一種具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物及其制備方法和應(yīng)用，該化合物的結(jié)構(gòu)式為其中R1、R2為鹵素基團，或者R1、R2共同形成該化合物對VEGFR?2激酶有很好的抑制活性，能夠通過抑制VEGFR?2激酶的活性，阻斷其誘導(dǎo)的信號通路，抑制腫瘤細(xì)胞的增生和遷移，從而可應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備。且該化合物的制備方法具有原料易得，反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)過程操作簡單，所用試劑便宜的優(yōu)點。
【專利說明】
一種具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物及其制備方法和 應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種抗腫瘤的化合物，特別涉及一種具有抗 腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物及其制備方法和應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 惡性腫瘤作為全球較大的公共衛(wèi)生問題之一，極大地危害人類的健康，并將成為 新世紀(jì)人類的第一殺手。惡性腫瘤已不再只是發(fā)達工業(yè)國家的嚴(yán)重疾病，發(fā)展中國家面臨 著更大的疾病負(fù)擔(dān)。化學(xué)藥物治療作為治療腫瘤的重要手段之一，在近三十年已經(jīng)有了巨 大的發(fā)展和進步，得到了一大批具有不同作用機制的臨床抗腫瘤藥物。但是抗腫瘤藥也存 在許多不良反應(yīng)，比如脫發(fā)，嘔吐，產(chǎn)生骨髓抑制，快速產(chǎn)生耐藥性等等，這些都導(dǎo)致化學(xué)藥 物無法達到預(yù)期的治療效果。因此新的抗腫瘤藥物的研究與開發(fā)是目前藥學(xué)領(lǐng)域的熱點和 難點問題之一。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物及其制備方法 和應(yīng)用，該化合物在體外體現(xiàn)出很好的抗腫瘤活性，能夠應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備。
[0004] 為達到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0005] -種具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
[0006]
基環(huán)丙烷羧酸通過縮合反應(yīng)制備具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物。
[0014] 所述步驟1)的具體操作為：將2-氟-6-碘苯甲腈溶于無水乙醇中，加入水合肼及 NaH⑶3,回流反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，向反應(yīng)液中加入水至固體析出，然后攪拌、抽 濾，濾餅即為4-碘-1H-吲唑-3-胺。
[0015] 所述步驟2)的具體操作為:將4-碘-1H-B引唑-3-胺、對氨基苯硼酸鹽酸鹽或間氨基 苯硼酸、無水碳酸鈉、催化劑Pd(PPh 3)4溶于1，4_二氧六環(huán)和水的混合溶液中，氮氣保護下反 應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，對反應(yīng)液進行抽濾，將濾液旋干得到粗品，用層析柱分離粗品， 得到4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺或4-(3-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺。
[0016] 所述步驟3)的具體操作為:在氮氣保護下，將無水三乙胺滴加到1，1_環(huán)丙二羧酸 的二氯甲烷溶液中，冰浴條件下攪拌均勻，再向其中滴加 S0C12的二氯甲烷溶液，滴加完畢 后攪拌反應(yīng)，然后向其中繼續(xù)滴加含有雙取代基的苯胺的二氯甲烷溶液，滴加完畢后繼續(xù) 攪拌反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，調(diào)節(jié)反應(yīng)液的pH值，用乙酸乙酯萃取，再減壓旋蒸除去有機溶劑，即 得到苯胺基羰基環(huán)丙烷羧酸。
[0017] 所述步驟4)的具體操作為:將4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺或4-(3-氨基苯基)_ 1H-吲唑-3-胺，以及苯胺基羰基環(huán)丙烷羧酸加入到冰浴中的無水二氯甲烷溶液中，然后加 入縮合劑HATU，攪拌均勻，再向其中滴加無水三乙胺的二氯甲烷溶液，撤去冰浴，室溫下反 應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，反應(yīng)液經(jīng)洗滌、干燥后減壓蒸去溶劑，得粗品，用層析柱分離粗品，得到具 有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物。
