一種二膦酸化合物及其制備方法與應用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種具有式Ⅱ結構的化合物，式中R為式中R1為H，OH或者鹵素。R2為或者其中n1＝0～10，n2＝0～10，n3＝0～10；Ar為芳基、亞芳基或取代基R99取代的芳基、取代基R99取代的亞芳基，R3、R4、R5、R6中至少含有一個硒或者硫原子，其余是碳或者氮原子。R3、R4、R5、R6之間連接方式為單鍵或雙鍵。對老年骨質疏松患者，可使骨細胞的骨形成和骨破壞維持一個較為理想的動態(tài)平衡。
【專利說明】
-種二麟酸化合物及其制備方法與應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明設及一種新的二麟酸化合物，W及制備所述新的二麟酸鹽化合物的方法， 屬于生物醫(yī)藥領域。
【背景技術】
[0002] 骨質疏松癥是一種W骨量低下，骨結構損壞，導致骨脆性增加，易發(fā)生骨折為特征 的全身性骨病。目前骨質疏松癥在全球常見病、多發(fā)病中居第7位，患者總數(shù)超過2億人，我 國超過9000萬人患不同程度骨質疏松，60歲W上老人骨質疏松患病率約50%~60%。
[0003] 二麟酸類藥物是近年發(fā)展起來的抗代謝骨病的一類新藥，該藥已成為用于治療 Paget'S病、高巧血癥、腫瘤導致的骨質溶解W及骨質疏松等骨疾病的一線用藥。二麟酸類 藥物發(fā)揮抗骨質疏松作用的機制在于具有很高的骨親和性，在骨組織遭受侵蝕時抑制破骨 細胞骨吸收，從而有效減少骨質的流失。二麟酸是自然形成的無機焦憐酸的結構類似物，但 比焦憐酸更穩(wěn)定，具有很強的抗生物降解能力。二麟酸結構中P-C-P骨架上的C可連接兩個 側鏈R'和R"，其結構如式I。
[0004]
[0005] 二麟酸中不同的側鏈能帶來藥物活性極大改變。關于二麟酸類藥物結構-活性關 系的研究表明：式I中R'主要為氨、徑基或面素，R'對二麟酸類藥物親骨能力影響相對較??； 式I中r基團的變化，導致其抗骨吸收能力多達幾個數(shù)量級的差別。在運些二麟酸類藥物 中，R"側鏈為氨基-烷基的第二代二麟酸藥物(帕米麟酸、阿侖麟酸、伊班麟酸、因卡麟酸等） 抗骨吸收活性強于側鏈上不含N的第一代二麟酸藥物(依替麟酸、氯麟酸W及替魯麟酸），而 R"側鏈含N雜環(huán)的第=代二麟酸藥物又強于第二代。根據(jù)目前的研究資料，抗骨質疏松活性 最強的二麟酸結構中R'必為徑基，而R"為含N雜環(huán)，尤其是五元雜環(huán)。然而現(xiàn)今上市的二麟 酸藥物，盡管對破骨細胞的抑制作用越來越強，但同時可能導致患者骨折的風險相應增加， 且促進成骨細胞的作用方面效果甚微。
[0006] 砸元素是生物不可或缺的微量元素，對于生物的生長、發(fā)育W及維持正常的生理 功能十分重要。現(xiàn)在，含砸化合物特別是有機砸已經(jīng)引起了人們極大的關注和熱情。在生物 有機體中，砸被攝入后同氨基酸結合形成多種形式的含砸蛋白，進而發(fā)揮其諸如清除自由 基、代謝激素等功能。砸蛋白對于骨代謝十分重要，缺砸往往同骨量減少W骨關節(jié)病密切相 關。

【發(fā)明內容】

[0007] 本發(fā)明的目的在于結合第=代二麟酸類藥物和砸元素，開發(fā)出一種新的含砸和氮 雜環(huán)二麟酸鹽，同時兼顧二麟酸獨特的抗骨質疏松活性和砸的抗氧化能力。該新型化合物 具有更好的抗骨質疏松活性和更佳的生理效應，同時對肝腎等器官的毒副作用更小。
[0008] 為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供了 W下技術方案：
[0009] -種二麟酸化合物，具有式n的結構：
[001 2] 式中Ri味tH. OH亦若訪'妄_
[0010]
[0011]
[0013] R2 為 岸中，ni = 0 ~10,112 = 0 ~10，n3 =0~10;Ar為亞芳基、雜亞芳基或取代基R99取代的亞芳基。取代基R99選自Cl~C6的烷基、 Cl~C6的取代烷基、面素、-CN、-N02、-OH、氨基、C1-C6的燒氨基。優(yōu)選的，其中m = 0~4，n2 = 0~1 ,M = O~5。更優(yōu)選的，其中ni = 0~3，n2 = 0~1 ,M = O~4。所述取代基R99可W有一個或 多個，當有多個取代基R99時，各個取代基R99相互之間為獨立選擇，即多個取代基R99可W相 同，也可W不同。
[0014] 優(yōu)選的，取代基R99選自甲基、乙基、丙基、異丙基、面素、-CN、-N02、-OH、氨基、Cl -C3 的燒氨基。最優(yōu)選的，取代基R99選自甲基、面素、-CN、-NO2、-OH、氨基、甲基氨基、乙基氨基。
[0015] 進一步，其中R2為
在R2中ni、n2、n3處 的亞烷基可W是直鏈亞烷基，也可W是具有支鏈的亞烷基。
[0016] 1?3、1?4、1?5、1?6中至少含有一個砸或者硫原子，其余是碳或者氮原子。1?3、1?4、1?5、1?6之間 連接方式為單鍵或雙鍵。
[0017] 在1?3、1?4、1?5、1?6上有取代基1?98，取代基1?98可^是一個或多個。當有多個取代基尺98 時，可W是相同的取代基，也可W是不同的。所述的取代基化8各自獨立的選自：氨原子、氧原 子、砸原子、氨基、亞氨基、面素、-CN、-N02、-OH、-0R97、-C00R97、-0C00R97、C0R97、-CON (R97) 2，- 00)則化7)2、-51?96、-5〇21?96、-5〇2則化7)2、-501?97、(：1~(：10的烷基、(：1~(：10的取代烷基、〔2~〔6 的締基、C2~C6的取代締基、C2~C6的烘基、C2~C6的取代烘基、芳基或取代芳基。
[0018] 進一步，取代基R98可W優(yōu)選自W下基團：氨、甲基、乙基、丙基、異丙基、正下基、異 下基、戊基、己基、環(huán)己基、徑基、氯基、氨基、亞氨基、苯基、砸原子或氧原子。當取代基R98全 部為氨原子時，也可W認為是相當于出現(xiàn)了 R3、R4、化、Rs上沒有取代的情況。
[0019] 其中，上述取代基R98中的Cl~CIO的取代烷基、C2~C6的取代締基、C2~C6的取代 烘基和取代芳基上的取代基團各自獨立的選自：徑基、面原子、簇基、氯基、氨基。即對于Cl- ClO的烷基、C2~C6的締基、C2~C6的烘基和芳基采用運些基團進行取代。相應的R98中所述 的芳基優(yōu)選為苯基。
[0020] 更進一步的，所述的Cl~Cio的取代烷基、C2~C6的取代締基、C2~C6的取代烘基 和取代芳基是Cl~C4的取代烷基、C2~C3的取代締基、C2~C3的取代烘基和取代苯基。
[0021] 更進一步的，所述的Cl~Cio的取代烷基、C2~C6的取代締基、C2~C6的取代烘基 和取代芳基是選自W下之一的基團：徑甲基、徑乙基、氯甲基、簇甲基、=氣甲基、面取代乙 基、甲氧甲基、氯基甲基、氯基乙基、簇甲基、簇乙基、氨甲基、氨乙基、甲基苯基、乙基苯基、 二甲基苯基、甲基乙基苯基、面取代乙締、面取代丙締、面取代丙烘、面取代丙乙烘、徑基苯 基、氯苯基、簇基苯基。
[00剖其中，R96和R97各自獨立地選自：氨、Cl~C6的烷基、芳基、取代基R95取代的Cl~C6 的烷基或取代基R95取代的芳基。相應的，R96和R97中所述的芳基優(yōu)選為苯基，含取代芳基中 的芳基。
[002；3 ] 其中，取代基R95獨立地選自-OH、面原子、-畑2、-CN、Cl -C4的烷基，C2-C4的締基。
[0024] 進一步，取代基R上的1?3、1?4、1?5、1?6中有一個是砸原子或硫原子，1~2個氮;1?3、尺4、 Rs、R6之間連接方式為單鍵或雙鍵。可W全部是單鍵，也可W包含部分雙鍵。
