子宮內(nèi)膜癌生物標(biāo)志物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了SPARCL1作為子宮內(nèi)膜癌的診治標(biāo)志物的用途。據(jù)此可將SPARCL1用于開(kāi)發(fā)診斷子宮內(nèi)膜癌的產(chǎn)品、開(kāi)發(fā)治療子宮內(nèi)膜癌的藥物。本發(fā)明的研究成果為臨床醫(yī)師制定個(gè)性化治療方案提供理論基礎(chǔ)、并且能夠?yàn)樽訉m內(nèi)膜癌藥物的開(kāi)發(fā)提供新的藥物靶點(diǎn)。
【專利說(shuō)明】
子宮內(nèi)膜癌生物標(biāo)志物
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及癌癥診斷、治療、預(yù)測(cè)預(yù)后領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明涉及以檢測(cè)SPARCL1 異常為手段的癌癥診斷、預(yù)測(cè)預(yù)后方法;及激活SPARCL1基因或蛋白質(zhì)的癌癥治療劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 子宮內(nèi)膜癌（endometrial carcinoma或carcinoma of endometrium,EC)是發(fā)生 于子宮內(nèi)膜的一組上皮性惡性腫瘤，以來(lái)源于子宮內(nèi)膜腺體的腺癌最常見(jiàn)，為女性生殖道 三大惡性腫瘤之一，占女性全身惡性腫瘤7%，在全世界范圍不同地區(qū)其發(fā)病率有差異，是 西方工業(yè)化國(guó)家最常見(jiàn)的婦科惡性腫瘤，北美、北歐地區(qū)發(fā)病率最高，亞洲日本、印度及中 南美等地區(qū)發(fā)病率較低。我國(guó)尚缺乏子宮內(nèi)膜癌比較詳盡的流行病學(xué)調(diào)查資料，估計(jì)與日 本發(fā)病情況相仿。北美及歐洲發(fā)達(dá)國(guó)家高于發(fā)展中國(guó)家，前者是后者的10倍，其發(fā)病率位于 乳腺癌、大腸癌、肺癌之后，是女性全身第四位常見(jiàn)惡性腫瘤，位居女性生殖道惡性腫瘤第 一位。
[0003] 雖然子宮內(nèi)膜癌癥狀出現(xiàn)較早、診斷相對(duì)較容易。但是在實(shí)際臨床工作中關(guān)于子 宮內(nèi)膜癌的診斷及治療仍存在一些爭(zhēng)議。腫瘤的惡性程度及病變范圍，包括手術(shù)分期、組織 學(xué)類型、腫瘤分級(jí)、肌層浸潤(rùn)深度、淋巴轉(zhuǎn)移及子宮外轉(zhuǎn)移等與子宮內(nèi)膜癌的預(yù)后有關(guān)。因 此，早期診斷子宮內(nèi)膜癌非常重要。目前，子宮內(nèi)膜癌的診斷主要依據(jù)病史及臨床表現(xiàn)，B 超、CT及MRI等影像學(xué)檢查，診斷性刮宮，宮腔鏡，腫瘤標(biāo)志物CA-125等輔助檢查。其中CA-125還可以作為療效觀察的指標(biāo)。但CA-125的缺乏組織敏感性和特異性，在卵巢上皮性腫 瘤、子宮內(nèi)膜癌、子宮內(nèi)膜異位癥、消化系統(tǒng)腫瘤等疾病中均可檢測(cè)到CA-125水平升高。因 此，尋找對(duì)子宮內(nèi)膜癌特異性高的腫瘤標(biāo)志物成為了研究熱點(diǎn)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的之一在于提供一種通過(guò)檢測(cè)SPARCL1基因或蛋白表達(dá)差異來(lái)診斷子 宮內(nèi)膜癌的方法。
[0005] 本發(fā)明的目的之二在于提供一種通過(guò)檢測(cè)SPARCL1基因或蛋白表達(dá)差異來(lái)預(yù)測(cè)子 宮內(nèi)膜癌預(yù)后的方法。
[0006] 本發(fā)明的目的之三在于提供一種通過(guò)激活SPARCL1基因或SPARCL1蛋白來(lái)治療子 宮內(nèi)膜癌的方法。
[0007] 本發(fā)明的目的之四在于提供一種用于篩選治療子宮內(nèi)膜癌的藥物的方法。
[0008] 本發(fā)明的目的之五在于提供一種用于治療子宮內(nèi)膜癌的藥物。
[0009] 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用了如下技術(shù)方案：
[0010]本發(fā)明提供了檢測(cè)SPARCL1基因或SPARCL1蛋白的產(chǎn)品在制備子宮內(nèi)膜癌診斷工 具中的用途。
[0011]本發(fā)明還提供了檢測(cè)SPARCL1基因或SPARCL1蛋白的產(chǎn)品在制備預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌 預(yù)后工具中的用途。
[0012] 進(jìn)一步，所述檢測(cè)SPARCL1基因或SPARCL1蛋白的產(chǎn)品包括檢測(cè)SPARCL1基因或 SPARCL1蛋白的表達(dá)水平的產(chǎn)品。所述產(chǎn)品包括能夠結(jié)合SPARCL1基因的核酸或者能夠結(jié)合 SPARCL1蛋白的物質(zhì)（例如抗體）。所述核酸能夠檢測(cè)SPARCL1基因的表達(dá)水平;所述物質(zhì)能 夠檢測(cè)SPARCL1蛋白的表達(dá)水平。
[0013]本發(fā)明的檢測(cè)SPARCL1基因的產(chǎn)品可基于使用核酸分子的已知方法來(lái)發(fā)揮其功 能：如PCR、如Southern雜交、Northern雜交、點(diǎn)雜交、熒光原位雜交(FISH)、DNA微陣列、AS0 法、高通量測(cè)序平臺(tái)等。使用該產(chǎn)品可以定性地、定量地、或半定量地實(shí)施分析。
[0014] 包含在上述產(chǎn)品中的核酸可以通過(guò)化學(xué)合成來(lái)獲得，或通過(guò)從生物材料制備含有 期望核酸的基因，然后使用設(shè)計(jì)用于擴(kuò)增期望核酸的引物擴(kuò)增它來(lái)獲得。
