一種作用于EGFR敏感突變激酶EGFR^L858R，EGFR^(d746-750)的6-取代氨基嘌呤類化合物及 ...的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了具有下列化學(xué)結(jié)構(gòu)的6?取代氨基嘌呤化合物及其可藥用鹽，，其中：R是或；R1是氫、氟、氯、溴、甲氧基或羥基。本發(fā)明提供新的6?取代氨基嘌呤化合物及其可藥用鹽，對(duì)EGFR激酶的抑制具有選擇性，能有效地抑制EGFR敏感突變激酶EGFRL858R，EGFR(d746?750)的活性，但對(duì)EGFRWT激酶不具有抑制效果，這樣既可以抑制EGFR突變體過(guò)度表達(dá)或異常激活的細(xì)胞增殖，從而高效地治療腫瘤，又可以避免因?yàn)橐种茖?duì)人體內(nèi)正常組織EGFRWT激酶的磷酸化和相關(guān)信號(hào)通路的激活，從而帶來(lái)較大的毒副作用，發(fā)生皮疹、嘔吐等藥物反應(yīng)，提高治療效果，減少副反應(yīng)。
【專利說(shuō)明】
_種作用于EGFR敏感突變激酶EGFRL858R，EGFR(d746_75Q)的 6-取代氨基嘌昤類化合物及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于醫(yī)藥化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及一種作用于選擇性抑制EGFR敏感突變 激酶EGFI^5' EGFR(d746 的活性6-取代氨基嘌呤類化合物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著人們的生活壓力越來(lái)越大，生活環(huán)境越來(lái)越差，癌癥的發(fā)病率較之過(guò)去也越 來(lái)越高，因此，癌癥治療的方法以及治療的效果越來(lái)越受到醫(yī)藥工作者的關(guān)心與關(guān)注。近幾 年隨著科學(xué)技術(shù)的發(fā)展，抗腫瘤藥物也有了新的進(jìn)展，目前為止研究比較熱門新型抗腫瘤 藥物有：新型細(xì)胞毒藥物，內(nèi)分泌治療藥物，基因藥物，免疫治療藥物和分子靶向抗腫瘤藥 物。其中，分子靶向抗腫瘤藥物中的受體酪氨酸激酶抑制劑和血管新生通路抑制劑有著良 好的前景。
[0003] 表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR)是一類磷酸化蛋白質(zhì)，是通過(guò)特定的酪氨酸殘基序列 排列的蛋白質(zhì)。表皮生長(zhǎng)因子受體（EGFR)屬于ErbB家族成員之一，其與HER2、HER3及HER4 共同組成ErbB大家族。研究表明在許多實(shí)體腫瘤中存在EGFR的高表達(dá)或異常表達(dá)。EGFR 與腫瘤細(xì)胞的增殖、血管生成、腫瘤侵襲、轉(zhuǎn)移及細(xì)胞凋亡的抑制有關(guān)。其可能機(jī)制有：EGFR 的高表達(dá)引起下游信號(hào)傳導(dǎo)的增強(qiáng)；突變型EGFR受體或配體表達(dá)的增加導(dǎo)致EGFR的持續(xù) 活化；自分泌環(huán)的作用增強(qiáng)；受體下調(diào)機(jī)制的破壞；異常信號(hào)傳導(dǎo)通路的激活等。EGFR的過(guò) 表達(dá)在惡性腫瘤的演進(jìn)中起重要作用，膠質(zhì)細(xì)胞、腎癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等 組織中都有EGFR的過(guò)表達(dá)。對(duì)膠質(zhì)細(xì)胞瘤的研究發(fā)現(xiàn)EGFR的高表達(dá)主要與其基因擴(kuò)增有 關(guān)。但有時(shí)EGFR表達(dá)水平的調(diào)節(jié)異常也存在于翻譯及翻譯后。EGFR在腫瘤中的高表達(dá)還 可能與活化后降解減少有關(guān)，一些研究指出c-Src可通過(guò)抑制受體泛素化和內(nèi)吞作用而上 調(diào)EGFR水平。許多腫瘤中有突變型EGFR存在，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)許多種EGFR突變型。突變型EGFR 的作用可能包括：具有配體非依賴型受體的細(xì)胞持續(xù)活化；由于EGFR的某些結(jié)構(gòu)域缺失而 導(dǎo)致受體下調(diào)機(jī)制的破壞、異常信號(hào)傳導(dǎo)通路的激活、細(xì)胞凋亡的抑制等。突變體的產(chǎn)生是 由于EGFR基因的缺失、突變和重排。
