長(zhǎng)效化艾塞那肽(Exendin-4)類(lèi)似物及其應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一類(lèi)長(zhǎng)效化艾塞那肽(Exendin?4)類(lèi)似物及其合成方法。通過(guò)對(duì)Exendin?4進(jìn)行改造得到具有更長(zhǎng)藥理作用時(shí)間的Exendin?4類(lèi)似物，目標(biāo)多肽的合成是通過(guò)微波促進(jìn)固相合成方法快速實(shí)現(xiàn)，粗品經(jīng)純化，凍干得到Exendin?4類(lèi)似物。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
長(zhǎng)效化艾塞那肽(Exend i n-4)類(lèi)似物及其應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及糖尿病治療領(lǐng)域的長(zhǎng)效化艾塞那肽(Exendin-4)類(lèi)似物及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 糖尿病是繼腫瘤、心血管疾病之后第三大嚴(yán)重威脅人類(lèi)健康的慢性非傳染性疾 病。目前，全球約有3億糖尿病患者，預(yù)計(jì)到2025年將增加至5億。臨床上采用胰島素強(qiáng)化治 療的方法來(lái)延緩糖尿病進(jìn)程，胰島素治療在降低血糖的同時(shí)可以一定程度上逆轉(zhuǎn)胰島細(xì) 胞功能損害。但是使用胰島素會(huì)出現(xiàn)低血糖的危險(xiǎn)。受到劑量大小、注射部位、注射途徑、個(gè) 體差異或注射后未進(jìn)食等因素的影響，如果使用胰島素稍有不慎，就會(huì)出現(xiàn)嚴(yán)重的低血糖 副作用。
[0003] 胰高血糖素樣肽-1 (GLP-1)是一種葡萄糖依賴性腸降血糖多肽激素，GLP-1刺激胰 島素分泌而不出現(xiàn)低血糖，這種葡萄糖依賴性的促胰島素分泌特性，避免了糖尿病治療中 常存在的產(chǎn)生低血糖癥的危險(xiǎn)，這些生理功能使開(kāi)發(fā)GLP-1作為一種2型糖尿病治療藥物具 有廣闊的前景。
[0004] GLP-1主要由末端空腸、回腸和結(jié)腸的L細(xì)胞所分泌的葡萄糖依賴性腸降血糖多肽 激素，通過(guò)作用于胰島β-細(xì)胞膜上的受體GLP-1受體(GLP-1R)，促進(jìn)胰島素的分泌。此外， cAMP水平升高，又激活cAMP依賴的蛋白激酶Α和磷酸化酶，進(jìn)而刺激β-細(xì)胞胰島素基因的轉(zhuǎn) 錄和翻譯，刺激細(xì)胞的增值和分化。
[0005] GLP-1具有多種生物學(xué)效應(yīng)。如下：
[0006] 1、具有血糖依賴性的腸促胰島素分泌作用；
[0007] 2、阻止胰腺β-細(xì)胞退化，刺激β-細(xì)胞的增值和分化；
[0008] 3、誘導(dǎo)前胰島素基因的轉(zhuǎn)錄，促進(jìn)前胰島素的生物合成；
[0009] 4、增加胰島素的敏感性；
[0010] 5、增加生長(zhǎng)抑素分泌，抑制胰高血糖素的產(chǎn)生(此作用也是血糖依賴性）；
[0011 ] 6、抑制胃酸分泌，延遲胃排空；
[0012] 7、通過(guò)作用于丘腦下部的中樞抑制食欲，降低食物攝取量等作用。