[0025] 進一步，上述式n結構的二麟酸化合物中，Ri優(yōu)選為H或0H。
[00%]進一步，上述式n結構的二麟酸化合物中，Ri優(yōu)選為面素，更優(yōu)選為F、C1、化或I。
[0027] 講一擊.戶沐古11結娩的^.臟瞞化合物中，關于其中的取代基1?2，1?2為 -
優(yōu)選Ar為亞芳基，更優(yōu)選Ar為苯環(huán)，即Ar為 亞苯基?；蛘邇?yōu)選Ar為取代基R94取代的亞芳基，最好是取代基R94取代的亞苯基，取代基R94 可W有一個或多個，取代基R94可W相同也可W不同。取代基R94各自獨立的選自：Cl~C6的 烷基、Cl~C6的任選被取代的烷基、面素、-CN、-N02、-OH、氨基、C1-C6烷基氨基。
[002引進一步，上述式n結構的二麟酸化合物中，關于取代基R上的1?3、1?4、1?5、1?6中含有一 個砸，1~2個氮。R3、R4、Rs、Rs之間連接方式有單鍵或雙鍵。
[0029] 進一步，上述式n結構的二麟酸化合物中，R3、R4、Rs、Rs上的取代基R98優(yōu)選為:氨、 徑基、-CN、氨基、亞氨基或氧原子中的一個或多個。取代基R98最好是選自W下基團：氨、徑 基、氨基、亞氨基或氧原子。
[0030] 進一步，上述式n結構的二麟酸化合物中，R為W下幾種結構通式之一，品質較佳。
[0031]
[0032] 進一步，上述化合物中R?~Ri6選自：氨、氧、氨基、亞氨基、面素、-CN、-N02、-OH、- 0R97、-C00R97、-0C00R97、C0R97、-CON( R97 ) 2，-OCON ( R97 ) 2、-SR96、-SO2R96、-SO2N( R97 ) 2、-S0R97、 Cl~C9的烷基、取代基R95取代的Cl~C9烷基、C2~C6的締基、取代基R95取代的C2~C6締基、 C2~C6的烘基、取代基R95取代的C2~C6烘基、芳基或取代基化5取代的芳基。
[0033] 其中，R96和R97各自獨立地選自氨、C1~C6的烷基、芳基、取代基R95取代的C1~C6的 烷基或取代基R95取代芳基。
[0034] 其中，取代基R95獨立地選自-OH、面原子、-畑2、-CN、C1-C4的烷基，C2-C4的締基。優(yōu) 選的，取代基R95獨立地選自-OH、面原子、-N出、-CN、甲基、乙基。
[0035] 進一步，上述式n化合物中化~化6與5元環(huán)連接方式可W為單鍵，也可W為雙鍵。
[0036] 進一步，上述式n化合物中R?~Ri6為C1-C5的烷基，氨基，亞氨基，氧原子、徑基、簇 基。
[0037] 進一步，上述式n化合物中化~Ri6為甲基，乙基，丙基，異丙基，氨基，亞氨基，氧原 子，徑基。
[0038] 進一步，上述式n化合物中R優(yōu)選為W下取代基之一，品質表現(xiàn)最佳。
[0039；
[0040]進一步，優(yōu)選的所述式n化合物為下列化合物之一：
[0041]
[0042] 或者，所述化合物為下列化合物之一：
^r\r\A A I
[0045] 本發(fā)明還提供了上述具有式n結構的二麟酸化合物的=種制備方法。
[0046] -種制備上述具有式n結構的二麟酸化合物的方法，先合成一種含砸五元雜環(huán)的 有機簇酸TY .結放加下.
[0047]
[004引然后，通過式K化合物合成含砸五元雜環(huán)的二麟酸化合物。
[0049] 方法一：
[0050] 含砸五元雜環(huán)的有機簇酸K中加入棚燒類的酸類溶液，將有機簇酸上面的氨取代 反應，時間約30min~120min，反應溫度為(TC~60°C，K與棚燒的摩爾比為1:1~1: 5。再加 入烷基類亞憐酸醋進行親核取代，反應時間為化~2地，得到麟酸烷基醋，K與烷基類亞憐 酸醋的摩爾比為1:2~1:6。最后加入醇，繼續(xù)反應化~4h，完成醇水解反應。最終得到含砸 雜環(huán)的二麟酸化合物。
[0051] 上述方法一中，優(yōu)選的，制備具有式n結構的二麟酸化合物，所述的棚燒的酸類溶 液中的酸類為四氨巧喃或1,4-二氧六環(huán)。
[0052] 上述方法一中，優(yōu)選的，制備具有式n結構的二麟酸化合物，所述的醇水解中的醇 為甲醇、乙醇、丙醇W及下醇中的一種或幾種。
[0化3]按照上述制備方法一，可W制備得到Ri為OH的具有式n結構的二麟酸化合物。上 述制備方法的過程如下：
[0化4]
[0055] 通過式K合成含砸五元雜環(huán)的二麟酸化合物。
[0化6] 方法二：
[0化7]將式K化合物與亞憐酸、=氯化憐在80°C~120°C溫度下反應化~化，向反應物中 加入水，Ig化合物K中加入1血~40mL水，于90°C~120°C回流比~化，化合物K與亞憐酸的 摩爾比為1:1~1:6，化合物K與=氯化憐摩爾比為1:2~1:6，反應液過濾，濾液中加入醇溶 液，并于-5 °C~5 °C放置1化~4她，抽濾，固體用水洗涂，60°C~120°C真空干燥地~1 Oh，得 到具有式n結構的二麟酸。
[005引上述方法二中，優(yōu)選的，制備具有式n結構的二麟酸化合物，濾液中加入醇溶液中 的醇為甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、下醇試劑中的一種或幾種。
[0059] 按照上述制備方法二，可W制備得到Ri為OH的具有式n結構的二麟酸化合物。上 述制備方法的過程如下：
[0060]
[0061] 另外一種制備具有式n結構的二麟酸的制備方法，先合成一種含砸五元雜環(huán)的面 代燒控X，結構如下： 1
[0063] '乂一[0064] 式中化7為面素。[0065] 通過式X化合物合成具有式n結構二麟酸，[0066] 方法
[0067] (I)亞甲基的質子活化：
[0068] 亞甲基二麟酸四異丙醋與強堿進行亞甲基質子活化反應，反應時間為化~地，反 應溫度為-5°C~40°C，強堿與亞甲基二麟酸四異丙醋的摩爾比為1:1~1:4,優(yōu)選為1:1~1: 3。
[0069] (2)烷基化反應：
[0070] 向上述所得反應液中加入具有式X結構面代燒控進行烷基化反應，反應溫度為60 °C~150°C，反應時間為化~化，X與亞甲基二麟酸四異丙醋的摩爾比為1:1~1:3;反應完 畢后加入有機溶劑至反應液中萃取，收集有機相并減壓蒸饋得到含五元砸雜環(huán)的二麟酸四 異丙醋化合物。
[0071] (3)水解反應：
[0072] 將含有五元砸雜環(huán)的二麟酸四異丙醋化合物中加入醇和濃鹽酸，lg化合物中加入 SmL~50ml醇溶液和SmL~60mL濃鹽酸，于60°C~110°C，優(yōu)選60-105°C，反應化~lOh，減壓 蒸饋除去溶劑，殘余物用醇洗涂，得到固體于50°C~100°C真空干燥4h~lOh，得到二麟酸化 合物。
[0073] 上述方法S中，優(yōu)選的，制備具有式n結構的二麟酸化合物，步驟（1)中強堿為氨 化鋼、甲醇鋼、乙醇鋼等鹽類。
[0074] 上述方法S中，優(yōu)選的，制備具有式n結構的二麟酸化合物，步驟(2)中所述有機 溶劑為二氯甲燒、=氯甲燒、乙酸乙醋或石油酸等中小極性試劑。
[0075] 上述方法S中，優(yōu)選的，制備具有式n結構的二麟酸化合物，步驟(3)中所述醇為 甲醇、乙醇或丙醇等醇類試劑。
[0076] 按照上述方法=制備方法，可W制備得到Ri為H的具有式n結構的二麟酸化合物。 具體過程如下：
[0077
[0078] 上述二麟酸化合物在制備治療骨代謝性疾病的藥物中的應用。
[0079] 二麟酸鹽類藥物用于治療骨質疏松其主要作用是通過抑制破骨細胞活性、誘導破 骨細胞的調亡起到抑制骨吸收，阻止骨吸收及骨微結構的破壞。盡管上市的二麟酸類化合 物對破骨細胞的抑制作用越來越強，但其對成骨細胞增殖作用的影響較弱，運可能會導致 患者骨折的風險相應地增加。本發(fā)明的二麟酸化合物能夠有效的避免現(xiàn)有技術中使用的二 麟酸鹽類化合物的不良影響，確保本發(fā)明的二麟酸化合物對于中老年人群的骨細胞狀態(tài)控 制在一個較為理想的平衡狀態(tài)。
