丙酸倍氯米松的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了丙酸倍氯米松的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用，本發(fā)明提供的丙酸倍氯米松的藥物組合物中含有丙酸倍氯米松和一種從澤瀉的干燥塊莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，丙酸倍氯米松與化合物(Ⅰ)組合物可以顯著提高糖尿病模型小鼠的糖耐受量，抑制α?葡萄糖苷酶活性，同時(shí)提高糖尿病模型小鼠的抗氧化損傷能力。丙酸倍氯米松與化合物(Ⅰ)組合物的活性強(qiáng)于丙酸倍氯米松或化合物(Ⅰ)單獨(dú)的活性，可以開發(fā)成治療糖尿病的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說明】
丙酸倍氯米松的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及丙酸倍氯米松的新用途，具體涉及丙酸倍氯米松 的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 丙酸倍氯米松化學(xué)名稱為16β-甲基-11β，17α，21_三羥基-9α-氯孕甾-1,4-二烯-3,20-二酮-17,21-二丙酸酯。
[0003] 丙酸倍氯米松系強(qiáng)效外用糖皮質(zhì)激素類藥，具有抗炎、抗過敏和止癢等作用，能抑 制支氣管滲出物，消除支氣管粘膜腫脹，解除支氣管痙攣。對(duì)皮膚血管收縮作用遠(yuǎn)比氫化可 的松強(qiáng)。局部抗炎作用是膚輕松和去炎松的5倍。親脂性較強(qiáng)，易滲透，涂于患處30分鐘后即 生效。對(duì)體溫和排尿也無明顯影響。因此，局部外用不會(huì)抑制人體皮質(zhì)功能和因皮質(zhì)功能紊 亂所引起的不良反應(yīng)。丙酸倍氯米松外用可治療各種炎癥皮膚病，如濕疹、過敏性皮炎、神 經(jīng)性皮炎、接觸性皮炎、牛皮癬、瘙癢等。氣霧劑可用于慢性及過敏性哮喘、過敏性鼻炎等。
[0004] 迄今為止，尚未見丙酸倍氯米松及其藥物組合物與糖尿病的相關(guān)性報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種丙酸倍氯米松的藥物組合物，該藥物組合物中含有丙 酸倍氯米松和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，丙酸倍氯米松和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療糖尿 病。
[0006] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0007] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0008]
〇
[0009] -種丙酸倍氯米松的藥物組合物，包括丙酸倍氯米松、如權(quán)利要求1所述的化合物 (I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0010] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0011] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0012] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將澤瀉的干燥塊莖粉碎，用65 ~75%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的 正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁 醇取物用大孔樹脂除雜，先用20%乙醇洗脫9個(gè)柱體積，再用65%乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收 集65%洗脫液，減壓濃縮得65%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中65%乙醇洗脫濃縮物用正 相硅膠分離，依次用體積比為65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組 分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為12:1、7:1和1:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離， 用體積百分濃度為58 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集11~15個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓 濃縮得到化合物(I)。
[0013] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用70%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0014] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0015]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0016] 上述化合物(I)在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