[0013] 雖然天然GLP-1在治療糖尿病上有以上諸多優(yōu)點(diǎn)，但它在體內(nèi)易被二肽基肽酶IV (DPP-IV)快速降解。DPP-IV可特異性識(shí)別GLP-1的Ν末端第二位丙氨酸(Ala)殘基，從肽鏈Ν 末端第2位丙氨酸(Ala)處切除二肽，使其轉(zhuǎn)變?yōu)闊o(wú)活性的形式，其體內(nèi)半衰期僅5分鐘左 右。GLP-1分子N端是與GLP-1受體的結(jié)合部位，其組氨酸殘基喪失，導(dǎo)致GLP-1完全失去生物 活性。目前普遍使用的延長(zhǎng)GLP-1體內(nèi)半衰期的修飾策略包括對(duì)8位修飾使得GLP-1、能抵 抗DPP-IV酶的降解，將GLP-1肽鏈N端8位和9位的氨基酸互換可以達(dá)到此目的。短效GLP-1受 體激動(dòng)劑Exendin-4和lixisenatide就是利用此方法進(jìn)行修飾的典型代表。然而，由于多肽 還會(huì)在腎臟中快速濾過(guò)消除，抗DPP-IV酶的降解只能一定程度的延長(zhǎng)GLP-1的半衰期。這 里，我們?cè)诙绦LP-1受體激動(dòng)劑Exendin-4的基礎(chǔ)上，設(shè)計(jì)了一類(lèi)Exendin-4類(lèi)似物。該類(lèi) 類(lèi)似物首次將其進(jìn)行多肽非活性位點(diǎn)的半胱氨酸替換，通過(guò)半胱氨酸的巰基與馬來(lái)酰亞胺 發(fā)生點(diǎn)擊化學(xué)反應(yīng)來(lái)方便高效地引入小分子基團(tuán)，可避免早期長(zhǎng)效化GLP-1受體激動(dòng)劑的 研發(fā)過(guò)程中，采用賴氨酸作為小分子基團(tuán)連接壁的選擇性差，反應(yīng)不方便等問(wèn)題。此外，小 分子基團(tuán)具有較強(qiáng)的血清白蛋白結(jié)合率，可增加綴合物與血清白蛋白的結(jié)合，延長(zhǎng)肽鏈的 作用時(shí)間，可避免GLP-1的腎臟快速濾過(guò)和代謝失活，因而該類(lèi)化合物的半衰期及體內(nèi)降糖 作用時(shí)間顯著延長(zhǎng)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 本發(fā)明涉及一類(lèi)艾塞那肽(Exendin-4)類(lèi)似物，其序列為：
[0015] His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaal-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala-Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Xaa2-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pr〇-Ser-Ser-Gly-Ala-Pr〇-Pr〇-Pr〇-Ser_Xaa3
[0016] 其中：
[0017] Xaal:化學(xué)修飾的Cys或Lys;
[0018] Xaa2:化學(xué)修飾的Cys或Trp;
[0019] Xaa3:化學(xué)修飾的 Cys 或-NH2;
[0020] 化學(xué)修飾的Cys結(jié)構(gòu)為
[0022] 這里：η選自6~14。
[0023]其中，優(yōu)選的脂肪鏈修飾Cys結(jié)構(gòu)為
[0025]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的Exendin-4類(lèi)似物：
[0030]在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及具有如下序列的Exendin-4類(lèi)似物：
[0032] 本發(fā)明還提供了一種藥物組合物，包括治療有效量的至少一種上述化合物和其藥 學(xué)上可接受的鹽，或藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。
[0033] 本發(fā)明進(jìn)一步提供了上述化合物和其藥學(xué)上可接受的鹽，或藥學(xué)上可接受的載體 或稀釋劑在制備用于糖尿病的藥物中的運(yùn)用。
