獲自功能型蘋果的黃烷醇調(diào)控蛋白MsMYB12L及其編碼基因和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種獲自功能型蘋果的黃烷醇調(diào)控蛋白MsMYB12L及其編碼基因和應(yīng)用。本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)，獲自蘋果，命名為MsMYB12L蛋白，是如下(a1)或(a2)：(a1)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)；(a2)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物黃烷醇類化合物含量相關(guān)的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。編碼所述MsMYB12L蛋白的基因(MsMYB12L基因)也屬于本發(fā)明的保護范圍。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了MsMYB12L蛋白及其功能，可用于培育黃烷醇類化合物含量改變的轉(zhuǎn)基因植物，在植物育種中具有重大應(yīng)用前景。
【專利說明】
獲自功能型蘋果的黃烷醇調(diào)控蛋白MsMYBI 2L及其編碼基因和 應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[00011本發(fā)明涉及一種獲自功能型蘋果的黃烷醇調(diào)控蛋白MsMYB12L及其編碼基因和應(yīng) 用。
【背景技術(shù)】
[0002] "醫(yī)食同源"是發(fā)展方向。蘋果耐貯性好，供應(yīng)周期長，是世界性果品，尤其果實含 有較高比例的、人體比較容易吸收的游離多酚，具有很好的抗氧化、抗腫瘤、預(yù)防心腦血管 疾病及保肝等作用，營養(yǎng)保健價值高，有"一天一蘋果，醫(yī)生遠(yuǎn)離我"（An apple a day keeps the doctor away!)的美譽，世界上相當(dāng)多的國家都將其列為主要消費果品而大力 推薦。但近幾年的調(diào)研結(jié)果表明，一方面，在過去幾十年國內(nèi)外育成的1000多個蘋果品種， 80%是'金帥'等品種的雜交、實生或芽選后代，這種"近親繁殖"往往帶來品種的遺傳基礎(chǔ) 狹窄及抗逆性減退等問題;另一方面，特色、多抗和多樣性果品成為產(chǎn)業(yè)發(fā)展的重要方向。 [0003] 新疆野蘋果及其紅肉變型（Malus sieversii f.neidzwetzkyana)是世界栽培蘋 果的祖先種，不僅遺傳多樣性極為豐富，而且富含類黃酮等功能、保健成分，是進(jìn)行抗逆與 品質(zhì)育種的珍貴基因庫。但因農(nóng)田開墾等原因，新疆野蘋果的遺傳多樣性正遭到嚴(yán)重破壞， 瀕臨滅絕;我國是世界上最大的蘋果生產(chǎn)和消費國，其中2012年生產(chǎn)蘋果3950萬噸，主要用 于鮮食，且近70 %是類黃酮含量較低的富士品種。
[0004] 因此，圍繞"新疆野蘋果資源的科學(xué)保護與持續(xù)高效利用、栽培品種遺傳基礎(chǔ)拓 展、蘋果產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)型升級與共給側(cè)結(jié)構(gòu)改革和農(nóng)民持續(xù)增收以及人類健康水平提升"，進(jìn)行聯(lián) 合攻關(guān)與集成示范，本發(fā)明的發(fā)明人與美國康奈爾大學(xué)的教授合作，對新疆野蘋果及歐洲 森林蘋果等世界范圍內(nèi)的97份蘋果資源進(jìn)行了基因組重測序與生物信息學(xué)分析，構(gòu)建了新 