[0080] 與現(xiàn)有技術相比，本發(fā)明的有益效果：
[0081] 本發(fā)明提供了一種新型二麟酸鹽化合物W及制備所述化合物的方法和用途，并且 已經(jīng)鑒別出該化合物的結構特征。在細胞藥理實驗中，使用已經(jīng)上市并廣泛使用的阿倫麟 酸鋼和挫來麟酸作為陽性對照藥。通過系列XC化合物對體外成骨細胞和破骨細胞功能的評 價研究表明，XC化合物不僅保持與阿倫麟酸鋼和挫來麟酸相似的抑制破骨細胞活力，還具 有比阿侖麟酸鋼和挫來麟酸較好的促進成骨細胞增殖作用。故可W初步推斷，對老年骨質 疏松患者，可使骨細胞的骨形成和骨破壞維持一個較為理想的動態(tài)平衡。
【具體實施方式】
[0082] 下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步的詳細描述。但不應該將此理解為本發(fā)明 上述主題范圍僅限于W下的實施例，凡基于本
【發(fā)明內容】
所實現(xiàn)的技術均屬于本發(fā)明的范 圍。本發(fā)明中未特別說明的百分比均為重量百分比。
[0083] 實施例1:化合物XC-I
[0084] 本實施例舉二麟酸化合物為：1-徑基-2-(2-氨基-1,3-砸挫-5-基)-亞乙基-1,1- 二麟酸。結構式如下
[0085]
[0086] 該化合物具體制備方法如下：
[0087] 將1.43g(26.5mmol)甲醇鋼溶于40mL無水甲醇中，室溫下向溶液中滴加1.14g (13.25mmol) 丫-下內醋，滴加完成后反應30min。反應完后濃縮，然后加入20mL水，用2mol/L 的鹽酸調節(jié)pH至3~4,然后用乙酸乙醋萃取，收集乙酸相，并減壓濃縮即得產(chǎn)物4-徑基下酸 甲醋。
[008引將1. 18g(10mmol)4-^基下酸甲醋溶于30mL二氯甲燒中，然后加入0.13g (1.6mmol)乙酸鋼和3.27旨（1511111101)氯銘酸化晚，室溫反應化。然后加入300血乙酸，繼續(xù)攬 拌30min，然后過濾，濾液濃縮，減壓蒸饋(80°C，0.2mmHg)即得4-幾基下酸甲醋。
[0089] 將1.16g(l〇mmol)4-幾基下酸甲醋溶于50mL乙酸/二氯甲燒/1,4-二氧六環(huán)/氯仿 中，加入9mL 1，4-二氧六環(huán)，緩慢滴加1. Sg(1 Immol)漠素，滴加時間超過化，滴加完畢后繼 續(xù)反應化。然后將反應液倒入50血二氯甲燒中，加入2.5g(25mmol)碳酸巧和0.8g(9.5mmol) 碳酸氨鋼，攬拌化。反應完畢后抽濾除去無機物，濾液減壓濃縮即得3-漠-4-幾基下酸甲醋。
[0090] 6.46g(33. llmmol)3-漠-4-幾基下酸甲醋懸浮于IOSmL水中，迅速攬拌下加入 4.16g(33.1Immol)砸脈，室溫攬拌4h。然后將反應液傾入冰塊中，用氨水(25%)中和，然后 減壓過濾收集沉淀，用冷水洗涂3次。濾液經(jīng)減壓濃縮后可得2-(2-氨基-1,3-砸挫-5-基）乙 酸甲醋。
[0091] 稱取4.38g(20mmol)2-(2-氨基-1,3-砸挫-5-基）乙酸甲醋于燒瓶中，加入50mL甲 醇溶解，攬拌下加入20mL 2mol/L的NaO田容液，室溫下反應化，反應完畢。過濾，濃縮，用酸調 節(jié)pH值，產(chǎn)生白色沉淀，靜置后，過濾，沉淀用少量水清洗后，烘干得到2-(2-氨基-1,3-砸 挫-5-基）乙酸。
[0092] 將2-(2-氨基-1,3-砸挫-5-基）乙酸0.46g加入SOmLS 口瓶中。加入四氨巧喃 6.25g，攬拌后加入兒茶酪棚燒0.45g，反應化，再加入甲基娃烷基）亞憐酸醋1.4mL， 反應化后，加入甲醇7.4血反應化。減壓蒸饋至油狀物產(chǎn)生，再加入55mL乙酸析出沉淀，沉淀 用水重結晶得到白色固體1-徑基-2-(2-氨基-1,3-砸挫-5-基)-亞乙基-1,1-二麟酸。
[00W]該白色固體鑒定：
[0094] IH-醒R(400MHz，DMS0)化.13(S，lH)，S2.71(S，2H)，S7.10(S，2H)DMS(ESI，m/z) 352.88(+H)
[00巧]經(jīng)上述鑒定可W確定該化合物為1-徑基-2-(2-氨基-1,3-砸挫-5-基)-亞乙基-1， 1-二麟酸。
[0096] 實施例2:化合物XC-2
[0097] 本實施列舉二麟酸化合物為：1-徑基-2-(2-甲基-1,3-砸挫-5-基)-亞乙基-1,1- 二麟酸。結構式如下：
[009引
[0099] 該化合物具體制備方法如下：
[0100] 將1.43g(26.5mmol)甲醇鋼溶于40mL無水甲醇中，室溫下向溶液中滴加1.14g (13.25mmol) 丫-下內醋，滴加完成后反應30min。反應完后濃縮，然后加入20mL水，用2mol/L 的鹽酸調節(jié)抑至3-4,然后用乙酸乙醋萃取，收集乙酸相，并減壓濃縮即得產(chǎn)物4-徑基下酸 甲醋。
[0101] 將1.18邑（10111111〇1)4-徑基下酸甲醋溶于301111^二氯甲燒中，然后加入0.13邑 (1.6mmol)乙酸鋼和3.27g(15mmol)氯銘酸化晚，室溫反應30min。然后加入SOOmL乙酸，過 濾，濾液濃縮，然后減壓蒸饋(80°C，0.2mmHg)即得產(chǎn)物4-幾基下酸甲醋。
[0102] 將1.16g( IOmmol )4-幾基下酸甲醋溶于50血乙酸中，加入9mL 1，4-二氧六環(huán)，緩慢 滴加1. Sg(Ilmmol)漠素，滴加時間超過化，再反應化。然后將反應液倒入50mL二氯甲燒中， 加入2.5g(25mmol)碳酸巧和0.8g(9.5mmol)碳酸氨鋼，然后攬拌化。反應完后抽濾除去無機 物，濾液減壓濃縮即得3-漠-4-幾基下酸甲醋
[0103] 6.46g(33.11mmol)3-漠-4-幾基下酸甲醋懸浮于IOSmL水中，迅速攬拌下加入 4.16g(33.1 ImmoI)砸代乙酷胺，室溫攬拌4h。然后將反應液傾入冰塊中，用氨水（25 % )中 和，然后減壓過濾收集沉淀，用冷水洗涂3次。濾液經(jīng)減壓濃縮后可得少量同純度的產(chǎn)品2- (2-甲基-1,3-砸挫-5-基）乙酸甲醋。
[0104] 稱取4.38g(20mmol)2-(2-甲基-1,3-砸挫-5基）乙酸甲醋于燒瓶中，加入50血甲醇 溶解，攬拌下加入20mL Imol/L的NaO田容液，室溫下反應化，反應完畢。過濾，濃縮，用酸調節(jié) pH值，產(chǎn)生白色沉淀，靜置后，過濾，沉淀用少量水清洗后，烘干得到產(chǎn)品2-(2-甲基-1,3-砸 挫-5-基）乙酸。
[0105] 將2-(2-甲基-1,3-砸挫-5-基）乙酸0.46g加入SOmLS 口瓶中。加入四氨巧喃 6.25g，攬拌后加入兒茶酪棚燒0.45g，反應化，再加入甲基娃烷基）亞憐酸醋1.4mL， 反應化后，加入甲醇7.4血反應化。減壓蒸饋至油狀物產(chǎn)生，再加入55mL乙酸析出沉淀，沉淀 用水重結晶得到白色固體1-徑基-2-(2-甲基-1,3-砸挫-5-基)-亞乙基-1,1-二麟酸。
[0106] 該白色固體鑒定：
[0107] IH-醒R(400MHz，DMS0)扣.20(S，lH)，S2.75(S，2H)，S0.98(S，3H)〇MS(ESI，m/z) 351.95(+H)
[0108] 經(jīng)上述鑒定可W確定該化合物為1-?基-2-(2-甲基-I，3-砸挫-5-基)-亞乙基-I， 1-二麟酸。
[0109] 實施例3:化合物XC-3
[0110] 本實施列舉二麟酸化合物為：1-徑基-2-( 2-亞氨基-4-氧代-1,3-砸挫燒-5-基)- 亞乙甚-1胃1-^臟酸"結放古加下.