[0018] 所述的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物在制備抑制VEGFR-2激酶活性的藥物 中的應(yīng)用。
[0019] 所述的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物在制備以VEGFR-2激酶為靶點的抗腫 瘤藥物中的應(yīng)用。
[0020] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下有益效果：
[0021]本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物，是一種新型的具有抗腫瘤活 性的化合物，其對VEGFR-2激酶有很好的抑制活性，可用于抗腫瘤藥物的制備。具體的，本發(fā) 明提供的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物，能夠抑制VEGFR-2激酶的活性。而血管生成 與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和迀移都有密切關(guān)系，抑制新生血管的形成可以有效的抑制腫瘤的生 長和迀移，許多生長因子調(diào)控新生血管生成，其中VEGFR-2是已知的最強的正調(diào)控因子。因 此本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物通過抑制VEGFR-2激酶的活性，阻斷 其誘導(dǎo)的信號通路，抑制腫瘤細(xì)胞的增生和迀移，從而可應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備，尤其是 以VEGFR-2激酶為靶點的抗腫瘤藥物以及抑制VEGFR-2激酶活性的藥物。
[0022]本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物的制備方法，通過2-氟-6-碘 苯甲腈與水合肼反應(yīng)得到4-碘-1H-吲唑-3-胺，再與對氨基苯硼酸鹽酸鹽或間氨基苯硼酸 Suzuki偶聯(lián)反應(yīng)得到4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺或4-(3-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺，并 通過1，1-環(huán)丙烷二羧酸與含有雙取代基的苯胺縮合反應(yīng)得到苯胺基羰基環(huán)丙烷羧酸，將苯 胺中的取代基引入到苯胺基羰基環(huán)丙烷羧酸的苯環(huán)上，然后4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺或4-(3-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺再與7-(4-氨基苯基)喹唑啉-2-胺縮合反應(yīng)，即得到具 有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物，該方法具有原料易得，反應(yīng)條件溫和，反應(yīng)過程操作簡 單，所用試劑便宜的優(yōu)點。
【附圖說明】
[0023] 圖1為本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物的合成路線圖；
[0024] 其中，化合物丨為2-氟-6-碘苯甲腈，化合物2為4-碘-1H-吲唑-3-胺，化合物3為對 氨基苯硼酸鹽酸鹽，化合物4為4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺，化合物為5為間氨基苯硼 酸，化合物6為4-(3-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺，化合物7為1，1_環(huán)丙烷二羧酸，化合物8為含 有雙取代基的苯胺，化合物9為苯胺基羰基環(huán)丙烷羧酸，化合物1'1343639、51-510為具有 抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物。
[0025]圖中標(biāo)注的具體為：
[0026] a: EtOH, NaHCOs, NH2NH2, H20 ； b: Pd (PPh3 )4, Na2C03, H20, dioxane ； c: SOCI2, Et3N, DCM ； d:HATU,Et3N,DCM,0°Cto rt.
【具體實施方式】
[0027] 下面結(jié)合附圖和具體的實施例對本發(fā)明做進一步的詳細(xì)說明，所述是對本發(fā)明的 解釋而不是限定。
[0028] 本發(fā)明提供了一種具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物，該環(huán)丙二酰胺化合物在 體外具有抗腫瘤活性，可應(yīng)用于抗腫瘤藥物的制備。