疆紅肉蘋果與蘋果品種雜種一代及回交一、二代分離群體，研究明確了新疆野蘋果群體遺 傳結(jié)構(gòu)與遺傳多樣性特征、核心種質(zhì)構(gòu)建的技術(shù)參數(shù)、類黃酮含量等性狀的遺傳變異特點 及發(fā)育機理，提出了"功能型蘋果"的概念及"寬行高干、行間生草、給草施肥、肥田養(yǎng)根"的 現(xiàn)代果園管理理念，創(chuàng)建了常規(guī)雜交與生物技術(shù)有機結(jié)合的蘋果高效育種技術(shù)體系，創(chuàng)制 了一批新品種及優(yōu)異種質(zhì)，研發(fā)了蘋果新品種配套高效栽培技術(shù)體系。目前，已授權(quán)和申報 發(fā)明專利10余項，定植雜種實生苗4萬余株，育成新品種（系）16個;發(fā)表相關(guān)研究論文120 篇，其中SCI論文20余篇，這些研究成果總體處在國際同類研究的領(lǐng)先水平。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的是提供一種獲自功能型蘋果的黃烷醇調(diào)控蛋白MsMYB12L及其編碼 基因和應(yīng)用。
[0006] 本發(fā)明提供的蛋白質(zhì)，獲自蘋果，命名為MSMYB12L蛋白，是如下(al)或(a2):
[0007] (al)由序列表中序列1所不的氣基酸序列組成的蛋白質(zhì)；
[0008] (a2)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添 加且與植物黃烷醇類化合物含量相關(guān)的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。
[0009] 為了使(a)中的MSMYB12L蛋白便于純化和檢測，可在由序列表中序列1所示的氨基 酸序列組成的蛋白質(zhì)的氨基末端或羧基末端連接上如表1所示的標(biāo)簽。
[0010] 表1標(biāo)簽的序列
[0012] 上述(b)中的MSMYB12L蛋白可人工合成，也可先合成其編碼基因，再進(jìn)行生物表達(dá) 得到。上述(b)中的MsMYB12L蛋白的編碼基因可通過將序列表中序列2所示的DNA序列中缺 失一個或幾個氨基酸殘基的密碼子，和/或進(jìn)行一個或幾個堿基對的錯義突變，和/或在其 5'端和/或3'端連上表1所示的標(biāo)簽的編碼序列得到。
[0013] 編碼所述MSMYB12L蛋白的基因(MSMYB12L基因）也屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0014]所述基因為如下（1)或(2)或(3):
[0015] ⑴編碼區(qū)序列表中序列2所示的DNA分子；
[0016] (2)在嚴(yán)格條件下與（1)限定的DNA序列雜交且編碼與植物黃烷醇類化合物含量相 關(guān)的蛋白質(zhì)的DNA分子；
[0017] (3)與（1)限定的DNA序列具有90%以上同源性且編碼與植物黃烷醇類化合物含量 相關(guān)的蛋白質(zhì)的DNA分子。
[0018] 上述嚴(yán)格條件可為用0.1 X SSPE(或0.1 X SSC)，0.1 % SDS的溶液，在DNA或者RNA雜 交實驗中65°C下雜交并洗膜。
[0019] 含有所述MsMYB 12L基因的重組表達(dá)載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系、轉(zhuǎn)基因植物組織 或重組菌均屬于本發(fā)明的保護范圍。
