一種抗神經(jīng)炎細胞抗體的制取工藝的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗神經(jīng)炎細胞抗體的制取工藝，其工藝步驟為：(1)神經(jīng)炎細胞的提取與培養(yǎng)；(2)乳化；(3)動物免疫：運用DNA重組技術，將熒光蛋白基因重組到免疫細胞分泌抗體的基因序列中，得到重組細胞，純化培養(yǎng)，取10?8重組細胞懸液備用；(4)抽取血清；(5)緩沖液的配制；(5)純化，本發(fā)明的一種抗神經(jīng)炎細胞抗體能用于制備檢測或診斷多發(fā)性神經(jīng)炎疾病，能同時針對神經(jīng)炎細胞表面的多個抗原，增強了臨床神經(jīng)炎患者的治療效果，制取周期短，穩(wěn)定性高，適于推廣應用。
【專利說明】
一種抗神經(jīng)炎細胞抗體的制取工藝
技術領域
[0001]本發(fā)明涉及生物醫(yī)藥領域，特別是涉及一種抗神經(jīng)炎細胞抗體的制取工藝。
【背景技術】
[0002]抗原通常是由多個抗原決定簇組成的，由一種抗原決定簇刺激機體，由一個B淋巴細胞接受該抗原所產(chǎn)生的抗體稱之為抗體。除了抗原決定簇的多樣性以外，同樣一類抗原決定簇，也可刺激機體產(chǎn)生IgG、IgM、IgA、IgE和IgD等五類抗體。當抗體是由異源抗原(大分子抗原、半抗原偶聯(lián)物)刺激機體產(chǎn)生免疫反應，有機體漿細胞分泌的一組免疫球蛋白。這種抗體可識別多個抗原表位、可引起沉淀反應，制備時間短，成本低的原因廣泛應用于研究和診斷方面，申請?zhí)枮镃N200410018771.X公開了一種抗人促血液血管生長因子(HAPO)的抗體、抗體及其應用，用于制備抗體的免疫原為人促血液血管生長因子，制備的抗體可以用來識別和定量分析人促血液血管生長因子、中和其生物學活性，由此組裝的試劑盒可檢測不同細胞、組織中人促血液血管生長因子的定位及表達，檢測血、尿、培養(yǎng)上清、細胞、組織等不同樣品中人促血液血管生長因子的含量，但是該抗體不能制備檢測或診斷多發(fā)性疾病，不能同時針對細胞表面的多個抗原，臨床患者的治療效果不好。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為克服現(xiàn)有技術上的不足，本發(fā)明目的是提供一種抗神經(jīng)炎細胞抗體的制取工藝。
[0004]為實現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明的技術方案如下:
[0005]一種抗神經(jīng)炎細胞抗體的制取工藝，其工藝步驟如下:
[0006](I)神經(jīng)炎細胞的提取與培養(yǎng):從BALA/C純種小白鼠體內(nèi)提取神經(jīng)炎細胞，體外培養(yǎng)，取對數(shù)生長神經(jīng)炎細胞離心，用無血清培養(yǎng)液洗3次，計數(shù)，取得10-7細胞備用；
[0007](2)乳化:計數(shù)取神經(jīng)炎細胞10-5，與油佐劑混合，制得免疫混合物，所述油佐劑包括白油、硬脂酸鋁和司本80，所述白油、硬脂酸鋁和司本80的用量分別為80ml、3g和5ml ；
[0008](3)動物免疫:向動物體內(nèi)注射免疫混合物，然后每隔一周向動物體內(nèi)注射，每次注射之前測量血液抗體滴度，當抗體滴度達到1: 1000-2500，終止免疫；
[0009](4)抽取血清:終止免疫后取動物血液，靜置l_2h后離心，取上清液，得到含神經(jīng)炎抗體的血清；
[0010](5)緩沖液的配制:取磷酸二氫鈉20ml和NaCll.5ml，制得緩沖液，控制其pH為7.2-9.0 ；
[0011](5)純化:將步驟(4)得到的血清填柱處理，用步驟(5)制取的緩沖液洗柱子，收集洗脫液，透析，收集透析之后的液體，凍干之后即得神經(jīng)炎細胞抗體。
[0012]優(yōu)選的，所述步驟(2)中，所述白油、硬脂酸鈉和司本80加熱融化得油佐劑。
[0013]優(yōu)選的，所述步驟(4)中，所述血液從動物脾臟內(nèi)抽取。
[0014]有益效果:本發(fā)明通過神經(jīng)炎細胞的提取與培養(yǎng)、乳化、動物免疫、抽取血清、緩沖液配制、純化六大步驟完成抗神經(jīng)炎細胞抗體的制取工藝，用于制備檢測或診斷多發(fā)性神經(jīng)炎疾病，能同時針對神經(jīng)炎細胞表面的多個抗原，增強了臨床神經(jīng)炎患者的治療效果，制取周期短，穩(wěn)定性高，純種小白鼠神經(jīng)炎細胞活性強，由此產(chǎn)生的抗體具有很強的活性，使該抗體具有廣泛的適用性，乳化過程中選用的油佐劑，可提高抗體的穩(wěn)定性能，緩沖液沖洗純化，得到高純度的抗體，臨床的治療效果更加優(yōu)異。
【具體實施方式】