[0029] 本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式具體如下：
[0030]
[0031]其中，Ri為三氟甲基、三氟甲氧基或鹵素，R2為三氟甲基、三氟甲氧基、鹵素或烷氧 基，通過0原子連接于酰胺基團的間位和對位。
[0032] 下面結(jié)合圖1中所示的合成路線和具體的合成實施例來詳細(xì)說明本發(fā)明提供的具 有抗腫瘤活性的候選藥物環(huán)丙二酰胺化合物的制備和活性篩選方法。
[0033] 實施例1
[0034]該具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物的結(jié)構(gòu)式中，Ri為三氟甲基，R2為溴，通過 以下步驟制備(參見圖1):
[0035] 1)由2-氟-6-碘苯甲腈(化合物1)制備4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)
[0036] 將10g 2-氟-6-碘苯甲腈溶于70mL無水乙醇中，加入12.5mL水合肼和5.2g NaHC03，90 °C回流反應(yīng)5h，反應(yīng)結(jié)束后，待反應(yīng)液冷卻至室溫，加入120mL水，有大量固體析 出，室溫下攪拌2h，抽濾，所得的濾餅即為4-碘-1H-吲唑-3-胺，約8g，產(chǎn)率77% ;
[0037] 2)由4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)和對氨基苯硼酸鹽酸鹽(化合物3)通過Suzuki 偶聯(lián)反應(yīng)制備4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺(化合物4)
[0038]將7.5g (28.9mmo 1) 4-碘-1H-吲唑-3-胺、5g (28.9mmo 1)對氨基苯硼酸鹽酸鹽、9.2g (86 · 7mmol)無水碳酸鈉和3 · 3g(2 · 89mmol)催化劑Pd(PPh3)4溶于150mL 1，4-二氧六環(huán)和 50mL水的混合溶液中，氮氣保護下，于100°C反應(yīng)過夜，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，抽濾，用1， 4_二氧六環(huán)洗滌濾餅，收集濾液，旋干得殘留物，殘留物經(jīng)過層析柱分離(洗脫溶劑為石油 醚:乙酸乙酯=3:1，體積比），得到4-(4-氨基苯基)-1H-吲唑-3-胺3.2g，產(chǎn)率約45% ;
[0039] 3)1，1_環(huán)丙烷二羧酸(化合物7)和5-溴-3-三氟甲基苯胺(化合物8)通過縮合反應(yīng) 制備1_({ [5-溴-2-(三氟甲基)苯基]氨基}羰基)環(huán)丙烷羧酸(化合物9)
[0040] 在氮氣保護條件下，將2.2mL無水三乙胺滴加到2g(15.4mmol)l，l-環(huán)丙二羧酸的 二氯甲烷溶液中，冰浴條件下攪拌30min，再緩慢滴加1.2mL S0C12的二氯甲烷溶液，滴加完 畢后攪拌2h，向反應(yīng)液中繼續(xù)滴加3.6g(15.4mmol )5_溴-3-三氟甲基苯胺的二氯甲烷溶液， 滴加完畢后繼續(xù)攪拌2h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液用2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至10,減壓蒸干， 加入適量水進行超聲，然后用乙酸乙酯萃取一次，保留水層，再用2mol/L HC1將水層調(diào)節(jié)pH 至2,再用乙酸乙酯萃取三次，減壓旋除有機溶劑，即得到l-({[5-溴-2-(三氟甲基)苯基]氨 基}羰基)環(huán)丙烷羧酸，約〇. 8g，產(chǎn)率37 % ;
[0041 ] 4)由4-(4-氨基苯基)-1Η-Β引挫-3-胺(化合物4)和1-( {[5-溴-2-(三氟甲基)苯基] 氨基}羰基)環(huán)丙烷羧酸(化合物9)通過縮合反應(yīng)得到具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物
[0042] 將0 · 38g(0 · 7mmol )4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺和0 · 24g(0 · 7_〇1) 1-( {[5-溴-2_(三氟甲基)苯基]氨基}羰基)環(huán)丙烷羧酸加入到冰浴中的無水二氯甲烷溶液中，再加入 0.48g(l.26mmol)縮合劑HATU，繼續(xù)攪拌30min，再慢慢滴加0. lmL無水三乙胺的二氯甲烷溶 液，撤去冰浴，室溫下反應(yīng)8h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液依次用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽 水洗滌，無水硫酸鈉干燥，然后旋干得到殘留物，用層析柱分離殘留物，得到具有抗腫瘤活 性的環(huán)丙二酰胺化合物0.12g，產(chǎn)率20%。
