更昔洛韋的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了更昔洛韋的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用，本發(fā)明提供的更昔洛韋的藥物組合物中含有更昔洛韋和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，更昔洛韋、化合物(Ⅰ)單獨作用時，可以治療前列腺增生；更昔洛韋和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時，對前列腺增生的治療效果進一步提高，可以開發(fā)成治療前列腺增生的藥物，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實質(zhì)性特點和顯著的進步。
【專利說明】
更昔洛韋的藥物組合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及更昔洛韋的新用途，具體涉及更昔洛韋的藥物組 合物及其在生物醫(yī)藥中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 更昔洛韋臨床用于預(yù)防及治療免疫功能缺陷病人的巨細胞病毒感染，如艾滋病患 者，接受化療的腫瘤患者，使用免疫抑制劑的器官移植病人。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種更昔洛韋的藥物組合物，該藥物組合物中含有更昔洛 韋和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物，更昔洛韋和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療前列腺增生。
[0004] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0005] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0006]
1234 -種更昔洛韋的藥物組合物，包括更昔洛韋、如權(quán)利要求1所述的化合物（I)和藥 學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。 2 進一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。 3 進一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。 4 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將絲瓜絡(luò)粉碎，用85~95%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇取物用 大孔樹脂除雜，先用35 %乙醇洗脫8個柱體積，再用90 %乙醇洗脫12個柱體積，收集90 %洗 脫液，減壓濃縮得90%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中90%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分 離，依次用體積比為120:1、60:1、30:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d) 步驟(C)中組分3用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為40:1、30:1和10:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體 積百分濃度為85%的甲醇水溶液等度洗脫，收集14~18個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮 得到化合物(I)。
[0011] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用90%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0012] 進一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0013]進一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制備治療前列腺增生的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 上述更昔洛韋的藥物組合物在制備治療前列腺增生的藥物中的應(yīng)用。
[0016] 本發(fā)明的優(yōu)點:本發(fā)明提供的更昔洛韋的藥物組合物中含有更昔洛韋和一種結(jié)構(gòu) 新穎的天然產(chǎn)物，更昔洛韋和該天然產(chǎn)物單獨作用時，對前列腺增生具有治療作用;二者聯(lián) 合作用時，對前列腺增生的治療效果進一步提高，可以開發(fā)成治療前列腺增生的藥物。
【具體實施方式】
[0017] 下面結(jié)合實施例進一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護范 圍。
