成纖維細(xì)胞混合物及其制備和使用方法
【專利摘要】本公開提供了一種非自體產(chǎn)品，所述產(chǎn)品是兩種以上同源或異源的分離自不同個(gè)體的成纖維細(xì)胞的細(xì)胞或組織培養(yǎng)物、或來自培養(yǎng)物的提取物、或培養(yǎng)基的混合物。所述細(xì)胞或因子被共混在賦予接受者的皮膚所期望的特性的產(chǎn)品中，所述接受者不是所述混合物的來源。本公開還涉及制備和使用和/或培養(yǎng)所述成纖維細(xì)胞的方法，所述方法包括對(duì)所述混合物的效能進(jìn)行優(yōu)化以賦予接受者的皮膚一種或多種所期望的特性。
【專利說明】
成纖維細(xì)胞混合物及其制備和使用方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本公開涉及兩種以上分離自不同個(gè)體的同源或異源的成纖維細(xì)胞的組織培養(yǎng)物、 或來自所述培養(yǎng)物的提取物、或者培養(yǎng)基的混合物。本公開還涉及應(yīng)用此類成纖維細(xì)胞培 養(yǎng)物、細(xì)胞共培養(yǎng)物、來自細(xì)胞的提取物、形成所述細(xì)胞培養(yǎng)物或培養(yǎng)基的可擴(kuò)散要素(單 獨(dú)或與環(huán)境條件配合)使細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)其產(chǎn)生其因子或要素（由所述細(xì)胞產(chǎn)生或提取自 所述細(xì)胞)的陣列。本公開還涉及將上述細(xì)胞或因子共混在產(chǎn)品中，所述產(chǎn)品對(duì)接受者的皮 膚賦予所期望的的特性，所述接受者不是所述混合物或任何個(gè)體成纖維細(xì)胞的來源，即，非 自體(non-autologous)。本公開還涉及制備和使用和/或培養(yǎng)所述成纖維細(xì)胞及其混合物 的方法，包括優(yōu)化混合物中的所述細(xì)胞或因子的潛能或效能以對(duì)接受者的皮膚賦予所期望 的特性的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 成纖維細(xì)胞的主要功能之一是通過連續(xù)分泌胞外基質(zhì)的前體來維持結(jié)締組織的 結(jié)構(gòu)完整性。成纖維細(xì)胞分泌胞外基質(zhì)的所有成分的前體，主要是基質(zhì)和各種纖維或結(jié)構(gòu) 蛋白。成纖維細(xì)胞也分泌小分子量可擴(kuò)散因子，小分子量可擴(kuò)散因子影響并協(xié)調(diào)相鄰細(xì)胞 的功能和產(chǎn)物從而增強(qiáng)組織響應(yīng)。胞外基質(zhì)的組成極大地決定了結(jié)締組織的物理性質(zhì)。
[0003] 本領(lǐng)域已知有利用自體成纖維細(xì)胞（即，獲取成纖維細(xì)胞的供體也是經(jīng)過培養(yǎng)的 所述成纖維細(xì)胞的接受者)的方法。在這類成纖維細(xì)胞的已知應(yīng)用中，存在通過施用經(jīng)培養(yǎng) 的成纖維細(xì)胞來促進(jìn)傷口（例如，表皮傷口或痿管）愈合的方法;通過增大與聲帶缺陷相鄰 的組織進(jìn)行的校正手術(shù)方法;和治療聲襞瘢痕以及修復(fù)皮膚和軟組織缺陷的方法。
[0004] 本領(lǐng)域還已知有由為了個(gè)體而培養(yǎng)的自體成纖維細(xì)胞所組成的劑量單元，該個(gè)體 同時(shí)也是供體。此外，存在生長(zhǎng)成纖維細(xì)胞用于自體應(yīng)用的方法。
[0005] 從兩種以上分離自不同個(gè)體的同源或異源的成纖維細(xì)胞的組織培養(yǎng)物或者來自 培養(yǎng)物的提取物或培養(yǎng)基的混合物獲得商用非自體產(chǎn)品。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本公開提供了非自體產(chǎn)品。