[0043] 實施例1制得的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物的結(jié)構(gòu)式如下：
[0044]
1234567 理化性質(zhì):mp: 186 ~188°C 2 氫譜核磁共振數(shù)據(jù)為：? 匪R(400MHz，CDCl3W8.32(d，J = 8.3Hz，2H)，7.55(m， lH),7.33-7.14(m,4H),7.11(d ,J = 8.5Hz,lH),6.85(m,2H),4.54(d ,J = 4.9Hz,2H),1.73-1.58(m,4H). 3 實施例2 4 該具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物的結(jié)構(gòu)式中，心、1?2分別通過0原子連接于 酰胺基團的間位和對位的烷氧基。 5 步驟1)~2)與實施例1的步驟1)~2)相同，即由2-氟-6-碘苯甲腈(化合物1)制備 6 4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)，再由4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)和對氨基苯硼酸鹽酸鹽 7 (化合物3)制備4-( 4-氨基苯基)-1H-吲唑-3-胺(化合物4)。
[0050] 3)1，1-環(huán)丙烷二羧酸(化合物7)和胡椒胺(化合物8)通過縮合反應(yīng)制備Nl_l，3苯 并二氧雜環(huán)戊-5-環(huán)丙基-1，1-二甲酰胺(化合物9)
[0051 ]在氮氣保護條件下，將2.2mL無水三乙胺滴加到2g(15.4mmol) 1，1-環(huán)丙二羧酸的 二氯甲烷溶液中，冰浴條件下攪拌30min，再緩慢滴加1.2mL S0C12的二氯甲烷溶液，滴加完 畢后攪拌2h，然后向反應(yīng)液中繼續(xù)滴加1.9g (15.4mmo 1)胡椒胺的二氯甲烷溶液，滴加完畢 后繼續(xù)攪拌2h。然后將反應(yīng)液用2mol/L的NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至10,減壓蒸干，加入適量水進行 超聲，用乙酸乙酯萃取一次，保留水層，再用2mol/L的HC1將水層調(diào)節(jié)pH至2,再用乙酸乙酯 萃取三次，減壓旋除有機溶劑即得到Nl-1，3苯并二氧雜環(huán)戊-5-環(huán)丙基-1，1-二甲酰胺，約 lg，產(chǎn)率 40%;
[0052] 4)由4-(4-氨基苯基)-1Η-Β引挫-3-胺(化合物4)和Nl-1，3苯并二氧雜環(huán)戊-5-環(huán)丙 基-1，1-二甲酰胺(化合物9)通過縮合反應(yīng)得到具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物
[0053] 將0.58(0.92111111〇1)4-(4-氨基苯基）-1!1-吲唑-3-胺和0.238(0.92111111〇1州1-1，3苯 并二氧雜環(huán)戊-5-環(huán)丙基-1，1-二甲酰胺加入到冰浴中的無水二氯甲烷溶液中，再加入 0.63g(l.66mmol)縮合劑HATU，繼續(xù)攪拌30min，再慢慢滴加0.13mL無水三乙胺的二氯甲烷 溶液，撤去冰浴，室溫反應(yīng)8h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液依次用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽 水洗滌，無水硫酸鈉干燥，然后旋干得到殘留物，用層析柱分離殘留物，得到具有抗腫瘤活 性的環(huán)丙二酰胺化合物0. lg，產(chǎn)率20%。
[0054] 實施例2制得的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物的結(jié)構(gòu)式如下：
[0055]
[0063]將7 · 6g( 36 · 5mmo 1 )4_鵬-1H-吲唑_3_胺、4g(36 · 5mmol)間氛基苯棚酸、9 · 3g (87 · 6mmol)無水碳酸鈉和3 · 4g(3 · 65mmol)催化劑Pd(PPh3)4溶于150mL 1，4-二氧六環(huán)和 50mL水的混合溶液中，氮氣保護下，于100°C反應(yīng)過夜，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，抽濾，用1， 4_二氧六環(huán)洗滌濾餅，收集濾液，旋干得殘留物，殘留物經(jīng)過層析柱分離(洗脫溶劑為石油 醚:乙酸乙酯=3:1，體積比），得到4-(3-氨基苯基)-1H-吲唑-3-胺2.9g，產(chǎn)率約40% ;
[0064] 3)1，1_環(huán)丙烷二羧酸(化合物7)和5-溴-2-三氟甲氧基苯胺(化合物8)通過縮合反 應(yīng)制備1_({ [5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]氨基}羰基)環(huán)丙烷羧酸(化合物9)