[0015] 進(jìn)一步，所述PCR方法為已知方法，例如，ARMS (Ampl if i cat ion Refractory Mutation System，擴(kuò)增不應(yīng)突變系統(tǒng))法、RT-PCR(逆轉(zhuǎn)錄酶-PCR)法、嵌套PCR法等等。擴(kuò)增 的核酸可以通過(guò)使用點(diǎn)印跡雜交法、表面等離子共振法(SPR法）、PCR-RFLP法、原位RT-PCR 法、PCR-SS0 (序列特異性寡核苷酸）法、PCR-SSP法、AMPFLP (可擴(kuò)增片段長(zhǎng)度多態(tài)性）法、 MVR-PCR法、和PCR-SSCP (單鏈構(gòu)象多態(tài)性)法來(lái)檢測(cè)。
[0016] 上面所述的核酸包括擴(kuò)增SPARCL1基因的引物，產(chǎn)品中包括的引物可以通過(guò)通過(guò) 化學(xué)合成來(lái)制備，通過(guò)使用本領(lǐng)域技術(shù)人員知道的方法參考已知信息來(lái)適當(dāng)?shù)卦O(shè)計(jì)，并通 過(guò)化學(xué)合成來(lái)制備。
[0017] 在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述核酸為QPCR實(shí)驗(yàn)中使用的擴(kuò)增引物，所述引物 的序列如SEQ ID N0.1 (正向序列）和SEQ ID N0.2(反向序列）所示。
[0018] 上面所述的核酸還可包括探針，所述探針可以通過(guò)化學(xué)合成來(lái)制備，通過(guò)使用本 領(lǐng)域技術(shù)人員知道的方法參考已知信息來(lái)恰當(dāng)設(shè)計(jì)，并通過(guò)化學(xué)合成來(lái)制備，或者可以通 過(guò)從生物材料制備含有期望核酸序列的基因，并使用設(shè)計(jì)用于擴(kuò)增期望核酸序列的引物擴(kuò) 增它來(lái)制備。
[0019] 本發(fā)明的檢測(cè)SPARCL1蛋白的產(chǎn)品可基于使用抗體的已知方法來(lái)發(fā)揮其功能：例 如，可以包括ELI SA、放射免疫測(cè)定法、免疫組織化學(xué)法、Wes tern印跡等。
[0020] 本發(fā)明的檢測(cè)SPARCL1蛋白的產(chǎn)品包括特異性結(jié)合SPARCL1蛋白的抗體或其片段。 可以使用任何結(jié)構(gòu)、尺寸、免疫球蛋白類別、起源等的抗體或其片段，只要它結(jié)合靶蛋白質(zhì) 即可。本發(fā)明的檢測(cè)產(chǎn)品中包括的抗體或其片段可以是單克隆的或多克隆的?？贵w片段指 保留抗體對(duì)抗原的結(jié)合活性的抗體一部分(部分片段)或含有抗體一部分的肽?？贵w片段可 以包括F(at/ )2、Fat/、Fab、單鏈Fv(scFv)、二硫化物鍵合的Fv(dsFv)或其聚合物、二聚化V 區(qū)（雙抗體）、或含有CDR的肽。本發(fā)明的檢測(cè)SPARCL1蛋白的產(chǎn)品可以包括編碼抗體或編碼 抗體片段的氨基酸序列的分離的核酸，包含該核酸的載體，和攜帶該載體的細(xì)胞。
[0021 ]抗體可以通過(guò)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的方法來(lái)獲得。例如，制備保留整個(gè)或部分靶 蛋白質(zhì)的多肽或整合編碼它們的多核苷酸的哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)載體作為抗原。使用抗原免 疫動(dòng)物后，從經(jīng)過(guò)免疫的動(dòng)物獲得免疫細(xì)胞并融合骨髓瘤細(xì)胞以獲得雜交瘤。然后從雜交 瘤培養(yǎng)物收集抗體。最后可以通過(guò)使用被用作抗原的SPARCL1蛋白或其部分對(duì)獲得的抗體 實(shí)施抗原特異性純化來(lái)獲得針對(duì)SPARCL1蛋白的單克隆抗體?？梢匀缦轮苽涠嗫寺】贵w:用 與上文相同的抗原免疫動(dòng)物，從經(jīng)過(guò)免疫的動(dòng)物收集血液樣品，從血液中分離出血清，然后 使用上述抗原對(duì)血清實(shí)施抗原特異性純化?？梢酝ㄟ^(guò)用酶處理獲得的抗體或通過(guò)使用獲得 的抗體的序列信息來(lái)獲得抗體片段。
[0022] 標(biāo)記物與抗體或其片段的結(jié)合可以通過(guò)本領(lǐng)域普遍知道的方法來(lái)實(shí)施。例如，可 以如下熒光標(biāo)記蛋白質(zhì)或肽：用磷酸鹽緩沖液清洗蛋白質(zhì)或肽，添加用DMS0、緩沖劑、等準(zhǔn) 備的染料，然后混合溶液，再于室溫放置10分鐘。另外，標(biāo)記可使用商品化的標(biāo)記試劑盒，諸 如生物素標(biāo)記試劑盒，如生物素標(biāo)記試劑盒-NH2、生物素標(biāo)記試劑盒-SH (DojindoLaboratories);堿性磷酸酶標(biāo)記試劑盒諸如堿性磷酸酶標(biāo)記試劑盒-NH2、堿性磷 酸酶標(biāo)記試劑盒-SH(Dojindo Laboratories);過(guò)氧化物酶標(biāo)記試劑盒諸如過(guò)氧化物酶標(biāo) 記試劑盒-NH2、過(guò)氧化物酶標(biāo)記試劑盒-NH2(Dojindo Laboratories);藻膽蛋白標(biāo)記試劑 盒諸如藻膽蛋白標(biāo)記試劑盒-NH2、藻膽蛋白標(biāo)記試劑盒-SH、B-藻紅蛋白標(biāo)記試劑盒-NH2， B-藻紅蛋白標(biāo)記試劑盒-SH、R-藻紅蛋白標(biāo)記試劑盒-NH2、R-藻紅蛋白標(biāo)記試劑盒SH (DojindoLaboratories);焚光標(biāo)記試劑盒諸如焚光素標(biāo)記試劑盒-NH2、HiLyte Fluor(TM) 555標(biāo)記試劑盒_NH2、HiLyte Fluor(TM)647標(biāo)記試劑盒_NH2(Dojindo Laboratories);及 DyLight 547和DyLight647(Techno Chemical Corp.)、Zenon(TM)、Alexa Fluor(TM)抗體 標(biāo)記試劑盒、Qdot(TM)抗體標(biāo)記試劑盒（Invitrogen Corporation)和EZ-標(biāo)記物蛋白質(zhì)標(biāo) 記試劑盒(Funakoshi Corporation)。為了正確標(biāo)記，可以使用適宜的儀器來(lái)檢測(cè)經(jīng)過(guò)標(biāo)記 的抗體或其片段。
