氟取代含葡萄糖苷結構三氮唑類去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種氟取代含葡萄糖苷結構三氮唑類去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應用，該制備方法用1,3?偶極環(huán)加成方法在去甲斑蝥素結構中C5和C6位引入1,2,3?三氮唑，與1?疊氮?全乙?；?α?D?葡萄糖反應導入葡萄糖苷結構，從而合成出氟取代含葡萄糖苷結構三氮唑類去甲斑蝥素衍生物，該化合物具有多種生物活性，可用于制備抗腫瘤藥物。
【專利說明】
氟取代含葡萄糖苷結構三氮唑類去甲斑蝥素衍生物及其制備 方法與應用
技術領域：
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術領域，具體是涉及一種氟取代含葡萄糖苷結構三氮唑類去甲 斑蝥素衍生物及其制備方法與應用。
【背景技術】：
[0002] 去甲斑蝥素，化學名：7-氧雜二環(huán)[2.2.1 ]庚烷-2，3-二羧酸酐，CAS: [5442-12-6; 29745-04-8]，化學結構式如下：
[0003]
[0004] 斑蝥素是研究惡性腫瘤藥物的有效成份?，F代研究證明，其對原發(fā)性肝癌有一定 療效，而且有升高白細胞，不抑制免疫系統(tǒng)等優(yōu)點，因此，具有很高的藥用研究價值，引起人 們的廣泛關注。但斑蝥素的毒性較大，合成很復雜，近來的研究表明，去甲斑蝥素中少了2,3 位的兩個甲基，去甲斑蝥素不僅保持了較強的抗腫瘤活性和獨特的升高白細胞作用，而且 毒性大大降低，基本上消除了斑蝥素對泌尿系統(tǒng)毒刺激副作用。
[0005] 因此，與斑蝥素骨架修飾有關的一項具有重大意義的合成工作是去掉2,3位甲基 取代。這一結構改變不會影響斑蝥素抗癌活性而毒性有所降低，并且合成步驟簡化。

【發(fā)明內容】
：
[0006] 本發(fā)明的第一方面目的是提供一種氟取代含葡萄糖苷結構三氮唑類去甲斑蝥素 衍生物。
[0007] 本發(fā)明采取的技術方案如下：
[0008] 一種氟取代含葡萄糖苷結構三氮唑類去甲斑蝥素衍生物，其結構式如下：
[0009]
[0010]該化合物相關實驗數據如下：
[0011]
[0012]
【申請人】通過研究發(fā)現：去甲斑蝥素五元環(huán)中的氧可以用氮或硫代替，一些取代基 可以取代在氮和硫上，同時在CdPC6上取代還可以改變藥理活性。通過進一步實驗確定:使 用1-疊氮-全乙酰基-α-D-葡萄糖對去甲斑蝥素進行結構改造，巧妙應用1，3_偶極環(huán)加成方 法引入1，2,3_三氮唑及葡萄糖苷結構，從而可以有效提高去甲斑蝥素的活性。
[0013] 本發(fā)明的第二方面目的是提供一種上述氟取代含葡萄糖苷結構三氮唑類去甲斑 蝥素衍生物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0014] (1 )、去甲去氫斑蝥素的合成：
[0015] 將順丁烯二酸酐研細，加入乙醚，室溫條件下攪拌至溶解，滴入呋喃，室溫攪拌24 ~48小時，呋喃與順丁烯二酸酐發(fā)生Diels-Alder反應，制得去甲去氫斑蝥素（1);
[0016] (2)、N-對氟苯基取代去甲去氫斑蝥酰亞胺的合成：