[0065] 在氮氣保護條件下，將2.2mL無水三乙胺滴加到2g(15.4mmol)l，l-環(huán)丙二羧酸的 二氯甲烷溶液中，冰浴條件下攪拌30min，再緩慢滴加1.2mL S0C12的二氯甲烷溶液，滴加完 畢后攪拌2h，向反應(yīng)液中繼續(xù)滴加3.5g(13.9mmol)5-溴-2-三氟甲氧基苯胺的二氯甲烷溶 液，滴加完畢后繼續(xù)攪拌2h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液用2mo 1/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至10，減壓蒸 干，加入適量水進行超聲，然后用乙酸乙酯萃取一次，保留水層，再用2mol/L HC1將水層調(diào) 節(jié)pH至2,再用乙酸乙酯萃取三次，減壓旋除有機溶劑，即得到1-( {[5-溴-2-(三氟甲氧基） 苯基]氨基}羰基)環(huán)丙烷羧酸，約〇.8g，產(chǎn)率35% ;
[0066] 4)由4-(3-氨基苯基)-1Η-Β引挫-3-胺(化合物6)和1-({ [5-溴-2-(三氟甲氧基）苯 基]氨基}羰基)環(huán)丙烷羧酸(化合物9)通過縮合反應(yīng)得到具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化 合物
[0067] 將0·5g(0·92mmol)4-(3-氨基苯基）-lH-吲唑-3-胺和0·34g(0·92mmol)l-({[5-溴-2-(三氟甲氧基)苯基]氨基}羰基)環(huán)丙烷羧酸加入到冰浴中的無水二氯甲烷溶液中，再 加入0.63g(l.66mmol)縮合劑HATU，繼續(xù)攪拌30min，再慢慢滴加0.13mL無水三乙胺的二氯 甲烷溶液，撤去冰浴，室溫反應(yīng)8h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液依次用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和 食鹽水洗滌，無水硫酸鈉干燥，然后旋干得到殘留物，用層析柱分離殘留物，得到具有抗腫 瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物〇. 12g，產(chǎn)率25%。
[0068] 實施例3制得的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物的結(jié)構(gòu)式如下：
[0069]
1234 理化性質(zhì)：mp:173 ~174Γ 2 氫譜核磁共振數(shù)據(jù)為：? NMR(400MHz, CDC13W8.62(s，1H) ,8.61 (d，J = 2.3Hz, 1H) ,8.41(d ,J = 8.1Hz,lH),7.60-7.55(m,lH),7.31-7.26(m,lH) ,7.22(d ,J = 6.9Hz , 1H), 7.04(m,lH),6.79(m,2H),6.74(d,J=1.7Hz,lH),4.38(s,2H),1.73(s,4H). 3 實施例4 4 該具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物的結(jié)構(gòu)式中，Ri、R2為氯：
[0074]步驟1)~2)與實施例1的步驟1)~2)相同，即由2-氟-6-碘苯甲腈(化合物1)制備 4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)，再由4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)和對氨基苯硼酸鹽酸鹽 (化合物3)制備4-( 4-氨基苯基)-1H-吲唑-3-胺(化合物4)。
[0075] 3)1，1-環(huán)丙烷二羧酸(化合物7)和3,4_二氯苯胺(化合物8)通過縮合反應(yīng)制備Ι α 3 ， 4-二氯苯胺氨基} 羰基) 環(huán)丙烷羧酸 (化合物 9)
[0076] 在氮氣保護條件下，將12.9mL無水三乙胺滴加到4g(30.8mmol) 1，1-環(huán)丙二羧酸的 二氯甲烷溶液中，冰浴條件下攪拌30min，再緩慢滴加2.3mL S0C12的二氯甲烷溶液，滴加完 畢后攪拌2h，向反應(yīng)液中繼續(xù)滴加4.5g(27.7mmo 1) 3，4-二氯苯胺的二氯甲烷溶液，滴加完 畢后繼續(xù)攪拌2h。然后將反應(yīng)液用2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至10,減壓蒸干，加入適量水進 行超聲，用乙酸乙酯萃取一次，保留水層，再用2mol/L HC1將水層調(diào)節(jié)pH至2,再用乙酸乙酯 萃取三次，減壓旋除有機溶劑，即得到1-({3,4_二氯苯胺氨基}羰基)環(huán)丙烷羧酸，約2g，產(chǎn) 率 40 %;
[0077] 4)由4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺(化合物4)和1-({3,4_二氯苯胺氨基}羰基） 環(huán)丙烷羧酸(化合物9)通過縮合反應(yīng)得到具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物