[0111
[0112] 該化合物具體制備方法如下：
[0113] 將20.3g k天冬氨酸，4.3g K化，44g濃硫酸，400mL水一并加入ILS口瓶中，裝上 溫度計，冰鹽浴中攬拌降溫至(TC W下，向瓶內緩慢滴加8. Sg NaN〇2的150mL水溶液，控制反 應瓶中溫度在(TC W下，有棟色氣體產(chǎn)生，滴畢后，保持溫度反應化，得到淺黃色反應液。用4 X 1 OOmL乙酸乙醋萃取，干燥有機相化，減壓蒸饋有機相，得白色固體產(chǎn)品漠代下二酸。
[0114] 將7g漠代下二酸，150mL乙醇，5mL皿r溶液一并加入到250mL單口瓶中，室溫攬拌 反應8h，固體完全溶解，減壓蒸饋溶劑，殘余物中加入200mL乙酸充分溶解，再用10 %碳酸氨 鋼液洗涂乙酸相至無氣泡產(chǎn)生為止。用無水硫酸儀干燥乙酸相，減壓蒸饋得到黃色油狀物 漠代下二酸二乙醋。
[0115] 將6.2g中間體漠代下二酸二乙醋和砸脈溶解到200mL乙醇中。然后加入ImL化晚， 加熱回流30min。抽濾，除去多余砸粉，溶液減壓蒸饋。得到淺黃色固體2-(2-亞氨基-4-氧 代-1，3-砸挫燒-5-基）乙酸乙醋。
[0116] 將2g中間體2-(2-亞氨基-4-氧代-1，3-砸挫燒-5-基）乙酸乙醋加入40mL 4mol/L 溶液中，40°C反應化，再加入活性炭反應Ig，反應完后，將反應液過濾，收集濾液，減壓蒸饋 成油狀物，再加入丙酬IOOmL,析出白色固體。過濾，60°C真空干燥得到產(chǎn)品2-(2-亞氨基-4- 氧代-1，3-砸挫燒-5-基）乙酸。
[0117] 將2-(2-亞氨基-4-氧代-1,3-砸挫燒-5-基）乙酸0.5g加入SOmLS口瓶中。加入四 氨巧喃6.25g，攬拌后加入兒茶酪棚燒0.45g，反應化，再加入= -( =甲基娃烷基)亞憐酸醋 1.4mL，反應化后，加入甲醇7.4mL反應2h。減壓蒸饋至油狀物產(chǎn)生，再加入55mL乙酸析出沉 淀，沉淀用水重結晶得到產(chǎn)品1-徑基-2-(2-亞氨基-4-氧代-1,3-砸挫燒-5-基)-亞乙基-1， 1-二麟酸。
[011引該白色固體鑒定：
[0119] lH-NMR(400MHz，DMS0)S9.80(S，lH)，S7.35(S，lH)，S2.41(T，lH)，S2.32(D，2H)〇MS (ESI，m/z)368.88(+H)
[0120] 經(jīng)上述鑒定可W確定該化合物為1-?基2-(2-氨基-4-氧代-I，3-砸挫燒-5-基)- 亞乙基-1,1-二麟酸。
[0121] 實施例4:化合物XC-4
[0122] 本實施列舉二麟酸化合物為：1-徑基-2-(2,4-二氧代-1,3-砸挫燒-5-基)-亞乙 基-1 . 1 滕酸。結構擊血下！
[0123
[0124]該化合物具體制備方法如下：
[01巧]將20.3g k天冬氨酸，4.3g K化，44g濃硫酸，400mL水一并加入ILS口瓶中，裝上 溫度計，冰鹽浴中攬拌降溫至(TC W下，向瓶內緩慢滴加8. Sg NaN〇2的150mL水溶液，控制反 應瓶中溫度在(TC W下，有棟色氣體產(chǎn)生，滴畢后，保持溫度反應化，得到淺黃色反應液。用4 X IOOmL乙酸乙醋萃取，干燥有機相化，減壓蒸饋有機相，得白色固體產(chǎn)品漠代下二酸。
[01 %] 將7g漠代下二酸，150mL乙醇，5mL皿r溶液一并加入到250mL單口瓶中，室溫攬拌 反應過夜化，固體完全溶解，減壓蒸饋溶劑，殘余物中加入200mL乙酸充分溶解，再用10 %碳 酸氨鋼液洗涂乙酸相至無氣泡產(chǎn)生為止。用無水硫酸儀干燥乙酸相，減壓蒸饋得到黃色油 狀物漠代下二酸二乙醋。
[0127]將6.2g中間體漠代下二酸二乙醋和砸脈溶解到200mL乙醇中。然后加入ImL化晚， 加熱回流30min。抽濾，除去多余砸粉，溶液減壓蒸饋。得到淺黃色固體2-(2-氨基-4-氧代- 1,3-砸挫燒-5-基）乙酸乙醋。
[012引將2g中間體2-(2-氨基-4-氧代-1,3-砸挫-5-基）乙酸乙醋加入40mL 8mol/L鹽酸 溶液中，80°C反應化，再加入活性炭反應Ig，反應完后，將反應液過濾，收集濾液，減壓蒸饋 成油狀物，再加入丙酬lOOmL，析出白色固體。過濾，60°C真空干燥得到產(chǎn)品2-(2,4-二氧代- 1,3-砸挫燒-5-基）乙酸。
[0129] 將2-(2，4-二氧代-1，3-砸挫燒-5-基）乙酸0.5g加入50血S 口瓶中。加入四氨巧喃 6.25g，攬拌后加入兒茶酪棚燒0.45g，反應化，再加入甲基娃烷基）亞憐酸醋1.4mL， 反應化后，加入甲醇7.4mL反應化。減壓蒸饋至油狀物產(chǎn)生，再加入55m L乙酸析出沉淀，沉 淀用水重結晶得到產(chǎn)品1-徑基-2-(2,4-二氧代-1,3-砸挫燒-5-基)-亞乙基-1,1-二麟酸。
[0130] 該白色固體鑒定：
[0131] lH-NMR(400MHz，DMS0)Sl2.20(S，lH)，S2.45(T，lH)，S2.30(D，2HKMS(ESI，m/z) 369.69(+H)
[0132] 經(jīng)上述鑒定可W確定該化合物為1-?基-2-(2,4-二氧代-I，3-砸挫燒-5-基)-亞 乙基-1,1-二麟酸。
[0133] 實施例5:化合物XC-5
[0134] 本實施列舉二麟酸化合物為：1-徑基-1-( 2-甲基-1,3-砸挫燒-4-基)-亞甲基-1， 1，-二麟酸。結構式如下：
[0135]
[0136] 該化合物具體制備方法如下：
[0137] 室溫下將3.Og砸粉加入IOmL水中，將3.Og棚氨化鋼溶于19mL水中，然后攬拌下緩 慢滴加砸粉水溶液中。再加入等量的3.Og砸粉，攬拌15分鐘。將反應瓶置于短暫的蒸氣浴中 1到2分鐘使反應完成。3.?氯代丙氨酸的鹽酸鹽溶于20mL水中調節(jié)pH值到9。2小時內將此 溶液緩慢滴加到上述砸的溶液中。在37°C下繼續(xù)攬拌過夜。調節(jié)反應溶液抑值到2,再加入 218mg鹽酸徑胺。抽濾除去過量的砸粉，濾液調節(jié)pH值6~6.5,然后放置在4°C條件下3~5天 結晶。抽濾得到澄黃色晶體，然后溶于Imol/L的鹽酸溶液20mL中。再抽濾掉多余的固體，調 節(jié)濾液抑值6~6.5,再放置3~5天結晶。最后抽濾得到黃色晶體，真空干燥過夜得產(chǎn)品心砸 代脫氨酸。
[013引 0.13g，0.3911111101的心砸代脫氨酸溶于0.05mol/L的化OH溶液5mL，再加入1.5mL乙 醇混合于圓底燒瓶中。IOmin內緩慢加入0.05g棚氨化鋼于上述反應中，混合溶液再額外攬 拌20min直至溶液變成無色，再將溶液至于冰浴中，調節(jié)pH值到5~6，0.24mL乙醒分S次 SOmin內每次80化加入，然后將反應溶液攬拌化。然后，加入20mL的乙醇溶液于上述混合反 應溶液中，冰箱中放置過夜。抽濾得黃色固體，真空干燥得產(chǎn)品1-(2-甲基-1,3-砸挫燒-4- 基）甲酸。
