一種預(yù)制備培養(yǎng)平皿及其制備方法和質(zhì)量控制方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種預(yù)制備培養(yǎng)平皿及其制備方法和質(zhì)量控制方法，預(yù)制備培養(yǎng)平皿是由以下步驟制備的：（1）配制培養(yǎng)基：精確稱取干粉培養(yǎng)基，加入超純水后攪拌，并加熱至121℃保持15分鐘，滅菌；（2）分裝培養(yǎng)基：將干凈的平皿進(jìn)行滅菌，然后將步驟（1）配制好的培養(yǎng)基通過無菌管道，在百級無菌條件下分裝至培養(yǎng)皿中，加蓋后冷卻至室溫；（3）無菌包裝：將步驟（2）制備好的培養(yǎng)皿在無菌條件下，進(jìn)行第一層真空包裝和第二層真空包裝，所述第一層包裝和第二層包裝是真空薄膜袋，然后進(jìn)行第三層外包裝；以輻照方式進(jìn)行滅菌。
【專利說明】
一種預(yù)制備培養(yǎng)平皿及其制備方法和質(zhì)量控制方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及無菌環(huán)境以及物體表面的檢測，尤其涉及采用預(yù)制備培養(yǎng)平皿進(jìn)行無 菌環(huán)境以及物體表面檢測的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 各大中型醫(yī)院檢驗科、各衛(wèi)生防疫站、藥品檢驗所、食品、制藥、化妝品等生廣廠、 以及各大專院校、科研機(jī)構(gòu)的微生物室由于生產(chǎn)、檢驗和科研的需要，必須環(huán)境的清潔，尤 其是微生物污染是環(huán)境評價的重要指標(biāo)。
[0003] 無菌培養(yǎng)基平皿是傳統(tǒng)微生物培養(yǎng)以及檢測方法，無論在科研和生產(chǎn)中使用十分 普遍。常規(guī)的無菌培養(yǎng)基平皿雖然制備并不復(fù)雜，但是，對于檢測量大，對平行性要求高的 企業(yè)、醫(yī)院和科研機(jī)構(gòu)而言依然需要耗費(fèi)巨大的人力，且傳統(tǒng)的自制無菌培養(yǎng)基平皿不僅 工序繁瑣、數(shù)量少，還很耗時，不足以應(yīng)付突發(fā)事件以及快速的需要，并且存在較大的人為 染菌風(fēng)險。因此效果往往由于檢測人員不精確的操作而出現(xiàn)平行性差，假陰性或假陽性的 概率也會增加。
[0004] 因此，亟需提供一種可以工業(yè)化生產(chǎn)、準(zhǔn)確性高、使用簡單的無菌培養(yǎng)基平皿。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 為了解決上述的技術(shù)問題，本發(fā)明的一個目的是提供一種預(yù)制備培養(yǎng)平皿，其特 征在于，其是由以下步驟制備的：
[0006] (1)配制培養(yǎng)基
[0007] 精確稱取干粉培養(yǎng)基，加入超純水后攪拌，并加熱至121°C保持15分鐘，滅菌；
[0008] (2)分裝培養(yǎng)基
[0009] 將干凈的平皿進(jìn)行滅菌，然后將步驟(1)配制好的培養(yǎng)基通過無菌管道，在百級無 菌條件下分裝至培養(yǎng)皿中，加蓋后冷卻至室溫；
[0010] ⑶無菌包裝
[0011] 將步驟(2)制備好的培養(yǎng)皿在無菌條件下，進(jìn)行第一層真空包裝和第二層真空包 裝，所述第一層包裝和第二層包裝是真空薄膜袋，然后進(jìn)行第三層外包裝；以輻照方式進(jìn)行 滅菌；
[0012] 進(jìn)一步地，所述輻照的強(qiáng)度為15-18kGy，所述無菌管道以121°C滅菌30分鐘，在無 菌管道中傳送時間為3-5分鐘。
[0013] 更進(jìn)一步地，培養(yǎng)皿的直徑為90mm或55mm。
[0014] 再進(jìn)一步地，培養(yǎng)皿底部外側(cè)設(shè)計有計數(shù)方格;優(yōu)選地，方格的大小為3-20mm，更 優(yōu)選地，方格的大小為3mm、5mm、10mm、15mm或20mm。