[0023] 作為依照本發(fā)明的檢測(cè)產(chǎn)品的樣品，可以使用例如自活檢受試者獲得的組織樣品 或流體。樣品不受特別限制，只要它適于本發(fā)明的測(cè)定;例如，它可以包括組織、血液、血漿、 血清、淋巴液、尿液、漿膜腔液、脊髓液、滑液、房水、淚液、唾液、或其級(jí)分或經(jīng)過(guò)處理的材 料。
[0024] 在本發(fā)明的具體實(shí)施方案中，所述樣品來(lái)自受試者的組織。
[0025] 在本發(fā)明中，"預(yù)后"是指癌癥患者在通過(guò)手術(shù)處理等抑制或緩解腫瘤生長(zhǎng)后的過(guò) 程或結(jié)果。在本說(shuō)明書中，預(yù)后可以是通過(guò)手術(shù)處理抑制或緩解腫瘤生長(zhǎng)后1、2、3、4、5、6、 7、8、9、10、15、20年或更久時(shí)的生機(jī)狀態(tài)。預(yù)后可以通過(guò)檢查生物標(biāo)志物即3?六1?(^1蛋白或 編碼SPARCL1蛋白的基因來(lái)預(yù)測(cè)。預(yù)后預(yù)測(cè)可以這樣進(jìn)行:根據(jù)生物標(biāo)志物的有或無(wú)，或者 升高或降低，確定患者的預(yù)后是良好還是不良，或者確定良好預(yù)后或不良預(yù)后的概率。
[0026] 在本發(fā)明中，"預(yù)后良好"是指在通過(guò)手術(shù)處理等為患者抑制或緩解腫瘤生長(zhǎng)之 后，患者長(zhǎng)時(shí)期(例如3、5、6、7、8、9、10、15、20年或更長(zhǎng))沒(méi)有危急狀況。或者，預(yù)后好可以意 指在這樣長(zhǎng)時(shí)間內(nèi)存活、無(wú)轉(zhuǎn)移、無(wú)復(fù)發(fā)、或無(wú)再發(fā)。例如，預(yù)后良好可以意指至少3年或尤 其是至少5年存活，優(yōu)選沒(méi)有轉(zhuǎn)移或復(fù)發(fā)。預(yù)后良好最優(yōu)選的狀態(tài)是長(zhǎng)期無(wú)疾病的存活。如 本文中所使用的，"預(yù)后良好"還可以包括任何這樣的狀態(tài)，其中可以發(fā)現(xiàn)疾病如轉(zhuǎn)移，但是 惡性低且不嚴(yán)重地影響生存能力。
[0027] 在本發(fā)明中，"預(yù)后不良"是指患者在通過(guò)手術(shù)處理等抑制或緩解腫瘤生長(zhǎng)后的短 時(shí)期（例如1、2、3、4、5年或更短）內(nèi)發(fā)生致命狀況?；蛘?，預(yù)后差是指在這樣的短時(shí)期里死 亡、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)、或再發(fā)。例如，預(yù)后差可以意指至少3年或尤其至少5年內(nèi)復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移、或死 亡。
[0028] 預(yù)測(cè)預(yù)后是指預(yù)測(cè)患者狀況的過(guò)程或結(jié)果，并不意味著能以100%的準(zhǔn)確度預(yù)測(cè) 患者狀況的過(guò)程或結(jié)果。預(yù)測(cè)預(yù)后是指確定某些過(guò)程或結(jié)果的可能性是否增加，而并不意 味著通過(guò)與某些過(guò)程或結(jié)果不發(fā)生的情況比較來(lái)確定發(fā)生某些過(guò)程或結(jié)果的可能性。如本 發(fā)明而言，本發(fā)明中SPARCL1基因或SPARCL1蛋白的水平降低的患者中，與不顯示該特征的 患者相比，更有可能觀察到特定過(guò)程或結(jié)果。
[0029] 進(jìn)一步，所述檢測(cè)SPARCL1基因或SPARCL1蛋白的產(chǎn)品可以是檢測(cè)SPARCL1基因或 SPARCL1蛋白的試劑、也可以是包含所述試劑的試劑盒、芯片、試紙等，也可以是使用所述試 劑的高通量測(cè)序平臺(tái)。
[0030]本發(fā)明還提供了一種診斷子宮內(nèi)膜癌的工具，所述工具能夠檢測(cè)SPARCL1基因或 SPARCL 1蛋白的表達(dá)水平。所述工具包括能夠結(jié)合SPARCL 1基因的核酸或者能夠結(jié)合 SPARCL1蛋白的物質(zhì)（例如抗體）。所述核酸能夠檢測(cè)SPARCL1基因的表達(dá)水平;所述物質(zhì)能 夠檢測(cè)SPARCL1蛋白的表達(dá)水平。
[0031]進(jìn)一步，所述核酸和所述物質(zhì)的性質(zhì)同前面所述。
[0032] 進(jìn)一步，所述診斷子宮內(nèi)膜癌的工具包括但不限于芯片、試劑盒、試紙、或高通量 測(cè)序平臺(tái)；高通量測(cè)序平臺(tái)是一種特殊的診斷子宮內(nèi)膜癌的工具，隨著高通量測(cè)序技術(shù)的 發(fā)展，對(duì)一個(gè)人的基因表達(dá)譜的構(gòu)建將成為十分便捷的工作。通過(guò)對(duì)比疾病患者和正常人 群的基因表達(dá)譜，容易分析出哪個(gè)基因的異常與疾病相關(guān)。因此，在高通量測(cè)序中獲知 SPARCL1基因的異常與子宮內(nèi)膜癌相關(guān)也屬于SPARCL1基因的用途，同樣在本發(fā)明的保護(hù)范 圍之內(nèi)。
[0033] 本發(fā)明還提供了一種預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的工具，所述預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌預(yù)后工具 包括能夠結(jié)合SPARCL1基因的核酸或者能夠結(jié)合SPARCL1蛋白的物質(zhì)(例如抗體）。所述核酸 能夠檢測(cè)SPARCL1基因的mRNA水平;所述物質(zhì)能夠檢測(cè)SPARCL1蛋白的表達(dá)水平。