[0020] 可用現(xiàn)有的植物表達(dá)載體構(gòu)建含有MSMYB12L基因的重組表達(dá)載體。所述植物表達(dá) 載體包括雙元農(nóng)桿菌載體和可用于植物微彈轟擊的載體等。使用MsMYB12L基因構(gòu)建重組表 達(dá)載體時，可在其轉(zhuǎn)錄起始核苷酸前加上任何一種增強型、組成型、組織特異型或誘導(dǎo)型啟 動子，它們可單獨使用或與其它的植物啟動子結(jié)合使用;此外，使用MsMYB12L基因構(gòu)建重組 表達(dá)載體時，還可使用增強子，包括翻譯增強子或轉(zhuǎn)錄增強子，這些增強子區(qū)域可以是ATG 起始密碼子或鄰接區(qū)域起始密碼子等，但必需與編碼序列的閱讀框相同，以保證整個序列 的正確翻譯。所述翻譯控制信號和起始密碼子的來源是廣泛的，可以是天然的，也可以是合 成的。翻譯起始區(qū)域可以來自轉(zhuǎn)錄起始區(qū)域或結(jié)構(gòu)基因。為了便于對轉(zhuǎn)基因植物細(xì)胞或植 物進(jìn)行鑒定及篩選，可對所用植物表達(dá)載體進(jìn)行加工，如加入在植物中表達(dá)可產(chǎn)生顏色變 化的酶或發(fā)光化合物的基因、具有抗性的抗生素標(biāo)記物或是抗化學(xué)試劑標(biāo)記基因等。從轉(zhuǎn) 基因植物的安全性考慮，可不加任何選擇性標(biāo)記基因，直接以表型篩選轉(zhuǎn)化植株。所述重組 表達(dá)載體的出發(fā)載體可為pRI 101載體。所述重組表達(dá)載體具體可為在pRI 101載體的Nde I 和BamH頂每切位點之間插入序列表的序列2所示的雙鏈DNA分子得到的重組質(zhì)粒pRI 101 - MsMYB12L〇
[0021]所述植物組織具體可為植物愈傷組織，更具體可為植物胚性愈傷組織。所述植物 可為單子葉植物或雙子葉植物。所述雙子葉植物具體可為薔薇科植物。所述薔薇科植物具 體可為蘋果屬植物。所述蘋果屬植物具體可為蘋果，更具體可為'王林'蘋果。
[0022] 本發(fā)明還保護所述MsMYB12L蛋白的應(yīng)用，為如下(bl)或(b2):
[0023] (bl)調(diào)控植物的黃烷醇類化合物含量；
[0024] (b2)增加植物的黃烷醇類化合物含量。
[0025] 所述植物可為單子葉植物或雙子葉植物。所述雙子葉植物具體可為薔薇科植物。 所述薔薇科植物具體可為蘋果屬植物。所述蘋果屬植物具體可為蘋果，更具體可為'王林' 蘋果。
[0026]本發(fā)明還保護所述MsMYBl 2L基因在培育黃烷醇類化合物含量增加的轉(zhuǎn)基因植物 中的應(yīng)用。所述植物可為單子葉植物或雙子葉植物。所述雙子葉植物具體可為薔薇科植物。 所述薔薇科植物具體可為蘋果屬植物。所述蘋果屬植物具體可為蘋果，更具體可為'王林' 蘋果。
[0027]本發(fā)明還保護一種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，包括如下步驟:將所述MsMYBl 2L基因 導(dǎo)入出發(fā)植物，得到黃烷醇類化合物含量高于所述出發(fā)植物的轉(zhuǎn)基因植物。所述出發(fā)植物 可為單子葉植物或雙子葉植物。所述雙子葉植物具體可為薔薇科植物。所述薔薇科植物具 體可為蘋果屬植物。所述蘋果屬植物具體可為蘋果，更具體可為'王林'蘋果。所述MsMYB12L 基因具體可通過以上任一所述重組表達(dá)載體導(dǎo)入所述出發(fā)植物。所述方法中，具體可將所 述MsMYB12L基因?qū)氤霭l(fā)植物的愈傷組織，然后將愈傷組織培育為植株。所述愈傷組織具 體可為胚性愈傷組織。攜帶有所述MsMYB 12L基因的重組表達(dá)載體可通過Ti質(zhì)粒、Ri質(zhì)粒、植 物病毒載體、直接DNA轉(zhuǎn)化、顯微注射、電導(dǎo)、農(nóng)桿菌介導(dǎo)等常規(guī)生物學(xué)方法轉(zhuǎn)化到植物細(xì)胞 或組織中。