[0015] 本發(fā)明的另一個目的是提供一種預(yù)制備培養(yǎng)平皿的制備方法，其特征在于，包括 以下步驟
[0016] (1)配制培養(yǎng)基
[0017]精確稱取干粉培養(yǎng)基，加入超純水后攪拌，并加熱至121°C保持15分鐘，滅菌；
[0018] (2)分裝培養(yǎng)基
[0019] 將干凈的平皿進(jìn)行滅菌，然后將步驟(1)配制好的培養(yǎng)基通過無菌管道，在百級無 菌條件下分裝至培養(yǎng)皿中，加蓋后冷卻至室溫；
[0020] (3)無菌包裝
[0021] 將步驟(2)制備好的培養(yǎng)皿在無菌條件下，進(jìn)行第一層真空包裝和第二層真空包 裝，所述第一層包裝和第二層包裝是真空薄膜袋，然后進(jìn)行第三層外包裝；以輻照方式進(jìn)行 滅菌。
[0022] 更進(jìn)一步地，根據(jù)權(quán)利要求3所述的預(yù)制備培養(yǎng)平皿的制備方法，其特征在于，所 述輻照的強(qiáng)度為15-18kGy，所述無菌管道以121°C滅菌30分鐘，在無菌管道中傳送時間為3-5分鐘。
[0023] 本發(fā)明的又一目的是提供一種預(yù)制備培養(yǎng)平皿的質(zhì)量控制方法，其特征在于，對 于制備得到的預(yù)制杯培養(yǎng)平皿進(jìn)行外觀、裝量、pH值、無菌性、微生物生長測試。
[0024] 進(jìn)一步地，所述外觀測試是以目測法，在自然光線明亮處目測，表面是否平整、潔 凈、無破損，無氣泡，無菌，是否有脫離現(xiàn)象。
[0025] 進(jìn)一步地，所述裝量測試是以通用量具或?qū)Ｓ昧烤邷y量測定平皿重量，直徑90mm 的平皿裝量:22 ± 2g，直徑55mm的平皿裝量：15 ± 0 · 5g。
[0026] 進(jìn)一步地，所述pH值測試是將樣品放置20°C~25°C預(yù)溫1小時，使用表面pH電極測 試，20 °C~25 °C時，該培養(yǎng)基pH值應(yīng)為6.5~7.0。
[0027] 進(jìn)一步地，所述無菌性測試是指隨機(jī)抽取最終輻照滅菌的最小包裝，整包裝培養(yǎng)， 不能將其拆開;將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至20 °C~25 °C培養(yǎng)3天，再在30°C~35 °C培養(yǎng)2天計數(shù);培養(yǎng)后 肉眼觀察每個平板培養(yǎng)基上均應(yīng)無微生物生長即可認(rèn)定無菌。
[0028] 進(jìn)一步地，所述微生物測試是將陽性菌液(少于100CFU/0. lmL)用涂布棒均勻的涂 布到培養(yǎng)基上，同時應(yīng)將菌液傾倒培養(yǎng)作為陽性對照。每種微生物接種2個平板;細(xì)菌在30 °C~35°C，倒置培養(yǎng)(應(yīng)為2天），真菌20°C~25°C，倒置培養(yǎng)5天;2個培養(yǎng)皿中微生物的計數(shù) 平均值與陽性對照相比回收率應(yīng)在70 %~130 %之間。
[0029] 本發(fā)明采用以上技術(shù)方案，有益效果為：
[0030] 1.本發(fā)明新型無菌培養(yǎng)基平皿結(jié)構(gòu)簡潔，使用方便，可實現(xiàn)大規(guī)模連續(xù)化生產(chǎn)，且 成本較低；
[0031 ] 2.每包平皿均為獨(dú)立密封，使用數(shù)量較為靈活；
[0032] 3.平皿經(jīng)過輻照滅菌后，本品應(yīng)貯存在相對濕度45~85%，溫度2~25°C保存，有 效期3個月。
【附圖說明】
[0033]圖1為預(yù)制備培養(yǎng)平皿制備工藝流程圖。
【具體實施方式】
[0034]實施例1預(yù)制備培養(yǎng)平皿的制備 [0035] (1)配制培養(yǎng)基
[0036]精確稱取干粉培養(yǎng)基，加入超純水后攪拌，并加熱至121°C保持15分鐘，滅菌；
[0037] (2)分裝培養(yǎng)基