[0017] 上述丙酸倍氯米松的藥物組合物在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
[0018] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明提供的丙酸倍氯米松的藥物組合物中含有丙酸倍氯米松和 一種從澤瀉的干燥塊莖中分離得到的結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，丙酸倍氯米松和該天然產(chǎn)物單 獨(dú)作用時(shí)，具有降血糖作用；二者聯(lián)合作用時(shí)，降血糖作用進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療糖 尿病的藥物。
【具體實(shí)施方式】
[0019] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。
[0020] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0021] 分離方法：（a)將澤瀉的干燥塊莖(2kg)粉碎，用70 %乙醇熱回流提?。?5L X 3次）， 合并提取液，濃縮至無醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽和的 正丁醇(3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟 (a)中乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用20%乙醇洗脫9個(gè)柱體積，再用65%乙 醇洗脫10個(gè)柱體積，收集65%洗脫液，減壓濃縮得65%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中65% 乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1 (9個(gè)柱體積）、35:1 (10個(gè)柱體積）、 15:1(8個(gè)柱體積)和7:1(8個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c) 中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為12:1(6個(gè)柱體積）、7:1(7個(gè)柱體積)和1:1 (6個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷 鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為58 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集11~15個(gè)柱體 積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (308mg，HPLC歸一化純度大于98% )。
[0022] 結(jié)構(gòu)確證:棕色無定形固體;HR-T0F-MS給出的準(zhǔn)分子離子峰m/z 243.0976[M+H ]+，表明化合物分子式為&此4〇3，不飽和度為Θ。h-NMRi普(CDC13，600MHz)中：H-l(7.06，d，J = 9.7Hz)，H-2(6.12，d，J = 9.7Hz)，H-4(2.58，q，J = 6.5Hz)，H-6a(3.32，d，J=16.5Hz)，H-6b(2.74，d，J=16.5Hz)，H-9(6.61，s)，H-ll(7.12，s)，H-13(9.78，s)，H-14(0.97，s)，H-15 (1.12，(1，1 = 6.5抱）；13(：-匪1?譜（00(：13，1501抱）中，顯示有15個(gè)碳信號(hào)，(：-1(141.8,0〇，(：-2 (127.6，CH)，C-3(200.2，C)，C-4(52.3，CH)，C-5(39.6，C)，C-6(33.4，CH2)，C-7(130.4，C)， C-8(155.2，C)，C-9(117.8，CH)，C-10(142.3，C)，C-11(120.6，CH)，C-12(153.5，C)，C-13 (177.9,0〇,014(17.2,〇，(：-15(7.6,〇。11?譜圖顯示在1675〇11-1處有吸收，說明存在共輒 羰基官能團(tuán)。在 1H-NMR譜顯示有一組α，β-不飽和烯質(zhì)子信號(hào)δΗ7.06( lH，d，J = 9.7Hz，H-1)， 6.12(1!1，(1，了 = 9.7抱，!1-2)，6.61(1!1，8，!1-9)，一組€[，0-不飽和醛質(zhì)子信號(hào)5!17.12(1!1，8，!1-11)，9.78(1!1，8，!1-13)，一組構(gòu)成48系統(tǒng)的亞甲基質(zhì)子信號(hào)6!13.32(1!1，(1，1=16.5泡，!1-6&)，2.74(1!1，(1，1 = 16.5抱，!1-613)，一個(gè)次甲基四重峰質(zhì)子信號(hào)5!12.58(1!14，1 = 6.5抱，!1-4)，兩個(gè)甲基質(zhì)子信號(hào)6!10.97(3!1，8，!1-14)與1.12(3!1，(1，1 = 6.5抱，!1-15)。13(：-匪1?譜表明存 在α，β-不飽和羰基 SC200.2(C，C-3)與 177.9(C，C-13)，不飽和烯碳信號(hào) SC141.8(CH，C-1)、 127.6(CH，C-2)、130.4(CH，C-7)、155.2(C，C-8)、117.8(CH，C-9)、142.3(C，C-10)、120.6 (CH，C-ll)、153.5(C，C-12)。