
[0048]與生理鹽水組比較，富馬酸比索洛爾與化合物（I)組合物組和阿司匹林組的腫脹 度和0D值均明顯降低，差異有統(tǒng)計學意義(P〈0.01)，富馬酸比索洛爾組、化合物（I)組也可 顯著降低腫脹度和0D值(P〈0.05)，說明富馬酸比索洛爾與化合物（I)組合物的消炎作用較 明顯，且能顯著降低0D值，較明顯抑制醋酸致小鼠腹腔毛細血管滲透性增加。
[0049] 試驗結果見表1。
[0050] 表1抗炎試驗結果(X土s，n = 10)
[0052] 2.3對小鼠 S02致咳的止咳作用
[0053]與生理鹽水組比較，富馬酸比索洛爾與化合物（I)組合物組和桂龍咳喘寧組均能 減少小鼠 S〇2致咳的咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期，差異有統(tǒng)計學意義(P〈0.01)，富馬酸比索 洛爾組、化合物(I)組也能減少咳嗽次數(shù)，延長咳嗽潛伏期(P〈〇. 05)。
[0054] 試驗結果見表2。
[0055] 表2對小鼠 S02致咳的止咳作用(X土s，n=10)
[0057] 2.4對大鼠排痰量的影響
[0058]富馬酸比索洛爾組、化合物（1)組和橘紅沖劑組6〇1^11/10(^引流的11^數(shù)為3.21± 0.57、3.25±0.37和3.28±0.42均高于生理鹽水組（2.24±0.43)，差異有統(tǒng)計學意義（卩〈 〇. 05)，富馬酸比索洛爾與化合物（I)組合物組為3.54± 0.68,顯著高于生理鹽水組（P〈 0·01)〇
[0059] 綜上所述，本發(fā)明提供的富馬酸比索洛爾與化合物（I)組合物具有明顯的抗炎止 咳作用，且優(yōu)于富馬酸比索洛爾或化合物(I)單獨的抗炎止咳作用。
[0060] 上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質性內容，但并不以此限定本發(fā)明的保護 范圍。本領域的普通技術人員應當理解，可以對本發(fā)明的技術方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術方案的實質和保護范圍。
【主權項】
1. 一種具有下述結構式的化合物（I)，2. -種富馬酸比索洛爾的藥物組合物，其特征在于:包括富馬酸比索洛爾、如權利要求 1所述的化合物(I)和藥學上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權利要求2所述的富馬酸比索洛爾的藥物組合物，其特征在于:藥學上可以接受 的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸 附載體或潤滑劑。4. 根據(jù)權利要求2所述的富馬酸比索洛爾的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片 劑、膠囊劑、□服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將干 燥的枇杷葉粉碎，用70~80%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、 乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取 物；（b)步驟(a)中正丁醇萃取物用大孔樹脂除雜，先用15%乙醇洗脫6個柱體積，再用70% 乙醇洗脫10個柱體積，收集70%洗脫液，減壓濃縮得70%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中 70%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為80:1、30:1、15:1和5:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為 25:1、15:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基 硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為72 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集8~14個柱 體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到純的化合物(I)。6. 根據(jù)權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用75%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為DlOl型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 權利要求1所述的化合物（I)在制備抗炎止咳的藥物中的應用。10. 權利要求2~4任一所述的富馬酸比索洛爾的藥物組合物在制備抗炎止咳的藥物中 的應用。
【文檔編號】A61K31/138GK105884741SQ201610263999
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2016年4月23日
【發(fā)明人】徐挺
【申請人】徐挺