[0007] 本公開還提供了這樣的非自體產(chǎn)品：其為兩種以上來自相同性別的的成纖維細(xì)胞 培養(yǎng)物、由其獲得的提取物和/或從培養(yǎng)基回收的可擴(kuò)散要素形成的同源和異源混合物。
[0008] 本公開還提出，來自相同性別的同源和/或異源的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物或其提取物 的每種混合物可以具有基于通過所述混合物所希望獲得的特性的"加權(quán)"因子。
[0009] 本公開還提出，可以影響成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物或其提取物或形成細(xì)胞培養(yǎng)物的可擴(kuò) 散要素，以便在產(chǎn)物或所得產(chǎn)品中產(chǎn)生變化。
[0010]另外，本公開提出，對(duì)于每種產(chǎn)品可以存在至少三種因子，其中一種或多種因子具 有更高的權(quán)重。
[0011]本公開還提出，所述因子包括但不限于:年齡、DNA測(cè)試、種族同質(zhì)性、健康狀況、外 觀美麗度(符合由黃金比例(有時(shí)稱之為斐波拉契數(shù)列)所描述的經(jīng)典美），以便在產(chǎn)物或不 同的所得產(chǎn)品中產(chǎn)生或創(chuàng)建變化。所述不同的所得產(chǎn)品可以用于提高、調(diào)節(jié)或處理本公開 組合物的使用者的一種或多種所期望的特性。
[0012] 本公開還提供了使用來自相同性別的成纖維細(xì)胞或其提取物或形成細(xì)胞培養(yǎng)物 的可擴(kuò)散要素的異源和/或同源的混合物來提供非自體產(chǎn)品的方法。
[0013] 另外，本公開提供了制備（即，培養(yǎng))混合物的方法，其包括增強(qiáng)所述混合物的有益 效果或調(diào)節(jié)所述混合物的效果的方面。
【附圖說明】
[0014] 圖1至4是展示整體表達(dá)譜的差異的測(cè)試結(jié)果的圖。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 如上所述，本公開提供了兩種以上分離自相同性別的不同個(gè)體的同源或異源的成 纖維細(xì)胞的組織培養(yǎng)物、細(xì)胞共培養(yǎng)物、來自細(xì)胞或培養(yǎng)物的提取物、形成細(xì)胞培養(yǎng)物的可 擴(kuò)散要素或者培養(yǎng)基的混合物。成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物、細(xì)胞的共培養(yǎng)物、來自細(xì)胞或培養(yǎng)物的 提取物、形成細(xì)胞培養(yǎng)物的可擴(kuò)散要素或培養(yǎng)基單獨(dú)或與環(huán)境條件配合使用，從而使生長(zhǎng) 細(xì)胞并誘導(dǎo)所述細(xì)胞產(chǎn)生其要素（由所述細(xì)胞產(chǎn)生或提取自所述細(xì)胞)陣列。這些細(xì)胞、培 養(yǎng)物、細(xì)胞的共培養(yǎng)物、形成所述細(xì)胞培養(yǎng)物的可擴(kuò)散要素和培養(yǎng)基和/或因子被共混到為 接受者的皮膚賦予所期望的特性的產(chǎn)品中。重要的是，因?yàn)榻邮苷卟皇腔旌衔锘蛉魏蝹€(gè)體 成纖維細(xì)胞的來源，因此接受者與成纖維細(xì)胞之間的關(guān)系被稱之為"非自體"。由于產(chǎn)品旨 在用于特定性別，即女性或男性，因而每種產(chǎn)品中的細(xì)胞、共培養(yǎng)物、培養(yǎng)物、形成所述細(xì)胞 培養(yǎng)物的可擴(kuò)散要素和培養(yǎng)基和/或要素源自所期望的的性別。