[0004] 目前，EGFR抑制劑的構(gòu)效關(guān)系并不明朗，有的結(jié)構(gòu)差別很小的化合物，其針對(duì) EGFR抑制的效果卻相差很大。本發(fā)明人經(jīng)過(guò)艱苦努力，令人意外地合成出對(duì)EGFR突變體具 有選擇性抑制作用的化合物，從而用于腫瘤的治療，減少抑制劑的副反應(yīng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的之一是為解決EGFR抑制劑作用效果低，副反應(yīng)大的問(wèn)題，提供一種 作用于EGFR敏感突變激酶EGFR185' EGFR(d746 的6-取代氨基嘌呤類化合物及其應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明提供了具有下列化學(xué)結(jié)構(gòu)的6-取代氨基嘌呤化合物及其可藥用鹽，
[0007]
[0010] R1是氫、氟、氯、溴、甲氧基或羥基。
[0011] 進(jìn)一步的，所述化合物選自6-(5-氯-吡咯-2-甲胺基）嘌呤或6-(6-氯-嘧 啶-4-甲胺基）嘌呤。
[0012] 本發(fā)明還提供一種上述6-取代氨基嘌呤化合物及其可藥用鹽在制備抗腫瘤藥物 中的應(yīng)用。
[0013] 本發(fā)明再提供一種上述6-取代氨基嘌呤化合物及其可藥用鹽在制備抑制EGFR突 變體過(guò)度表達(dá)或異常激活的細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。
[0014] 本發(fā)明再提供一種藥物、藥物組合或試劑，包括上述的6-取代氨基嘌呤化合物及 其可藥用鹽。
[0015] 進(jìn)一步的，所述藥物、藥物組合或試劑用于抑制EGFR突變體過(guò)度表達(dá)或異常激活 的細(xì)胞增殖。
[0016] 進(jìn)一步的，所述EGFR突變體是在L858R或（d746-750)位點(diǎn)產(chǎn)生突變的EGFR激酶。
[0017] 進(jìn)一步的，所述藥物、藥物組合或試劑用于治療或預(yù)防腫瘤。
[0018] 進(jìn)一步的，所述腫瘤是EGFR依賴性腫瘤。
[0019] 進(jìn)一步的，所述腫瘤包括肺癌、腸癌、卵巢癌、腎癌、膀胱癌、空腔癌、胃癌或乳腺 癌。
[0020] 本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明提供新的6-取代氨基嘌呤化合物及其可藥用鹽， 對(duì)EGFR激酶的抑制具有選擇性，能有效地抑制EGFR敏感突變激酶EGFR LS5SR，EGFR_ 750)的 活性，但對(duì)EGFRWT激酶不具有抑制效果，這樣既可以抑制EGFR突變體過(guò)度表達(dá)或異常激活 的細(xì)胞增殖，從而高效地治療腫瘤，又可以避免因?yàn)橐种茖?duì)人體內(nèi)正常組織EGFR WT激酶的 磷酸化和相關(guān)信號(hào)通路的激活，從而帶來(lái)較大的毒副作用，發(fā)生皮疹、嘔吐等藥物反應(yīng)。
【附圖說(shuō)明】
[0021] 圖1所示為本發(fā)明6-(5-氯-吡咯-2-甲胺基）嘌呤的合成路線。
[0022] 圖2所示為本發(fā)明6-(6-氯-嘧啶-4-甲胺基）嘌呤的合成路線。
【具體實(shí)施方式】
[0023] 下文將結(jié)合具體附圖詳細(xì)描述本發(fā)明具體實(shí)施例。應(yīng)當(dāng)注意的是，下述實(shí)施例中 描述的技術(shù)特征或者技術(shù)特征的組合不應(yīng)當(dāng)被認(rèn)為是孤立的，它們可以被相互組合從而達(dá) 到更好的技術(shù)效果。
[0024] 實(shí)施例1化合物6- (5-氯-吡咯-2-甲胺基）嘌呤（A1)的合成
[0025] 1化合物的合成路線
[0026] 具體合成路線如圖1所示。
[0027] 2合成步驟
[0028] 2. 16-(5-氯-吡咯-2-甲胺基）嘌呤（A1)的制備