[0139] 將0.26g 1-(2-甲基-1,3-砸挫燒-4-基）甲酸，2g THF，0.29g兒茶酪棚燒一并加入 到SOmLS 口瓶中，產(chǎn)生大量氣泡，固體溶解，室溫反應化，向瓶內加入1.32mLS-(S甲基娃 烷基）亞憐酸醋，室溫反應16h，再加入甲醇反應化。旋蒸溶劑，得到淺黃色油狀固體，加入 10血甲醇溶解，再加入50mL乙酸析出白色沉淀，放置化，倒去上清液，60°C真空干燥化，得到 淺黃色固體1-徑基-1-(2-甲基-1,3-砸挫燒-4-基)-亞甲基-1，1，-二麟酸。
[0140] 該白色固體鑒定：
[0141] lH-NMR(400MHz，DMS0)Sl2.20(S，lH)，S2.45(T，lH)，S2.30(D，2H)〇MS(ESI，m/z) 369.69(+H)
[0142] 經(jīng)上述鑒定可W確定該化合物為1-?基-1-(2-甲基-I，3-砸挫燒-4-基)-亞甲基- 1，1，-二麟酸。
[0143] 實施例6:化合物XC-6
[0144] 本實施列舉二麟酸化合物為：1-徑基-2-( 1，2，3-砸二挫-4-基)-亞乙基-1，1，-二 麟酸。結構式如下：
[0145；
[0146] 該化合物具體制備方法如下：
[0147] 單口瓶中加入2，5-二甲基四氨巧喃（18.6mL，0.144mol)，再加入鹽酸72mL( Imol/ L)，混合在室溫下攬拌IOmin，加入碳酸氨鋼調節(jié)抑為6~6.5。水相用乙酸乙醋(6 X70血)進 行萃取，水相中再加入氯化鋼至飽和，再用乙酸乙醋（3X60mL)萃取。有機相合并后用硫酸 儀干燥后過濾，減壓蒸饋得到產(chǎn)品下二醒。
[0148] 在研體上將等量的鹽酸氨基脈和無水醋酸鋼磨碎后加入到燒瓶中，再加入10倍體 積的無水乙醇，煮沸趁熱過濾。然后將等量的下二醒加入到上述濾液中水浴加熱30min~ 60min，然后冷卻，加水到剛剛出現(xiàn)渾濁，使其緩慢冷卻。縮氨基脈結晶出來后，過濾，晶體用 乙醇或稀乙醇(70%)重結晶，得化合物化)-1-(4-氧代亞下基)氨基脈。
[0149] 在裝有攬拌器、冷凝管和溫度計的S 口瓶中加入0.0 OSmol的化)-1-(4-氧代亞下 基)氨基脈，60mL冰醋酸，然后在冷卻攬拌下分批加入6.6g(0.06mol)升華二氧化砸，加完后 室溫攬拌4h，過濾，濾液中加入50mL水，氯仿萃取，飽和碳酸鋼洗涂，無水硫酸鋼干燥。除去 溶劑，殘余物用石油酸(沸點60°C~90°C)重結晶，得產(chǎn)物2-(1,2,3-砸二挫-4-基）乙醒。 [0150] 于250mL燒杯中加入IOOmL水，將17g(0 . Imol)硝酸銀溶于水中，攬拌下加入 4.4gNaOH的50mL水溶液，攬拌5min，濾除氧化銀并用水洗涂。將此氧化銀置于SOOmL燒杯中， 加入250mL水，劇烈攬拌下加入20g固體化0H。將混合物加熱至60°C，繼續(xù)攬拌，加入18 . Sg (0 . Imol)2-( 1，2，3-砸二挫-4-基）乙醒，繼續(xù)攬拌lOmin。過濾，母液用鹽酸調節(jié)抑為酸性， 過濾或萃取，并用冰水洗涂，烘干得到2-( 1，2，3-砸二挫-4-基）乙酸。
[0151] 將2-( 1，2，3-砸二挫-4-基）乙酸O . 4：3g加入SOmLS 口瓶中，通氮氣。加入四氨巧喃 6.25g，攬拌后加入兒茶酪棚燒0.85g，反應化，再加入甲基娃烷基）亞憐酸醋3.4mL， 反應化后，加入甲醇7.4mL，反應化。減壓蒸饋至油狀物產(chǎn)生，再加入55mL乙酸析出沉淀，沉 淀用水重結晶得到產(chǎn)品1-?基-2-(1,2,3-砸二挫-4-基)-亞乙基-I，1-二麟酸。
[0152] 該白色固體鑒定：
[0153] lH-NMR(400MHz，DMS0)S5.16(S，lH)，?.68(S，2H)。MS化SI，m/z)338.94(+H)
[0154] 經(jīng)上述鑒定可W確定該化合物為1-徑基-2-(1,2,3-砸二挫-4-基)-亞乙基-1,1- 二麟酸。
[01巧]實施例7:化合物XC-7
[0156] 本實施列舉二麟酸化合物為：1-徑基-1-(2-氧代-1,3-砸挫燒-4-基)-亞甲基-1， 1，-二麟酸。結構式如下：
[0157
[01化」 該化令、倒具體制爸力保觀h :
[0159] 室溫下將3.Og砸粉加入IOmL水中，將3.Og棚氨化鋼溶于19mL水中，然后攬拌下緩 慢滴加砸粉水溶液中。再加入等量的3.Og砸粉加入W上反應，攬拌15分鐘。將反應瓶置于短 暫的蒸氣浴中1到2分鐘使反應完成。3.?氯代丙氨酸的鹽酸鹽溶于20mL水中調節(jié)抑值到9。 2小時內將此溶液緩慢滴加到上述砸的溶液中。在37°C下繼續(xù)攬拌過夜。調節(jié)反應溶液pH值 到2，再加入21 Smg鹽酸徑胺。抽濾除去過量的砸粉，濾液調節(jié)抑值6~6.5，然后放置在4 °C條 件下3~5天結晶。抽濾得到澄黃色晶體然后溶于Imol/L的鹽酸溶液20mL中。再抽濾掉多余 的固體，調節(jié)濾液pH值6~6.5,再放置3~5天結晶。最后抽濾得到黃色晶體，真空干燥過夜 得產(chǎn)品k砸代脫氨酸。
[0160] 0.25g，0.075mmol k砸代脫氨酸加入盛有10血0.05mol/L的NaOH和3mL乙醇溶液 的單頸燒瓶中，將0.1 g,2.6mmol的棚氨化鋼IOmin內緩慢加入上述溶液中。將此黃色溶液繼 續(xù)攬拌20分鐘至無色，然后至于冰浴中，調節(jié)溶液抑值5~6，將0.2g，1.2mmol的1,1幾基二 咪挫加入上述溶液中時間30min，然后攬拌反應1小時。假設溶液又變成黃色，將上述加入二 幾咪挫的步驟重復再做。反應完后將溶液酸化至pH值等于2,然后用15mL乙酸乙醋萃取S 次。合并有機相，并用飽和氯化鋼溶液15mL洗2次。用無水硫酸儀干燥有機相，旋干后真空干 燥得產(chǎn)品1-(2-氧代-1，3-砸挫燒-4-基）甲酸。
[0161 ] 將0.26g中間體1-( 2-氧代-1，3-砸挫燒-4-基）甲酸，2g THF，0.29g兒茶酪棚燒一 并加入到SOmL= 口瓶中，產(chǎn)生大量氣泡，固體溶解，室溫反應化，向瓶內加入1.32mL = -( = 甲基娃烷基)亞憐酸醋，室溫反應16h，再加入甲醇反應比。旋蒸溶劑，得到淺黃色油狀固體， 加入IOmL甲醇溶解，再加入50血乙酸析出白色沉淀，放置化，倒去上清液，60°C真空干燥化， 得到淺黃色固體1-徑基-1-(2-氧代-1,3-砸挫燒-4-基)-亞甲基-1，1，-二麟酸。
[0162] 該白色固體鑒定：
[0163] IH-醒 R(400MHz，DMS0)S8.16(D，lH)，S3.85(Q，lH)，Sl.94(D，2H)〇MSUSI，m/z) 341.90(+H)
[0164] 經(jīng)上述鑒定可W確定該化合物為1-?基-1-(2-氧代-I，3-砸挫燒-4-基)-亞甲基- 1，1，-二麟酸。
[01化]實施例8:化合物XC-8
[0166] 本實施列舉二麟酸化合物為：1-徑基-2-(2-氨基-1,3-砸挫-4-基)-亞乙基-1,1- 二麟醇娃說前n 了.