[0034]本發(fā)明提供的上述化合物化學(xué)性質(zhì)穩(wěn)定，部分化合物血漿半衰期達(dá)到了 30h以上， 較原型Exendin-4(半衰期2.4h)有顯著的提高。另外，本發(fā)明提供的上述化合物或化合物作 為有效成分制備的藥物組合物用于降低體內(nèi)血糖濃度時(shí)，既有很長(zhǎng)的血漿半衰期，高于目 前已經(jīng)上市的化學(xué)修飾長(zhǎng)效化多肽利拉魯肽，又具有顯著的降糖效果，而且可避免藥劑學(xué) 手段長(zhǎng)效化產(chǎn)品易產(chǎn)生的注射部位出現(xiàn)局部瘙癢等不良反應(yīng)。
[0035]本發(fā)明還提供了上述化合物的制備方法，本發(fā)明采用微波促進(jìn)Fmoc/tBu正交保護(hù) 固相合成策略高效快速地合成得到上述目標(biāo)化合物。
[0036]以下是本發(fā)明中涉及的Exendin-4類(lèi)似物的體外和體內(nèi)降糖藥理實(shí)驗(yàn)方法以及結(jié) 果：
[0037] (l)Exendin_4及Exendin-4類(lèi)似物體外血衆(zhòng)穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
[0038]大鼠在取血漿前禁食12h(不禁水），乙醚麻醉，眼球采血于盛有肝素鈉(30mg)的磨 口三角瓶中，采血過(guò)程中輕輕振搖三角瓶，使肝素鈉均勻溶于血中。收集全血， 3000rpm.min-l離心15min，移取上清液，即得血衆(zhòng)。純化后的Exendin-4和Exendin-4衍生物 用Tris緩沖液配成1000ng/ml的初始母液，100yL的化合物溶液與等體積大鼠血漿渦旋混 勻，pH = 7.4,37°C溫孵。所有化合物都溫孵24h以上，于0、0.5、1、2、4、6、8、12、24、36、48和 72h時(shí)間點(diǎn)取10yL溫孵樣品，加入20yL含有0.1 %TFA的乙腈沉淀，渦旋3min，14000rpm.min-1離心15分鐘，上清液直接進(jìn)LC-MS分析，記錄不同時(shí)間點(diǎn)的質(zhì)譜峰面積數(shù)值，做出降解曲 線，計(jì)算化合物的體外半衰期。如圖1所示，沒(méi)有經(jīng)過(guò)改造的原型Exendin-4半衰期只有約 2.5h，而Exendin-4類(lèi)似物的半衰期均得到延長(zhǎng)，其中，最長(zhǎng)的半衰期達(dá)到35.6個(gè)小時(shí)。
[0039] (2)Exendin-4及Exendin-4類(lèi)似物的隔日降血糖實(shí)驗(yàn)
[0040] 正常昆明小鼠，分為8組，每組6只，小鼠飼養(yǎng)在標(biāo)準(zhǔn)化動(dòng)物房中。實(shí)驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，提前 24h給予Exendin-4及Exendin-4類(lèi)似物，對(duì)照組注射生理鹽水。正常飲食飲水12h，接著禁食 12h，在化合物注射24h后，進(jìn)行小鼠單次腹腔葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)。各組按照小鼠體重每千克腹 腔注射18mmol的葡萄糖溶液（濃度20%)，注射葡萄糖時(shí)定為Omin，在0，15,30,45,60， 120min用血糖儀測(cè)定血糖水平。
[0041 ] 表1 Exendin-4及Exendin-4類(lèi)似物隔日降血糖的效應(yīng)
[0044] n = 6，X±s_· *戶<〇·〇5，**ρ<〇 · 〇1，***p<〇 · 〇〇lvs Exendin_4with saline as control
[0045] 如表1所示，由于修飾后的Exendin-4類(lèi)似物的生物半衰期都達(dá)到了30h以上，所以 在體內(nèi)代謝24h后，降血糖實(shí)驗(yàn)顯示其促胰島素分泌作用仍然維持，而未經(jīng)改造的天然 Exendin-4早已失去活性，說(shuō)明我們的Exendin-4類(lèi)似物體內(nèi)降糖作用時(shí)間顯著的延長(zhǎng)。