[0029] 量取5ml的正丁醇，稱取80mg的6-氯嘌呤以及100mg的（5-氯-1H-吡咯-2-基） 甲胺，放入25ml的圓底燒瓶中，并加入50 μ 1的三乙胺作為催化劑，加入攪拌子。在 110°C油浴加熱回流5h，冷卻，待白色固體析出，減壓抽濾，用正丁醇洗滌兩次，干燥，得到 6-(5-氯-吡咯-2-甲胺基）嘌呤（A1)。
[0030] 2. 26- (5-氯-吡咯-2-甲胺基）嘌呤（A1)的物理特征
[0031] t-NMR (DMS0-d6) δ (ppm) : 12. 987 (s，1H，7' or 9 ' -P ur i n e-Η)， 8. 220 (s，1H，-NH)，8. 140-8. 15 (m，2H，2'，8' -Purine-H)，7. 858 (s，1H，Γ -Pyrrole-H)， 6. 432-6. 446 (m，1H，4' -Pyrrol e-H)，6. 252-6. 283 (m，1H，3' -Pyrrol e-H)， 4.760(s，2H，-CH2)。ESI-MS:249. 1[M+H] +。
[0032] 實(shí)施例2化合物6- (6-氯-嘧啶-4-甲胺基）嘌呤（A2)的合成
[0033] 1化合物的合成路線
[0034] 具體合成路線如圖2所示。
[0035] 2合成步驟
[0036] 2. 16-(6-氯-嘧啶-4-甲胺基）嘌呤（A2)的制備
[0037] 量取5ml的正丁醇，稱取80mg的6-氯嘌呤以及120mg的（6-氯嘧啶-4-基）甲 胺，放入25ml的圓底燒瓶中，并加入50 μ 1的三乙胺作為催化劑，加入攪拌子。在110°C油浴 加熱回流5h，冷卻，待白色固體析出，減壓抽濾，用正丁醇洗滌兩次，干燥，得到6-(6-氯-嘧 啶-4-甲胺基）嘌呤（A2)。
[0038] 2. 26- (6-氯-嘧啶-4-甲胺基）嘌呤（A2)的物理特征
[0039] ^-NMR (DMS0-d6) δ (ppm) ：13.276(s,lH, 7'or 9' -Purine-H), 9. 432 (s, 1H, 2' -Pyrimidine-H)，8. 720 (s, 1H, -NH-)，8. 125-8. 243 (m, 2H, 2'，8' -Purine -Η)，7. 673(s，1H，5' -Pyrimidine-H)，4. 980(s，2H，-CH2)。ESI-MS:262. 6[M+H] +。
[0040] 實(shí)施例3化合物體外EGFR抑制活性測(cè)試
[0041] EGFR激酶體外活性篩選：實(shí)驗(yàn)采用的方法是Caliper Mobility Shift Assay，該 實(shí)驗(yàn)是以微流體芯片技術(shù)的迀移率檢測(cè)技術(shù)為核心的檢測(cè)平臺(tái)。具體的實(shí)驗(yàn)步驟是：配 置 1. 25x 激酶反應(yīng)緩沖液（62. 5mmol/L HEPES，ρΗ7· 5 ;0· 001875% Brij-35 ;12· 5mmol/L MgCl2;2. 5mmol/L DTT)和激酶反應(yīng)終止液（100mmol/L HEPES，ρΗ7· 5 ;0· 015% Brij-35 ; 0· 2% Coating Reagent#3);在5 μ 1的5x濃度化合物溶液中（DMS0溶解，用水稀釋10倍） 加入10 μ 1的2. 5x的EGFR激酶溶液（在1. 25x激酶反應(yīng)緩沖液中加激酶），室溫反應(yīng)10min 后再加入10 μ 1的2. 5x底物肽溶液（在1. 25x激酶反應(yīng)緩沖液中加 FAM標(biāo)記肽和ATP)，在 28°C下反應(yīng)特定的時(shí)間后加入25 μ 1激酶反應(yīng)終止液。在Caliper上搜集數(shù)據(jù)，對(duì)激酶活 性的抑制率=(max-conversion)/(max_min) XIOOo
[0042] 通過(guò)上述方法在5 μ mol/L濃度下測(cè)定化合物A1和化合物A2對(duì)FGFR1，KDR，野生 型EGFR激酶，EGFR敏感突變激酶EGFRLS5SR，EGFR(d746 75°}及EGFR突變耐藥激酶EGFR ?°M等 激酶的抑制活性，以表征抑制劑僅對(duì)EGFR突變株的抑制效果，抑制率見下表。
[0043] 化合物 A1 和化合物 A2 在 5 μ mol/L 濃度下對(duì) EGFRWT、EGFRLS5SR、EGFR(d746 75°)以及各 種激酶的抑制率
[0044]