通過DEPT譜可知還存在亞甲基碳信號(hào)δC33.4(CH 2，C-6)，兩個(gè) 甲基碳信號(hào) SC17.2(CH3，C-14)與 7.6(CH3，C-15)。通過 HMBC 譜分析可知 H-13 與 C-12、H-11 與 C-7和C-12、Me-14與C-5、Me-15與C-4存在相關(guān)信號(hào)。ROESY譜中，Me-14與Me-15的相關(guān)性表 明Me-14和Me-15為β構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁 數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下式所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn) 值基本一致。
[0023] 該化合物化學(xué)式及碳原子編號(hào)如下：
[0024]
[0025] 實(shí)施例2:藥理作用
[0026] 1、材料與方法
[0027] 1.1材料與儀器
[0028]健康雄性ICR小鼠，沈陽醫(yī)學(xué)院動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心，體重18~22g;丙酸倍氯米松購自中 國藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實(shí)施例1。鏈脲佐菌素(STZ)美國Sigma 化學(xué)公司，用前用檸檬酸緩沖液配成1 % STZ溶液;其他試劑國產(chǎn)分析純。SW-CJ-2H)超凈工 作臺(tái)蘇州凈化設(shè)備有限公司；QYC-2112大型雙層全溫培養(yǎng)搖床上海天呈實(shí)驗(yàn)儀器制造有限 公司；SHY-2A雙功能水浴恒溫振蕩器江蘇東鵬儀器制造有限公司；TGL20W臺(tái)式高速冷凍離 心機(jī)湖南湘儀實(shí)驗(yàn)室儀器開發(fā)有限公司;PB203-N電子天平瑞士，深圳市怡華新電子有限公 司;FW177中草藥粉碎機(jī)天津泰斯特有限責(zé)任公司；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀日本，北京五洲東方科技發(fā) 展有限公司;YRD-30.2A真空冷凍干燥機(jī)上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；葡萄糖試劑盒，超氧 化物歧化酶(S0D)和丙二醛(MDA)測定試劑盒四川邁克科技有限責(zé)任公司。
[0029] 1.2STZ誘導(dǎo)糖尿病小鼠模型建立
[0030] 隨機(jī)抽取體重（20±2)g小鼠，禁食16h，腹腔注射1%STZ 150mg · kg-Uh后注射 20%葡萄糖溶液。正常飼養(yǎng)3d后，禁食3h，用葡萄糖試劑盒測定血糖值，血糖值多 ll.lmmol · L-1者確定為糖尿病模型鼠。
[0031] 1.3實(shí)驗(yàn)分組及給藥
[0032]取糖尿病模型鼠40只，隨機(jī)為4組，每組10只：模型組、丙酸倍氯米松組（100mg · kg^1)、化合物⑴組（100mg · kg'、丙酸倍氯米松與化合物（I)組合物組【50mg · kg"1丙酸倍 氯米松+50mg · kg^1化合物（I)】，另取健康鼠10只，作為正常對(duì)照組。各組分別灌胃給藥(模 型組和正常對(duì)照組灌胃等體積生理鹽水），連續(xù)給藥30d，測血糖值，監(jiān)測毛色，飲水量，墊料 潮濕程度和體重的基本體征。
[0033] 1.4葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)
[0034]另取一批小鼠，造模及給藥同上，末次給藥lh后，灌胃2g · kg-1葡萄糖溶液，灌胃后 0、30、60、120min測定血糖值，計(jì)算血糖曲線下面積(AUC)，計(jì)算方法：
[0035] mmol · h · L-1 = 12A+B+C+12D(A、B、C、D分別為0、30、60、12011^11血糖值）。
[0036] 1.5α-葡萄糖苷酶活性的測定
[0037] 禁食處死小鼠，取小腸上段，0.01Μ PBS，pH7.4漂洗，反轉(zhuǎn)小腸內(nèi)腔，剝離小腸刷狀 緣膜，擦干，按w: V = 1:9加PBS后冰浴勻漿，4 °C離心(4000r/min)取上清液，-34 °C冷凍備用。 小腸黏膜葡萄糖苷酶活性測定：用考馬斯亮藍(lán)測定提取液組織蛋白含量。稀釋小腸粘膜 提取液至最佳濃度，取〇. 2mL，分別加入ρΗ6.8磷酸鹽緩沖液0.7mL，37 °C水浴1 Omin后，加入 0.5mol · L-1鹿糖溶液0.1mL，37°C水浴20min加入0.1 mol · L-iNasCOslmL終止反應(yīng)。測定葡 萄糖濃度，平行測定3管，取平均值，計(jì)算α_葡萄糖苷酶活力。
[0038] 1.6抗氧化活性的測定
[0039] 給藥20d后，取血3mL，3500r/min離心5min，提取血清。采用黃嘌呤氧化酶法測定 S0D活性，采用硫代巴比妥酸法測定MDA含量，按照SOD、MDA檢測試劑盒說明書步驟操作。 [0040] 1.7數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
[0041 ] 用SPSS17.0軟件處理數(shù)據(jù)，以X土s表示。