[0046] (3)Exendin-4及Exendin-4類(lèi)似物的隔日多次口服葡萄糖耐量實(shí)驗(yàn)
[0047] 選取8周齡db/db糖尿病小鼠，隨機(jī)分組，每組6只，適應(yīng)性飼養(yǎng)7天后，在實(shí)驗(yàn)開(kāi)始 前12小時(shí)禁食，只給予飲水。每組小鼠在給予Exendin-4及Exendin-4類(lèi)似物之前，測(cè)初始血 糖值，定為-30min，然后腹腔給予Exend in-4類(lèi)似物，30min后腹腔注射葡萄糖（每千克 18mmol )，定為Omin，對(duì)照組注射相同體積的生理鹽水和Exendin-4aOmin，15min，30min， 60min，90min，120min分別尾部取血，測(cè)定血液葡萄糖濃度。并且于360min和720min再次注 射葡萄糖，繼續(xù)測(cè)定血糖值，一共重復(fù)給予3次葡萄糖，檢測(cè)化合物的長(zhǎng)效化降糖活性。 [0048] 表2 Exendin-4及Exendin-4類(lèi)似物多次腹腔葡萄糖耐量效應(yīng)
[0051 ] η = 6，^Γ=*^.*ρ<〇·〇5，**Ρ<〇·01，***P<〇.〇〇lvs saline as control [0052] 如表2所示，Exendin-4在第三次腹腔糖耐量實(shí)驗(yàn)時(shí)已經(jīng)失去活性，而所有的 Exendin-4類(lèi)似物在三次給予葡萄糖過(guò)程中，仍然維持了較好的降糖活性，說(shuō)明化合物經(jīng)過(guò) 改造后，其長(zhǎng)效化降糖作用顯著。
[0053]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：
[0054] 1.提出的一種長(zhǎng)效化Exendin-4類(lèi)似物可以在保留降糖活性的基礎(chǔ)上，具有抗腎 臟濾過(guò)消除和抗DPP-IV酶解作用，生物半衰期較Exendin-4原型顯著延長(zhǎng)，部分達(dá)到了 30小 時(shí)以上，提高了穩(wěn)定性，極大的延長(zhǎng)了降糖作用時(shí)間。
[0055] 2.微波促進(jìn)固相合成的Exendin-4類(lèi)似物大大的提高了偶合反應(yīng)速率，常規(guī)固相 合成方法充分偶合一個(gè)氨基酸到樹(shù)脂上去，往往需要2小時(shí)到20小時(shí)不等，甚至更長(zhǎng)。而微 波促進(jìn)則平均只需要10分鐘左右;常規(guī)固相合成方法脫Fmoc保護(hù)基，往往需要30分鐘到1小 時(shí)不等，而微波促進(jìn)則平均只需要5分鐘左右，這極大的提高了多肽合成的效率，縮短了合 成周期。此外，合成Exendin-4類(lèi)似物的粗品純度大于80%，較常規(guī)固相合成方法大大提高， 這方便了后續(xù)的純化工作。微波促進(jìn)固相合成Exendin-4類(lèi)似物的方法易于實(shí)現(xiàn)自動(dòng)化、大 規(guī)?；?，這使其更適合工業(yè)化生產(chǎn)。
[0056]因此用本發(fā)明提供的微波促進(jìn)固相合成技術(shù)制備的Exendin-4類(lèi)似物，收率高、合 成周期短、粗品純化容易，生產(chǎn)成本低、易于工業(yè)自動(dòng)化生產(chǎn)。制備得到的Exendin-4類(lèi)似 物，結(jié)構(gòu)全新，比天然Exendin-4更加穩(wěn)定，降血糖作用時(shí)間長(zhǎng)，適合作為治療糖尿病藥物的 活性成分。
【附圖說(shuō)明】
[0057]上文對(duì)本發(fā)明做了一般性描述，下面附圖用于說(shuō)明本發(fā)明的具體實(shí)施方案。其中： [0058] 圖1顯示的是原型Exendin-4和本發(fā)明的Exendin-4類(lèi)似物的血衆(zhòng)溫孵半衰期柱形 圖；
【具體實(shí)施方式】
[0059] 在本說(shuō)明書(shū)全文中采用以下縮寫(xiě)：
