從油茶葉中提取山奈酚及其衍生物的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供了一種從油茶中提取山奈酚及其衍生物的方法。方法為：經(jīng)浸提、D101大孔吸附樹(shù)脂分離、硅膠層析分離、DAC色譜分離，中間結(jié)合色譜分析，從油茶葉中逐步分離出山奈酚的純品，以及山奈酚?3?O?β?鼠李糖苷的純品。本發(fā)明同時(shí)從油茶葉中成功提取出了山奈酚及其衍生物，即山奈酚、山奈酚?3?O?β?鼠李糖苷，其中后者為首次從油茶葉提取得到，并且該提取方法具有收率高、產(chǎn)品純度高等優(yōu)點(diǎn)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
從油茶葉中提取山奈齡及其衍生物的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及藥物提取技術(shù)領(lǐng)域，尤其是設(shè)及一種從油茶葉中提取山奈酪及其衍生 物的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 油茶葉為山茶科植物油茶的葉，其富含多種藥效成分，尤其是黃酬類(lèi)化合物、巧類(lèi) 化合物。黃酬類(lèi)化合物具有多種生物活性，例如屯、血管系統(tǒng)活性、抗菌及抗病毒活性、抗腫 瘤活性、抗氧化自由基活性、鎮(zhèn)痛活性、保肝活性等。巧類(lèi)化合物具有桂疲止咳、抗腫瘤、抗 真菌、抑菌及降膽固醇等生物活性。
[0003] 如何從油茶葉中提取出山奈酪等生物活性成分，對(duì)深度開(kāi)發(fā)油茶作物極其重要。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的在于提供從油茶葉中提取山奈酪及其衍生物的方法，所述的提取方 法首次從油茶葉中成功提取出了山奈酪及其衍生物，即山奈酪、山奈酪-3-0-0-鼠李糖巧， 并且該提取方法具有收率高、產(chǎn)品純度高等優(yōu)點(diǎn)。
[0005] 為解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明提供了 W下技術(shù)方案：
[0006] 從油茶葉中提取山奈酪及其衍生物的方法，包括W下步驟：
[0007] A: W乙醇溶液為溶劑，對(duì)油茶葉進(jìn)行浸提，得到粗提液；
[000引 B: WDlO 1大孔吸附樹(shù)脂為填料，依次用水、15-25wt %乙醇溶液、75-85wt %乙醇溶 液對(duì)所述粗提液進(jìn)行恒定洗脫；
[0009] C:將所述75-85wt%乙醇溶液洗脫得到的洗脫液進(jìn)行硅膠層析分離，用9-11:1至1 :2.5-3.5梯度的二氯甲燒-甲醇進(jìn)行梯度洗脫，分段收集洗脫液，經(jīng)色譜分析，合并含有山 奈酪的流份段，命名為第一順序組分；W及合并含有山奈酪-3-0-0-鼠李糖巧的流份段，命 名為第二順序組分；
[0010] D:采用DAC色譜柱，用55-65 %甲醇-7jC為流動(dòng)相對(duì)所述第二順序組分進(jìn)行恒定洗 脫，分段收集洗脫液，經(jīng)色譜分析，合并含有山奈酪-3-0-0-鼠李糖巧的流份段；
[0011] E:對(duì)所述第一順序組分進(jìn)行硅膠層析，用45-55:1至8-12:1梯度的二氯甲燒-甲醇 進(jìn)行梯度洗脫，分段收集洗脫液，經(jīng)色譜分析，合并含有山奈酪的流份段。
[0012] 上述提取方法由粗至精的方式從油茶葉中逐步分離出山奈酪(簡(jiǎn)稱(chēng)為C0-4)的純 凈物，W及山奈酪-3-0-0-鼠李糖巧(簡(jiǎn)稱(chēng)為C0-3)的純凈物。