[0034]進(jìn)一步，所述核酸和所述物質(zhì)的性質(zhì)同前面所述。
[0035] 進(jìn)一步，所述預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的工具包括但不限于芯片、試劑盒、試紙、或高 通量測(cè)序平臺(tái)；高通量測(cè)序平臺(tái)是一種特殊的診斷子宮內(nèi)膜癌的工具，隨著高通量測(cè)序技 術(shù)的發(fā)展，對(duì)一個(gè)人的基因表達(dá)譜的構(gòu)建將成為十分便捷的工作。通過(guò)對(duì)比疾病患者和正 常人群的基因表達(dá)譜，容易分析出哪個(gè)基因的異常與疾病相關(guān)。因此，在高通量測(cè)序中獲知 SPARCL1基因的異常與子宮內(nèi)膜癌相關(guān)也屬于SPARCL1基因的用途，同樣在本發(fā)明的保護(hù)范 圍之內(nèi)。
[0036] 本發(fā)明的檢測(cè)產(chǎn)品、診斷工具中使用的抗SPARCL1抗體或其片段所識(shí)別的氨基酸 的數(shù)目沒(méi)有特別限制，只要抗體能夠結(jié)合SPARCL1即可。
[0037] 本發(fā)明還提供了一種診斷子宮內(nèi)膜癌或預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的方法，所述方法包 括如下步驟：
[0038] (1)獲取受試者的樣品；
[0039 ] (2)檢測(cè)受試者樣品中SPARCL1基因或蛋白的表達(dá)水平；
[0040] (3)將測(cè)得的SPARCL1基因或蛋白的表達(dá)水平與受試者的患病與否關(guān)聯(lián)起來(lái)。
[0041] (4)與對(duì)照相比，SPARCL1基因或蛋白的表達(dá)水平降低，則該受試者被診斷為子宮 內(nèi)膜癌，或該受試者被確定為預(yù)后不良。
[0042]本發(fā)明還提供了一種子宮內(nèi)膜癌的治療方法，所述方法包括激活SPARCL1基因或 SPARCL1蛋白。
[0043]進(jìn)一步，所述方法包括促進(jìn)SPARCL1基因的表達(dá)，或促進(jìn)SPARCL1蛋白的表達(dá)或增 強(qiáng)SPARCL1蛋白的活性。
[0044] 本發(fā)明還提供了一種癌癥藥物的篩選方法，可以通過(guò)在對(duì)癌細(xì)胞添加測(cè)試藥物后 或在對(duì)癌癥模型動(dòng)物施用測(cè)試藥物后的某個(gè)時(shí)期測(cè)量SPARCL1基因或者SPARCL1蛋白的表 達(dá)水平來(lái)測(cè)定癌癥藥物改善癌癥預(yù)后的效果。更具體地說(shuō)，當(dāng)SPARCL1基因或者SPARCL1蛋 白的表達(dá)水平在添加或施用測(cè)試藥物后升高時(shí)或者恢復(fù)正常水平時(shí)，可選擇該藥物作為改 善癌癥預(yù)后的治療藥物。
[0045] 本發(fā)明還提供了一種含有SPARCL1基因或SPARCL1蛋白的激活劑的藥物。
[0046] 本發(fā)明還提供了上述激活劑在制備治療子宮內(nèi)膜癌的藥物中的應(yīng)用。
[0047]本發(fā)明的SPARCL1基因或SPARCL1蛋白的激活劑不受限制，只要是可以促進(jìn)或者增 強(qiáng)SPARCL1或涉及SPARCL1上游或下游途徑的物質(zhì)的表達(dá)或活性，且對(duì)于治療癌癥有效的藥 物即可。
[0048] 進(jìn)一步，所述激活劑包括SPARCL1基因、SPARCL1蛋白、促進(jìn)型miRNA、促進(jìn)型轉(zhuǎn)錄調(diào) 控因子、或促進(jìn)型靶向小分子化合物。
[0049] 所述激活劑還包括包含攜帶SPARCL1基因的載體或者宿主細(xì)胞。
[0050] 本發(fā)明的激活劑一方面可以用于補(bǔ)充內(nèi)源性的SPARCL1蛋白的缺失或不足，通過(guò) 提尚SPARCL1蛋白的表達(dá)，從而治療因 SPARCL1蛋白缺之導(dǎo)致的子宮內(nèi)U旲癌。另一方面可以 用于增強(qiáng)SPARCL1蛋白的活性，從而治療子宮內(nèi)膜癌。
[0051] 本發(fā)明的藥物可以作為醫(yī)藥單獨(dú)施用或與其它藥物一起施用?？梢耘c本發(fā)明的藥 物一起施用的其它藥物不受限制，只要它不損害本發(fā)明的治療性或預(yù)防性藥物的效果即 可，優(yōu)選的是，用于治療或預(yù)防癌癥的藥物可以包括例如烷化劑，諸如異環(huán)磷酰胺、環(huán)磷酰 胺、達(dá)卡巴嗪、替莫唑胺、尼莫司汀、白消安、丙卡巴肼、美法侖、和雷莫司汀;抗代謝物，諸如 依諾他濱、卡培他濱、卡莫氟、克拉屈濱、吉西他濱、阿糖胞苷、阿糖胞苷十八烷基磷酸鹽 (cytarabine ocfosfate)、替加氟、替加氟-尿啼啶、替加氟吉美啼啶奧替拉西鉀、去氧氟尿 苷、羥基脲、氟尿嘧啶、氟達(dá)拉濱、培美曲塞、噴司他丁、巰嘌呤、和甲氨蝶呤;植物生物堿，諸 如伊立替康、依托泊苷、索布佐生、多西他賽、nogitecan、帕利他賽、長(zhǎng)春瑞濱、長(zhǎng)春地辛、和 長(zhǎng)春堿;抗癌抗生素，諸如放線菌素 D、阿柔比星、氨柔比星、伊達(dá)比星、表柔比星、凈司他丁 stimalamer、柔紅霉素、多柔比星、啦柔比星、博來(lái)霉素、培洛霉素、絲裂霉素 C、和米托蒽醌； 基于鉑的藥物，諸如奧沙利鉑、卡鉑、順鉑、和奈達(dá)鉑;激素藥物，諸如阿那曲唑、依西美坦、 雌莫司汀、炔雌醇、氯地孕酮、戈舍瑞林、他莫昔芬、地塞米松、托瑞米芬、比卡魯胺、氟他胺、 潑尼松龍、磷雌酚、米托坦、甲睪酮、甲羥孕酮、美雄烷、亮丙瑞林、和來(lái)曲唑；生物反應(yīng)修飾 劑，諸如干擾素 α、干擾素 β、干擾素 γ、白介素、烏苯美司、干BCG、和香菇多糖;和分子靶向藥 物，諸如伊馬替尼（imatinib)、吉非替尼(gefitinib)、吉姆單抗、奧佐米星、他米巴羅汀、曲 妥單抗、維A酸、硼替佐米(bortezomib)、和利妥昔單抗等。