[0038]將干凈的平皿進(jìn)行滅菌，然后將步驟(1)配制好的培養(yǎng)基通過無菌管道，所述無菌 管道以121Γ滅菌30分鐘，在無菌管道中傳送時間為3-5分鐘，在百級無菌條件下分裝至培 養(yǎng)皿中，加蓋后冷卻至室溫；
[0039] (3)無菌包裝
[0040] 將步驟(2)制備好的培養(yǎng)皿在無菌條件下，進(jìn)行第一層真空包裝和第二層真空包 裝，所述第一層包裝和第二層包裝是真空薄膜袋，然后進(jìn)行第三層外包裝；以15-18kGy的輻 照強(qiáng)度進(jìn)行滅菌。
[0041] 實施例2預(yù)制備培養(yǎng)平皿的質(zhì)量檢測
[0042] 對于實施例1制備得到的預(yù)制杯培養(yǎng)平皿進(jìn)行外觀、裝量、pH值、無菌性、微生物生 長測試。
[0043] 對外觀進(jìn)行測試，以目測法，在自然光線明亮處目測，其表面平整、潔凈、無破損、 無氣泡、無菌、未發(fā)現(xiàn)脫離現(xiàn)象。
[0044] 對裝量進(jìn)行測試，隨機(jī)抽取10只平皿，以天平測量測定平皿重量，直徑90mm的平皿 裝量：22 ± 2g，直徑55謹(jǐn)?shù)钠矫笱b量：15 ± 0 · 5g 〇 「nrucil
[0046] 對pH值進(jìn)行測試，將樣品放置20°C~25°C預(yù)溫1小時，使用表面pH電極測試，20°C ~25 °C時，該培養(yǎng)基pH值應(yīng)為6.5~7.0。
[0047]

'[0048]對無菌性進(jìn)行測試，隨機(jī)抽取最終輻照滅菌的最小包裝，整包裝培養(yǎng)，不能將其拆 開;將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至20 °C~25 °C培養(yǎng)3天，再在30 °C~35 °C培養(yǎng)2天計數(shù);培養(yǎng)后肉眼觀察每 個平板培養(yǎng)基上均應(yīng)無微生物生長。
[0049]對微生物生長進(jìn)行測試，將陽性菌液(少于100CFU/0. lmL)用涂布棒均勻的涂布到 培養(yǎng)基上，同時應(yīng)將菌液傾倒培養(yǎng)作為陽性對照。每種微生物接種2個平板;細(xì)菌在30 °C~ 35°C，倒置培養(yǎng)(應(yīng)為2天），真菌20°C~25°C，倒置培養(yǎng)5天;空白對照平板應(yīng)無菌生長。質(zhì)控 菌株:金黃色葡萄球菌生長良好(麥桿色菌落）、大腸埃希菌生長良好(乳白色菌落）、枯草芽 孢桿菌生長良好(不規(guī)則的麥桿色菌落）、銅綠假單胞菌生長良好(藍(lán)綠色菌落）、白色念珠 菌生長良好（乳白色菌落）。2個培養(yǎng)皿中微生物的計數(shù)平均值與陽性對照相比回收率在 70%~130%之間。
【主權(quán)項】
1. 一種預(yù)制備培養(yǎng)平皿，其特征在于，其是由以下步驟制備的： (1) 配制培養(yǎng)基 精確稱取干粉培養(yǎng)基，加入超純水后攪拌，并加熱至12 rc保持15分鐘，滅菌； (2) 分裝培養(yǎng)基 將干凈的平皿進(jìn)行滅菌，然后將步驟（1)配制好的培養(yǎng)基通過無菌管道，在百級無菌條 件下分裝至培養(yǎng)皿中，加蓋后冷卻至室溫； (3) 無菌包裝 將步驟(2)制備好的培養(yǎng)皿在無菌條件下，進(jìn)行第一層真空包裝和第二層真空包裝，所 述第一層包裝和第二層包裝是真空薄膜袋，然后進(jìn)行第三層外包裝；以輻照方式進(jìn)行滅菌； 優(yōu)選地，所述輻照的強(qiáng)度為15-18kGy，所述無菌管道以121°C滅菌30分鐘，在無菌管道 中傳送時間為3-5分鐘。