[0013] W干油茶葉為基準(zhǔn)，本發(fā)明對(duì)C0-3的提取率在21.1mg/kgW上，在對(duì)C0-4的提取率 在50.2mg/kgW上，并且前后兩個(gè)產(chǎn)品的純度均在90% W上。
[0014] 本發(fā)明所述的流動(dòng)相（即洗脫所用的液體)的比例均指體積比，流動(dòng)相中的"％"指 非水物質(zhì)所占的體積百分?jǐn)?shù)，乙醇溶液均指乙醇的水溶液，例如，15-25%乙醇溶液指乙醇 體積百分比為15-25%的水溶液。55-65%甲醇-水指甲醇體積百分比為55-65%的水溶液。
[0015] 本發(fā)明所述的恒定洗脫是指流動(dòng)相的組成比例固定。
[0016] 本發(fā)明所述的梯度洗脫是指在洗脫過(guò)程中不斷改變流動(dòng)相的濃度配比，但起始濃 度和終點(diǎn)濃度是固定的，例如步驟C中的梯度洗脫是指:二氯甲燒-甲醇按照起始濃度為9- 11:1、洗脫終點(diǎn)濃度為1:2.5-3.5的方式進(jìn)行梯度洗脫。
[0017] 本發(fā)明所述的DAC色譜柱指軸向動(dòng)態(tài)壓縮工業(yè)色譜柱。
[0018] 本發(fā)明所述的提取方法適用于不同種屬的油茶葉，尤其適合普通油茶(Camellia oleifera Abel),其提取率高。
[0019] 步驟A中，浸提所用的溶劑、料液比、溫度對(duì)粗提液中的雜質(zhì)含量W及有效成分的 提取率都有影響。溶劑優(yōu)選用40-60 %的乙醇-水溶液，更優(yōu)選50 %的乙醇-水溶液。料液比 優(yōu)選為1:2.5-3.5( Ig固體:2.5-3.5mL溶劑），更優(yōu)選1:2.5-3。浸提溫度優(yōu)選為70-80°C，并 且W回流浸提為最佳。采用W上浸提條件能降低粗提液中的雜質(zhì)含量，提高山奈酪及其衍 生物的提取率。
[0020] 另外，為了降低后期分離的難度，在浸提之后可W濃縮干燥粗提液，除去乙醇。
[0021 ]步驟B中，每個(gè)梯度洗脫所用流動(dòng)相的體積優(yōu)選為柱體積的3.5-4.5倍，更優(yōu)選為 4-4.5倍，保證待提取成分能夠被充分洗脫出來(lái)。所用流動(dòng)相的濃度優(yōu)選水、15-20%乙醇溶 液、75-80%乙醇溶液。
[0022] 步驟C中，硅膠層析分離為分離手段，色譜分析為評(píng)價(jià)分離結(jié)果的手段，兩者互相 配合，篩選出含有C0-3的洗脫液，W及含有C0-4的洗脫液。篩選通常為粗篩選，一般是經(jīng)色 譜分析，先將色譜圖相似的洗脫液合并，然后與目標(biāo)提取物的標(biāo)準(zhǔn)品色譜圖對(duì)比，從中篩選 出含有目標(biāo)提取物的洗脫液，將其合并。當(dāng)然，也可W不經(jīng)過(guò)合并，直接與目標(biāo)提取物的標(biāo) 準(zhǔn)品色譜圖對(duì)比來(lái)選出有用的洗脫液，運(yùn)種做法工作量較大，但是結(jié)果更精確。
[0023] 所述步驟C中，所用的硅膠的粒徑優(yōu)選為200-300目，所述梯度洗脫優(yōu)選為：用9-10 :1至1:2.5-3梯度的二氯甲燒-甲醇進(jìn)行梯度洗脫，采用W上進(jìn)一步優(yōu)化的條件，可W提高 分離度和柱效。
[0024] 在所述步驟C中，所述硅膠層析分離之前還包括:將所述75-85%乙醇溶液洗脫得 到的洗脫液濃縮干燥，可W避免乙醇對(duì)后續(xù)硅膠層析的干擾。
[0025] 另外，所述步驟C中的色譜分析可W是薄層色譜(TLC)、高效液相色譜等任意能用 于定性的方法，其中后者更準(zhǔn)確。