[0017] 將去甲去氫斑蝥素溶于丙酮溶劑中，在攪拌下滴加對氟苯胺(2)的丙酮溶液，反應 1小時后加入醋酸錳、三乙胺和醋酐，在室溫下反應8小時;將干燥后的沉淀溶于二甲基甲酰 胺中，冰水浴中與二環(huán)己基碳二亞胺攪拌反應10小時，將濾液置于冰水中得到結晶，再重結 晶得到產物(3);
[0018] (3)、導入葡萄糖苷三氮唑結構：
[0019] 室溫氮氣保護下將N-對氟苯基取代去甲去氫斑蝥酰亞胺和1-疊氮-全乙?；?α-D-葡萄糖(4)混合于甲醇中，進行加成反應，回流2小時后冰水浴冷卻至0°C，氮氣保護下緩 慢滴加甲醇鈉的甲醇溶液;滴加完畢后，升至室溫繼續(xù)反應3~4小時，TLC監(jiān)測至原料點消 失，用732強酸苯乙烯陽離子交換樹脂調節(jié)體系至中性，過濾，用甲醇洗滌離子交換樹脂數 次，濾液減壓除去甲醇后得黃色固體，柱層析后甲醇再結晶，真空干燥得到目標化合物(5)。 [0020] 進一步的：
[0021 ]所述的步驟(1)中，反應得到的沉淀需減壓過濾；
[0022]所述的步驟(2)中，反應得到的沉淀需要真空干燥;冰水浴應將溫度降至0°C;重結 晶應用甲醇。
[0023]所述的步驟(3)中，1 -疊氮-全乙?；?a - D-葡萄糖的合成方法如下:50毫升圓底燒 瓶中加入溴代乙酰葡萄糖，疊氮化鈉以及無水DMF，氮氣保護。室溫攪拌過夜，體系顏色由白 變淺黃色。劇烈攪拌下，將體系倒入200毫升水中，出現大量固體，抽濾，冷水洗滌出去鹽和 DMF，干燥，得到1-疊氮-全乙?；?α-D-葡萄糖(4)。
[0024]本發(fā)明涉及的反應如下：
[0025]
[0026] 本發(fā)明的第三方面目的是提供一種前述氟取代含葡萄糖苷結構三氮唑類去甲斑 蝥素衍生物在制備抗腫瘤藥物方面的應用。通過實驗驗證:上述化合物，對于不同瘤株如人 肝癌細胞、口腔癌細胞、胃癌細胞、卵巢癌細胞、白血病細胞、腸癌細胞等，均具有抑制作用， 其中對于HL-60 (白血病細胞)具有更佳的抑制率和選擇性，可單獨制備抗腫瘤藥物、也可以 作為活性成分與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業(yè)應用前景。
[0027]本發(fā)明的原理及有益效果如下：
[0028]
【申請人】通過研究發(fā)現：1，2，3-三唑類化合物本身多具各種活性，將1，2，3-三唑基 引入某些活性分子可明顯增強其藥性;進一步的實驗研究證實:氟原子的引入能夠賦予有 機分子獨特而有利的生理化學性質，從而改變其藥理學性質。這次我們在C-5或C-6上引入 三氮唑的基礎上還導入了葡萄糖苷結構，得到氟取代含葡萄糖苷結構三氮唑類去甲斑蝥素 衍生物。上述化合物針對人肝癌細胞、口腔癌細胞、胃癌細胞、卵巢癌細胞、白血病細胞、腸 癌細胞等瘤株，特別是針對白血病細胞，具有顯著的抗增殖活性。
[0029] 以下結合實施例對本發(fā)明做進一步描述，但實施例不應解釋為限定本發(fā)明的范 圍。
【具體實施方式】：
[0030] 實施例1:
[0031] (1)、去甲去氫斑蝥素的合成：
[0032] 在100mL錐形瓶中依次加入15mL乙醚，4.00g(40mmol)粉末狀順丁烯二酸酐。等順 丁烯二酸酐溶解后，攪拌下加入2.76g(40.5mmol)呋喃。然后再室溫下放置24-48小時，將反 應完全后得到的產物進行減壓過濾得到去甲斑蝥素結晶。
[0033] (2)、N_對氟苯基取代去甲去氫斑蝥酰亞胺的合成：
