陽離子多殺菌素衍生物及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了陽離子多殺菌素衍生物及其制備方法和應(yīng)用。所述陽離子多殺菌素衍生物的結(jié)構(gòu)如式(I)式所示。所述陽離子多殺菌素衍生物能用于制備抗腫瘤藥物。
【專利說明】
陽離子多殺菌素衍生物及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及多殺菌素的結(jié)構(gòu)衍生物，特別是涉及多殺菌素衍生物上引入三苯基膦 陽離子，其制備方法及用于抗腫瘤等方面的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 多殺菌素(5口；[11083(1)是由刺糖多胞菌(33(^1^1'0口015^口0瓜8口；[11083)發(fā)酵液中提 取的一種能夠同時(shí)激活γ -氨基丁酸受體和煙堿型乙酰膽堿受體的大環(huán)內(nèi)酯類無公害高效 生物殺蟲劑，由陶氏益農(nóng)公司于上世紀(jì)九十年代初期開發(fā)并推向市場(chǎng)，商品化的多殺菌素 主要活性成分為多殺菌素 Α和多殺菌素 D(圖式1)，分別占多殺菌素總含量的85 %及15 %左 右。多殺菌素4作為其主要成分，安全性很高（1^)50瓜1:，0抑1>500011^/1^，丨。>100011^/1^)。希 臘ENTARC0SA公司2010年在一份專利中證實(shí)多殺菌素能作用于呼吸鏈復(fù)合物II，有抑制線 粒體氧化磷酸化作用，體外、體內(nèi)實(shí)驗(yàn)均顯示了較好的抗腫瘤活性(對(duì)腫瘤細(xì)胞株BxPC-3， Dul45，PC-3，MDA-MB-231 的GI50分別為11.1、12.5、13.3、13.4yg/mL)。多殺菌素 A和多殺菌素 D的化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
0
[0004] 氧化磷酸化相關(guān)的作用靶點(diǎn)位于線粒體基質(zhì)內(nèi)，即線粒體內(nèi)膜的內(nèi)側(cè)，多殺菌素 為分子量較大的電中性分子，不易透過線粒體內(nèi)膜進(jìn)入線粒體基質(zhì)內(nèi)，不利于其發(fā)揮抑制 線粒體氧化磷酸化的作用。如果能將多殺菌素對(duì)線粒體氧化磷酸化的抑制作用與親脂性陽 離子對(duì)腫瘤細(xì)胞線粒體的選擇性作用結(jié)合起來，設(shè)計(jì)合成親脂性陽離子多殺菌素衍生物， 則能提高多殺菌素進(jìn)入線粒體內(nèi)膜的能力，使其選擇性積聚于腫瘤細(xì)胞線粒體內(nèi)，發(fā)揮抑 制線粒體氧化磷酸化的作用。
[0005] 因此，基于上述思想，我們考慮在多殺菌素上進(jìn)行結(jié)構(gòu)修飾，引入不同的烷基側(cè) 鏈，再進(jìn)一步引入親脂性三苯基膦陽離子，提高其進(jìn)入線粒體的能力，設(shè)計(jì)合成了一類結(jié)構(gòu) 新穎的陽離子多殺菌素衍生物，并發(fā)現(xiàn)它們具有很強(qiáng)的抗腫瘤活性。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的之一為提供一類全新的陽離子多殺菌素衍生物。
[0007]所述陽離子多殺菌素衍生物結(jié)構(gòu)如式(I)所示：
[0009] 式(I)中：
[0010] R為Η或甲基，X為陰離子，linker為式(II)、式(III)、式(IV)所示的基團(tuán)，
[0012]式(II)、式(III)、式(IV)中 n = 0 ~18。
[0013 ]優(yōu)選地，所述陰離子X選自氯、溴、碘、硫酸根、硫酸氫根、磷酸根、甲磺酸根、苯磺酸 根、對(duì)甲苯磺酸根或氫氧根。
[0014] 優(yōu)選地，所述陽離子多殺菌素衍生物具體為式（V)、式（VI)、式（W)、式(珊）、式 (IX)、式（X)所示的化合物：
[0016] 本發(fā)明的目的之二為提供以上陽離子多殺菌素衍生物的制備方法。
[0017] 所述陽離子多殺菌素衍生物的制備方法技術(shù)路線如下：
[0018]
[0019] ⑴制備中間體1和中間體2:
[0020] 將多殺菌素溶于溶劑，并加入單質(zhì)碘和乙酸鈉，反應(yīng)后去除溶劑并加入飽和硫代 硫酸鈉溶液，用溶劑萃取數(shù)次，合并萃取液，加入干燥劑干燥，旋干溶劑并分離純化后得中 間體1，其中，所述多殺菌素、單質(zhì)碘、乙酸鈉的物質(zhì)的量的比為1: (1~10) : (1~10)，所述溶 劑用量為每lg多殺菌素使用1~lOOOrnL溶劑，所述飽和硫代硫酸鈉溶液用量為每lg多殺菌 素使用1~1 OOOmL飽和硫代硫酸鈉溶液；
[0021]將多殺菌素溶于1~10m〇l/L硫酸溶液中反應(yīng)結(jié)束后用水和溶劑萃取數(shù)次，合并萃 取液，加入干燥劑干燥，旋干溶劑得中間體2;