[0026] 另外，在進(jìn)行硅膠層析時(shí)，為了保證待分離物均勻分散在硅膠之中，優(yōu)選將二氯甲 燒-甲醇稀釋待分離物，同時(shí)拌入硅膠，之后再水浴蒸干。經(jīng)過(guò)W上處理后的物質(zhì)再裝入娃 膠柱中進(jìn)行層析。
[0027] 同樣，所述步驟D中，經(jīng)色譜分析可W為:高效液相色譜分析，和/或薄層分析等，優(yōu) 選前者或兩者結(jié)合。
[0028] 所述步驟D中，流動(dòng)相的濃度優(yōu)選55-60%甲醇-水時(shí)，具有更高的分離度。在該步 驟中即可獲得C0-3的純凈物，只要在色譜分析后，將僅含有C0-3的流份段合并即可。此處的 "僅含"是指C0-3的含量只要達(dá)到提取物的一般純度即可，在此基礎(chǔ)上，可根據(jù)生產(chǎn)需求選 擇進(jìn)一步提純。
[0029] 所述步驟E中，所述步驟C中，所用的硅膠的粒徑優(yōu)選為200-300目，所述梯度洗脫 優(yōu)選為：用45-50:1至8-10:1梯度的二氯甲燒-甲醇進(jìn)行梯度洗脫，采用W上進(jìn)一步優(yōu)化的 條件，可W提高分離度和柱效。在該步驟中即可獲得C0-4的純凈物，只要在色譜分析后，將 僅含有CO-4的流份段合并即可。此處的"僅含"是指CO-4的含量只要達(dá)到提取物的一般純度 即可，在此基礎(chǔ)上，可根據(jù)生產(chǎn)需求選擇進(jìn)一步提純，例如W甲醇為溶劑，進(jìn)行重結(jié)晶。
[0030] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明能達(dá)到W下技術(shù)效果：
[0031] (1)首次從油茶葉中提取了出高純度的山奈酪及其衍生物一一山奈酪、山奈酪-3- 0-e-鼠李糖巧；
[0032] (2)由粗到精的提取方式利于提取方法的規(guī)模化推廣；
[0033] (3)提取收率高。
【附圖說(shuō)明】
[0034] 為了更清楚地說(shuō)明本發(fā)明【具體實(shí)施方式】或現(xiàn)有技術(shù)中的技術(shù)方案，下面將對(duì)具體 實(shí)施方式或現(xiàn)有技術(shù)描述中所需要使用的附圖作簡(jiǎn)單地介紹，顯而易見(jiàn)地，下面描述中的 附圖是本發(fā)明的一些實(shí)施方式，對(duì)于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來(lái)講，在不付出創(chuàng)造性勞動(dòng)的前 提下，還可W根據(jù)運(yùn)些附圖獲得其他的附圖。
[0035] 圖1為本發(fā)明實(shí)施例1提供的80%乙醇洗脫后收集的樣品的液相色譜圖；
[0036] 圖2為C0-3的質(zhì)譜圖；
[0037] 圖3為C0-4的質(zhì)譜圖；
[003引圖4為C0-3的Ih-NMR譜圖；
[0039] 圖 5 為C0-3 的 Uc-NMR 譜圖；
[0040] 圖 6 為C0-4 的 Ih-NMR譜圖；
[0041 ]圖 7 為C0-4 的 Uc-NMR 譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0042] 下面將結(jié)合附圖和【具體實(shí)施方式】對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述，但 是本領(lǐng)域技術(shù)人員將會(huì)理解，下列所描述的實(shí)施例是本發(fā)明一部分實(shí)施例，而不是全部的 實(shí)施例，僅用于說(shuō)明本發(fā)明，而不應(yīng)視為限制本發(fā)明的范圍?