[0078] 將0 · 5g(0 ·92mmol)4-(4-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺和0 · 25g(0 ·92mmol) 1-( {3,4-二氯苯胺氨基}羰基）環(huán)丙烷羧酸加入到冰浴中的無水二氯甲烷溶液中，再加入〇.63g (1.66mmol)縮合劑HATU，繼續(xù)攪拌30min，再慢慢滴加0.13mL無水三乙胺的二氯甲烷溶液， 撤去冰浴，室溫下反應(yīng)8h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液依次用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水洗 滌，無水硫酸鈉干燥，然后旋干得到殘留物，用層析柱分離殘留物，得到具有抗腫瘤活性的 環(huán)丙二酰胺化合物〇. 12g，產(chǎn)率22%。
[0079] 實施例4制得的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物的結(jié)構(gòu)式如下：
[0080]
[0081 ]理化性質(zhì)：mp: 103 ~104°C
[0082] 氫譜核磁共振數(shù)據(jù)為：4 NMR(400MHz，DMS0) δ9 · 95 (s，1H)，8 · 26(d，J = 8 · 1Hz， 1H) ,7.91(s，lH) ,7.59-7.54(m，lH) ,7.49(s，2H)，7· 12(d，J = 8.2Hz，3H)，6.73(d，J = 8·4Hz，2H)，5·12(s，2H)，1·53(m，2H)，1·46(m，2H)·
[0083] 實施例5
[0084] 該具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物的結(jié)構(gòu)式中，Ri、R2為氯：
[0085] 步驟1)~2)與實施例3的步驟1)~2)相同，即由2-氟-6-碘苯甲腈(化合物1)制備 4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)，再由4-碘-1H-吲唑-3-胺(化合物2)和間氨基苯硼酸(化合 物5)制備4-(3-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺(化合物6)。
[0086] 3)1，1_環(huán)丙烷二羧酸(化合物7)和2,4_二氯苯胺(化合物8)通過縮合反應(yīng)制備Ια 2 ， 4-二氯苯胺氨基} 羰基) 環(huán)丙烷羧酸 (化合物 9)
[0087] 在氮氣保護條件下，將12.9mL無水三乙胺滴加到4g(30.8mmol) 1，1-環(huán)丙二羧酸的 二氯甲烷溶液中，冰浴條件下攪拌30min，再緩慢滴加2.3mL S0C12的二氯甲烷溶液，滴加完 畢后攪拌2h，向反應(yīng)液中繼續(xù)滴加4.5g(27.7mmo 1) 2，4-二氯苯胺的二氯甲烷溶液，滴加完 畢后繼續(xù)攪拌2h。然后將反應(yīng)液用2mol/L NaOH溶液調(diào)節(jié)pH至10,減壓蒸干，加入適量水進 行超聲，用乙酸乙酯萃取一次，保留水層，再用2mol/L HC1將水層調(diào)節(jié)pH至2,再用乙酸乙酯 萃取三次，減壓旋除有機溶劑，即得到1-({2,4_二氯苯胺氨基}羰基)環(huán)丙烷羧酸，約2g，產(chǎn) 率 40 %;
[0088] 4)由4-(3-氨基苯基)-1Η-吲唑-3-胺(化合物6)和1-({2,4_二氯苯胺氨基}羰基） 環(huán)丙烷羧酸(化合物9)通過縮合反應(yīng)得到具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物
[0089] 將0 · 5g(0 ·92mmol)4-(3-氨基苯基）-1Η-吲唑-3-胺和0 · 25g(0 ·92mmol) 1-( {2,4-二氯苯胺氨基}羰基）環(huán)丙烷羧酸加入到冰浴中的無水二氯甲烷溶液中，再加入〇.63g (1.66mmol)縮合劑HATU，繼續(xù)攪拌30min，再慢慢滴加0.13mL無水三乙胺的二氯甲烷溶液， 撤去冰浴，室溫下反應(yīng)8h。反應(yīng)結(jié)束后，將反應(yīng)液依次用飽和碳酸氫鈉溶液和飽和食鹽水洗 滌，無水硫酸鈉干燥，然后旋干得到殘留物，用層析柱分離殘留物，得到具有抗腫瘤活性的 環(huán)丙二酰胺化合物〇. 12g，產(chǎn)率20%。
[0090] 實施例5制得的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物的結(jié)構(gòu)式如下：
[0091]
[0092] 理化性質(zhì)：mp: 109~lilt：
[0093] 氫譜核磁共振數(shù)據(jù)為：4 NMR( 400MHz，CDCl3W8.43(d，J = 8.3Hz，lH)，8.38(s， 1H)，8.22(d，J = 8.8Hz，lH)，7.59(t，J = 7.8Hz，lH) ,7.30-7.28(m，3H) ,7.25-7.20(m，2H), 6.82(d ,J = 7.6Hz,lH),6.77(d ,J = 9.7Hz,lH),4.37(s,2H),1.72(s,2H),1.69(s,2H).