[0022] (2)制備中間體3、中間體4和中間體5:
[0023]將中間體1溶于溶劑中，加入末端二鹵代烷烴反應(yīng)后去除溶劑，加入水后用溶劑萃 取數(shù)次，合并萃取液，加入干燥劑干燥，旋干溶劑并離純化后得中間體3,其中，所述中間體1 和末端二鹵代烷烴的物質(zhì)的量比為1:(1~10)，所述溶劑用量為每lg中間體1使用1~ 1 OOOmL 溶劑；
[0024]將中間體1溶于溶劑中，加入脂肪酰鹵反應(yīng)后去除溶劑，加入水后用溶劑萃取數(shù) 次，合并萃取液，加入干燥劑干燥，旋干溶劑并分離純化后得中間體4，其中，所述中間體1和 脂肪酰鹵的物質(zhì)的量比為1: (1~1 〇 )，所述溶劑用量為每1 g中間體1使用1~1 〇〇〇mL溶劑； [0025]將中間體2溶于溶劑中，加入脂肪酰鹵反應(yīng)后去除溶劑，加入水后用溶劑萃取數(shù) 次，合并萃取液，加入干燥劑干燥，旋干溶劑并分離純化得到中間體5，其中，所述中間體2和 脂肪酰鹵的物質(zhì)的量比為1: (1~1 〇 )，所述溶劑用量為每1 g中間體1使用1~1 〇〇〇mL溶劑； [0026] (3)制備化合物A、化合物B和化合物C，所述化合物A、化合物B和化合物C為陽離子 多殺菌素衍生物：
[0027] 將中間體3、中間體4和中間體5分別溶于溶劑中，加入三苯基膦反應(yīng)后去除溶劑， 用正己烷/異丙醇重結(jié)晶數(shù)次，經(jīng)分離純化后得到陽離子多殺菌素的衍生物:化合物A、化合 物B和化合物C，其中，所述中間體3與三苯基膦的物質(zhì)的量的比為1: (1~20 )，所述中間體4 與三苯基膦的物質(zhì)的量的比為1: (1~20 )，所述中間體5與三苯基膦的物質(zhì)的量的比為1: (1 ~20 )，所述溶劑用量為每1 g中間體3或中間體4或中間體5使用1~1 OOOmL溶劑；
[0028] 步驟(1)、（2)和(3)中所述溶劑為質(zhì)子性溶劑或非質(zhì)子性溶劑。
[0029]步驟（1)、（2)和（3)中所述溶劑為乙醇、甲醇、石油醚、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷、 氯仿、乙腈或N，N-二甲基甲酰胺等;步驟（1)、（2)和(3)中所述反應(yīng)的溫度為-10°C-200°C; 步驟(1)、（2)和(3)中所述干燥劑為無水硫酸鈉或無水氯化鈣等。所述分離純化是經(jīng)硅膠柱 層析分離純化。
[0030] 上述的陽離子多殺菌素衍生物能用于制備抗腫瘤藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0031] 實(shí)施例1
[0032] N-去甲基多殺菌素 A的制備
[0034] N-去甲基多殺菌素 A的結(jié)構(gòu)式
[0035] 在500mL茄型瓶中，依次加入5.00g(6.83mmol)多殺菌素 A和200mL甲醇，將1.12g (13.66mmol)乙酸鈉溶于lmL水中并加入反應(yīng)體系，最后加入6.94g單質(zhì)碘(27.32mmol)，攪 拌下于70 °C下回流反應(yīng)12h。反應(yīng)過程中用lmo 1 /L的氫氧化鈉溶液保持反應(yīng)液pH=8~9。旋 轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去甲醇，加入l〇〇mL飽和硫代硫酸鈉溶液，用乙酸乙酯（3X100mL)萃取，合并有機(jī) 相，用無水硫酸鈉干燥4h。減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫去溶劑后經(jīng)硅膠(200目~300目）柱層析[洗脫 劑:V(乙酸乙酯）：V(甲醇）：V(三乙胺）= 10:1:0.1]純化得N-去甲基多殺菌素 A為淡黃色固 體3.968，收率81%。111.?.81~89。(：；1!1匪1?(4001取，〇)(：13)，3 :6.78(8，1!1)，5.89((1，了 = 9.8Hz，lH)，5.81(d，J = 9.8Hz，lH)，4.89~4.84(m，lH)，4.73~4.64(m，lH)，4.53~4.47(m， 1Η)，4·36~4.29(m，lH)，3.69~3.62(m，lH)，3.59~3.55(m，4H)，3.53~3.45(m，10H),3.35 ~3.26(m，lH)，3.17~3.09(m，2H)，3.06~2.99(m，lH)，2.92~2.84(m，lH)，2.51(s，3H)， 2.45~2.32(m，3H),2.31~2.23(m，lH),2.23~2.12(m，2H),2.02~1.90(m，2H),1.83~ 1.71(m，lH)，1.62~1.40(m，9H)，1.35(d，J = 6.1Hz，4H)，1.29(d，J = 6.2Hz，3H)，1.19(d，J = 