[0016] 由如上所述的細(xì)胞、培養(yǎng)物、培養(yǎng)基和/或要素產(chǎn)生或可從其提取的這些要素被共 混起來并包含在產(chǎn)品中。所述要素包括但不限于：包括表皮生長(zhǎng)因子在內(nèi)的生長(zhǎng)因子、蛋 白、肽、細(xì)胞因子和存在于細(xì)胞或培養(yǎng)基中的所有其它生物分子。
[0017] 根據(jù)本公開，產(chǎn)品優(yōu)選為局部組合物。優(yōu)選的局部組合物是乳霜、精華液（serum) 或乳液。所述組合物可以包含遞送載劑，例如脂質(zhì)體和膠束。所述組合物還可以包含轉(zhuǎn)運(yùn)分 子，例如促進(jìn)或提供分子雪橇運(yùn)輸(molecular sledding)的蛋白或大分子。使用這類分子 使得能夠?qū)⑺鲆剡f送至接受者的表皮或真皮。然而，所述組合物可以是胃腸外（例如， 可注射或靜脈內(nèi)等)組合物、通過裝置(例如，激光器、微針頭或吸入器等)遞送或者口腔牙 周組合物(包括漱口水）。
[0018] 還可以對(duì)組織培養(yǎng)成纖維細(xì)胞或者成纖維細(xì)胞或培養(yǎng)物或者來自培養(yǎng)物的提取 物、形成細(xì)胞培養(yǎng)物的可擴(kuò)散要素或者培養(yǎng)基施以影響，以便在由細(xì)胞或培養(yǎng)基產(chǎn)生或可 從其提取的要素的陣列、要素的量和類型方面由于暴露于不同的化學(xué)物質(zhì)、培養(yǎng)物、或培養(yǎng) 物生長(zhǎng)培養(yǎng)基的環(huán)境要素而產(chǎn)生變化。例如，氧水平(缺氧、高氧或正常的氧水平）、Α0Χ、ρΗ、 溫度、和細(xì)胞在不同水平的紫外光和1^^、1^8、1^(：、11?和可見光的不同混合光下的暴露可能 作用于或影響成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物或來自其的提取物。此外，環(huán)境條件可能影響培養(yǎng)的成纖 維細(xì)胞或成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物、或來自培養(yǎng)物的提取物、或培養(yǎng)基、或要素。這類環(huán)境條件包 括但不限于P02、C0(高氧或缺氧條件）、對(duì)不同的紫外譜帶或其它形式能量的暴露以及溫度 等。
[0019] 如本文所用，術(shù)語"同源"是指使用的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物獲自下述供體，所述供體 構(gòu)成的族群的血統(tǒng)80%以上、優(yōu)選90%以上、更優(yōu)選95%以上和最優(yōu)選基本100%為單一民 族或種族。因此，成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物獲自同源供體組(相同性別），例如以下的族群：日本女 性、西非女性或印度女性。由于數(shù)世紀(jì)之久的民族融合，術(shù)語"同源"通常不適用選自例如美 國或加勒比群島的那些族群。
[0020] 如本文所用，術(shù)語"異源"是指使用非種族同質(zhì)性的成纖維細(xì)胞，例如獲自相同性 別但為不同族群或來源的組合的成纖維細(xì)胞，例如以下的族群:西非女性和日本女性、或西 非女性和印度女性、或日本女性和西歐女性。