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例，本領(lǐng) 域普通技術(shù)人員在沒(méi)有做出創(chuàng)造性勞動(dòng)前提下所獲得的所有其他實(shí)施例，都屬于本發(fā)明保 護(hù)的范圍。實(shí)施例中未注明具體條件者，按照常規(guī)條件或制造商建議的條件進(jìn)行。所用試劑 或儀器未注明生產(chǎn)廠商者，均為可W通過(guò)市售購(gòu)買(mǎi)獲得的常規(guī)產(chǎn)品。
[0043] 本發(fā)明中所述的流動(dòng)相的比例均指體積比。
[0044] 實(shí)施例1
[0045] 第一步：
[0046] 將自然陰干的油茶干燥葉粉碎過(guò)60目篩，取20kg分兩批用50 %乙醇按料液比1: 3 在70-80°C加熱回流，重復(fù)提取2次，每次提取化，合并所得上清液，過(guò)濾獲得上清液，減壓濃 縮至無(wú)醇味，得到原體積約一半的粗提液樣品，備用。
[0047] 第二步：
[004引用工業(yè)酒精處理約IOL的Dioi型大孔吸附樹(shù)脂，用水洗到無(wú)醇味，將第一步得到的 提取液分兩次上樣，依次用水、20 %乙醇、80 %乙醇洗脫，每個(gè)梯度洗脫4倍柱體積，根據(jù)化C 和HPLC分析結(jié)果，各部位合并濃縮。
[00例 80%乙醇洗脫后收集的樣品濃縮干燥(約150g，其HPlX譜圖如圖1所示，洗脫程序： O-IOmin 50%甲醇水溶液，10-20min 80%甲醇水溶液，20-21min 100%甲醇；檢測(cè)波長(zhǎng) 254nm，進(jìn)樣量10化），溶解于10:1的二氯甲燒-甲醇中，拌入300g薄層層析硅膠（200~300 目），水浴揮干，分兩次裝柱，其中每次空白層裝填硅膠約SOOg。
[0050] 流動(dòng)相系統(tǒng)為二氯甲燒-甲醇（10:1~1:3梯度洗脫），每SOOmL收集為一次，經(jīng)過(guò) TLC檢測(cè)合并為1-化2'（表示:將第一次硅膠柱的第一個(gè)流份、第二個(gè)流份W及第二次硅膠 柱的第二個(gè)流份合并），3-7+3'-7'，8-10+8'-10'，11-13+11'，14-16+12'-13'，17-19+14'， 20-22+15'-18'，19'-21'，23-26+22'-27'，27-40,28'-34'，35'-44'，41-47,48-64,65,66- 67,68-70,71，72-78,45'-51'，52'-63'，64'-67'，68'-71'，72'-84'共計(jì)24個(gè)組分（兩次娃 膠柱的流份用序號(hào)后面的符號(hào)加 W區(qū)分，部分流份進(jìn)行交叉合并，用加號(hào)銜接（同一次 硅膠柱的流份用-銜接），例如，第一次裝柱的提取液經(jīng)洗脫后，收集的液體編號(hào)分別為1、 2……78,第二次裝柱的提取液經(jīng)洗脫后，收集的液體編號(hào)分別為1'、2'……84'）。
[0051] 第S步：
[0052] 27-40利用DAC制備色譜分離，60%甲醇-水恒定洗脫，經(jīng)高效液相色譜分析，合并 經(jīng)含有C0-3的流份，共9. Img。
[0化3] 第四步：
[0054]將3-7+3'-7'流份溶解于一定比例的二氯甲燒-甲醇中，拌入Sg薄層層析硅膠 (200-300目），水浴揮干，空白層裝填硅膠約80g。流動(dòng)相系統(tǒng)為二氯甲燒-甲醇(50:1至10:1 梯度洗脫），每100血收集為一個(gè)流份，經(jīng)過(guò)IlX檢測(cè)合并為1，2-3，4，5-7，8，9-10，11，12-14， 15,16-17,18-21，22-24,25-26,27-30，31,32-36共計(jì) 16 個(gè)流份。（編號(hào)方法同第二步）。 [0化5] 第五步：