6·7Ηζ，4Η) ,0.98~0.88(m，lH)，0.83(t，J = 7.4Hz，3H) ;13C 匪R(100MHz，CDC13)，δ: 202.76,172.56,147.57,144.08,129.33,128.78,103.12,95.40,82.24,81.01,80.85， 77.68,76.05,74.45,67.91,60.95,60.59,59.01,57.70,49.42,47.58,46.02,41.50, 41.15,37.36,36.26,34.29,34.19,33.11,30.42,30.11,28.37,27.35,21.50,19.04, 17.79，16.24,9.37;邢451-]\^:〇4()1163吣1()[]\1+!1] +，計(jì)算值718.453 02，測(cè)定值718.452 39。
[0036] 實(shí)施例2
[0037] N-去甲基多殺菌素 D的制備
[0039] N-去甲基多殺菌素 D的結(jié)構(gòu)式
[0040] 按實(shí)例1，用多殺菌素 D代替多殺菌素 A，得白色固體3.8g，收率771HR-ESI-MS: 〇41抱5勵(lì)1()[]\1+!1] +，計(jì)算值731.460 85，測(cè)定值731.460 39。
[0041 ] 實(shí)施例3
[0042] 17-0-Psa多殺菌素 A的制備
[0044] 17-0-Psa多殺菌素 A的結(jié)構(gòu)式
[0045] 在250mL單頸瓶中，依次加入5g(6.83mmol)多殺菌素 A和100mL新制lmol/L H2SO4， 攪拌下于80 °C下反應(yīng)4h。停止反應(yīng)，冷卻至室溫，抽濾，用新制lmol/L H2S〇4溶液(500mL)洗 滌濾渣。收集濾渣，加入100mL水，用二氯甲烷(3 X 200mL)萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干 燥4h。減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫去溶劑后得17-0-Psa多殺菌素 A為白色固體3.9g，收率95%。
[0046] 實(shí)施例4
[0047] 17-0-Psa多殺菌素 D的制備
[0049] 17-0-Psa多殺菌素 D的結(jié)構(gòu)式
[0050]按實(shí)例3,用多殺菌素 D代替多殺菌素 A，得白色固體4.0g，收率99%。
[0051 ] 實(shí)施例5
[0052] N-脫甲基-N_(3-溴丙基)多殺菌素 A的制備
[0054] N-脫甲基-N_(3-溴丙基)多殺菌素 A的結(jié)構(gòu)式
[0055] 在50mL單頸瓶中，依次加入lg( 1.39mmol)中間體化合物1和20mL乙腈，再加入 385mg(2.78mmol)碳酸鉀和426yL(4.18mmol)l，3-二溴丙烷，攪拌下于45°C下反應(yīng)24h。停止 反應(yīng)，冷卻至室溫，抽濾除去碳酸鉀固體，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙腈，加入50mL水，用乙酸乙酯(3 X 50mL)萃取，合并有機(jī)相，用無水硫酸鈉干燥4h。減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫去溶劑后經(jīng)硅膠（200目~ 300目）柱層析[洗脫劑:V(石油醚）：V(乙酸乙酯）=4:1]純化得N-脫甲基-N-(3-溴丙基）多 殺菌素 A為白色固體122mg，收率10%。
[0056] 實(shí)施例6
[0057] N-脫甲基-N_(3-溴丙基)多殺菌素 D的制備
[0059] N-脫甲基-N_(3-溴丙基)多殺菌素 D的結(jié)構(gòu)式
[0060] 按實(shí)例5,用多殺菌素 D代替多殺菌素 A，得白色固體121mg，收率10%。
[0061 ] 實(shí)施例7
[0062] N-脫甲基-N_(6-溴己基)多殺菌素 A的制備
[0064] N-脫甲基-N_(6-溴己基)多殺菌素 A的結(jié)構(gòu)式
[0065]按實(shí)例5，用1，6-二溴己烷代替1，3-二溴丙烷，得白色固體304mg，收率25%。
[0066] 實(shí)施例8
[0067] N-脫甲基-N-(氯乙?；?多殺菌素 A的制備
[0069] N-脫甲基-N-(氯乙?；?多殺菌素 A的結(jié)構(gòu)式
[0070] 在25mL單頸瓶中，依次加入500mg(0.70mmol)中間體化合物1和10mL二氯甲燒，稱 取288mg(2.09mmol)碳酸鉀加入反應(yīng)體系，量取157yL(2.09mmol)氯乙酰氯加入反應(yīng)體系， 攪拌下于室溫下反應(yīng)12h。停止反應(yīng)，抽濾除去碳酸鉀固體，加入lOOmL水，用二氯甲烷(3 X 100mL)萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥4h。減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫去溶劑后經(jīng)硅膠（200目~ 300目）柱層析[洗脫劑：V(石油醚）：V(乙酸乙酯）=4:1]純化得淡黃色固體420mg，收率 76% 〇