[0021] 可以對(duì)本公開的同源和/或異源的成纖維細(xì)胞組織培養(yǎng)物的混合物進(jìn)行"定制 (tailoring)"以便使包括的一個(gè)種族族群多于另一種種族族群。此外，"定制"可以包括考 慮基于期望從所述混合物獲得的特性而對(duì)因子進(jìn)行"加權(quán)"。所述因子包括但不限于:年齡、 DNA測(cè)試、種族同質(zhì)性、健康狀況、外觀美麗度(符合由黃金比例(有時(shí)稱之為斐波拉契數(shù)列） 所描述的經(jīng)典美態(tài)），以便在產(chǎn)物或不同的所得產(chǎn)品中產(chǎn)生或創(chuàng)建變化。這些不同的所得產(chǎn) 品可以用于提高本公開的組合物的使用者的一種或多種所期望的特性。
[0022] 例如，成纖維細(xì)胞的組織培養(yǎng)物的混合物可以包括50%的來自西非女性的成纖維 細(xì)胞、30%的來自日本女性的成纖維細(xì)胞和20%的來自印度女性的成纖維細(xì)胞。每種百分 比可以獲自單個(gè)女性或構(gòu)成同源混合組(對(duì)術(shù)語同源的定義如上所述）的女性組，例如，來 自西非國家馬里的多位女性。就需要改善或賦予接受者皮膚的特定色素或其它特性對(duì)于混 合物的成纖維細(xì)胞的選擇和因子的權(quán)重進(jìn)行預(yù)測(cè)。因此應(yīng)該理解，根據(jù)本公開的一個(gè)實(shí)施 方式，組合物提供了選出一個(gè)或多個(gè)種族族群的供體和可能的"加權(quán)"混合物，以獲得傳遞 至少一種性質(zhì)(優(yōu)選對(duì)皮膚)的所得產(chǎn)品。所述一種性質(zhì)可以為例如增強(qiáng)的皮膚緊致性或光 滑度、或者皮膚更加飽滿。而且，所述一種性質(zhì)可以在幾乎任何使用本公開該實(shí)施方式的組 合物的人(任何種族背景）中得以改善。
[0023] 要賦予接受者的皮膚的特定特性包括但不限于:膚色、皮膚彈性、皮膚光滑性、瘢 痕減少、皺紋減少、對(duì)炎性刺激的反應(yīng)、水分保持能力、產(chǎn)生新的血管和輸送養(yǎng)分的傾向以 及皮膚厚度或密度、對(duì)外傷或自由基傷害的反應(yīng)的改善、或者本領(lǐng)域技術(shù)人員基于本公開 顯而易見的皮膚特性的組合。由于可以"定制"同源和/或異源成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物的混合物 來提供特定的期望的皮膚特性或皮膚特性的組合，本公開提供了為接受者的皮膚賦予特性 的無限可能性。因此，"定制"可以包括更大百分比的來自一個(gè)同源或異源的女性組的女性 的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物，因?yàn)橐阎驌?jù)信該女性或該組可提供所期望的特性。
[0024] 據(jù)信皮膚起皺紋是較淺色皮膚類型的問題。此外，斑駁的色素過度沉著和膚色不 均與較深色皮膚類型相關(guān)。此外，亞裔血統(tǒng)具有抵抗光老化的防護(hù)機(jī)制。因此，在決定包括 基于產(chǎn)品中所期望的皮膚特性或皮膚特性組合的權(quán)重的定制時(shí)可以考慮到上述因素。如下 文的測(cè)試數(shù)據(jù)所示，在相對(duì)于一組(或單培養(yǎng)物），"共培養(yǎng)物"中HAS1的增加顯示出改善的 抗皺、和光損害的避免或最小化。這強(qiáng)調(diào)了制造其中可以實(shí)現(xiàn)對(duì)組合物的定制或個(gè)人化的 本公開組合物的能力。本公開中的測(cè)試數(shù)據(jù)證明了細(xì)胞或共培養(yǎng)物的任意組合，并支持認(rèn) 為來自細(xì)胞或培養(yǎng)物的提取物、形成細(xì)胞培養(yǎng)物的可擴(kuò)散要素、培養(yǎng)基或外部因子的任意 組合能夠?qū)M合物增加對(duì)HAS1 (透明質(zhì)酸)生產(chǎn)的Collal刺激和/或MMP1抑制以生產(chǎn)抗老化 產(chǎn)品。