[0167]
[016引U下…" 一，《戶" ,.
[0169] 將10邑(23111111〇1)乙酷乙酸乙醋溶于301111^乙酸中，攬拌降溫至0°(：^下后，向反應瓶 內緩慢滴加12.5g(78mmo 1)Bn，控制反應瓶內溫度在-5°C~(TC之間，加畢，反應化，得褐黃 色液體。反應完畢后向反應液中加入100mL水，再用C此Cl2(100mLX3)萃取，干燥有機化旋 干溶劑，得淺黃色液體4漠乙酷乙酸乙醋。
[0170] 取78g(68mmol)e-CD溶于1360mL水中，將其加熱至50°C，并不斷攬拌，使其溶解呈 無色透明狀。取16g(SOmmol M-漠乙酷乙酸乙醋，溶于SOmL丙酬中。將4-漠乙酷乙酸乙醋的 丙酬溶液快速滴加至e-CD的50°C水溶液中，并不斷攬拌，向其中迅速加入1?砸脈。將上述 混合溶液在氮氣保護下50°C反應化。反應完畢后，用乙酸乙醋（200mLX 5)萃取，合并有機 相，用無水MgS〇4干燥過夜，過濾，旋干得淺黃色固體2-(2-氨基-1,3砸挫-4-基)-乙酸乙醋。 [0171 ] 取2.35g(0 . Olmol)的2-(2-氨基-1，3砸挫-4-基）-乙酸乙醋，加入90mL二氯甲燒 中，再加入100血Imol/L的BBn二氯甲燒溶液(O.lmol BBr3)，-5°C~0°C條件下攬拌反應化， 旋干。用甲醇溶解，濃縮，加入4~5倍的體積的乙酸，靜置析出淡黃色沉淀，即得水解產(chǎn)物2- (2-氨基-1,3砸挫-4-基)-乙酸。
[0172] 將2-(2-氨基-1,3砸挫-4-基)-乙酸0.46g加入50血S口瓶中，通氮氣。加入四氨巧 喃6.25g，攬拌后加入兒茶酪棚燒0.85g，反應化，再加入甲基娃烷基）亞憐酸醋 3.4mL，反應16h后，加入甲醇7.4mL反應2h。減壓蒸饋至油狀物產(chǎn)生，再加入55血乙酸析出沉 淀，沉淀用水重結晶得到白色固體1-徑基-2-(2-氨基-1,3-砸挫-4-基)-亞乙基-1,1-二麟 酸。
[0173] 該白色固體鑒定：
[0174] IH-醒R(400MHz，DMS0)扣.19(S，lH)，S2.61(S，2H)，S7.25(S，2H)〇MS(ESI，m/z) 352.95(+H)
[01巧]經(jīng)上述鑒定可W確定該化合物為1-徑基-2-(2-氨基-1,3-砸挫-4-基)-亞乙基-1， 1-二麟酸。
[0176] 實施例9:化合物XC-9
[0177] 本實施列舉二麟酸化合物為1-徑基1-(2-氨基-4-甲基-1,3-砸挫-5-基)-亞甲基- 1,1-二麟酸。結構式如下：
[0178
[0179- ___________________________________________
[0180] 將8g(50mmol)NBS和0.05g對甲基苯橫酸加入至150mL二氯甲燒中，然后向其中加 入6.5g巧Ommol)乙酷乙酸乙醋，攬拌冰浴降溫至(TC左右反應地，后常溫反應過夜，TLC監(jiān)測 反應，反應完畢后旋干，用正己燒溶解，過濾，將濾液旋干，得無色油狀物2-漠乙酷乙酸乙 醋。
[0181] 取3.42g(3mmol)e-環(huán)糊精溶于60血水中，將其加熱至50°C，并不斷攬拌，使其溶解 呈無色透明狀。取0.7g(3.3mmo 1)2-漠乙酷乙酸乙醋，溶于3血丙酬中。將2-漠乙酷乙酸乙醋 的丙酬溶液快速滴加至e-環(huán)糊精的50°C水溶液中，并不斷攬拌，向其中迅速加入0.5g (4mmol)砸脈。將上述混合溶液在氮氣保護下50°C反應化。反應完畢后，用乙酸乙醋（200mL X 5)萃取，合并有機相，用無水MgS〇4干燥過夜，過濾，旋干得白色固體1- (2-氨基-4-甲基- 1,3-砸挫-5-基）甲酸乙醋。
[0182] 取2.35g(0.Olmol)的1-(2-氨基-4-甲基-1,3-砸挫-5-基）甲酸乙醋，加入90mL二 氯甲燒中，再加入100血Imol/L的BBn二氯甲燒溶液(0.1molB化3)，-5°C~0°C條件下攬拌反 應化，旋干。用甲醇溶解，濃縮，加入4~5倍的體積的乙酸，靜置析出淡黃色沉淀，即得水解 產(chǎn)物1-(2-氨基-4-甲基-1,3-砸挫-5-基）甲酸。
[0183] 將1-(2-氨基-4-甲基-1，3-砸挫-5-基）甲酸0.46g加入SOmLS 口瓶中，通氮氣。加 入四氨巧喃6.25g，攬拌后加入兒茶酪棚燒0.85g，反應化，再加入= -( =甲基娃烷基）亞憐 酸醋3.4m L，反應化后，加入甲醇7.4m L反應化。減壓蒸饋至油狀物產(chǎn)生，再加入55mL乙酸 析出沉淀，沉淀用水重結晶得到白色固體1-徑基1-(2-氨基-4-甲基-1,3-砸挫-5-基)-亞甲 基-1,1-二麟酸。
[0184] 該白色固體鑒定：
[0185] lH-NMR(400MHz，DMS0)S7.22(S，2H)，S2.02(S，3H)〇MS(ESI，m/z)352.87(+H)
[01化]經(jīng)上述鑒定可W確定該化合物為1-徑基1-(2-氨基-4-甲基-1,3-砸挫-5-基)-亞 甲基-1,1-二麟酸。
[0187] 實施例10:化合物XC-IO
[0188] 本實施例舉二麟酸化合物為:2-(2,4-二氧代-1,3-砸挫燒-5-基)-亞乙基-1,1-二 麟酸。結構式如下：
[018(
[0190] 該化合物具體制備方法如下：
[0191] 將206g亞甲基二麟酸四異丙醋緩慢滴加至25.2g氨化鋼600mL DMF中并攬拌，滴加 完畢后室溫反應化。
[0192] 在上述溶液中加入186.4g 5-漠甲基-1，3-砸挫燒-2，4-戊二酬，加畢升溫至80°C 反應4h，反應完畢，向反應液中加入250mL乙酸乙醋萃取，收集有機相并減壓蒸饋，得到2- (2,4-二氧代-1,3-砸挫燒-5-基)-亞乙基-1，1-二麟酸四異丙醋
[0193] 向33g 2-(2,4-二氧代-1,3-砸挫燒-5-基)-亞乙基-1,1-二麟酸四異丙醋中加入 SOOmL甲醇和ieOOmL濃鹽酸于Iior回流化。反應完畢后將反應液過濾，濾液蒸干，殘余物用 甲醇洗涂并105 °C真空干燥1化得到白色固體。
[0194] 該白色固體鑒定：
[01 巧]1H-NMR(400MHZ，DMS0)S10.20(S，1H)，S2.45(T，1H)，S1.75(T，2H)，S1.63(T，1H)。 MS 化SI，m/z)353.8(+H)
[0196] 經(jīng)上述鑒定可W確定該化合物為2-(2,4-二氧代-1,3-砸挫燒-5-基)-亞乙基-1， 1-二麟酸。
[0197] 實施例11:化合物XC-Il
[019引本實施列舉二麟酸化合物為：2-(2-甲基-1,3-砸挫燒-4-基)-亞乙基-1,1，-二麟 酸。結構井々n下.