[0042] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0043] 2.1對(duì)小鼠糖耐受量的影響
[0044] 各組小鼠灌胃葡萄糖后血糖開始升高。其中丙酸倍氯米松與化合物（I)組合物組 的AUC值最低，顯示出最強(qiáng)的糖耐量作用(P〈0.01)，其次是丙酸倍氯米松組、化合物（I)組(P 〈0.05)。組合物糖耐受能力強(qiáng)于單一組。結(jié)果見表1，〇111；[11、30111；[11、60111；[11和120111；[11血糖值單 位為mmol · L-^AUC單位為mmol · h · L-1。
[0045] 表1小鼠糖耐受量
[0046]
[0047] 2.2糖尿病小鼠α-葡萄糖苷酶活性的測定
[0048] 給藥后的糖尿病小鼠α-葡萄糖苷酶活性見表2。給藥組α-葡萄糖苷酶活性在0.3~ 0.7U · mg^1之間。與模型組相比，丙酸倍氯米松與化合物（I)組合物組小鼠小腸黏膜葡萄糖 苷酶活性顯著下調(diào)(P〈〇.01)，丙酸倍氯米松組、化合物（I)組小鼠小腸黏膜葡萄糖苷酶活性 也有明顯下調(diào)(P〈〇.05)。通過抑制該酶活性，降低了人體對(duì)攝入的淀粉、蔗糖等碳水化合物 的吸收利用。
[0049] 表2糖尿病小鼠α-葡萄糖苷酶活性的測定
[0050]
[0051 ] 2.3抗氧化活性的測定
[0052]糖尿病小鼠抗氧化活性見表3。與模型組相比，丙酸倍氯米松與化合物（I)組合物 組的S0D活性明顯升高(Ρ〈0.01)，MDA含量有顯著下降(Ρ〈0.01)，且這種作用強(qiáng)于丙酸倍氯 米松組或化合物（I)組。
[0053] 表3對(duì)糖尿病小鼠S0D活性和MDA含量影響
[0054]
[0055] 上述試驗(yàn)表明，丙酸倍氯米松與化合物（I)組合物可以顯著提高糖尿病模型小鼠 的糖耐受量，抑制葡萄糖苷酶活性，同時(shí)提高糖尿病模型小鼠的抗氧化損傷能力。丙酸倍 氯米松與化合物（I)組合物的活性強(qiáng)于丙酸倍氯米松或化合物（I)單獨(dú)的活性，可以開發(fā)成 治療糖尿病的藥物。
[0056] 上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)娩立的化合物（n.2. -種丙酸倍氯米松的藥物組合物，其特征在于:包括丙酸倍氯米松、如權(quán)利要求1所 述的化合物(I)和藥學(xué)上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的丙酸倍氯米松的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可W接受的 載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附 載體或潤滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的丙酸倍氯米松的藥物組合物，其特征在于：所述劑型包括片 劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注 射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將澤 瀉的干燥塊莖粉碎，用65~75 %乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油 酸、乙酸乙醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃 取物；（b)步驟(a)中正下醇取物用大孔樹脂除雜，先用20 %乙醇洗脫9個(gè)柱體積，再用65 % 乙醇洗脫10個(gè)柱體積，收集65%洗脫液，減壓濃縮得65%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中 65 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為65:1、35:1、15:1和7:1的二氯甲燒- 甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(C)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為 12:1、7:1和1:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基娃 燒鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為58 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集11~15個(gè)柱 體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用70%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為DlOl型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲燒代 替乙酸乙醋進(jìn)行萃取，得到二氯甲燒萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的藥物組合物在制備治療糖尿病的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K31/573GK105906595SQ201610257562
【公開日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年4月23日
【發(fā)明人】陳斌
【申請(qǐng)人】陳斌