[0025] 在優(yōu)選實(shí)施方式中，據(jù)信"加權(quán)"的混合物在各因子間存在等級(jí)之分。優(yōu)選地，對(duì)于 種族同質(zhì)性而言，考慮（1)健康狀況、（2)年齡和(3)美麗度因子的優(yōu)先級(jí)順序。
[0026] 關(guān)于健康狀況因子，重要的是考慮排除患有遺傳疾病的供體。此外，應(yīng)從供體"庫" 中排除由于環(huán)境條件所致的過早老化，例如，自由基生成，即日曬和較高的贅生物以及因吸 煙所致的過早老化。
[0027] 對(duì)于年齡因素，供體"庫"、尤其是女性，獲取成纖維細(xì)胞的供體的年齡優(yōu)選年紀(jì)較 輕，因其皮膚和成纖維細(xì)胞正處在生命的最佳階段。所述年齡的范圍基于種族可能有所不 同。據(jù)信，優(yōu)選的年齡范圍是18至35周歲，更優(yōu)選18至30周歲。然而，可設(shè)想年齡范圍可以具 有更低下限，達(dá)成熟個(gè)體的年齡，這在美國為青少年，即約12周歲。
[0028] 對(duì)于美麗度因子，符合由黃金比例(有時(shí)稱為斐波拉契數(shù)列)所描述的經(jīng)典美具備 許多希望的特征。這些希望的特征包括但不限于面部關(guān)鍵特征或要素(包括但不限于嘴、目艮 和眉弓）的角度和間距之間的幾何學(xué)關(guān)系。對(duì)于這類特征的選擇將包括在最終產(chǎn)品的"定 制"中。因此，可以將產(chǎn)品為預(yù)期的接受者定制。
[0029] 如上文所討論，還認(rèn)為本公開可以用于其它目的。例如，本發(fā)明的組合物可以用于 使傷口愈合或減輕瘢痕。因此，可設(shè)想不僅表皮層而且內(nèi)表皮、真皮和SQ都能受到本公開的 組合物和方法的影響。
[0030] 本公開還提供了制備（即，培養(yǎng))成纖維細(xì)胞混合物以及對(duì)所述培養(yǎng)進(jìn)行優(yōu)化的方 法。眾所周知，成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物要耗費(fèi)相當(dāng)?shù)臅r(shí)間才能生長(zhǎng)至足夠數(shù)量，并且通常需要對(duì) 成纖維細(xì)胞在培養(yǎng)基中傳代多次以獲得滿意的產(chǎn)率。此外，制備成纖維細(xì)胞的方法可以通 過例如外部和/或環(huán)境誘導(dǎo)等過程而改造。此外，成纖維細(xì)胞可以經(jīng)遺傳修飾。再者，可以從 皮膚或非皮膚來源(例如，臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞)轉(zhuǎn)化成成纖維細(xì)胞。根據(jù)本公開，成纖維細(xì)胞 培養(yǎng)物可以根據(jù)本領(lǐng)域已知方法獲自如哺乳動(dòng)物等動(dòng)物。優(yōu)選地，成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物通過 從相同類型的組織分離成纖維細(xì)胞而獲得，所述組織是本公開的應(yīng)用方法的目標(biāo)。包括培 養(yǎng)基和培養(yǎng)技術(shù)(例如，傳代和選擇）的培養(yǎng)成纖維細(xì)胞的方法也是本領(lǐng)域已知的。通常的 培養(yǎng)基包括牛血清白蛋白或不存在FBS的胎牛血清。然而，成纖維細(xì)胞可以在供體的血清混 合物中培養(yǎng)。優(yōu)選地，選擇生成膠原的成纖維細(xì)胞。
[0031 ]本公開設(shè)想，根據(jù)所述制備方法獲得的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物混合物的效能可以針對(duì) 改善的效力進(jìn)行有益地修飾或進(jìn)行優(yōu)化。例如，效能的改善或要素的改變可以通過修改進(jìn) 行培養(yǎng)和成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)的氧水平而實(shí)現(xiàn)?？梢酝ㄟ^調(diào)節(jié)培養(yǎng)成纖維細(xì)胞的氧水平來調(diào)節(jié) 同源和/或異源的成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物混合物的效能。