[0015]為使本發(fā)明實現(xiàn)的技術手段、創(chuàng)作特征、達成目的與功效易于明白了解，下面結合【具體實施方式】，進一步闡述本發(fā)明。
[0016]實施例1:
[0017]本實施例的一種抗神經(jīng)炎細胞抗體的制取工藝，其工藝步驟如下:
[0018](I)神經(jīng)炎細胞的提取與培養(yǎng):從BALA/C純種小白鼠體內(nèi)提取神經(jīng)炎細胞，體外培養(yǎng)，取對數(shù)生長神經(jīng)炎細胞離心，用無血清培養(yǎng)液洗3次，計數(shù)，取得10-7細胞備用；
[0019](2)乳化:計數(shù)取神經(jīng)炎細胞10-5，與油佐劑混合，制得免疫混合物，所述油佐劑包括白油、硬脂酸鋁和司本80，所述白油、硬脂酸鋁和司本80的用量分別為80ml、3g和5ml，所述白油、硬脂酸鈉和司本80加熱融化得油佐劑；
[0020](3)動物免疫:向動物體內(nèi)注射免疫混合物，然后每隔一周向動物體內(nèi)注射，每次注射之前測量血液抗體滴度，當抗體滴度達到1: 1000-2500，終止免疫；
[0021](4)抽取血清:終止免疫后取動物血液，靜置l_2h后離心，取上清液，得到含神經(jīng)炎抗體的血清,所述血液從動物脾臟內(nèi)抽取；
[0022](5)緩沖液的配制:取磷酸二氫鈉20ml和NaCl 1.5ml,制得緩沖液，控制其pH為7.2-9.0 ；
[0023](5)純化:將步驟(4)得到的血清填柱處理，用步驟(5)制取的緩沖液洗柱子，收集洗脫液，透析，收集透析之后的液體，凍干之后即得神經(jīng)炎細胞抗體。
[0024]實施例2:其余與所述實施例1相同，不同之處在于，步驟⑵將油佐劑改為脂質體，本實施例中，成本較低，但是作用效果相對較低。
[0025]實施例3:其余與所述實施例1相同，不同之處在于，步驟(5)配制的緩沖液為
0.1M的檸檬酸鈉，pH為3.0，本實施例中，成本低，但效果差。
[0026]經(jīng)實際應用中可知，通過神經(jīng)炎細胞的提取與培養(yǎng)、乳化、動物免疫、抽取血清、緩沖液配制、純化六大步驟完成抗神經(jīng)炎細胞抗體的制取工藝，用于制備檢測或診斷多發(fā)性神經(jīng)炎疾病，能同時針對神經(jīng)炎細胞表面的多個抗原，增強了臨床神經(jīng)炎患者的治療效果，制取周期短，穩(wěn)定性高，純種小白鼠神經(jīng)炎細胞活性強，由此產(chǎn)生的抗體具有很強的活性，使該抗體具有廣泛的適用性，乳化過程中選用的油佐劑，可提高抗體的穩(wěn)定性能，緩沖液沖洗純化，得到高純度的抗體，臨床的治療效果更加優(yōu)異。
[0027]以上所述僅為本發(fā)明的實施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書內(nèi)容所作的等效結構或等效流程變換，或直接或間接運用在其他相關的技術領域，均同理包括在本發(fā)明的專利保護范圍內(nèi)。
【主權項】
1.一種抗神經(jīng)炎細胞抗體的制取工藝，其特征在于，其工藝步驟如下: (1)神經(jīng)炎細胞的提取與培養(yǎng):從BALA/C純種小白鼠體內(nèi)提取神經(jīng)炎細胞，體外培養(yǎng)，取對數(shù)生長神經(jīng)炎細胞離心，用無血清培養(yǎng)液洗3次，計數(shù)，取得10-7細胞備用； (2)乳化:計數(shù)取神經(jīng)炎細胞10-5，與油佐劑混合，制得免疫混合物，所述油佐劑包括白油、硬脂酸鋁和司本80，所述白油、硬脂酸鋁和司本80的用量分別為80ml、3g和5ml ; (3)動物免疫:向動物體內(nèi)注射免疫混合物,然后每隔一周向動物體內(nèi)注射,每次注射之前測量血液抗體滴度，當抗體滴度達到1: 1000-2500，終止免疫； (4)抽取血清:終止免疫后取動物血液，靜置l_2h后離心，取上清液，得到含神經(jīng)炎抗體的血清； (5)緩沖液的配制:取磷酸二氫鈉20ml和NaCl1.5ml，制得緩沖液，控制其pH為7.2-9.0 ； (5)純化:將步驟(4)得到的血清填柱處理，用步驟(5)制取的緩沖液洗柱子，收集洗脫液，透析，收集透析之后的液體，凍干之后即得神經(jīng)炎細胞抗體。2.根據(jù)權利要求1所述的抗神經(jīng)炎細胞抗體的制取工藝，其特征在于，所述步驟(2)中，所述白油、硬脂酸鈉和司本80加熱融化得油佐劑。3.根據(jù)權利要求1所述的抗神經(jīng)炎細胞抗體的制取工藝，其特征在于，所述步驟(4)中,所述血液從動物脾臟內(nèi)抽取。
【文檔編號】C07K16/28GK105884894SQ201410741466
【公開日】2016年8月24日
【申請日】2014年12月9日
【發(fā)明人】晏健強
【申請人】晏健強