[0045] 通過(guò)上述方法分別在 10000, 3333,1111，370,123,41，14, 5, 2,1(單位：nmol/L)等 10個(gè)濃度下測(cè)定化合物A1和化合物A2對(duì)野生型EGFR激酶，EGFR敏感突變激酶EGFI^ 5' EGFR(d746 75°)的抑制活性，IC50結(jié)果見下表。
[0046] 化合物 A1 和化合物 A2 對(duì) EGFRWT、EGFRLS5lP EGFR (d746 75°)的 1C 5。值
[0047]
[0048] 激酶實(shí)驗(yàn)表明：化合物A1和化合物A2對(duì)突變的EGFR激酶具有很高的選擇性，尤 其是對(duì)EGFR敏感突變激酶EGFR LS5SR，EGFR_ 75Q)具有很好的抑制作用，達(dá)到了 nmol/L的水 平，但對(duì)FGFR1，KDR和野生型的EGFR均不具有抑制作用。
[0049] 本發(fā)明的新的6-取代氨基嘌呤化合物及其可藥用鹽，對(duì)EGFR激酶的抑制具有選 擇性，能有效地抑制EGFR敏感突變激酶EGFR LS5SR，EGFR_ 75°}的活性，但對(duì)EGFR "激酶不具 有抑制效果，這樣既可以抑制EGFR突變體過(guò)度表達(dá)或異常激活的細(xì)胞增殖，從而高效地治 療腫瘤，又可以避免因?yàn)橐种茖?duì)人體內(nèi)正常組織EGFR WT激酶的磷酸化和相關(guān)信號(hào)通路的激 活，從而帶來(lái)較大的毒副作用，發(fā)生皮疹、嘔吐等藥物反應(yīng)，提高治療效果，減少副反應(yīng)。
[0050] 本文雖然已經(jīng)給出了本發(fā)明的一些實(shí)施例，但是本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，在 不脫離本發(fā)明精神的情況下，可以對(duì)本文的實(shí)施例進(jìn)行改變。上述實(shí)施例只是示例性的，不 應(yīng)以本文的實(shí)施例作為本發(fā)明權(quán)利范圍的限定。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 具有下列化學(xué)結(jié)構(gòu)的6-取代氨基嘌呤化合物及其可藥用鹽，Rl是氫、氟、氯、溴、甲氧基或羥基。2. 如權(quán)利要求1所述的6-取代氨基嘌呤化合物及其可藥用鹽，其特征在于，所述化合 物選自6-(5-氯-吡咯-2-甲胺基）嘌呤或6-(6-氯-嘧啶-4-甲胺基）嘌呤。3. 如權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的6-取代氨基嘌呤化合物及其可藥用鹽在制備抗腫 瘤藥物中的應(yīng)用。4. 如權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的6-取代氨基嘌呤化合物及其可藥用鹽在制備抑制 EGFR突變體過(guò)度表達(dá)或異常激活的細(xì)胞增殖藥物中的應(yīng)用。5. -種藥物、藥物組合或試劑，其特征在于，包括權(quán)利要求1所述的6-取代氨基嘌呤化 合物及其可藥用鹽。6. 如權(quán)利要求5所述的藥物、藥物組合或試劑，其特征在于，所述藥物、藥物組合或試 劑用于抑制EGFR突變體過(guò)度表達(dá)或異常激活的細(xì)胞增殖。7. 如權(quán)利要求6所述的藥物、藥物組合或試劑，其特征在于，所述EGFR突變體是在 L858R或（d746-750)位點(diǎn)產(chǎn)生突變的EGFR激酶。8. 如權(quán)利要求5所述的藥物、藥物組合或試劑，其特征在于，所述藥物、藥物組合或試 劑用于治療或預(yù)防腫瘤。9. 如權(quán)利要求8所述的藥物、藥物組合或試劑，其特征在于，所述腫瘤是EGFR依賴性腫 瘤。10. 如權(quán)利要求9所述的藥物、藥物組合或試劑，其特征在于，所述腫瘤包括肺癌、腸 癌、卵巢癌、腎癌、膀胱癌、空腔癌、胃癌或乳腺癌。
【文檔編號(hào)】C07D473/34GK105884777SQ201510315178
【公開日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2015年6月9日
【發(fā)明人】葉發(fā)青, 王宇, 王躍武, 俞淑芳, 陳弟, 陳梁芳, 宋曉琴, 謝自新, 梁廣, 李校堃, 劉志國(guó), 林丹
【申請(qǐng)人】溫州醫(yī)科大學(xué)