[0018] 實施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0019]分離方法：（a)將絲瓜絡(luò)(2kg)粉碎，用90 %乙醇熱回流提?。?5L X 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用35%乙醇洗脫8個柱體積，再用90%乙醇洗脫 12個柱體積，收集90%洗脫液，減壓濃縮得90%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中90%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為120:1 (11個柱體積）、60:1 (9個柱體積）、30:1 (9 個柱體積)和15:1 (8個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得至1」4個組分；（d)步驟(c)中組分 3用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為40:1(6個柱體積）、30:1(8個柱體積)和10:1(6個 柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合 的反相硅膠分離，用體積百分濃度為85 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集14~18個柱體積洗 脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (HPLC歸一化純度大于98% )。
[0020] 結(jié)構(gòu)確證:冊431-]\^顯示[]\?^]+為111/2 533.2214，結(jié)合核磁特征可得分子式為 C29H34〇8，不飽和度為 13。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ppm，DMS〇-d6，600MHz): H-1 (6 · 74，d，J = 10.0)，H-2(6.08，d，J = 9.9)，H-5(2.20，s)，H-9(2.61，s)，H-ll(4.15，d，J = 5.4)，H-12 (5.O3，s)，H-15(3.89，s)，H-16a(1.97，dd，J=13.6，11.2)，H-160(2.26，dd，J=13.9,6.6)， H-17(2.85，dd，J=11.0,6.6)，H-18(0.74，s)，H-19(1.51，s)，H-21(7.06，s)，H-22(6.02， br，s)，H-23(7.25，br，s)，H-28(1.49，s)，H-29(1.46，s)，H-30(1.32，s)，H-2,（2.21，m，2H)， H-3 '（ 1 · 04，t，J = 7 · 6);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)δ。(ppm，DMS〇-d6，150MHz): 150 · 8 (CH，1 -C)，127 · 3 (CH，2-C)，203.2(C，3-C)，47.7(C，4-C)，59.4(CH，5-C)，187.2(C，6-C)，205.1(C，7-C)，34.5 (C，8-C)，42.7(CH，9-C)，40.1(C，10-C)，72.4(CH，11-C)，82.3(CH，12-C)，44.4(C，13-C)， 68.1(C，14-C)，56.2(CH，15-C)，31.1(CH2，16-C)，41.8(CH，17-C)，15.2(CH 3，18-C)，25.8 (CH3，19-C)，121.7(C，20-C)，140·1(CH，21-C)，110.7(CH，22-C)，142.6(CH，23-C)，26.7 (CH3,28-C)，21.1(CH3,29-C)，22.3(CH3,30-C)，173.8(C，r-C)，27.5(CH2,2'-C)，9.1(CH 3， 3'-C)<JR光譜表明該化合物含有羰基（17350^1)基團。4和13C-NMR譜表明，該化合物含有一 個〇，0-不飽和酮羰基[5冊.74(1!1，(1，1=10.0泡，!1-1)和6.08(1!1，(1，1 = 9.9取，!1-2);3 C150.8(01)，127.3(02)，203.2(03)]，兩個酮羰基[SC187.2(C-6)和205.1 (C-7)]，一個 環(huán)氧基團[5!13.89(1!1，8，!1-15)4068.1((：-14)和56.2((：-15)]，一個丙酰氧基側(cè)鏈[5!11.04 (3H，t，J = 7.6Hz，Me-3'WP2.21(2H，m，H-2'）；SC173.8(C-l'），27.5(C-2'WP9.1(C-3'）]， 以及一個6-取代呋喃環(huán)[5!17.06(1!1，8，!1-21)，6.02(1!1，1^，8，!1-22)和7.25(1!1，1^，8，!1-23) JC121.7(C_20)，140.1(021)，110.7(022)和 142.6(023)]。此外，還含有五個甲基信 號[3!10.74(3!1，8，]\^-18)，1.51(3!1，8，]\^-19)，1.49(3!1，8，]\^-28)，1.46(3!1，8，]\^-29)和 1.32 (3H，s，Me-30)]。上述數(shù)據(jù)表明該化合物為檸檬苦素類化合物。1Η」Η COSY譜中H-1與H-2的相關(guān)性，以及HMBC譜中Me-19與C-1，Η-1與C-3的相關(guān)性證實了 α，β-不飽和酮羰基結(jié)構(gòu)。 HMBC譜中Η-12與C-Γ的相關(guān)性，以及4-? COSY譜中Me-3'與Η-2'的相關(guān)性表明丙酰氧基位 于C-12位上。HMBC譜中Me-18和Me-30與C-14,以及H-15與C-16的相關(guān)性表明C-14和C-15之 間存在一個環(huán)氧基團。通過核磁數(shù)據(jù)可知C-17位連有一個β-取代呋喃環(huán);HMBC譜中，H-17與 C-20，C-21和C-22的相關(guān)性驗證了上述推論。ROESY譜中Η-12與Η-17,以及Η-17與Η-16β的相 關(guān)性，表明它們?yōu)棣聵?gòu)型，貝IJ丙酰氧基側(cè)鏈為α構(gòu)型;Η-9與Η-11，以及Η-9與Me-18很強的相關(guān) 性表明H-9、H-11和Me-18為α構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻關(guān)于相關(guān)類 型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進一步通過ECD試驗確定，理論值與 實驗值基本一致。