[0071] 實(shí)施例9
[0072] 17-0-溴丁酸酯-多殺菌素 A-17-Psa的制備
[0074] 17-0-溴丁酸酯-多殺菌素 A-17-Psa的結(jié)構(gòu)式
[0075] 在50mL單頸瓶中，依次加入1 · 10g( 1 ·82mmol) 17-〇-Psa多殺菌素 A和30mL二氯甲 烷，稱取0.50g(3.65mmol)碳酸鉀加入反應(yīng)體系，量取423yL 4-溴丁酰氯(3.65mmol)加入反 應(yīng)體系，攪拌下于室溫下反應(yīng)12h。停止反應(yīng)，抽濾除去碳酸鉀固體，加入lOOmL水，用二氯甲 烷(3X 100mL)萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥4h。減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫去溶劑后經(jīng)硅膠(200 目~300目）柱層析[洗脫劑:V(石油醚）：V(乙酸乙酯）=4:1]純化得白色固體0.62g，收率 46% 〇
[0076] 實(shí)施例10
[0077] 17-0-溴丁酸酯-多殺菌素 D-17-Psa的制備
[0079] 17-0-溴丁酸酯-多殺菌素 D-17-Psa的結(jié)構(gòu)式
[0080] 按實(shí)例9,用17-0-Psa多殺菌素 D代替17-0-Psa多殺菌素 A，得白色固體0.60g，收率 44% 〇
[0081 ] 實(shí)施例11
[0082] 17-0-碘丁酸酯-多殺菌素 A-17-Psa的制備
[0084] 17-0-碘丁酸酯-多殺菌素 A-17-Psa的結(jié)構(gòu)式
[0085] 在25mL單頸瓶中，依次加入292mg(0·39mmol) 17-0-溴丁酸酯-多殺菌素 A-17-Psa 和10mL丙酮，稱取118mg(0.79mmol)碘化鈉加入反應(yīng)體系，攪拌下于50°C下反應(yīng)6h。停止反 應(yīng)，冷卻至室溫，抽濾除去析出的NaBr固體，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去丙酮，加入10mL水，用乙酸乙酯(3 X20mL)萃取，合并有機(jī)相，無水硫酸鈉干燥4h。減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)脫去溶劑后經(jīng)硅膠（200目~ 300目）柱層析[洗脫劑：V(石油醚）：V(乙酸乙酯）=2 :1]純化得淡黃色固體213!1^，收率 69% 〇
[0086] 實(shí)施例12
[0087] 17-0-碘丁酸酯-多殺菌素 D-17-Psa的制備
[0089] 17-0-碘丁酸酯-多殺菌素 D-17-Psa的結(jié)構(gòu)式
[0090] 按實(shí)例11，用17-0-溴丁酸酯-多殺菌素 D-17-Psa代替17-0-溴丁酸酯-多殺菌素 A-17-Psa，得淡黃色固體220mg，收率71 %。
[0091] 實(shí)施例13
[0092] N-脫甲基-N_(3-三苯基膦)丙基多殺菌素 A溴化季磷鹽的制備
[0094] N-脫甲基-N_(3-三苯基膦)丙基多殺菌素 A溴化季磷鹽的結(jié)構(gòu)式【式（V)】
[0095] 在25mL單頸瓶中，依次加入200mg(0.24mmol)N-脫甲基-N-(3-溴丙基）多殺菌素 A 和151111^乙腈，稱取12511^(0.481]11]1〇1)三苯基膦加入反應(yīng)體系，攪拌下于85<€下回流反應(yīng)3(1。 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙腈，用正己烷和異丙醇[v(正己烷）：V(異丙醇）=3 :1]重結(jié)晶兩次后經(jīng) Sephadex LH20凝膠柱層析（洗脫劑：甲醇）純化得白色固體102mg，收率39 %。4 NMR (500MHz，CDCl3)S7.92-7 ·85(ι?，6H) ,7.85-7.79(m，3H) ,7.76-7 ·70(ι?