[0056] 將第四步中的5-7樣品濃縮至小體積，加甲醇溶解，靜置析晶，將粗晶體濾出，W甲 醇重結(jié)晶，得到單體化合物C0-4(6.8mg)。
[0057] 第六步:表征提取物
[0化引將C0-3、C0-4進(jìn)行質(zhì)譜檢測(cè)，如圖2和3所示。
[0化9 ] 將C0-3、C0-4進(jìn)行核磁共振圖譜檢測(cè)，C0-3的Ih-NMR、I3C-NMR分別如圖4和5所示， C0-4的Ih-NMR、I3C-NMR分別如圖6和7所示。
[0060] 結(jié)合上述表征結(jié)果可W確定C0-3的分子式如下式（一）。
[0061]
[0062] C0-4為山奈酪(結(jié)構(gòu)式如式(二））。
[0063 ]經(jīng)檢測(cè)，0)-3、0)-4的純度分別為93.2%、95.4%。
[0064]
[00化]實(shí)施例2
[0066] 第一步：
[0067] 將自然陰干的油茶干燥葉粉碎過(guò)60目篩，取20kg分兩批用40%乙醇按料液比1: 2.5在70-80°C加熱回流，重復(fù)提取2次，每次提取化，合并所得上清液，過(guò)濾獲得上清液，減 壓濃縮至無(wú)醇味，得到原體積約一半的粗提液樣品，備用。
[006引 第二步：
[0069] 用工業(yè)酒精處理約IOL的DlOl型大孔吸附樹(shù)脂，用水洗到無(wú)醇味，將第一步得到的 提取液分兩次上樣，依次用水、15%乙醇、75%乙醇洗脫，每個(gè)梯度洗脫4.5倍柱體積，根據(jù) TLC和HPLC分析結(jié)果，各部位合并濃縮。
[0070] 80 %乙醇洗脫后收集的樣品濃縮干燥(約150g )，溶解于10:1的二氯甲燒-甲醇中， 拌入300g薄層層析硅膠(200~300目），水浴揮干，分兩次裝柱，其中每次空白層裝填硅膠約 SOOgo
[0071] 流動(dòng)相系統(tǒng)為二氯甲燒-甲醇(9:1~1:2.5梯度洗脫），每SOOmL收集為一次，經(jīng)過(guò) TLC檢測(cè)合并含有山奈酪的流份段，合并含有山奈酪-3-0-0-鼠李糖巧的流份段。
[0072] 第S步：
[0073] 對(duì)第二步中含有山奈酪-3-0-0-鼠李糖巧的流份段，利用DAC制備色譜分離，55 % 甲醇-水恒定洗脫，經(jīng)高效液相色譜分析，合并經(jīng)含有C0-3的流份，共9.4mg。
[0074] 第四步：
[0075] 將第二步中含有山奈酪的流份溶解于一定比例的二氯甲燒-甲醇中，拌入Sg薄層 層析硅膠（200-300目），水浴揮干，空白層裝填硅膠約80g。流動(dòng)相系統(tǒng)為二氯甲燒-甲醇 (45:1至8:1梯度洗脫），每IOOmL收集為一個(gè)流份，經(jīng)過(guò)化C檢測(cè)合并含有山奈酪的流份。
[0076] 第五步：
[0077] 將第四步中的含有山奈酪的流份濃縮至小體積，加甲醇溶解，靜置析晶，將粗晶體 濾出，W甲醇重結(jié)晶，得到單體化合物C0-4(6.9mg)。
[0078] 第六步:表征提取物
[0079] 同樣，采用質(zhì)譜和1H-NMR、i3C-NMR進(jìn)行表征，結(jié)果與實(shí)施例1相同，C0-3為山奈酪- 3-0-0-鼠李糖巧，C0-4為山奈酪。
[0080] 實(shí)施例3 [0081 ]第一步：
[0082] 將自然陰干的油茶干燥葉粉碎過(guò)60目篩，取20kg分兩批用60%乙醇按料液比1: 3.5在70-80°C加熱回流，重復(fù)提取2次，每次提取化，合并所得上清液，過(guò)濾獲得上清液，減 壓濃縮至無(wú)醇味，得到原體積約一半的粗提液樣品，備用。