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的預(yù)制備培養(yǎng)平皿，其特征在于，培養(yǎng)皿的直徑為90mm或55mm; 培養(yǎng)皿底部外側(cè)設(shè)計有計數(shù)方格;優(yōu)選地，方格的大小為3_20mm，更優(yōu)選地，方格的大小為 3mm、5mm、IOmm、I5mm或20mm〇3. -種預(yù)制備培養(yǎng)平皿的制備方法，其特征在于，包括以下步驟 (1) 配制培養(yǎng)基 精確稱取干粉培養(yǎng)基，加入超純水后攪拌，并加熱至121°C保持15分鐘，滅菌； (2) 分裝培養(yǎng)基 將干凈的平皿進(jìn)行滅菌，然后將步驟（1)配制好的培養(yǎng)基通過無菌管道，在百級無菌條 件下分裝至培養(yǎng)皿中，加蓋后冷卻至室溫； (3) 無菌包裝 將步驟(2)制備好的培養(yǎng)皿在無菌條件下，進(jìn)行第一層真空包裝和第二層真空包裝，所 述第一層包裝和第二層包裝是真空薄膜袋，然后進(jìn)行第三層外包裝；以輻照方式進(jìn)行滅菌。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的預(yù)制備培養(yǎng)平皿的制備方法，其特征在于，所述輻照的強(qiáng)度為 15-18kGy，所述無菌管道以121°C滅菌30分鐘，在無菌管道中傳送時間為3-5分鐘。5. -種預(yù)制備培養(yǎng)平皿的質(zhì)量控制方法，其特征在于，對于制備得到的預(yù)制杯培養(yǎng)平 皿進(jìn)行外觀、裝量、pH值、無菌性、微生物生長測試。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的預(yù)制備培養(yǎng)平皿的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述外觀測試 是以目測法，在自然光線明亮處目測，表面是否平整、潔凈、無破損，無氣泡，無菌，是否有脫 離現(xiàn)象。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的預(yù)制備培養(yǎng)平皿的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述裝量測試 是以通用量具或?qū)Ｓ昧烤邷y量測定平皿重量，直徑90mm的平皿裝量:22 ±2g，直徑55mm的平 皿裝量：15±0.5g。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的預(yù)制備培養(yǎng)平皿的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述pH值測試 是將樣品放置20 °C~25 °C預(yù)溫1小時，使用表面pH電極測試，20 °C~25 °C時，該培養(yǎng)基pH值 應(yīng)為6.5~7.0。9. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的預(yù)制備培養(yǎng)平皿的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述無菌性測 試是指隨機(jī)抽取最終輻照滅菌的最小包裝，整包裝培養(yǎng)，不能將其拆開;將培養(yǎng)基轉(zhuǎn)移至20 °C~25 °C培養(yǎng)3天，再在30 °C~35 °C培養(yǎng)2天計數(shù);培養(yǎng)后肉眼觀察每個平板培養(yǎng)基上均應(yīng) 無微生物生長即可認(rèn)定無菌。10.根據(jù)權(quán)利要求5所述的預(yù)制備培養(yǎng)平皿的質(zhì)量控制方法，其特征在于，所述微生物 測試是將陽性菌液(少于100CFU/0.1 mL)用涂布棒均勻的涂布到培養(yǎng)基上，同時應(yīng)將菌液傾 倒培養(yǎng)作為陽性對照，每種微生物接種2個平板;細(xì)菌在30°C~35°C，倒置培養(yǎng)(應(yīng)為2天）， 真菌20°C~25°C，倒置培養(yǎng)5天;2個培養(yǎng)皿中微生物的計數(shù)平均值與陽性對照相比回收率 應(yīng)在70%~130%之間。
【文檔編號】C12Q1/00GK105907834SQ201610132960
【公開日】2016年8月31日
【申請日】2016年3月9日
【發(fā)明人】金如松
【申請人】浙江天杭生物科技股份有限公司