[0052]本發(fā)明的藥物可根據(jù)需要制備成各種劑型。包括但不限于，經(jīng)皮、粘膜、鼻、口頰、 舌下或經(jīng)口使用的片劑、溶液劑、顆粒劑、貼劑、膏劑、膠囊劑、氣霧劑或栓劑。
[0053]本發(fā)明的藥物的施用途徑不受限制，只要它能發(fā)揮期望的治療效果或預(yù)防效果即 可，包括但不限于靜脈內(nèi)，腹膜內(nèi)，眼內(nèi)，動(dòng)脈內(nèi)，肺內(nèi)，口服，小泡內(nèi)，肌肉內(nèi)，氣管內(nèi)，皮下 的，通過(guò)皮膚，通過(guò)胸膜，局部的，吸入，通過(guò)粘膜，皮膚，腸胃，關(guān)節(jié)內(nèi)，心室內(nèi)，直腸，陰道， 顱骨內(nèi)，尿道內(nèi)，肝內(nèi)，瘤內(nèi)。在某些情況下，可以系統(tǒng)地給藥。在某些情況下是局部地給藥。 [0054]本發(fā)明的藥物的劑量不受限制，只要獲得期望的治療效果或者預(yù)防效果即可，可 以依據(jù)癥狀、性別、年齡等來(lái)恰當(dāng)?shù)拇_定。本發(fā)明的治療藥物或預(yù)防藥物的劑量可以使用例 如對(duì)疾病的治療效果或者預(yù)防效果作為指標(biāo)來(lái)確定。
[0055] 在本發(fā)明的上下文中，"診斷子宮內(nèi)膜癌"既包括判斷受試者是否已經(jīng)患有子宮內(nèi) 膜癌、也包括判斷受試者是否存在患有子宮內(nèi)膜癌的風(fēng)險(xiǎn)。
[0056] 本文所用的"治療"涵蓋患有相關(guān)疾病或病癥的哺乳動(dòng)物例如人類中治療相關(guān)的 疾病或疾病狀態(tài)，并且包括：
[0057] (1)預(yù)防疾病或疾病狀態(tài)在哺乳動(dòng)物中發(fā)生，尤其是當(dāng)該哺乳動(dòng)物易感于所述疾 病狀態(tài)，但尚未被診斷出患有這種疾病狀態(tài)時(shí)；
[0058] (2)抑制疾病或疾病狀態(tài)，即阻止其發(fā)生;或者
[0059] (3)緩解疾病或疾病狀態(tài)，即使疾病或疾病狀態(tài)消退。
[0060] 術(shù)語(yǔ)"治療"通常涉及治療人類或動(dòng)物(例如，被獸醫(yī)所應(yīng)用），其中可達(dá)到某些預(yù) 期的治療效果，例如，抑制病癥的發(fā)展(包括降低發(fā)展速度、使發(fā)展停止）、改善病癥和治愈 病癥。還包括作為預(yù)防措施(例如預(yù)防）的治療。對(duì)還沒(méi)有發(fā)展為病癥但有發(fā)展為該病癥危 險(xiǎn)的患者的用途，也包括在術(shù)語(yǔ)"治療"中。
[0061] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)和有益效果：
[0062] 本發(fā)明的發(fā)現(xiàn)了一種診斷子宮內(nèi)膜癌的分子標(biāo)志物，使用該分子標(biāo)志物可以在子 宮內(nèi)膜癌發(fā)生的早期即可作為判斷，提供了患者的生存率。
[0063]另外，通過(guò)預(yù)測(cè)患者的預(yù)后，本發(fā)明能夠提供有意義的信息來(lái)為患者決定治療方 案策略。
[0064]本發(fā)明的包括SPARCL1基因或蛋白的激活劑的治療藥物可用作新的子宮內(nèi)膜癌的 治療藥物。
【附圖說(shuō)明】
[0065] 圖1顯示利用Western blot檢測(cè)SPARCL1蛋白在子宮內(nèi)膜癌組織與正常子宮內(nèi)膜 組織中的表達(dá)情況；
[0066] 圖2顯示利用Western blot檢測(cè)SPARCL1基因過(guò)表達(dá)情況。
[0067]具體的實(shí)施方式
[0068] 下面結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的說(shuō)明。以下實(shí)施例僅用于說(shuō)明本 發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件的實(shí)驗(yàn)方法，通常按照常規(guī)條 件，例如Sambrook等人，分子克?。簩?shí)驗(yàn)室手冊(cè)(New York:Cold Spring HarborLaboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。
[0069] 實(shí)施例1基因芯片篩選差異表達(dá)基因
[0070] 1、樣本收集：
[0071] 子宮內(nèi)膜癌組織樣本:收集子宮內(nèi)膜癌患者，全部患者均經(jīng)手術(shù)治療，手術(shù)石蠟標(biāo) 本10例。所有患者均經(jīng)過(guò)病理檢查確診患有子宮內(nèi)膜癌。其他入組條件為:所有患者入院前 未接受過(guò)任何治療:未合并其他惡性腫瘤;未合并其他激素相關(guān)性疾病;臨床資料完整。 [0072] 10例子宮內(nèi)膜癌患者，發(fā)病平均年齡58歲?；颊咧饕R床表現(xiàn)為陰道不規(guī)則出血、 下腹痛、月經(jīng)紊亂、陰道排液等，亦有部分患者無(wú)明顯癥狀而于健康查體發(fā)現(xiàn)。子宮內(nèi)膜癌 標(biāo)本經(jīng)HE染色切片，組織形態(tài)學(xué)確診為子宮內(nèi)膜癌。
[0073] 正常子宮內(nèi)膜組織樣本：10例正常子宮內(nèi)膜手術(shù)石蠟標(biāo)本。樣本來(lái)源的病人所患 疾病包括:子宮肌瘤、子宮脫垂、膀朧膨出、直腸膨出。
[0074] 2、組織RNA的獲取
[0075] 使用Trizol-步法提取組織總RNA，通過(guò)Nanodrop ND-1000讀取260nm和280nm處 的吸光度值(A)測(cè)定RNA溶液的純度。經(jīng)1%甲醛變性瓊脂糖凝膠電泳，紫外透射光下觀察， 檢測(cè)RNA的完整性。
[0076] 3、基因芯片雜交及掃描
[0077] 總RNA經(jīng)線性化擴(kuò)增后，cy3-UTP標(biāo)記，熒光標(biāo)記后的cRNAs采用RNEASY Mini Kit 純化，用Amhion的RNA Fragmentation Reagents對(duì)標(biāo)記好的cRNAs進(jìn)行片段化處理。采用美 國(guó)Agilent公司的人全基因表達(dá)譜芯片(4x 44K基因），在芯片雜交爐中65°C雜交17h，然后 洗脫、染色，最后用Agilent DNA MicroarrayScanner掃描儀掃描。