[0032] 根據(jù)本公開，與制備"定制"、"加權(quán)"的同源和/或異源成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物的混合物 的能力結(jié)合時(shí)，通過調(diào)節(jié)生長(zhǎng)成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物的混合物的可選水平來調(diào)節(jié)所得成纖維細(xì) 胞培養(yǎng)混合物的效能的能力提供了更為廣闊的選擇，包括治療選擇。
[0033] 如本文所討論，在優(yōu)選的實(shí)施方式中，所針對(duì)的是女性。然而，本公開也可用于男 性。因此，相同的原理和教導(dǎo)(如上文所討論)可以適用于男性。
[0034]將低傳代的來自非裔美國人[非裔美國人組]和亞裔[亞裔/韓裔組]背景的人類女 性的人皮膚成纖維細(xì)胞接種至6孔皿。在單一培養(yǎng)物中并以非裔美國人與亞裔/韓裔為50: 50組合比例接種兩組。進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)，直至在細(xì)胞達(dá)到匯合(緊密堆積的單層）后約二十四 (24)小時(shí)。在匯合后24小時(shí)，將細(xì)胞裂解并使用苯酚：氯仿提取法提取RNA(Trizol Reagent)。然后對(duì)RNA定量并評(píng)估RNA濃度。利用SABiosciences RT2Easy First Strand試 劑盒將所述RNA轉(zhuǎn)化為cDNA。根據(jù)試劑盒說明，將cDNA與SYBR綠檢測(cè)試劑混合并添加至其它 的SABiosciences RT2ECM and Adhesion分子陣列的孔內(nèi)。將所述陣列加載至Bio-Rad iCycler內(nèi)進(jìn)行陣列分析和數(shù)據(jù)采集。利用專門針對(duì)所述陣列設(shè)計(jì)的基于網(wǎng)絡(luò)的軟件進(jìn)行 分析。
[0035]由所述基于網(wǎng)絡(luò)的軟件對(duì)每個(gè)參數(shù)一個(gè)實(shí)驗(yàn)復(fù)制樣品的結(jié)果針對(duì)對(duì)照細(xì)胞和暴 露細(xì)胞之間的倍數(shù)調(diào)制變化以及統(tǒng)計(jì)顯著性/P值測(cè)定進(jìn)行評(píng)估。然后對(duì)調(diào)節(jié)異常(具有或 不具有統(tǒng)計(jì)顯著性)檢驗(yàn)陣列上的基因，從而確定陣列的哪些區(qū)域具有最多的調(diào)節(jié)異常且 最可能是受到影響的過程。由于對(duì)于每個(gè)樣品僅運(yùn)行一個(gè)陣列，無法生成P值且下文所列的 值僅針對(duì)生物學(xué)顯著性進(jìn)行分析(相對(duì)于對(duì)照，基因表達(dá)值增加或減少超過2倍）。所有的基 因值相對(duì)于對(duì)照基因列表(Control Gene List)中的HPRTl、B2M、GAroH和RPLP0進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn) 化。將亞裔/韓裔細(xì)胞組設(shè)定為對(duì)照樣品，因此以下比較是相對(duì)于亞裔/韓裔表達(dá)水平的基 因調(diào)節(jié)異常，如下文基因表達(dá)值總結(jié)表中所示。