[0028]本發(fā)明還保護一種獲得轉(zhuǎn)基因植物組織的方法，包括如下步驟:將所述MsMYB12L 基因?qū)氤霭l(fā)植物組織，得到黃烷醇類化合物含量高于所述出發(fā)植物組織的轉(zhuǎn)基因植物組 織。所述出發(fā)植物可為單子葉植物或雙子葉植物。所述雙子葉植物具體可為薔薇科植物。所 述薔薇科植物具體可為蘋果屬植物。所述蘋果屬植物具體可為蘋果，更具體可為'王林'蘋 果。所述MsMYB12L基因具體可通過以上任一所述重組表達(dá)載體導(dǎo)入所述出發(fā)植物組織。所 述植物組織具體可為植物愈傷組織。所述愈傷組織具體可為胚性愈傷組織。
[0029] 本發(fā)明還保護所述MsMYBl 2L蛋白或所述所述MsMYB 12L基因或以上任一所述方法 在植物育種中的應(yīng)用。所述植物育種的目的為培育黃烷醇類化合物含量增高的植物。
[0030]以上任一所述黃烷醇類化合物為具有式(I)所示母環(huán)的化合物；
[0032]以上任一所述黃烷醇類化合物為式(II)所示化合物；
[0035] R2 = 0H或 Η;
[0036] R3 = H 或 OH。
[0037] κ1 = η，Κ2 = 〇Η，Κ3 = Η 時為兒茶素
[0038] Ri = OH，R2 = H，R3 = H 時為表兒茶素
[0039] 辦=Η，R2 = OH，R3 = 0H時為沒食子兒茶素
[0040] 辦=0!1，1?2=!1，1?3=0!1時為表沒食子兒茶素 [0041 ] Rl = 0G，r2 = η，r3 = η時為表兒茶素沒食子酸酯 [0042] Ri = 0G，R2 = Η，R3 = 0Η時為表沒食子兒茶素沒食子酸酯
[0043]本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了MsMYB12L蛋白及其功能，可用于培育黃烷醇類化合物含量改變的轉(zhuǎn) 基因植物，在植物育種中具有重大應(yīng)用前景。
【附圖說明】
[0044] 圖1為DMACA染色前照片。
[0045] 圖2為DMACA染色后照片。
【具體實施方式】
[0046] 以下的實施例便于更好地理解本發(fā)明，但并不限定本發(fā)明。下述實施例中的實驗 方法，如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自 常規(guī)生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設(shè)置三次重復(fù)實驗，結(jié)果取平 均值。
[0047] pRIlOl 載體（又稱"pRIHU-AN DNA"）：Takala 公司，Code No.3262。農(nóng)桿菌 LBA4404:Tiangen公司，產(chǎn)品目錄號：CC2901。'王林'蘋果：參考文獻(xiàn)：《The bHLH transcription factor MdbHLH3 promotes anthocyanin accumulation and fruit colouration in response to low temperature in apples))〇
[0048] 實施例l、MsMYB12L蛋白及其編碼基因的發(fā)現(xiàn)
[0049] 從"紫紅1號"蘋果中發(fā)現(xiàn)了一個新蛋白，如序列表的序列1所示，將其命名為 MsMYB12L蛋白。將編碼MsMYB12L蛋白的基因命名為MsMYB12L基因，其開放閱讀框如序列表 的序列2所示。
[0050] GENBANK中，與序列1同源性最高的蛋白如序列表的序列3所示。將序列表的序列3 所示的蛋白質(zhì)命名為對照蛋白，其編碼基因命名為對照基因，如序列表的序列4所示。
[0051 ] 實施例2、MsMYB12L蛋白的功能鑒定