[0021] 該化合物化學(xué)式及碳原子編號如下：
[0022]
[0023] 實施例2:藥理作用
[0024]本實施例采用昆明種小鼠去勢，連續(xù)3周sc丙酸睪酮5mg · kg4 · 0-1，造前列腺增 生模型，觀察藥物對前列腺增生的治療作用。
[0025] 1、材料與方法
[0026] 1.1動物
[0027]小鼠，昆明種，雄性，20~23g，80只，由河北省實驗動物中心提供。
[0028] 1.2試劑與樣品
[0029] 更昔洛韋購自中國藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實施例1。戊 巴比妥鈉，中國醫(yī)藥集團上?；瘜W(xué)試劑公司；注射用青霉素鈉，華北制藥股份有限公司；丙 酸睪酮注射液，上海通用藥業(yè)股份有限公司；癃閉舒膠囊，石家莊科迪藥業(yè)有限公司；小鼠 睪酮(T)ELISA檢測試劑盒，北京科美東雅生物技術(shù)有限公司；小鼠雌二醇(E2)ELISA檢測試 劑盒，北京科美東雅生物技術(shù)有限公司。
[0030] 1.3儀器
[0031] FA(N)/JA(N)系列電子天平，上海民橋精密儀器有限公司；TGL-16G高速冷凍離心 機，上海安亭科學(xué)儀器廠；電動勻漿機，寧波新芝生物科技股份有限公司；Sn-895B型智能放 免γ測量儀:上海原子核研究所四環(huán)儀器一廠。
[0032] 1.4小鼠分組及模型制備
[0033]取體重20~23g雄性小鼠80只，隨機取10只作為空白對照組，做假手術(shù)處理；其余 小鼠造前列腺增生模型，小鼠稱重后腹腔注射2%戊巴比妥鈉(30mg · kg^1)麻醉，常規(guī)消毒 皮膚，于無菌條件下經(jīng)陰囊摘除雙側(cè)睪丸，殘端處結(jié)扎，縫合皮膚，肌內(nèi)注射青霉素20萬u· kg<;手術(shù)后第3天，取去勢成功、狀態(tài)良好的小鼠50只，隨機分為5組用于造前列腺增生模 型，分別為模型對照組、陽性對照組(癃閉舒膠囊混懸液450mg · kg<)和更昔洛韋組(80mg · kg"1)、化合物（I)組(80mg · kg<)、更昔洛韋與化合物（I)組合物組【40mg · kg<更昔洛韋+ 40mg · kg"1化合物⑴】，連續(xù)3周每日sc丙酸睪酮5mg · kg<(溶于大豆油)造模，空白組注射 等量溶媒。于造模型第1天，模型對照組ig生理鹽水；陽性對照組ig癃閉舒膠囊混懸液 (450mg · kg<);更昔洛韋組、化合物（I)組、更昔洛韋與化合物（I)組合物組ig上述劑量的藥 物，給藥體積均為20mL · kg'空白對照組灌服同體積的生理鹽水;每日給藥1次，連續(xù)給藥3 周。于末次給藥后2h(禁食不禁水12h)，小鼠稱重后眼眶取血，離心，分離血清，測血清中T， E2水平;然后脫頸椎處死小鼠，迅速取前列腺組織，對各組小鼠前列腺腺體進行立體計量學(xué) 測定，測定腺體的體密度。
[0034] 1.5血清中T的測定
[0035]用小鼠 TELISA檢測試劑盒測定血清中T的含量:試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶 聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，往預(yù)先包被T抗體的包被微孔中，依次加入標本、對照品、HRP標記 的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍 色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的T呈正相關(guān)。用酶標儀在 450nm波長下測定吸光度(A)，計算樣品濃度，即得到小鼠血清中T的含量。
[0036] 1·6血清中E2的測定
[0037] 用小鼠 E2ELISA檢測試劑盒測定血清中雌二醇的含量:試劑盒采用雙抗體一步夾 心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)，往預(yù)先包被E2抗體的包被微孔中，依次加入標本、對照品、 HRP標記的檢測抗體，經(jīng)過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn) 化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的E 2S正相關(guān)。用酶標 儀在450nm波長下測定A，計算樣品濃度，即得到小鼠血清中扮的含量。
[0038] 1.7前列腺腺體的體密度測定
[0039]采用通用立體計量學(xué)測定方法，應(yīng)用測試格點分析法，計算腺體上的交叉點數(shù)與 參照系中的交叉點數(shù)的百分比，為該組織中腺體的體密度(Vv)。
[0040] 1.8統(tǒng)計學(xué)方法
[0041] 實驗數(shù)據(jù)采用SPSS13.0統(tǒng)計軟件處理。數(shù)據(jù)以i±s表示，計量資料組間比較采用單 因素方差分析。P<〇. 05有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0042] 2、實驗結(jié)果
[0043] 2.1對小鼠前列腺增生模型血清T、E2水平的影響