，6H)，6.78(s，lH)， 5.90(d ,J=10.0Hz,lH),5.81(d ,J=10.0Hz,lH) ,4.87(s, 1H) ,4.72-4.65(m, 1H) ,4.40(d ,J =9.0Hz,lH),4.37-4.30(m,lH),4.08-3.94(m,lH),3.89-3.77(m,lH),3.66-3.60(m,lH), 3.59-3.56(m,4H),3.54-3.46(m,10H),3.33-3.25(m,lH),3.18-3.10(m,2H),3.06-3.00(m, 1H),2.92-2.85(m,lH),2.83-2.71(m,2H),2.42(d,J=12.6Hz,lH),2.32-2.24(m,lH), 2.23-2.16(m,lH),2.13-2.06(m,3H),1.98-1.91(m,2H),l.83-1.72(m,3H),l.61-1.58(m, 8H),1.32-1.26(m,6H),1.25-1.22(m,lH),l.20-1.17(m,4H),l.16-1.13(m,3H),0.92-0.88 (m，lH)，0.84(t，J = 7.5Hz，3H);13C NMR(101MHz，CDC13)S202.74，172.54，147.50，144.07， 135.11,133.78,130.63,129.35,128.82,95.44,82.28,81.05,77.73,76.07,67.95,60.93， 59.01,57.72,49.46,47.61,46.06,41.52,41.17,37.39,36.30,34.29,30.17,28.37， 21 · 44，17 · 81，16 · 28，9 · 36; HR-ESI-MS: C6iH83BrNOi〇P[M-Br ]+計(jì)算值 1020 · 57 491 測(cè)定值 1020.57 568.
[0096] 實(shí)施例14
[0097] N-脫甲基-N_(3-三苯基膦)丙基多殺菌素 D溴化季磷鹽的制備
[0099] N-脫甲基-N_(3-三苯基膦)丙基多殺菌素 D溴化季磷鹽的結(jié)構(gòu)式【式(X)】
[0100] 按實(shí)例13,用N-脫甲基-N-(3-溴丙基）多殺菌素 D代替N-脫甲基-N-(3-溴丙基）多 殺菌素厶，得白色固體10〇11^，收率34%。冊(cè)451-]\^:〇6211858心〇1(^[]\1-81]+計(jì)算值1034.59 056測(cè)定值 1034.59 032.
[0101] 實(shí)施例15
[0102] N-脫甲基-N_(3-三苯基膦)己基多殺菌素 A溴化季磷鹽的制備
[0104] N-脫甲基-N-(3-三苯基膦)己基多殺菌素 A溴化季磷鹽的結(jié)構(gòu)式【式(VI)】
[0105] 在25mL單頸瓶中，依次加入300mg(0.34mmo 1 )N-脫甲基-N-(6-溴己基）多殺菌素 A 和151111^乙腈，稱取17811^(0.681]11]1〇1)三苯基膦加入反應(yīng)體系，攪拌下于85<€下回流反應(yīng)3(1。 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去乙腈，用正己烷和異丙醇[V(正己烷）：V(異丙醇）= 3:1]重結(jié)晶一次后經(jīng) Sephadex LH20凝膠柱層析（洗脫劑：甲醇）純化得白色固體254mg，收率65%。1!! NMR (500MHz，CDCl3)S7.90-7 ·84(ι?，6H) ,7.84-7.79(m，3H) ,7.75-7 ·70(ι?，6H)，6.78(s，lH)， 5.89(d ,J = 9.5Hz,lH) ,5.81(d ,J=10.0Hz,lH) ,4.87(s , 1H), 4.71-4.65(m, 1H), 4.43(s, 1H),4.36-4.30(m,lH),3.84(s,2H),3.67-3.61(m,lH),3.58-3.55(m,4H),3.53-3.46(m, 10H),3.33-3.26(m,lH),3.16-3.10(m,2H),3.05-3.00(m,lH),2.91-2.85(m,lH),2.44-2.39(m,lH),2.31-2.24(m,2H),2.21-2.12(m,3H),2.00-1.91(m,2H),1.72-1.64(m,9H), 1.58- 1.46(m,8H),1.31-1.28(m,4H),1.24-1.22(m,4H),1.20-1.18(m,4H),0.95-0.87(m, 1H)，0.83(t，J = 7.5Hz，3H) ;13C 匪R(101MHz，CDC13)S202.79，172.46，147.50，144.08， 135.05,133.74,133.64,130.59,130.47,129.34,128.81,118.68,117.82,95.43,82.26， 81.03,80.76,77.71,76.06,67.93,60.92,59.01,57.70,49.44,47.60,46.04,41.50， 41.16,37.38,36.29,34.32,34.21,30.13,28.37,23.02,22.52,21.46,17.81,16.25,9.35; HR-ESI-MS: C64H89BrNOi〇P[M-Br]+計(jì)算值 1062 · 62 186測(cè)定值 1062 · 62097.