[0060] Et3N:三乙胺；NMM:N-甲基嗎啉；DIEAJ，^-二異丙基乙胺；DMF:二甲基甲酰胺； DMS0:二甲亞砜;DCM:二氯甲烷;Fmoc:N-9-芴甲氧羰基;DIC:N，N'_二異丙基碳二亞胺;CDI: N，N'_羰基二咪唑;DMAP:4-二甲氨基吡啶;H0SU:N-羥基琥珀酰亞胺;EDC.HC1:1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽;HATU:2-(7-偶氮苯并三氮唑)-Ν,Ν,Μ，^_四甲基脲六 氟磷酸酯;HBTU:苯并三氮唑-Ν,Ν,Υ-四甲基脲六氟磷酸酯;HCTU: 6-氯苯并三氮唑-1， 1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯;Η0ΑΤ: 1-羥基-7-偶氮苯并三氮唑;Η0ΒΤ: 1-羥基-苯并三氮唑； PyBOP:六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷;HPLC:高效液相色譜;ESI-MS:電噴霧 質(zhì)譜;Gly:甘氨酸;Ser:絲氨酸;Ala:丙氨酸;Thr:蘇氨酸;Val:纈氨酸；Ile:異亮氨酸;Leu: 亮氨酸;Tyr:酪氨酸;Phe:苯丙氨酸;Hi s:組氨酸;Pro:脯氨酸;Asp:天門(mén)冬氨酸;Met:蛋氨 酸;Glu:谷氨酸;Trp:色氨酸;Lys:賴氨酸;Arg:精氨酸。Asn:天冬酰胺;Gin:谷氨酰胺。
[0061] 本發(fā)明是通過(guò)下列實(shí)施例來(lái)進(jìn)行說(shuō)明的，但這些實(shí)施例不做任何限制本發(fā)明的解 釋。
[0062] 實(shí)施例1
[0064]的微波促進(jìn)固相合成 [0065] (1)側(cè)鏈改構(gòu)的半胱氨酸合成
[0066] 稱(chēng)取Fmoc-Cys-〇H 0.21g，溶于DCM中，加入0.12g N-正辛基馬來(lái)酰亞胺，3ul DIEA 作為催化劑，室溫下攪拌反應(yīng)4小時(shí)，薄層板監(jiān)測(cè)反應(yīng)完畢后，反應(yīng)液減壓濃縮，柱層析分離 得產(chǎn)物0.278，收率79%。
[0067] MS(70eV)m/z：575.6([M+Na]+)〇
[0068] (2)樹(shù)脂的溶脹
[0069] 稱(chēng)取Fmoc-Rink amide-MBHA Resin 50mg(取代量0 · 4mmol/g)，經(jīng)7mL DCM溶脹 30min，抽濾去DCM，再用lOmLNMP溶脹30min，最后分別用NMP，DCM，NMP 7mL沖洗干凈。
[0070] (3)微波促進(jìn)Fmoc保護(hù)基的脫除
[0071] 將溶脹好的樹(shù)脂放入反應(yīng)器中，加入7mL含0.1M Η0ΒΤ的25%哌啶/匪?(￥八)溶液， 在微波反應(yīng)器中反應(yīng)lmin，微波功率為15W，反應(yīng)溫度控制在50°C以內(nèi)，使用空氣壓縮機(jī)壓 縮空氣冷卻，反應(yīng)結(jié)束后濾去溶液;再加入7mL含0.1M HOBT的25%哌啶/NMP(V/V)溶液在微 波反應(yīng)器中再反應(yīng)4min，微波功率為25W，反應(yīng)溫度控制在50°C，使用空氣壓縮機(jī)壓縮空氣 冷卻。反應(yīng)結(jié)束后濾去溶液，用NMP洗滌干凈。得到脫去初始連接的Fmoc保護(hù)基的樹(shù)脂。
[0072] (4)微波促進(jìn)Fmoc-Ser-Rink amide-MBHA Resin的合成
[0073] 將Fmoc-Ser-OH(0·04mmol)，HBTU(0·04mmol)，Η0ΒΤ(0·04mmol)和DIPEA (0.08mmol)溶于lOmLWP中，再將此溶液加入上面的樹(shù)脂中，在微波反應(yīng)器中反應(yīng)7min，微 波功率為25W，反應(yīng)溫度控制在50°C，使用空氣壓縮機(jī)壓縮空氣冷卻。反應(yīng)結(jié)束后濾除反應(yīng) 液，用DCM和NMP各7mL洗滌樹(shù)脂3次。