[0078] 4、芯片數(shù)據(jù)處理與分析
[0079] 雜交后的芯片經(jīng)芯片掃描儀讀取數(shù)據(jù)點(diǎn)后，將數(shù)據(jù)導(dǎo)入分析軟件，對(duì)于兩組比值 的自然對(duì)數(shù)絕對(duì)值大于2.0或小于0.5的基因作為差異表達(dá)基因。
[0080] 5、統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
[0081] 采用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間差異比較采用單因素方差分析法，P〈 0.05差異有顯著性意義。
[0082] 6、結(jié)果
[0083] 芯片結(jié)果顯示，子宮內(nèi)膜癌組織與正常子宮內(nèi)膜組織之間共篩選出654個(gè)差異表 達(dá)基因，其中表達(dá)水平上調(diào)的基因421個(gè)，表達(dá)水平下調(diào)的基因233個(gè)。
[0084]實(shí)施例2大樣本驗(yàn)證篩選出的差異表達(dá)基因
[0085]考慮現(xiàn)有技術(shù)中還未見(jiàn)關(guān)于該基因與子宮內(nèi)膜癌相關(guān)性進(jìn)行研究的基因作為候 選基因，同時(shí)考慮基因測(cè)序的結(jié)果，選擇SPARCL1基因（其表達(dá)在子宮內(nèi)膜癌組織中下調(diào))進(jìn) 行驗(yàn)證。
[0086] 1、樣本收集
[0087]按照實(shí)施例1的方法收集子宮內(nèi)膜癌組織50例，正常子宮內(nèi)膜組織60例。
[0088] 2、在mRNA水平上進(jìn)行驗(yàn)證
[0089] 2.1提取組織RNA
[0090] 步驟同實(shí)施例1。
[0091] 2.2逆轉(zhuǎn)錄
[0092] 使用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒，用逆轉(zhuǎn)錄緩沖液對(duì)lyg總RNA進(jìn)行逆反錄合成cDNA。采用25μ1 反應(yīng)體系，每個(gè)樣品取lyg總RNA作為模板RNA，在PCR管中分別加入以下組分:DEPC水，5 X逆 轉(zhuǎn)錄緩沖液，10mm〇l/l dNTP，0.1mmol/l DTT，30ymmol/l Oligo (1Τ，20〇υ/μ1 MMLVRT，模板 RNA。42 °C孵育1小時(shí)，72 °C 10分鐘，短暫離心。
[0093] 2.3PCR
[0094] 使用引物設(shè)計(jì)軟件Primer Premier 5.0設(shè)計(jì)mRNA焚光定量上下游PCR引物，合成 引物序列，使用SYBR Green PCR Master Mix試劑盒操作，具體步驟按說(shuō)明書進(jìn)行操作，采 用25μ1反應(yīng)體系，每個(gè)樣本設(shè)置3個(gè)平行管，所有擴(kuò)增反應(yīng)均重復(fù)三次以上以保證結(jié)果的可 靠性。配制以下反應(yīng)體系(如表1所示），各項(xiàng)操作均于冰上進(jìn)行：
[0096]
[0095] 表1熒光定量PCR各組分及相應(yīng)體積
[0097]
[0098] 以GAH)H為內(nèi)參，以SYBR Green I作為熒光標(biāo)記物，在Light Cycler熒光定量PCR 儀上進(jìn)行PCR反應(yīng)，通過(guò)融解曲線分析和電泳確定目的條帶，△ ACT法進(jìn)行相對(duì)定量。
[0099] SPARCL1基因引物序列如下所示：
[0100] 上游引物：5'-TCAATAAGCACATTCAAG-3'（SEQ ID N0.1);
[0101] 下游引物：5'-ATTACCATCATCAGTAGG-3'（SEQ ID N0.2)。
[0102] GAPDH基因引物序列如下所示：
[0103] 上游引物：5'-TTTAACTCTGGTAAAGTGGATAT-3'（SEQ ID N0.3);
[0104] 下游引物：5'-GGTGGAATCATATTGGAACA-3'（SEQ ID N0.4)。
[0105] 2.4結(jié)果
[0106] 結(jié)果顯示，與正常子宮內(nèi)膜組織相比，子宮內(nèi)膜癌組織中SPARCL1基因的mRNA水平 明顯下調(diào)，相對(duì)表達(dá)量為〇. 18 ±0.012，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.05)。
[0107] 3、在蛋白水平上進(jìn)行驗(yàn)證
[0108] 3.1提取組織總蛋白
[0109]按照EpiQuik組織/細(xì)胞總蛋白提取試劑盒的說(shuō)明書進(jìn)行蛋白提取的操作。
[0110] 3.2Western blot檢測(cè)
[0111] 將提取的蛋白定量進(jìn)行SDS-PAGE電泳，之后進(jìn)行轉(zhuǎn)膜、封閉、一抗孵育、二抗孵育、 顯色。
[0112] 3.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
[0113]將蛋白條帶的灰度值使用Image J軟件進(jìn)行分析，以β-actin為內(nèi)參，將SPARCL1蛋 白條帶的灰度值進(jìn)行歸一化處理。結(jié)果數(shù)據(jù)都是以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差的方式來(lái)表示，采用 SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件來(lái)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析的，兩者之間的差異采用t檢驗(yàn)，認(rèn)為當(dāng)P〈0.05時(shí)具有統(tǒng) 計(jì)學(xué)意義。