[0038]
[0039] 這些測(cè)試所顯示出的是可以獲得混合不同組或種族群的成纖維細(xì)胞或細(xì)胞或者 共培養(yǎng)的能力。這可以在細(xì)胞階段完成，而不是僅在培養(yǎng)基階段。此外，通過檢驗(yàn)總體表達(dá) 譜(將陣列上所測(cè)試的每種基因的表達(dá)值作圖為線圖），觀察到非裔美國人細(xì)胞 v.s.非裔美 國人細(xì)胞與亞裔/韓裔細(xì)胞(下文稱為50:50比例的"共培養(yǎng)物(CoCulture)"）的表達(dá)譜的顯 著差異。在以亞裔/韓裔組作為對(duì)照并因此充當(dāng)基線(或圖上的〇線），圖1一4所示的圖清楚 地展示出總體表達(dá)譜的差異。與僅比較非裔美國人組細(xì)胞與亞裔組細(xì)胞相比，共培養(yǎng)物顯 示出更大幅度的變化。在某些情況下，共培養(yǎng)物展示出相對(duì)非裔美國人細(xì)胞反方向的調(diào)節(jié) 異常（當(dāng)共培養(yǎng)物上調(diào)時(shí)，非裔美國人細(xì)胞下調(diào)）。
[0040]
[UU41 j 開培喬物?不出對(duì)功酡組的.兇里為刺微丨生的雙奴（蛍日的生成増加），時(shí)非倚美 國人單培養(yǎng)物則展示出更為抑制性(蛋白的生成減少)的效應(yīng)。共培養(yǎng)物還展示出在參與所 列出的功能組的大部分的基因中更高的活性。僅基底膜成分以及膠原蛋白&ECM結(jié)構(gòu)成分途 徑展示出相同水平的調(diào)節(jié)異常(但它們?nèi)哉故境鲈诠才囵B(yǎng)的細(xì)胞中更強(qiáng)的刺激性效應(yīng)）。
[0042] 測(cè)試的結(jié)果說明了以下內(nèi)容。能夠?qū)煞N以上供體或不同種族群的成纖維細(xì)胞進(jìn) 行混合。此外，測(cè)試支持了非裔美國人細(xì)胞與共培養(yǎng)物(50:50的非裔美國人和亞裔/韓裔） 中的那些細(xì)胞相比在表達(dá)譜上的顯著差異。即，共培養(yǎng)物提供了 ：（1)對(duì)蛋白生成的更大的 刺激性效果，（2)在涉及跨膜分子、粘附分子(細(xì)胞一細(xì)胞;細(xì)胞一基質(zhì)等等）、ECM蛋白酶和 抑制劑的途徑中更大的程度；（3)不同的基因表達(dá)，（4)HAS1(透明質(zhì)酸合成酶)的顯著增加， (5)C0L7A1的增加(根據(jù)科學(xué)文獻(xiàn)，C0L7A1的損失有助于皺紋形成）；和(6)更大量的MMP參 與。
[0043] 因此，顯然出人意料地發(fā)現(xiàn)了即使在細(xì)胞水平也能夠?qū)崿F(xiàn)本公開所設(shè)想的定制 和/或個(gè)人化的共混。
[0044] 應(yīng)該理解，本公開是局部組合物。優(yōu)選地，所述局部組合物是涂敷于接受者的乳 霜。乳霜或乳霜產(chǎn)品具有載劑。所述載劑使得能夠涂敷在接受者的皮膚上而不會(huì)妨礙成纖 維細(xì)胞混合物的效果。據(jù)信載劑的大部分百分比是水。此外還設(shè)想，整個(gè)局部組合物或乳霜 中的成纖維細(xì)胞混合物的量小于百分之5(%)，且優(yōu)選小于1%。據(jù)認(rèn)為，小于1%將在局部 組合物中產(chǎn)生最佳的結(jié)果。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種非自體的局部產(chǎn)品，基于要對(duì)接受者的皮膚賦予的一種或多種所期望的產(chǎn)品特 性，該產(chǎn)品包含兩種以上分離自不同個(gè)體的同源或異源的成纖維細(xì)胞組織培養(yǎng)物或來自培 養(yǎng)物的提取物或培養(yǎng)基的混合物。