[0074] (5)偶合效率的檢測(cè)
[0075]用茚三酮法或者溴酚蘭法定性檢測(cè)樹(shù)脂的偶合效率，顯色反應(yīng)為陰性即可進(jìn)入下 一個(gè)偶合循環(huán)。
[0076] 茚三酮法:取少量樹(shù)脂顆粒用乙醇洗滌，放入透明小瓶中加入5 %茚三酮乙醇、KCN 吡啶溶液(2ml 0.001M KCN稀釋于98ml吡啶中）、80 %苯酚乙醇溶液各2滴，于100°C加熱5分 鐘，如果樹(shù)脂顯藍(lán)色即為陽(yáng)性。
[0077] 溴酚蘭法:取少量樹(shù)脂顆粒用二甲酰乙酰胺洗滌，放入透明小瓶中加入3滴1 %的 溴酚藍(lán)二甲基乙酰胺溶液，常溫下振搖3分鐘，如果樹(shù)脂顯藍(lán)色即為陽(yáng)性。
[0078] (6)肽鏈的延長(zhǎng)
[0079]按照肽鏈的序列，重復(fù)上述脫保護(hù)和偶合的步驟依次連接上相應(yīng)的氨基酸，合成 到肽鏈17位時(shí)，加入側(cè)鏈改構(gòu)的半胱氨酸，偶合45min，然后繼續(xù)重復(fù)脫保護(hù)和偶合的步驟 依次連接上相應(yīng)的氨基酸直至肽鏈合成完畢，得到連有化合物的樹(shù)脂。
[0080] (7)樹(shù)脂上多肽的裂解
[0081 ]將上述得到的連有化合物的樹(shù)脂放入反應(yīng)瓶中，各加入裂解劑Reagent K(TFA/苯 甲硫醚/水/苯酚/EDT，82.5:5:5:5:2.5，V/V) 10mL，先在0 °C下振搖30min，再在常溫下反應(yīng) 3h。反應(yīng)結(jié)束后抽濾，加少量TFA和DCM洗滌三次，合并濾液。將濾液加入大量的冰乙醚中析 出白色絮狀沉淀，冷凍離心得到目標(biāo)多肽的粗品。最終得到化合物的粗品63.2mg，收率為 94.3%〇
[0082] (7)多肽的純化
[0083]將粗品多肽溶于50%的乙腈/水中，使用制備液相色譜純化，色譜條件為:C18反相 柱（320mm X 28mm，5μπι);流動(dòng)相A: 0 · 1 % TFA/水(V/V)，流動(dòng)相B: 0 · 1 %TFA/乙腈(V/V);流動(dòng) 相梯度:流動(dòng)相B 40 %~90 %，20min;流速為6mL/min檢測(cè)波長(zhǎng)為214nm。收集的溶液凍干得 純品30mg。理論相對(duì)分子質(zhì)量為4370 · 7DESI-MS m/z : found[M+3H]3+1457 · 9，[M+4H]4+ 1093· 7;calu[M+3H]3+1457· 7，[M+4H]4+1093 · 2。
[0084] 實(shí)施例2~9
[0085] 根據(jù)實(shí)施例1所述的方法，根據(jù)相應(yīng)的序列合成得到實(shí)施例2~9的Exendin-4類(lèi)似 物，通過(guò)電噴霧質(zhì)譜(ESI-MS)確證各自的分子量。
[0086] 實(shí)施例2
[0088] 理論相對(duì)分子質(zhì)量為4426.8』51-1\^111/2:€〇1111(1[]\1+3!1]3+1476.6，[]\1+4!1] 4+ 1107.7;calu[M+3H]3+1476.8，[M+4H]4+1107.9。
[0089] 實(shí)施例3
[0091 ]理論相對(duì)分子質(zhì)量為4483 · 6DESI-MS m/z : found[M+3H]3+1495 · 5，[M+4H]4+ 1121.9;calu[M+3H]3+1495.2，[M+4H]4+1121.9〇
[0092] 實(shí)施例4
[0094] 理論相對(duì)分子質(zhì)量為4313.6』51-]\^111/2:€〇1111(1[]\1+3!1]3+1438.9，[]\1+4!1] 4+ 1079.4; calu[M+3H]3+1439.1，[M+4H]4+1079.7。