[0083] 第二步：
[0084] 用工業(yè)酒精處理約IOL的DlOl型大孔吸附樹(shù)脂，用水洗到無(wú)醇味，將第一步得到的 提取液分兩次上樣，依次用水、25 %乙醇、85 %乙醇洗脫，每個(gè)梯度洗脫3.5倍柱體積，根據(jù) TLC和HPLC分析結(jié)果，各部位合并濃縮。
[0085] 80%乙醇洗脫后收集的樣品濃縮干燥(約150g)，溶解于10:1的二氯甲燒-甲醇中， 拌入300g薄層層析硅膠(200~300目），水浴揮干，分兩次裝柱，其中每次空白層裝填硅膠約 SOOgo
[0086] 流動(dòng)相系統(tǒng)為二氯甲燒-甲醇（11:1~1:3.5梯度洗脫），每SOOmL收集為一次，經(jīng)過(guò) TLC檢測(cè)合并含有山奈酪的流份段，合并含有山奈酪-3-0-0-鼠李糖巧的流份段。
[0087] 第S步：
[00則對(duì)第二步中含有山奈酪-3-0-0-鼠李糖巧的流份段，利用DAC制備色譜分離，65 % 甲醇-水恒定洗脫，經(jīng)高效液相色譜分析，合并經(jīng)含有C0-3的流份，共8.7mg。
[0089] 第四步：
[0090] 將第二步中含有山奈酪的流份溶解于一定比例的二氯甲燒-甲醇中，拌入Sg薄層 層析硅膠（200-300目），水浴揮干，空白層裝填硅膠約80g。流動(dòng)相系統(tǒng)為二氯甲燒-甲醇 (55:1至12:1梯度洗脫），每1 OOmL收集為一個(gè)流份，經(jīng)過(guò)化C檢測(cè)合并含有山奈酪的流份。
[0091] 第五步：
[0092] 將第四步中的含有山奈酪的流份濃縮至小體積，加甲醇溶解，靜置析晶，將粗晶體 濾出，W甲醇重結(jié)晶，得到單體化合物C0-4(6.6mg)。
[0093] 第六步:表征提取物
[0094] 同樣，采用質(zhì)譜和1h-NMR、i3C-NMR進(jìn)行表征，結(jié)果與實(shí)施例1相同，C0-3為山奈酪- 3-0-0-鼠李糖巧，C0-4為山奈酪。
[0095] 最后應(yīng)說(shuō)明的是：W上各實(shí)施例僅用W說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)方案，而非對(duì)其限制;盡 管參照前述各實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了詳細(xì)的說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解:其依 然可W對(duì)前述各實(shí)施例所記載的技術(shù)方案進(jìn)行修改，或者對(duì)其中部分或者全部技術(shù)特征進(jìn) 行等同替換；而運(yùn)些修改或者替換，并不使相應(yīng)技術(shù)方案的本質(zhì)脫離本發(fā)明各實(shí)施例技術(shù) 方案的范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 從油茶葉中提取山奈酚及其衍生物的方法，其特征在于，包括以下步驟： A:以乙醇溶液為溶劑，對(duì)油茶葉進(jìn)行浸提，得到粗提液； B:以DlOl大孔吸附樹(shù)脂為填料，依次用水、15-25wt%乙醇溶液、75-85wt%乙醇溶液對(duì) 所述粗提液進(jìn)行恒定洗脫； C:將所述75-85wt%乙醇溶液洗脫得到的洗脫液進(jìn)行硅膠層析分離，用9-11:1至1: 2.5-3.5梯度的二氯甲烷-甲醇進(jìn)行梯度洗脫，分段收集洗脫液，經(jīng)色譜分析，合并含有山奈 酚的流份段，命名為第一順序組分；以及合并含有山奈酚-3-Ο-β-鼠李糖苷的流份段，命名 為第二順序組分； D:采用DAC色譜柱，用55-65 %甲醇-水為流動(dòng)相對(duì)所述第二順序組分進(jìn)行恒定洗脫，分 段收集洗脫液，經(jīng)色譜分析，合并含有山奈酚-3-Ο-β-鼠李糖苷的流份段； E:對(duì)所述第一順序組分進(jìn)行硅膠層析，用45-55:1至8-12:1梯度的二氯甲烷-甲醇進(jìn)行 梯度洗脫，分段收集洗脫液，經(jīng)色譜分析，合并含有山奈酚的流份段。