[0034] 取3.32g(20mmol)去甲斑蝥素溶解于30mL丙酮中，將丙酮溶液和苯胺加入到反應 錐形瓶中，可見有大量的沉淀生成。在常溫下反應8小時后，將沉淀過濾出來后真空干燥，溶 解于20mL二甲基甲酰胺中，冷卻至0°C。置于冰水浴中，加入3.09g(15mm 〇l)二環(huán)己基碳二亞 胺，攪拌反應1 〇小時。然后冷卻，過濾，將濾液倒在50mL冰水中，析出固體。將其過濾，洗滌， 最后用甲醇重結晶得到產物(3)。
[0035] (3)、導入葡萄糖苷三氮唑結構:室溫氮氣保護下將N-對氟苯基取代去甲去氫斑蝥 酰亞胺和1-疊氮-全乙?；?α-D-葡萄糖混合于甲醇中，進行加成反應，回流2小時后冰水浴 冷卻至0°C，氮氣保護下緩慢滴加甲醇鈉的甲醇溶液。滴加完畢后，升至室溫繼續(xù)反應3~4 小時，TLC監(jiān)測至原料點消失，用732強酸苯乙烯陽離子交換樹脂調節(jié)體系至中性，過濾，用 甲醇洗滌離子交換樹脂數次，濾液減壓除去甲醇后得黃色固體，柱層析后用甲醇再結晶，真 空干燥得到目標化合物(5)。
[0036]化合物(5)名稱:氟取代含葡萄糖苷結構三氮唑類去甲斑蝥素衍生物
[0037] 分子式：C2QH21FN4O8
[0038] 物化參數：黃色固體，m · p · 171 -172 Γ
[0039] 結構確認：
[0040] 4 Mffi(DMS0-d6):S = 7.53-7.21(m，4H，Ar-H)，5.15(d，J = 9.60Hz，lH，H5)，4.74 (d，J= 17.60Hz，lH，H4)，4.56(d，J= 17.60Hz，lH，Hl)，4.00(d，J = 9.60Hz，lH，H6)，3.43(d， J = 7.20Hz,lH,H3) ,3.30(d,J = 7.20Hz,lH,H2) ,5.08-3.08(m,llH,7XGlucosyl-H,4X 〇H)；
[0041] IR(KBr)v：3478(N-C = 0) ,2985 2942(ArH), 1782,1742,1715(C = 0), 1612(N=N), 1229(C-0-C)，1216(C-N)，1160(N-N)cm_1;
[0042] Anal.calcd.for C20H21FN4O8.C,51.72；H,4.58；N, 12.07〇
[0043] 應用實施例:氟取代含葡萄糖苷結構三氮唑類去甲斑蝥素衍生物(化合物5)的抗 腫瘤活性測定。
[0044]將上述實施例制備的化合物（5)，分別以不同瘤株（腫瘤細胞Bel-7402、KB、 SGC7901、H08901、HL-60、ECA109)為實驗對象，測試化合物（5)對于不同瘤株的體外抑制作 用:實驗采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應比色法(MTT法），活性用半數抑制濃度表示（IC 50)。
[0045]具體實驗步驟如下：
[0046] 將化合物5用DMS0溶解，稀釋，腫瘤細胞Bel-7402(人肝癌細胞）、KB(口腔癌細胞）、 SGC7901(胃癌細胞）、H08901 (卵巢癌細胞）、HL-60(白血病細胞）、ECA109(腸癌細胞)在96孔 板上種入4000個/200yL/孔，每孔加入化合物2yL，終濃度為12. ΟμΜ，6. ΟμΜ，3. ΟμΜ，1.5μΜ，共 同于37°C、5 %C02細胞培養(yǎng)箱中孵育72小時，以DMS0(1 % )為空白對照。72小時后，加入終濃 度為0.25mg/mL的MTT，置于37 °C、5 % C02細胞培養(yǎng)箱中4小時，之后吸干溶劑，每孔加入100μ 1 DMS0,用酶聯免疫儀于570nm處測定吸光度(0D值），所得數據用于計算IC5Q值。測定不同濃 度下的化合物作用時間不同對人腫瘤細胞周期和凋亡的影響。