[0106] 實(shí)施例16
[0107] N-脫甲基-N_[( 2-三苯基膦）乙?；鵠多殺菌素 A氯化季磷鹽的制備
[0109] N-脫甲基-N_[(2-三苯基膦）乙酰基]多殺菌素 A氯化季磷鹽的結(jié)構(gòu)式【式(珊）】在 25mL單頸瓶中，依次加入300mg(0.38mmol)N-脫甲基-N-(氯乙?；?多殺菌素 A和15mL乙腈， 稱取19811^(0.76111111〇1)三苯基膦加入反應(yīng)體系，攪拌下于85°(：下回流反應(yīng)3(1。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去 乙腈，用正己烷和異丙醇[V(正己烷）：V(異丙醇）= 3:1]重結(jié)晶一次后經(jīng)Sephadex LH20凝 膠柱層析(洗脫劑：甲醇）純化得白色固體204mg，收率51%。1!1匪1?(40010^，0)(：1 3)67.97-7.88(m,6H),7.77-7.70(m,3H),7.68-7.61(m,6H),6.78(s,lH),5.89(d,J=9.6Hz,lH), 5.84-5.78(m,lH),4.87(s,lH),4.71-4.63(m,1H),4.51-4.42(m,1H),4.36-4.29(m,1H), 3.59- 3.55(m,4H),3.54-3.45(m,10H),3.35-3.30(m,2H),3.16-3.09(m,2H),3.05-2.99(m, 1H),2.91-2.83(m,lH),2.71(s,lH),2.45-2.37(m,lH),2.32-2.23(m,lH),2.22-2.12(m, 1H),1.98-1.90(m,2H),1.85-1.67(m,8H),l.60-1.42(m,8H),l.31-1.27(m,4H),1.23(d,J = 6.0Hz,2H) ,1.19-1.14(m,3H) ,0.99(d, J = 6. OHz , 2H), 0.94-0.87(m, 1H), 0.82( t ,J = 7·2Hz，3H);13C 匪R(126MHz，CDC13)S202.71,172.53,164.95,147.41,144.15,134.37， 133.97,129.96,129.34,128.81,120.13,119.41,103.54,102.98,95.48,82.29,81.08， 80·57，77·75，76·09，67·95，60·91,59.00,57.71,49.46,47.62,46.04，41.51，41.17， 37.39,36.30,34.24,30.85,30.07,28.38,28.02,26.51,24.86,21.49,18.25,17.98， 17.81,16.14,9.33;HR-ESI-MS:C6〇H79C1NOiiP[M-C1] +計(jì)算值 1020.53 853測(cè)定值 1020.54 498.