[0199]
[0200] 將206g亞甲基二麟酸四異丙醋緩慢滴加至25.2g氨化鋼600mL DMF中并攬拌，滴加 完畢后室溫反應化。
[0201] 在上述溶液中加入157.4g 4-(2-漠乙基)-2-甲基-1,3-砸挫燒，加畢升溫至80°C 反應4h，反應完畢，向反應液中加入250mL乙酸乙醋萃取，收集有機相并減壓蒸饋，得到2- (2-甲基-1,3-砸挫燒-4-基)-亞乙基-1，1，-二麟酸四異丙醋。
[0202] 向28g 1-(2-甲基-1,3-砸挫燒-4-基）-亞甲基-1,1，-二麟酸四異丙醋中加入 SOOmL甲醇和ieOOmL濃鹽酸于Iior回流化。反應完畢后將反應液過濾，濾液蒸干，殘余物用 甲醇洗涂并105 °C真空干燥I化得到白色固體2-( 2-甲基-I，3-砸挫燒-4-基)-亞乙基-I，I，- 二麟酸。
[020引該白色固體鑒定：
[0204] IH-醒R(400MHz，DMS0)S10.20(S，1H)，S2.9(M，1H)，S2.72(M，1H)，S1.72(T，1H)，5 1.65(D，2H)，Sl.47(T，2H)，Sl.05(D，3H)。MS化SI，m/z)339.87(+H)
[02化]經(jīng)上述鑒定可W確定該化合物為2-(2-甲基-1,3-砸挫燒-4-基)-亞乙基-1，1，-二 麟酸。
[0206] 二麟酸化合物的功能試驗例
[0207] 受試藥物:XC-I~11，自制，見實施例。
[0208] 陽性對照藥:阿侖麟酸鋼，中國食品藥品檢定研究院（批次：100901-21302);挫來 麟酸，中國食品藥品檢定研究院(批次:100778-200501)
[0209] 空白對照:為除去受試藥物、阿侖麟酸鋼W及挫來麟酸外的藥物溶媒。
[0210] 通過細胞實驗評價系列XC化合物的抗骨質疏松能力。
[0211] 采用成骨細胞(OBs)及破骨細胞(OCs)兩種體外細胞模型對運11種XC化合物的體 外抗骨質疏松能力進行初步評價，并W目前臨床上被公認治療骨質疏松藥物阿侖麟酸鋼和 挫來麟酸作為陽性對照；系列XC化合物對成骨細胞功能的影響用昆明種24h內新出生乳鼠 煩蓋骨為原代的成骨細胞，評價藥物對促成骨細胞增殖能力和促成骨細胞礦化能力影響。 系列XC化合物對破骨細胞功能的影響用購自日本C0SM0BI0公司的大鼠破骨細胞前體試劑 盒，評價藥物對抑制破骨細胞活力的影響。
[0212] 對成骨細胞功能的影響實驗研究
[0213] 成骨細胞的分離培養(yǎng)，取2地內新出生乳鼠10只左右，拉頸處死后投入盛有75%乙 醇的燒杯內消毒5min。成骨細胞原代培養(yǎng)采用通用的培養(yǎng)方法，培養(yǎng)出符合實驗要求數(shù)量 和質量的成骨細胞。
[0214] 實驗分為空白對照組(CTL組）、挫來麟酸組(Z化組）、阿侖麟酸組(ALN組)和11個XC 化合物組，各實驗組濃度為l(T8mol/L。數(shù)據(jù)分析采用SPSS軟件的t檢驗進行分析，P<0.05認 為與對照組(CTL組)有顯著性差異。
[0215] 促成骨細胞增殖能力
[0216] 大鼠成骨細胞W3 X 10^孔接種于96孔培養(yǎng)板中，每孔體積10化L，每組設6個平行 孔進行測定。過夜培養(yǎng)后(37°C，5%C02)，待細胞貼壁完全，吸干培養(yǎng)基，按照實驗分組情況 每孔分別加入含對應藥物的培養(yǎng)基10化L，繼續(xù)培養(yǎng)后第1、2、3天取每組6孔樣本進行檢測。 增殖能力測定采用CCK-8試劑盒在測定，原理為CCK-8溶液中的WST-8可被活細胞內的脫氨 酶氧化還原后生成的澄黃色甲贈染料溶解在培養(yǎng)基中，生成的甲贈量與活細胞的數(shù)量成正 比，測定溶液的吸光度值(0.D)即可間接反應細胞的數(shù)量，即增殖能力。W成骨細胞增殖促 進率為評價結果。成骨細胞增殖促進率=[(0.曲^/0. D礎.?)-1 ] X 100 %。結果見下表1。
[0217] 表1促成骨細胞增殖平均促進率（％ )
[021 引 [(
[0220] 促成骨細胞礦化能力
[0221] 每組設3個平行孔進行測定，大鼠成骨細胞W4X10シ孔接種于24孔培養(yǎng)板中，每 孔體積50化L。過夜培養(yǎng)后（37 °C，5 %C〇2 )，待細胞貼壁完全，吸干培養(yǎng)基。每孔分別加入含 對應藥物濃度的培養(yǎng)基50化L，向加樣培養(yǎng)基中加入礦化誘導劑(含2mM0-甘油憐酸鋼(0- GP) ,WnM地塞米松和50iig/mL抗壞血酸），每3d換液一次，繼續(xù)培養(yǎng)至第21天，每組3孔樣本 進行檢測。
[0222] 礦化能力測定用細胞的茜素紅染色，其中礦化結節(jié)被染成橘紅色。再向染色的成 骨細胞中加入10 %西化氯胺溶液，每孔加20化L，靜置30min，橘紅色紅色結節(jié)逐漸被溶解， 溶液呈現(xiàn)紫紅色。將溶液轉入96孔板中，每孔10化L，于570nm波長處測定各孔吸光度(0.D)。 礦化結節(jié)形成促進率（％ ) = [ (0.曲捕/0.曲順)-1 ] X 100%。結果見下表2:
[0223] 表2促成骨細胞礦化能力平均促進率（％ )
[0224]
[0225]
[0226] 系列XC化合物藥物對促成骨細胞增殖能力和促成骨細胞礦化能力影響結果表明， 對成骨細胞增殖能力第1天除XC2、X 口和XC8外，其它藥物與Z化和ALN比較，皆具有一定的促 進成骨細胞增殖作用，第2天除XC2外皆促進增殖，而第3天各XC藥物皆具有促進成骨細胞增 殖作用。各XC藥物組與ZOL組和ALN組比較，皆能促進成骨礦化能力。從上述結果表明，系列 XC化合物皆有促成骨能力。
[0227] 對破骨細胞功能影響的實驗研究
[02%]破骨細胞的骨吸收能力測定采用日本C0SM0BI0公司的破骨細胞骨吸收檢測試劑 盒進行測定。取出骨吸收檢測試劑盒中的48孔板，每孔小屯、沿孔壁加入0.25mL試劑盒中的 BO肥RESORPTION ASSAY FACS，每孔接種細胞懸液500化，每孔接種細胞6.5X103cells/ mL。每孔加入100 X藥物母液各扣L。連續(xù)培養(yǎng)4~7天，中間不換液。連續(xù)培養(yǎng)4天后，從骨吸 收檢測板各孔中取100化細胞培養(yǎng)上清至96孔板中。96孔板各孔中加入50化試劑盒中的 BONE RESORPTION ASSAY BUFFER,輕輕混勻。用巧光酶標儀檢測各孔的吸光度值，若骨吸收 效果不明顯，可將骨吸收檢測板全部更換新鮮無酪紅的培養(yǎng)基，再相應加入藥物，再連續(xù)培 養(yǎng)至7d后重復檢測。抑制破骨細胞活力抑制率（％) = [1-(0.曲端/0.D礎,S)] X 100%。結果見 下表3:
[0229]表3抑制破骨細胞活力平均抑制率（％ )
[0?301
[0：
[0232] 系列XC化合物藥物對破骨細胞抑制活力，從表3結果可見，各XC藥物無論是第4天 還是第7天皆有一定的抑制破骨細胞活力，其中，XC4作用比ZOL稍強。
[0233] 總之，通過系列XC化合物對體外成骨細胞和破骨細胞功能的評價研究，表明，XC化 合物不僅保持與ZOL和ALN相似的抑制破骨細胞活力，還具有比ZOL和ALN較好的促進成骨細 胞增殖作用。故可W初步推斷，對老年骨質疏松患者，可使骨細胞的骨形成和骨破壞維持一 個較為理想的動態(tài)平衡。
[0234] 進一步，按照本發(fā)明方法一或二合成下列化合物：



【主權項】