[0052] 一、構(gòu)建重組質(zhì)粒
[0053] 將人工合成的序列表的序列2所示的雙鏈DNA分子插入pRIlOl載體的Nde I和BamH 頂每切位點之間，得到重組質(zhì)粒pRI 1 〇 1 -MsMYB 12L。
[0054] 將人工合成的序列表的序列4所示的雙鏈DNA分子插入pRI 101載體的Nde I和BamH 頂每切位點之間，得到對照質(zhì)粒。
[0055]二、轉(zhuǎn)基因組織的獲得
[0056] 1、將重組質(zhì)粒pRI101-MsMYB12L導(dǎo)入農(nóng)桿菌LBA4404,得到重組農(nóng)桿菌。
[0057] 2、取步驟1得到的重組農(nóng)桿菌菌體，用30ml MS液體培養(yǎng)基懸浮，得到0D6QQnm = 0.8 的菌懸液，加入30yL乙酰丁香酮，得到侵染液。
[0058] 3、取'王林'蘋果的胚性愈傷組織，接種至MS固體培養(yǎng)基上，25 °C培養(yǎng)15天。
[0059] 4、完成步驟3后，取愈傷組織，浸沒于步驟2得到的侵染液中，160rpm室溫振蕩15- 20min，然后用滅菌濾紙吸干表面。
[0060] 5、完成步驟4后，取愈傷組織，置于共培養(yǎng)培養(yǎng)基(含lmg/L 2，4-D和0 · 5mg/L6-BA 的MS固體培養(yǎng)基)上，25°C黑暗培養(yǎng)36小時。
[0061] 6、完成步驟5后，取愈傷組織，置于篩選培養(yǎng)基(含50mg/L卡那霉素、250mg/L羧卞 青霉素、lmg/L 2,4-D和0.5mg/L 6-BA的MS固體培養(yǎng)基)上，25°C黑暗培養(yǎng)20-30天。
[0062] 7、完成步驟6后，取可以在篩選培養(yǎng)基上生長的抗性愈傷組織，進(jìn)行PCR鑒定。
[0063] PCR鑒定所用的引物對如下：
[0064] 35s-F:5 '-GACGCACAATCCCACTATCC-3 '；
[0065] MYB12L-R:5 '-GACTACTCTCTCCAACTC-3 '；
[0066] 35s-F對應(yīng)于載體骨架上的35S啟動子中的區(qū)段，MYB12L-R對應(yīng)于MsMYB12L基因中 的區(qū)段，靶序列長度約為l〇〇〇bp。
[0067] PCR鑒定陽性的愈傷組織即為轉(zhuǎn)MsMYB 12L基因愈傷組織。
[0068] 8、將步驟7得到的轉(zhuǎn)MsMYB12L基因愈傷組織接種至篩選培養(yǎng)基（含50mg/L卡那霉 素、250mg/L羧卞青霉素、lmg/L 2，4-D和0.5mg/L 6-BA的MS固體培養(yǎng)基)上進(jìn)行繼代培養(yǎng)。 [0069]三、對照組織的獲得
[0070] 將對照質(zhì)粒代替重組質(zhì)粒pRI101_MsMYB12L進(jìn)行步驟二，得到轉(zhuǎn)對照基因愈傷組 織。
[0071] 將PRI101載體代替重組質(zhì)粒PRI101-MSMYB12L進(jìn)行步驟二，得到轉(zhuǎn)空載體愈傷組 織。
[0072]四、組織的鑒定
[0073] 1、定性鑒定(DMACA染色法）
[0074] DMACA染色法原理:在酸性條件下，對二甲氨基肉桂醛(DMACA)可以和黃烷醇類化 合物(黃烷醇類化合物包括三類:第一類為天然黃烷-3-醇類;第二類為黃烷-3，4-二醇類， 即無色花色素；第三類為原花青素）顯色生成藍(lán)色，其顏色與濃度呈正向關(guān)系。參考文獻(xiàn)： 《茶樹根原花青素提取工藝及檢測方法的優(yōu)化》。
[0075] 待測愈傷組織分別為:轉(zhuǎn)MsMYB12L基因愈傷組織、轉(zhuǎn)空載體愈傷組織和哥倫比亞 生態(tài)型擬南芥愈傷組織。
[0076]按照如下步驟進(jìn)行操作：