[0094] 下面對本發(fā)明制得的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物進行VEGFR-2激酶的抑 制活性篩選。
[0095] 激酶VEGFR-2和底物Abltide購自 Signal-Chem公司，選用Promega公司的ADP-GlobTM Kinase Assays檢測試劑盒檢測本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合 物的抑酶活性，操作方法按照試劑盒說明進行。將ATP(1 OmM)用buf f er (2 X ) (Tr i s 80mM， MgCl2 20mM，BSA 0.2mg/mL，DTT 2mM)稀釋40倍配制成ΑΤΡ(250μΜ)的buffer(2X)溶液；將 250μΜ的ATP溶液和Abltide溶液體積1:1混合配制成ATP(125yM)-Abltide(0.5ygAU)的混 合溶液備用；VEGFR-2激酶溶液用buffer(lX)(Tris 40mM，MgCl2 10mM，BSA 0.1mg/mL，DTT ImM)稀釋66倍配制成VEGFR-2( 1.5ng/yl)的buffer(l X )溶液備用；將目標(biāo)化合物和陽性對 照藥（Sorafinib)用bufTer( 1 X )分別配制成6 X 10-5mol/L，6 X 10-6mol/L，6 X 10-7mol/L，6 X l(TV〇l/L，6X l(T9m〇l/L，6X l(T1Qm〇l/L濃度梯度的樣品溶液，于384孔板上每孔依次加 入2yL ATP-Abltide的混合溶液，lyL樣品溶液，2yL酶溶液；空白孔加3yL緩沖液和2yLATP-Abltide的混合溶液;對照孔加2yL ATP-Abltide的混合溶液，lyL緩沖液，2yL酶溶液，加畢， 30°〇下孵育6〇111；[11;加入40?-610試劑5以1^，在25°(^下孵育40111；[11;加入1(;[11&86(16丨601:;[011試劑 10yL，在25°C下孵育30min。采用PerkinElmer多功能酶標(biāo)儀的化學(xué)發(fā)光模塊測定每孔的發(fā) 光值，計算本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物對VEGFR-2的抑制率和IC50。
[0096]本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物對VEGFR激酶的抑制活性結(jié)果 具體如表1所示：
[0097] 表1環(huán)丙二酰胺化合物對VEGFR激酶的IC50
[0098]
[0099] 由表1可以看出，本發(fā)明制備的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物對VEGFR-2激 酶具有抑制活性，可用于制備抑制VEGFR-2激酶活性的藥物以及制備以VEGFR-2激酶為靶點 的抗腫瘤藥物。
[0100] 上述化合物的結(jié)構(gòu)具體如表2所示：
[0101 ]表2本發(fā)明提供的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酰胺化合物的具體結(jié)構(gòu)式
【主權(quán)項】
1. 一種具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酷胺化合物，其特征在于，其化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：其中，Ri、R2為面素基團，或者Ri、R2共同形2. 如權(quán)利要求1所述的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酷胺化合物，其特征在于，所述的面素 基團為氣原子、氯原子、漠原子、=氣甲基或=氣甲氧基。3. 