[0110] 實(shí)施例17
[0111] 17-0-(4-三苯基膦)丁酸酯-多殺菌素 A-17-Psa碘化季磷鹽的制備
[0113] 17-0-(4-三苯基膦)丁酸酯-多殺菌素 A-17-Psa碘化季磷鹽的結(jié)構(gòu)式【式(W)】
[0114] 在25mL單頸瓶中，依次加入232mg(0.29mmol) 17-0-碘丁酸酯-多殺菌素 A-17-Psa 和15mL丙酮，稱取155mg(0.59mmol)三苯基膦加入反應(yīng)體系，攪拌下于60°C下回流反應(yīng)3d。 旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去丙酮，用正己烷和異丙醇[V(正己烷）：V(異丙醇）= 3:1]重結(jié)晶兩次后經(jīng) Sephadex LH20凝膠柱層析（洗脫劑：甲醇）純化得淡黃色固體145mg，收率48%。4 M1R (500MHz,CDCl3)57.92-7.86(m,6H),7.84-7.80(m,3H),7.75-7.70(m,6H),6.83(s,lH), 5.91-5.87(m,lH),5.82-5.78(m,lH),5.08-5.02(m,lH),4.86(s,lH),4.71-4.64(m,1H), 4.36-4.30(m,lH),4.07-3.91(m,2H),3.57-3.55(m,4H),3.52-3.46(m,10H),3.43-3.39(m, lH),3.15-3.09(m,2H),3.06-3.01(m,lH),2.98-2.88(m,3H),2.45-2.40(m,lH),2.33-2.26 (m,lH),2.23-2.15(m,lH),1.99-1.91(m,3H),1.78-1.68(m,3H),1.65-1.46(m,4H),1.41-1.33(m,2H),1.30(d ,J = 6.5Hz,3H),1.12(d ,J = 6.5Hz,3H), 0.95-0.88(m,lH),0.82(t,J = 7.5Hz，3H);13C 匪R(101MHz，CDC13)S201.58，172.81，172.42，147.93，143.75，135.07， 133.88,130.60,129.44,128.81,118.50,117.64,95.51,82.28,81.01,77.80,76.14， 75.66,67.98,60.88,59.02,57.75,49.54,47.68,46.15,45.31,41.45,41·14,37.43， 36.34,34.35,33.38,33.20,32.68,30.16,28.14,22.15,21.64,20.82,18.18,17.85， 16.81，9.37;邢451-]\^:〇55117。1〇1疋[]?-1] +計(jì)算值921.47 011測(cè)定值921.47 021.
[0115] 實(shí)施例18
[0116] 17-0-(4-三苯基膦)丁酸酯-多殺菌素 D-17-Psa碘化季磷鹽的制備
[0118] 17-0-(4-三苯基膦)丁酸酯-多殺菌素 D-17-Psa碘化季磷鹽的結(jié)構(gòu)式【式(IX)】
[0119] 按實(shí)例17,用17-0-碘丁酸酯-多殺菌素 D-17-Psa代替17-0-碘丁酸酯-多殺菌素 A- 17-Psa，得淡黃色固體 140mg，收率45% AR-ESI-MS: C56H72I0iqP[M-I ]+計(jì)算值935 · 48 576測(cè) 定值935.48 583.
[0120]抗腫瘤活性活性實(shí)驗(yàn)
[0121] (1)胰酶消化對(duì)數(shù)期人乳腺癌MCF-7細(xì)胞或結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116，終止后離心收集， 制成細(xì)胞懸液。
[0122] (2)接種細(xì)胞:根據(jù)細(xì)胞增長(zhǎng)速率以每孔100yL體積設(shè)置好細(xì)胞密度，接種96孔板， 設(shè)置4個(gè)復(fù)孔，同時(shí)設(shè)置調(diào)零孔(培養(yǎng)基、MTT、二甲基亞砜），對(duì)照孔(細(xì)胞、相同濃度的藥物 溶解介質(zhì)、培養(yǎng)液、MTT、二甲基亞砜，DMS0終濃度〈0.1 % )。待細(xì)胞貼壁后以Ομπιο 1/L、6.25μ mol/L、12.5ymol/L、25ymol/L、50ymol/L的濃度梯度對(duì)多殺菌素類似物進(jìn)行處理。
[0123] (3)培養(yǎng)細(xì)胞:在37 °C、5 % C02的飽和濕度下，培養(yǎng)48h。
[0124] (4)顯色:每孔加入MTT溶液(5mg/mL) 20yL，繼續(xù)培養(yǎng)4h后棄去孔內(nèi)培養(yǎng)液，每孔加 入100yL DMS0，于脫色搖床上振蕩lOmin，使結(jié)晶物充分融解。
[0125] (5)比色:選490nm波長(zhǎng)，校正波長(zhǎng)630nm，用酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀測(cè)定各孔吸光度，記錄 結(jié)果，計(jì)算抑制率。