[0114] 3.4 結(jié)果
[0115]結(jié)果如圖1所示，與正常子宮內(nèi)膜組織相比，子宮內(nèi)膜癌組織中SPARCL1蛋白水平 顯著降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈〇. 05)。
[0116] 實(shí)施例3 SPARCL1基因過(guò)表達(dá)
[0117] 1、質(zhì)粒構(gòu)建
[0118] 根據(jù)SPARCL1基因的編碼序列設(shè)計(jì)擴(kuò)增引物，引物的設(shè)計(jì)為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟 知。從成人胎腦的cDNA文庫(kù)(clontech公司，貨號(hào)：638831)中擴(kuò)增全長(zhǎng)的5?六1?(^1基因的編 碼序列，上述cDNA序列插入到真核細(xì)胞表達(dá)載體pcDNA3. 1中，連接獲得的重組載體 pcDNA3.1-SPARCL1用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
[0119] 2、子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的培養(yǎng)與轉(zhuǎn)染
[0120] 2.1細(xì)胞培養(yǎng)
[0121] Ishikawa3-H-12細(xì)胞系均用50ml的培養(yǎng)瓶貼壁培養(yǎng)于RPMI 1640培養(yǎng)基(含10% 胎牛血清，l〇〇U/ml青霉素，100g/ml鏈霉素）中，在37 °C，5 %⑶2飽和濕度的培養(yǎng)箱中連續(xù)培 養(yǎng)。
[0122] 2.2細(xì)胞轉(zhuǎn)染
[0123] 1、轉(zhuǎn)染前一天將0.5_2*105個(gè)腫瘤細(xì)胞懸浮于500μ1不含抗生素的培養(yǎng)基，接種至 24孔培養(yǎng)板。
[0124] 2、轉(zhuǎn)染當(dāng)天細(xì)胞密度應(yīng)達(dá)80%-90%，準(zhǔn)備以下復(fù)合物Α:將lyg質(zhì)粒DNA稀釋于無(wú) 血清培養(yǎng)基中，輕輕混勾；復(fù)合物B:取4μ1 Lipofectamine2000稀釋于無(wú)血清培養(yǎng)基中，混 勻。
[0125] 3、將復(fù)合物A和B混合，輕輕混勻，室溫孵育。
[0126] 4、將100μ1脂質(zhì)體復(fù)合體加入腫瘤細(xì)胞中，上下左右輕輕混勻，將細(xì)胞放入37°C含 5 % C02培養(yǎng)箱孵育5-7小時(shí)。
[0127] 5、加 lml含有2倍正常血清和抗生素濃度的生長(zhǎng)培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞18-24小時(shí)。
[0128] 3、利用QPCR實(shí)驗(yàn)檢測(cè)pcDNA3.1-SPARCL1的過(guò)表達(dá)情況
[0129] 3.1提取細(xì)胞總RNA利用常規(guī)方法進(jìn)行操作。
[0130] 3.2逆轉(zhuǎn)錄
[0131] 步驟同實(shí)施例2。
[0132] 3.3QPCR
[0133] 步驟同實(shí)施例2。
[0134] 3.4 結(jié)果
[0135] 結(jié)果顯示，pcDNA3.1-SPARCL1能夠成功過(guò)表達(dá)，相對(duì)表達(dá)量為5.94 ± 0.78，差異具 有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈〇.〇5)。
[0136] 3、Western blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)pcDNA3 · 1-SPARCL1 過(guò)表達(dá)情況
[0137] 步驟同實(shí)施例2。
[0138] 結(jié)果如圖2所示，與轉(zhuǎn)染pcDNA3. 1組相比，轉(zhuǎn)染pcDNA3. 1-SPARCL1的細(xì)胞中 SPARCL1蛋白的含量明顯增加，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.05)。
[0139] 實(shí)施例4 SPARCL1基因的表達(dá)對(duì)子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞增殖能力的測(cè)定
[0140] 1、步驟：
[0141] 應(yīng)用5-溴-2'脫氧尿嘧啶(Brd U)標(biāo)記及檢測(cè)試劑盒。參照試劑盒使用說(shuō)明，細(xì)胞 轉(zhuǎn)染(轉(zhuǎn)染步驟同實(shí)施例3)48小時(shí)后，吸棄培養(yǎng)基，加入Brd U標(biāo)記培養(yǎng)基，37°C，5 %⑶2培 養(yǎng)箱中培育60min。棄去培養(yǎng)基，PBS沖洗后，以70 %乙醇固定，過(guò)夜。用一抗為小鼠的抗Brd U抗體，二抗為帶FITC的抗小鼠的熒光抗體，進(jìn)行免疫反應(yīng)。然后進(jìn)行流式細(xì)胞學(xué)檢測(cè)。
[0142] 2、Brd U摻入結(jié)果：
[0143] 結(jié)果顯示：轉(zhuǎn)染pcDNA3 · 1細(xì)胞組摻入率平均為：（28 · 59 ± 1 · 37) % ; pcDNA3 · 1-SPARCL1細(xì)胞組摻入率平均為（11.64 ±0.53) %，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.05)。上述實(shí)驗(yàn) 結(jié)果表明，SPARCL1基因表達(dá)抑制了子宮內(nèi)膜癌細(xì)胞的增殖。
[0144] 實(shí)施例7 Transwell實(shí)驗(yàn)檢測(cè)SPARCL1基因表達(dá)對(duì)細(xì)胞迀移的影響
[0145] 步驟：