[0044]與空白對照組比，模型組小鼠血清中T水平顯著升高（P<0.01)，E2水平顯著降低 (P<0.01)，說明造模成功。和模型對照組相比，更昔洛韋與化合物（I)組合物組及陽性對照 組小鼠血清中T水平顯著降低、E 2水平顯著升高(P<0.01);與模型對照組比，更昔洛韋組、 化合物(I)組小鼠血清中T水平降低、平升高(P<0.05)。結(jié)果見表1。
[0045] 2.2對前列腺增生模型小鼠前列腺腺體的體密度的影響
[0046]與空白對照組比，模型組前列腺腺體體密度顯著升高(P<0.01)，說明造前列腺增 生模型成功。與模型對照組比，更昔洛韋組、化合物（I)組小鼠前列腺腺體的體密度降低(P <0.05);和模型對照組相比，更昔洛韋與化合物（I)組合物組、陽性對照組小鼠前列腺腺體 的體密度顯著降低(P<〇. 01)。結(jié)果見表1。
[0047] 表1對小鼠前列腺增生模型血清睪酮、雌二醇水平及前列腺腺體密度的影響
[0048]
[0049] 本實驗采用小鼠去勢后皮下注射丙酸睪酮成功建立前列腺增生模型，小鼠去勢 后，前列腺迅速萎縮，再給予外源性雄激素，可造成動物體內(nèi)性激素水平紊亂，使前列腺發(fā) 生增生。睪酮(T)是人體內(nèi)主要的雄激素，在5α_還原酶作用下變?yōu)殡p氫睪酮(DHT)，前列腺 內(nèi)的DHT濃度增加可導(dǎo)致腺體增生。堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)通過DHT的作用增加釋 放，促前列腺間質(zhì)增生，刺激前列腺上皮細胞生長的表皮細胞生長因子(EGF)與血漿中雄激 素的含量呈正相關(guān)，導(dǎo)致前列腺的增生，造成前列腺增生模型。雌雄激素比例的變化是前列 腺增生的關(guān)鍵誘因，血清中睪酮、雌二醇水平對反應(yīng)前列腺增生狀況有重要意義。前列腺濕 重及前列腺指數(shù)是反映前列腺增生程度最客觀的指標之一，前列腺組織形態(tài)是確定是否增 生的關(guān)鍵;前列腺增生是慢性病，長期的病理變化可能會累及相關(guān)臟器。前列腺增生可能會 累及機體免疫功能，胸腺的組織形態(tài)學(xué)變化及其淋巴細胞的個數(shù)可有效反應(yīng)前列腺增生狀 況。
[0050] 上述結(jié)果表明，更昔洛韋、化合物（I)單獨作用時，可以治療前列腺增生;更昔洛韋 和化合物（I)聯(lián)合作用時，對前列腺增生的治療效果進一步提高，可以開發(fā)成治療前列腺增 生的藥物。
[0051] 上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和保護范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種更昔洛韋的藥物組合物，其特征在于:包括更昔洛韋、如權(quán)利要求1所述的化合 物(I)和藥學(xué)上可W接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的更昔洛韋的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可W接受的載體 包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、吸附載體 或潤滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的更昔洛韋的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、膠 囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含W下操作步驟：（a)將絲 瓜絡(luò)粉碎，用85~95%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油酸、乙酸乙 醋和水飽和的正下醇萃取，分別得到石油酸萃取物、乙酸乙醋萃取物和正下醇萃取物；（b) 步驟(a)中正下醇取物用大孔樹脂除雜，先用35%乙醇洗脫8個柱體積，再用90%乙醇洗脫 12個柱體積，收集90%洗脫液，減壓濃縮得90%乙醇洗脫濃縮物；（C)步驟(b)中90%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為120:1、60:1、30:1和15:1的二氯甲燒-甲醇梯度 洗脫得到4個組分；（d)步驟(C)中組分3用正相硅膠進一步分離，依次用體積比為40:1、30:1 和10:1的二氯甲燒-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合 的反相硅膠分離，用體積百分濃度為85 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集14~18個柱體積洗 脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用90%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為DlOl型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲燒代 替乙酸乙醋進行萃取，得到二氯甲燒萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療前列腺增生的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的更昔洛韋的藥物組合物在制備治療前列腺增生的藥物中 的應(yīng)用。
【文檔編號】A61K31/522GK105906685SQ201610335083
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年5月19日
【發(fā)明人】王昌榮
【申請人】王昌榮