權(quán)利要求1或2所述的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酷胺化合物的制備方法，其特征在 于，包括W下步驟： 1) 2-氣-6-艦苯甲臘與水合阱反應(yīng)得到4-艦-IH-嗎I挫-3-胺； 2) 4-艦-IH-嗎I挫-3-胺與對氨基苯棚酸鹽酸鹽通過Suzuki反應(yīng)制備4-(4-氨基苯基)- IH-嗎I挫-3-胺;或者4-艦-IH-嗎I挫-3-胺與間氨基苯棚酸通過Suz址i反應(yīng)制備4-(3-氨基苯 基）-IH-嗎階-3-胺； 3) 1，1-環(huán)丙烷二簇酸與含有雙取代基的苯胺通過縮合反應(yīng)制備苯胺基幾基環(huán)丙烷簇 酸； 4) 4-(4-氨基苯基)-lH-嗎I挫-3-胺或4-(3-氨基苯基)-lH-嗎I挫-3-胺與苯胺基幾基環(huán) 丙烷簇酸通過縮合反應(yīng)制備具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酷胺化合物。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酷胺化合物的制備方法，其特征在 于:所述步驟1)的具體操作為:將2-氣-6-艦苯甲臘溶于無水乙醇中，加入水合阱及化肥化， 回流反應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，向反應(yīng)液中加入水至固體析出，然后攬拌、抽濾，濾餅即 為4-艦-IH-嗎I挫-3-胺。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酷胺化合物的制備方法，其特征在 于:所述步驟2)的具體操作為:將4-艦-IH-嗎I挫-3-胺、對氨基苯棚酸鹽酸鹽或間氨基苯棚 酸、無水碳酸鋼、催化劑Pd(PPh3)4溶于1,4-二氧六環(huán)和水的混合溶液中，氮氣保護下反應(yīng)， 反應(yīng)結(jié)束后冷卻至室溫，對反應(yīng)液進行抽濾，將濾液旋干得到粗品，用層析柱分離粗品，得 至lj4-( 4-氨基苯基)-IH-嗎I挫-3-胺或4-(3-氨基苯基)-IH-嗎I挫-3-胺。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酷胺化合物的制備方法，其特征在 于:所述步驟3)的具體操作為:在氮氣保護下，將無水=乙胺滴加到1,1-環(huán)丙二簇酸的二氯 甲燒溶液中，冰浴條件下攬拌均勻，再向其中滴加SOCh的二氯甲燒溶液，滴加完畢后攬拌 反應(yīng)，然后向其中繼續(xù)滴加含有雙取代基的苯胺的二氯甲燒溶液，滴加完畢后繼續(xù)攬拌反 應(yīng)，反應(yīng)結(jié)束后，調(diào)節(jié)反應(yīng)液的pH值，用乙酸乙醋萃取，再減壓旋蒸除去有機溶劑，即得到苯 胺基幾基環(huán)丙烷簇酸。7. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酷胺化合物的制備方法，其特征在 于:所述步驟4)的具體操作為:將4-(4-氨基苯基)-lH-嗎I挫-3-胺或4-(3-氨基苯基)-lH-嗎I 挫-3-胺，W及苯胺基幾基環(huán)丙烷簇酸加入到冰浴中的無水二氯甲燒溶液中，然后加入縮合 劑HATU，攬拌均勻，再向其中滴加無水S乙胺的二氯甲燒溶液，撤去冰浴，室溫下反應(yīng)，反應(yīng) 結(jié)束后，反應(yīng)液經(jīng)洗涂、干燥后減壓蒸去溶劑，得粗品，用層析柱分離粗品，得到具有抗腫瘤 活性的環(huán)丙二酷胺化合物。8. 權(quán)利要求1或2所述的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酷胺化合物在制備抑制VEGFR-2激酶 活性的藥物中的應(yīng)用。9. 權(quán)利要求1或2所述的具有抗腫瘤活性的環(huán)丙二酷胺化合物在制備WVEGFR-2激酶為 祀點的抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】C07D405/12GK105906568SQ201610278878
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年4月28日
【發(fā)明人】賀浪沖, 張 杰, 潘曉艷, 王金鳳, 蘇萍, 盧聞, 王嗣岑, 張濤
【申請人】西安交通大學(xué)