[0146] 1、從-80 °C的冰箱中取出凍存的Matr i ge 1物，然后在4 °C溫度條件下過(guò)夜，使其變 成液體。
[0147] 2、取出200μ1無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基，加入50μ1的Matrigel試劑，在低溫條件，最好是 在冰面上操作將其混和均勻，然后各加入1〇〇μ1，放在37°C，二氧化碳的培養(yǎng)箱中培育5h，此 間常觀察液體情況，當(dāng)液體變成稍白色時(shí)，說(shuō)明其已變?yōu)槟虘B(tài)。
[0148] 3、將轉(zhuǎn)染過(guò)的細(xì)胞(按照實(shí)施例3步驟操作）用胰酶消化，用不含血清的培養(yǎng)基清 洗3次，然后計(jì)數(shù)，再將其配成細(xì)胞懸浮液。
[0149] 4、用無(wú)血清的培養(yǎng)基將凝膠輕輕洗1次，然后將2*105細(xì)胞懸浮于100μΙ RPMI 1640中，再接種于transwell上室。
[0150] 5、下室加600μ1 10%FBS RPMI 1640。
[0151] 6、37 °C培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)12h后，取出transwe 11小室，每組均重復(fù)4個(gè)樣本。
[0152] 7、其中1個(gè)小室棄去培養(yǎng)基，用無(wú)鈣的roS洗3遍，4%多聚甲酵固定lOmin，棉簽擦 掉上層未迀移的細(xì)胞，PBS洗3遍，結(jié)晶紫染色或Giemsa染色，在顯微鏡下觀察。剩余3個(gè)小室 將其下層迀移細(xì)胞用0.25%膜蛋白酶消化，計(jì)算迀移細(xì)胞數(shù)。
[0153] 結(jié)果：
[0154] 迀移實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染pcDNA3. 1細(xì)胞組細(xì)胞迀移個(gè)數(shù)平均為242個(gè)，轉(zhuǎn)染 pcDNA3.1-SPARCL1細(xì)胞組細(xì)胞迀移個(gè)數(shù)平均為147個(gè)，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P〈0.05)。
[0155] 上述實(shí)施例的說(shuō)明只是用于理解本發(fā)明的方法及其核心思想。應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本 領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以對(duì)本發(fā)明進(jìn)行若干改進(jìn) 和修飾，這些改進(jìn)和修飾也將落入本發(fā)明權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 檢測(cè)SPARCL1基因或SPARCL1蛋白的產(chǎn)品在制備診斷子宮內(nèi)膜癌或預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌 預(yù)后的工具中的應(yīng)用。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征在于，所述檢測(cè)SPARCL1基因或SPARCL1蛋白的產(chǎn) 品包括檢測(cè)SPARCL1基因或SPARCL1蛋白的表達(dá)水平的產(chǎn)品。3. 根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述產(chǎn)品包括能夠結(jié)合SPARCL1基因的 核酸或者能夠結(jié)合SPARCL1蛋白的物質(zhì)；所述核酸能夠檢測(cè)SPARCL1基因的表達(dá)水平;所述 物質(zhì)能夠檢測(cè)SPARCL1蛋白的表達(dá)水平。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述核酸是實(shí)時(shí)定量PCR中使用的特異擴(kuò) 增SPARCL1基因的引物如SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO.2所示。5. -種診斷子宮內(nèi)膜癌或預(yù)測(cè)子宮內(nèi)膜癌預(yù)后的工具，其特征在于，所述工具包括能 夠檢測(cè)SPARCL1基因或SPARCL1蛋白的表達(dá)水平的工具。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的工具，其特征在于，所述工具包括能夠結(jié)合SPARCL1基因的核 酸或者能夠結(jié)合SPARCL1蛋白的物質(zhì)；所述核酸能夠檢測(cè)SPARCL1基因的表達(dá)水平;所述物 質(zhì)能夠檢測(cè)SPARCL1蛋白的表達(dá)水平。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的工具，其特征在于，所述核酸是實(shí)時(shí)定量PCR中使用的特異擴(kuò) 增SPARCL1基因的引物如SEQ ID NO. 1和SEQ ID NO.2所示。8. -種治療子宮內(nèi)膜癌的藥物，其特征在于，所述藥物包含SPARCL1基因或SPARCL1蛋 白的激活劑。9. 根據(jù)權(quán)利要求8所述的藥物，其特征在于，所述激活劑能夠促進(jìn)或增強(qiáng)SPARCL1或涉 及SPARCL1上游或下游途徑的物質(zhì)的表達(dá)或活性。10. 權(quán)利要求8或9所述的激活劑在制備治療子宮內(nèi)膜癌的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P35/00GK105907879SQ201610491574
【公開(kāi)日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2016年6月29日
【發(fā)明人】楊承剛, 任靜
【申請(qǐng)人】北京泱深生物信息技術(shù)有限公司