[0047]不同濃度的受試化合物用96孔板進行粗篩，根據所得的抑制率，計算IC5Q值，結果 見下表。
[0048]表1、葡萄糖苷結構三氮唑類去甲斑蝥素衍生物對六種腫瘤細胞株的1(：50值
[0049]
[0050] 通過上表數據可以看出：本發(fā)明制備的化合物，對于六種腫瘤細胞株均具有抑制 作用，其中對于HL-60(白血病細胞)具有突出的抑制率和選擇性，可以單獨制備抗腫瘤藥 物、也可以作為活性成分與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業(yè)應用前 景。
【主權項】
1. 一種氣取代含葡萄糖巧結構S氮畔類去甲斑莖素衍生物，其結構式如下：2. -種氣取代含葡萄糖巧結構=氮挫類去甲斑莖素衍生物的制備方法，其特征在于， 包括W下步驟： (1) 、去甲去氨斑莖素的合成： 將順下締二酸酢研細，加入乙酸，室溫條件下攬拌至溶解，滴入巧喃，室溫攬拌24~48小 時，巧喃與順下締二酸酢發(fā)生Diels-Alder反應，制得去甲去氨斑莖素； (2) 、N-對氣苯基取代去甲去氨斑莖酷亞胺的合成： 將去甲去氨斑莖素溶于丙酬溶劑中，在攬拌下滴加對氣苯胺的丙酬溶液，反應1小時后 加入醋酸儘、=乙胺和醋酢，在室溫下反應8小時;將干燥后的沉淀溶于二甲基甲酯胺中，冰 水浴中與二環(huán)己基碳二亞胺攬拌反應10小時，將濾液置于冰水中得到結晶，再重結晶得到 產物； (3) 、導入葡萄糖巧S氮挫結構： 室溫氮氣保護下將N-對氣苯基取代去甲去氨斑莖酷亞胺和1-疊氮-全乙酷基-a-D-葡 萄糖混合于甲醇中，進行加成反應，回流2小時后冰水浴冷卻至(TC，氮氣保護下緩慢滴加甲 醇鋼的甲醇溶液;滴加完畢后，升至室溫繼續(xù)反應3~4小時，T L C監(jiān)測至原料點消失，用陽 離子交換樹脂調節(jié)體系至中性，過濾，用甲醇洗涂離子交換樹脂數次，濾液減壓除去甲醇后 得黃色固體，柱層析后甲醇再結晶，真空干燥得到目標化合物。3. 根據權利要求2所述的一種氣取代含葡萄糖巧結構=氮挫類去甲斑莖素衍生物的制 備方法，其特征在于:步驟(1)中，反應得到的沉淀需減壓過濾。4. 根據權利要求2所述的一種氣取代含葡萄糖巧結構=氮挫類去甲斑莖素衍生物的制 備方法，其特征在于:步驟(2)中，反應得到的沉淀需要真空干燥;冰水浴應將溫度降至(TC ; 重結晶應用甲醇。5. 根據權利要求2所述的一種氣取代含葡萄糖巧結構=氮挫類去甲斑莖素衍生物的制 備方法，其特征在于:步驟(3)中，1-疊氮-全乙酷基-a-D-葡萄糖的合成方法如下:50毫升圓 底燒瓶中加入漠代乙酷葡萄糖，疊氮化鋼W及無水DMF，氮氣保護，室溫攬拌過夜，體系顏色 由白變淺黃色，劇烈攬拌下，將體系倒入200毫升水中，出現大量固體，抽濾，冷水洗涂出去 鹽和DMF,干燥，得到1-疊氮-全乙酷基-a-D-葡萄糖。6. -種前述氣取代含葡萄糖巧結構=氮挫類去甲斑莖素衍生物在制備抗腫瘤藥物方 面的應用。
【文檔編號】A61P35/02GK105906678SQ201610395573
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年6月6日
【發(fā)明人】鄧莉平, 王瑋, 胡純琦, 許燕飛, 張耀紅, 任小榮, 左樹峰
【申請人】紹興文理學院