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從油茶葉中提取山奈酚及其衍生物的方法，其特征在于，所述 步驟A中，浸提的方法為:料液比為1:2.5-3.5，在70-80°C下回流提取，乙醇溶液優(yōu)選為40-60%的乙醇-水溶液。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從油茶葉中提取山奈酚及其衍生物的方法，其特征在于，所述 步驟B中，每個(gè)梯度洗脫所用流動(dòng)相的體積為柱體積的3.5-4.5倍，優(yōu)選3.5-4倍。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從油茶葉中提取山奈酚及其衍生物的方法，其特征在于，所述 步驟C中，所用的硅膠的粒徑為200-300目，所述梯度洗脫優(yōu)選為：用9-10:1至1:2.5-3梯度 的二氯甲烷-甲醇進(jìn)行梯度洗脫。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從油茶葉中提取山奈酚及其衍生物的方法，其特征在于，所述 步驟C中，所用的色譜分析優(yōu)選為T(mén)LC。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從油茶葉中提取山奈酚及其衍生物的方法，其特征在于，所述 步驟D中，經(jīng)色譜分析合并含有山奈酚-3-Ο-β-鼠李糖苷的流份段進(jìn)一步為： 經(jīng)液相色譜分析，合并僅含山奈酚-3-Ο-β-鼠李糖苷的流份段。7. 根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的從油茶葉中提取山奈酚及其衍生物的方法，其特征在于， 所述步驟D中，所述55-65 %甲醇-水為55-60 %甲醇-水。8. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從油茶葉中提取山奈酚及其衍生物的方法，其特征在于，所述 步驟E中，所用的硅膠的粒徑為200-300目。9. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從油茶葉中提取山奈酚及其衍生物的方法，其特征在于，所述 步驟E中，在合并含有山奈酚的流份段之后還包括：以甲醇為溶劑進(jìn)行重結(jié)晶；所述梯度洗 脫優(yōu)選為:用45-50:1至8-10:1梯度的二氯甲烷-甲醇進(jìn)行梯度洗脫。10. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的從油茶葉中提取山奈酚及其衍生物的方法，其特征在于，在 所述步驟C中，所述硅膠層析分離之前還包括:將所述75-85wt%乙醇溶液洗脫得到的洗脫 液濃縮干燥。
【文檔編號(hào)】C07H17/07GK105924419SQ201610278287
【公開(kāi)日】2016年9月7日
【申請(qǐng)日】2016年4月29日
【發(fā)明人】鐘海雁, 馬力, 曹清明, 王蔚婕
【申請(qǐng)人】中南林業(yè)科技大學(xué)