2. -種非自體的局部產(chǎn)品，其單獨(dú)利用或與環(huán)境條件配合利用成纖維細(xì)胞培養(yǎng)物、來 自細(xì)胞的提取物、或培養(yǎng)基來使細(xì)胞生長(zhǎng)并誘導(dǎo)其產(chǎn)生其要素陣列，所述要素陣列由所述 細(xì)胞產(chǎn)生或從所述細(xì)胞提取，并且所述細(xì)胞或因子被共混在對(duì)接受者的皮膚賦予一種或多 種所期望的特性的產(chǎn)品中。3. 權(quán)利要求2所述的產(chǎn)品，其中，所述混合物經(jīng)定制能夠包含兩個(gè)以上的種族群。4. 權(quán)利要求3所述的產(chǎn)品，其中，在所述兩個(gè)以上的種族群中，來自一個(gè)種族群的供體 的百分比大于來自另外的一個(gè)或多個(gè)種族群的供體的百分比。5. 權(quán)利要求3所述的產(chǎn)品，其中，經(jīng)定制的混合物包含對(duì)基于需要通過所述混合物獲得 的特性進(jìn)行加權(quán)的因子的考量。6. 權(quán)利要求5所述的產(chǎn)品，其中，所述加權(quán)的因子包括一個(gè)因子。7. 權(quán)利要求5所述的產(chǎn)品，其中，所述一個(gè)因子是多個(gè)因子。8. 權(quán)利要求6所述的產(chǎn)品，其中，所述多個(gè)因子包括每個(gè)供體的年齡、種族同質(zhì)性、健康 狀況和外在美麗度。9. 權(quán)利要求8所述的產(chǎn)品，其中，所述年齡因子包括僅處于12至35周歲的供體。10. 權(quán)利要求8所述的產(chǎn)品，其中，所述年齡因子包括僅處于18至30周歲的供體。11. 權(quán)利要求8所述的產(chǎn)品，其中，所述健康狀況因子包括排除患有遺傳疾病和因環(huán)境 條件導(dǎo)致過早老化的供體。12. 權(quán)利要求11所述的產(chǎn)品，其中，所述環(huán)境條件包括自由基生成。13. 權(quán)利要求12所述的產(chǎn)品，其中，所述自由基生成包括日曬、吸煙和較高的贅生物。14. 權(quán)利要求8所述的產(chǎn)品，其中，所述美麗度因子包括符合黃金比例。15. 權(quán)利要求2所述的產(chǎn)品，其中，所述局部產(chǎn)品選自由乳霜、精華液和乳液組成的組。16. 權(quán)利要求2所述的產(chǎn)品，其中，所述所期望的特性選自由以下特性組成的組:膚色、 皮膚彈性、皮膚光滑性、瘢痕減少、皺紋減少、對(duì)炎性刺激的反應(yīng)、水分保持能力、產(chǎn)生新的 血管、輸送養(yǎng)分的傾向、皮膚厚度或密度、及其任意組合。17. 權(quán)利要求16所述的產(chǎn)品，其中，所述所期望的特性決定所述產(chǎn)品的定制和加權(quán)。18. 權(quán)利要求1所述的產(chǎn)品，其中，所述產(chǎn)品用于優(yōu)化混合物對(duì)接受者的皮膚賦予所期 望的特性的潛能或效能。19. 一種制備非自體局部產(chǎn)品的方法，基于要對(duì)接受者的皮膚賦予的一種或多種所期 望的產(chǎn)品特性，由兩種以上分離自不同個(gè)體的同源或異源的成纖維細(xì)胞組織培養(yǎng)物或來自 培養(yǎng)物的提取物或培養(yǎng)基制備所述非自體局部產(chǎn)品。20. 權(quán)利要求19所述的方法，其中，能夠?qū)λ霎a(chǎn)品進(jìn)行定制以包含兩個(gè)以上的種族 群，其中一個(gè)種族群的供體的百分比大于另外的一個(gè)或多個(gè)種族群的供體的百分比。
【文檔編號(hào)】C12N5/0775GK105916979SQ201480062569
【公開日】2016年8月31日
【申請(qǐng)日】2014年11月14日
【發(fā)明人】J·沙克奈, M·S·沃茲曼, D·H·麥克丹尼爾
【申請(qǐng)人】德瑪奇實(shí)驗(yàn)室公司