[0126] 計(jì)算IC5Q值，結(jié)果見表1。
[0127] 表1:被測(cè)化合物對(duì)乳腺癌MCF-7細(xì)胞和結(jié)腸癌HCT116細(xì)胞的增殖抑制活性，以多 殺菌素 A為陽性對(duì)照.（IC5Q值，單位μΜ)
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 陽離子多殺菌素衍生物，其特征在于，所述陽離子多殺菌素衍生物結(jié)構(gòu)如式（I)所 示： 式⑴中：R為H或甲基，X為陰離子，linker為式(II)、式(III)、式(IV)所示的基團(tuán)，式(II)、式(III)、式(IV)中 n = 0 ~18。2. 如權(quán)利要求1所述的陽離子多殺菌素衍生物，其特征在于，所述陰離子X選自氯、溴、 碘、硫酸根、硫酸氫根、磷酸根、甲磺酸根、苯磺酸根、對(duì)甲苯磺酸根或氫氧根。3. 如權(quán)利要求1所述的陽離子多殺菌素衍生物，其特征在于，所述陽離子多殺菌素衍生 物具體為式（V)、式(VI)、式(VH)、式(珊）、式(K)、式（X)所示的化合物：(DO (X)〇4.如權(quán)利要求1所述陽離子多殺菌素衍生物的制備方法，其特征在于，所述方法包括如 下步驟： (1) 制備中間體1和中間體2: 將多殺菌素溶于溶劑，并加入單質(zhì)碘和乙酸鈉，反應(yīng)后去除溶劑并加入飽和硫代硫酸 鈉溶液，用溶劑萃取數(shù)次，合并萃取液，加入干燥劑干燥，旋干溶劑并分離純化后得中間體 1，其中，所述多殺菌素、單質(zhì)碘、乙酸鈉的物質(zhì)的量的比為1:(1~10):(1~10)，所述溶劑用 量為每Ig多殺菌素使用1~1000 mL溶劑，所述飽和硫代硫酸鈉溶液用量為每Ig多殺菌素使 用1~I OOOmL飽和硫代硫酸鈉溶液； 將多殺菌素溶于1~l〇mol/L硫酸溶液中反應(yīng)結(jié)束后用水和溶劑萃取數(shù)次，合并萃取 液，加入干燥劑干燥，旋干溶劑得中間體2; (2) 制備中間體3、中間體4和中間體5: 將中間體1溶于溶劑中，加入末端二鹵代烷烴反應(yīng)后去除溶劑，加入水后用溶劑萃取數(shù) 次，合并萃取液，加入干燥劑干燥，旋干溶劑并離純化后得中間體3，其中，所述中間體1和末 端二鹵代烷烴的物質(zhì)的量比為I: (1~I ο)，所述溶劑用量為每I g中間體1使用1~I OOOmL溶 劑； 將中間體1溶于溶劑中，加入脂肪酰鹵反應(yīng)后去除溶劑，加入水后用溶劑萃取數(shù)次，合 并萃取液，加入干燥劑干燥，旋干溶劑并分離純化后得中間體4,其中，所述中間體1和脂肪 酰鹵的物質(zhì)的量比為I: (1~1 〇 )，所述溶劑用量為每Ig中間體1使用1~1000 mL溶劑； 將中間體2溶于溶劑中，加入脂肪酰鹵反應(yīng)后去除溶劑，加入水后用溶劑萃取數(shù)次，合 并萃取液，加入干燥劑干燥，旋干溶劑并分離純化得到中間體5,其中，所述中間體2和脂肪 酰鹵的物質(zhì)的量比為I: (1~1 〇 )，所述溶劑用量為每Ig中間體1使用1~1000 mL溶劑； (3)制備化合物A、化合物B和化合物C，所述化合物A、化合物B和化合物C為陽離子多殺 菌素衍生物： 將中間體3、中間體4和中間體5分別溶于溶劑中，加入三苯基膦反應(yīng)后去除溶劑，用正 己烷/異丙醇重結(jié)晶數(shù)次，經(jīng)分離純化后得到陽離子多殺菌素的衍生物:化合物A、化合物B 和化合物C，其中，所述中間體3與三苯基膦的物質(zhì)的量的比為I: (1~20)，所述中間體4與三 苯基膦的物質(zhì)的量的比為1:(1~20)，所述中間體5與三苯基膦的物質(zhì)的量的比為1:(1~ 20 )，所述溶劑用量為每I g中間體3或中間體4或中間體5使用1~I OOOmL溶劑； 步驟(1)、（2)和(3)中所述溶劑為質(zhì)子性溶劑或非質(zhì)子性溶劑。5. 如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，步驟（1)、（2)和(3)中所述溶劑為乙醇、甲醇、 石油醚、乙酸乙酯、丙酮、二氯甲烷、氯仿、乙腈或N，N-二甲基甲酰胺;步驟（1)、⑵和(3)中 所述反應(yīng)的溫度為-l〇°C -200°C;步驟(1)、（2)和(3)中所述干燥劑為無水硫酸鈉或無水氯 化鈣。6. 如權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于，步驟(1)、（2)和(3)中所述分離純化是經(jīng)硅膠 柱層析分離純化。7. 如權(quán)利要求1至3任一項(xiàng)所述的陽離子多殺菌素衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK105884844SQ201610356840
【公開日】2016年8月24日
【申請(qǐng)日】2016年5月26日
【發(fā)明人】馬大友, 劉蘇友, 羅志勇, 賴青, 彭坤堅(jiān), 劉麗君
【申請(qǐng)人】中南大學(xué)