[0095] 實(shí)施例5
[0097] 理論相對(duì)分子質(zhì)量為4369.7DESI-MS m/z:found[M+3H]3+1457.6, [M+4H]4+ 1093· 1;calu[M+3H]3+1457·9，[M+4H]4+1093 · 2。
[0098] 實(shí)施例6
[0100] 理論相對(duì)分子質(zhì)量為4426 · 5ASI-MS m/z : found[M+3H]3+1476 · 5，[M+4H]4+ 1107·6;calu[M+3H]3+1476·6，[M+4H]4+1107 ·6〇
[0101] 實(shí)施例7
[0103] 理論相對(duì)分子質(zhì)量為4498.8iSI-MS m/z:found[M+3H]3+1500.6, [M+4H]4+ 1125.7;calu[M+3H]3+1500.6，[M+4H]4+1025.4。
[0104] 實(shí)施例8
[0106] 理論相對(duì)分子質(zhì)量為4554.9iSI-MS m/z:found[M+3H]3+1519.3, [M+4H]4+ 1139.7;calu[M+3H]3+1519.8，[M+4H]4+1139.5〇
[0107] 實(shí)施例9
[0109]理論相對(duì)分子質(zhì)量為4611 · 7iSI-MSm/z: found[M+3H]3+1538 · 6，[M+4H]4+1153 · 9; calu[M+3H]3+1538.7，[M+4H]4+1153.3。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種艾塞納膚巧xendin-4)類(lèi)似物，其序列為： His-Gly-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Leu-Ser-Xaal-Gln-Met-Glu-Glu-Glu-Ala- Val-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu-Xaa2-Leu-Lys-Asn-Gly-Gly-Pr〇-Ser-Ser-Gly-Ala-Pr〇-Pr〇- Pr〇-Ser-Xaa3 其中： Xaal:化學(xué)修飾的切s或Lys; Xaa2:化學(xué)修飾的切S或Trp; Xaa3:化學(xué)修飾的切S或-N出； 化學(xué)修飾的切S結(jié)構(gòu)為運(yùn)里:η選自6~14。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的艾塞納膚巧xendin-4)類(lèi)似物，優(yōu)選的序列為：3. -種藥物組合物，包括治療有效量的至少一種權(quán)利要求1中所述的艾塞納膚 化xendin-4)類(lèi)似物和其藥學(xué)上可接受的鹽。4. 一種藥物組合物，包括治療有效量的至少一種權(quán)利要求1中所述的艾塞納膚 化xendin-4)類(lèi)似物和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑。5. 權(quán)利要求1中所述的艾塞納膚化xendin-4)類(lèi)似物和其藥學(xué)上可接受的鹽在制備用 于糖尿病的藥物中的運(yùn)用。6. 權(quán)利要求1中所述的艾塞納膚化xendin-4)類(lèi)似物和藥學(xué)上可接受的載體或稀釋劑 在制備用于糖尿病的藥物中的運(yùn)用。7. 權(quán)利要求1中所述的艾塞納膚化xendin-4)類(lèi)似物的制備方法，包括生物表達(dá)、液相 合成和固相合成制備方法。
【文檔編號(hào)】C07K14/575GK105936647SQ201610283641
【公開(kāi)日】2016年9月14日
【申請(qǐng)日】2016年4月27日
【發(fā)明人】黃文龍, 錢(qián)海, 孫李丹, 蔡星光, 韓京, 褚瑩瑩, 周潔
【申請(qǐng)人】中國(guó)藥科大學(xué)