1. 一種二膦酸化合物，具有式Π 的結構：Ri為Η、ΟΗ或者鹵素；其中，ηι = 0 ~10，η2 = 0 ~10，η3 = 0 ~ 10; Ar為亞芳基、雜亞芳基或取代基R99取代的亞芳基;取代基R99選自C1~C6的烷基、C1~C6 的取代烷基、鹵素 、-CN、-N02、-OH、氨基或C1-C6的烷氨基； R3、1?4、1?5、1?6中至少含有一個硒或者硫原子，其余是碳或者氮原子； 此、1?4、1?5、1?6之間連接方式為單鍵或雙鍵； 在尺3、1?4、1^、1?6上有取代基1?98，取代基1?98可以是一個或多個；當有多個取代基1?98時，可以 是相同的取代基，也可以是不同的； 所述的取代基R98各自獨立的選自：氫原子、氧原子、硒原子、氨基、亞氨基、鹵素、-^- N〇2、-OH、-OR97、-COOR97、-OCOOR97、⑶R97、-⑶N( R97 ) 2，-0⑶N( R97 ) 2、-SR96、-S02R96、-S〇2N (R97)2、-S0R97、C1~CIO的烷基、Cl~CIO的取代烷基、C2~C6的烯基、C2~C6的取代烯基、C2 ~C6的炔基、C2~C6的取代炔基、芳基或取代芳基； 其中，R96和R97各自獨立地選自：氫、C1~C6的烷基、芳基、取代基R95取代的C1~C6的烷 基或取代基R95取代的芳基； 其中，取代基R95獨立地選自-OH、鹵原子、-NH2、-CN、C1-C4的烷基，C2-C4的烯基。2. 根據(jù)權利要求1所述的化合物，其特征在于:RiSH、OH、F、Cl、Br或I。3. 根據(jù)權利要求1所述的化合物，其特征在于：_或者其中，m = 0 ~4，ri2 = 0~1，Π3 = 0~5。4. 根據(jù)權利要求1所述的化合物，其特征在于:所述取代基R99可以有一個或多個； 當有多個取代基R99時，各個取代基R99相互之間為獨立選擇，即多個取代基R99可以相 同，也可以不同； 取代基R99選自甲基、乙基、丙基、異丙基、鹵素、-^-勵2、-0!1、氨基、(：1-03的烷氨基。最 優(yōu)選的，取代基R99選自甲基、鹵素、-CN、-N02、-OH、氨基、甲基氨基或乙基氨基。5. 根據(jù)權利要求1所述的化合物，其特征在于：或者在尺2中111、112、113處的亞烷基可以是直鏈亞烷基，也可以是具有支鏈的亞烷基。 ，.6. 根據(jù)權利要求1所述的化合物，其特征在于：Ar為苯環(huán)，即Ar為亞苯基； 或者Ar為取代基R94取代的亞芳基，取代基R94可以有一個或多個，取代基R94可以相同也 可以不同； 取代基R94各自獨立的選自：C1~C6的烷基、C1~C6的任選被取代的烷基、鹵素、-CN、-N〇2、-OH、氛基、C1 -C6的烷基氛基。7. 根據(jù)權利要求1所述的化合物，其特征在于： 取代基R上的1?3、1?4、1^、1?6中有一個是硒原子或硫原子，1~2個氮;1?3、1?4、1?5、 R6之間連接方式為單鍵或雙鍵。8. 根據(jù)權利要求1所述的化合物，其特征在于： 取代基R98中的所述的C1~CIO的取代烷基、C2~C6的取代烯基、C2~C6的取代炔基和取 代芳基，是C1~C4的取代烷基、C2~C3的取代烯基、C2~C3的取代炔基和取代苯基。9. 根據(jù)權利要求1所述的化合物，其特征在于： 取代基R98中的C1~C10的取代烷基、C2~C6的取代烯基、C2~C6的取代炔基和取代芳基 上的取代基團各自獨立的選自：羥基、鹵原子、羧基、氰基、氨基。10. 根據(jù)權利要求1所述的化合物，其特征在于： 取代基R98中所述的C1~C10的取代烷基、C2~C6的取代烯基、C2~C6的取代炔基和取代 芳基是選自以下之一的基團：羥甲基、羥乙基、氯甲基、羧甲基、三氟甲基、齒取代乙基、甲氧 甲基、氰基甲基、氰基乙基、羧甲基、羧乙基、氨甲基、氨乙基、甲基苯基、乙基苯基、二甲基苯 基、甲基乙基苯基、齒取代乙烯、齒取代丙烯、齒取代丙炔、齒取代丙乙炔、羥基苯基、氰苯 基、羧基苯基。11. 根據(jù)權利要求1所述的化合物，其特征在于： 所述式Π 結構的二膦酸化合物中，R為以下幾種結構通式之一：上述化合物中R"?~Ri6選自：氫、氧、氨基、亞氨基、|^i^、-CN、-N〇2、-OH、-〇R97、 -COOR97、-OCOOR97、COR97、-CON (R97) 2，-OCON (R97) 2、-SR96、-SO2R96、-SO2N (R97) 2、-SOR97、C1 ~C9 的烷基、 取代基R95取代的C1~C9烷基、C2~C6的烯基、取代基R95取代的C2~C6烯基、C2~C6的炔基、 取代基R 95取代的C2~C6炔基、芳基或取代基R95取代的芳基； 其中，R96和R97各自獨立地選自氫、C1~C6的烷基、芳基、取代基R95取代的C1~C6的烷基 或取代基R95取代芳基； 其中，取代基R95獨立地選自-OH、鹵原子、-NH2、-CN、C1-C4的烷基，C2-C4的烯基。12. 根據(jù)權利要求11所述的化合物，其特征在于： 化合物中R?~Ri6與5元環(huán)連接方式可以為單鍵，也可以為雙鍵。13. 根據(jù)權利要求11所述的化合物，其特征在于： 式Π 化合物中R優(yōu)選為以下取代基之一：14. 根據(jù)權利要求1所述的化合物，其特征在于:所述二膦酸化合物為以下化合物之一：15.-種制備上述具有式Π 結構的二膦酸化合物的方法，先合成一種含硒五元雜環(huán)的 有機羧酸Κ，結構如下：然后，通過式IX化合物合成含硒五元雜環(huán)的二膦酸化合物； 含硒五元雜環(huán)的有機羧酸式IX中加入硼烷類的醚類溶液，將有機羧酸上面的氫取代反 應，時間約30min~120min，反應溫度為0°C~60°C，IX與硼烷的摩爾比為1:1~1:5;再加入 烷基類亞磷酸酯進行親核取代，反應時間為2h~24h，得到膦酸烷基酯，IX與烷基類亞磷酸 酯的摩爾比為1:2~1:6;最后加入醇，繼續(xù)反應lh~4h，完成醇水解反應;最終得到含硒雜 環(huán)的二膦酸化合物；16.-種制備上述具有式Π 結構的二膦酸化合物的方法，先合成一種含硒五元雜環(huán)的 有機羧酸K，結構如下：然后，通過式IX化合物合成含硒五元雜環(huán)的二膦酸化合物； 將式IX化合物與亞磷酸、三氯化磷在80°C~120°C溫度下反應2h~8h，向反應物中加入 水，lg化合物IX中加入lmL~40mL水，于90°C~120°C回流lh~6h，化合物IX與亞磷酸的摩爾 比為1:1~1:6,化合物IX與三氯化磷摩爾比為1: 2~1:6,反應液過濾，濾液中加入醇溶液， 并于-5 °C~5 °C放置12h~48h，抽濾，固體用水洗滌，60 °C~120 °C真空干燥4h~1 Oh，得到具 有式Π 結構的二膦酸；17. -種制備具有式Π 結構的二膦酸的制備方法，先合成一種含硒五元雜環(huán)的鹵代烷 烴X，結構如下：式中Rl7為鹵素； 通過式X化合物合成具有式Π 結構二膦酸， (1) 亞甲基的質子活化： 亞甲基二膦酸四異丙酯與強堿進行亞甲基質子活化反應，反應時間為lh~4h，反應溫 度為-5°C~40°C，強堿與亞甲基二膦酸四異丙酯的摩爾比為1:1~1:4,優(yōu)選為1:1~1:3; (2) 烷基化反應： 向上述所得反應液中加入具有式X結構鹵代烷烴進行烷基化反應，反應溫度為60°C~ 150°C，反應時間為2h~5h，X與亞甲基二膦酸四異丙酯的摩爾比為1:1~1:3;反應完畢后 加入有機溶劑至反應液中萃取，收集有機相并減壓蒸餾得到含五元硒雜環(huán)的二膦酸四異丙 酯化合物； (3) 水解反應： 將含有五元硒雜環(huán)的二膦酸四異丙酯化合物中加入醇和濃鹽酸，lg化合物中加入5mL ~50ml醇溶液和5mL~60mL濃鹽酸，于60°C~110°C，優(yōu)選60-105°C，反應2h~10h，減壓蒸餾 除去溶劑，殘余物用醇洗滌，得到固體于50°C~100°C真空干燥4h~10h，得到二膦酸化合 物；18.具有式Π 結構的二膦酸化合物在制備治療骨代謝性疾病的藥物中的應用。
【文檔編號】A61P19/10GK105924470SQ201610541497
【公開日】2016年9月7日
【申請日】2016年7月11日
【發(fā)明人】李明起, 曾永龍, 鄧啟民, 蔣雪, 段玉春, 潘俊男, 程作用, 王翰, 曹剛, 文德仲, 劉媛媛
【申請人】成都云克藥業(yè)有限責任公司