[0077] (1)將1體積份甲醇和1體積份6M HC1水溶液混合，得到甲醇-鹽酸混合液。
[0078] (2)將DMACA溶于甲醇-鹽酸混合液，得到0 · 3g/100ml的DMACA溶液。
[0079] (3)取待測愈傷組織，在DMACA溶液中染色15min。
[0080] DMACA染色前照片見圖1。轉(zhuǎn)MsMYB12L基因愈傷組織為深黃色。哥倫比亞生態(tài)型擬 南芥愈傷組織和轉(zhuǎn)空載體愈傷組織均為淺黃色。
[0081 ] DMACA染色后的照片見圖2。轉(zhuǎn)MsMYBl 2L基因愈傷組織被DMACA染成深藍(lán)色，意味著 有大量黃烷醇類化合物的積累。哥倫比亞生態(tài)型擬南芥愈傷組織和轉(zhuǎn)空載體愈傷組織均未 被染成深藍(lán)色，顯示為淺粉色。結(jié)果表明，MsMYB12L蛋白能調(diào)控黃烷醇類化合物的合成。 [0082]進(jìn)行五次重復(fù)試驗，結(jié)果一致。
[0083] 2、定量鑒定
[0084]待測愈傷組織分別為:轉(zhuǎn)MsMYBl 2L基因愈傷組織、轉(zhuǎn)對照基因愈傷組織、轉(zhuǎn)空載體 愈傷組織和哥倫比亞生態(tài)型擬南芥愈傷組織。
[0085]按照如下步驟進(jìn)行操作：
[0086] (1)取0.2g待測愈傷組織，液氮研磨后轉(zhuǎn)移到離心管中。
[0087] (2)取步驟（1)得到的離心管，加入lml含lmg/ml抗壞血酸的70% (體積百分含量） 丙酮水溶液，4°C、黑暗條件下靜置提取30min，收集上清液，離心管中剩余沉淀。
[0088] (3)取步驟(2)得到的離心管，加入lml含lmg/ml抗壞血酸的70% (體積百分含量） 丙酮水溶液，4°C、黑暗條件下靜置提取30min，收集上清液，離心管中剩余沉淀。
[0089] (4)取步驟(5)得到的離心管，加入lml含lmg/ml抗壞血酸的70% (體積百分含量） 丙酮水溶液，4°C、黑暗條件下靜置提取30min，收集上清液，離心管中剩余沉淀。
[0090] (5)取步驟(4)得到的離心管，加入lml含lmg/ml抗壞血酸的70% (體積百分含量） 丙酮水溶液，4°C、黑暗條件下靜置提取10小時，收集上清液。
[0091] (6)將步驟(2)得到的上清液、步驟(3)得到的上清液、步驟(4)得到的上清液和步 驟(5)得到的上清液混合，得到混合液。
[0092] (7)取步驟(6)得到的混合液，加入3ml乙醚，-20°C、黑暗條件下靜置(分相，上層為 乙醚相，下層為丙酮相，下層相含有黃烷醇類化合物），收集下層相。
[0093] (8)取2ml步驟(7)得到的下層相，加入1ml甲醇和0.5ml步驟1的（2)制備的DMACA溶 液，室溫靜置20min，然后643nm測量吸光度。
[0094] 以（ + )_Catechin(sigma產(chǎn)品）制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，標(biāo)準(zhǔn)曲線方程如下：7 = 2.816叉-0.012，R2 = 0.996 (y:吸光值;X:黃烷醇類化合物濃度、單位為mg/g)。
[0095] 將吸光度帶入標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，從而計算待測種子中的黃烷醇類化合物含量。
[0096] 進(jìn)行五次重復(fù)試驗，每次重復(fù)試驗中取10份待測愈傷組織的平均值。
[0097]轉(zhuǎn)MsMYBl 2L基因愈傷組織的黃烷醇類化合物含量為124.562mg/kg。轉(zhuǎn)對照基因愈 傷組織的黃烷醇類化合物含量為63.254mg/kg。轉(zhuǎn)空載體愈傷組織的黃烷醇類化合物含量 為21.758mg/kg。哥倫比亞生態(tài)型擬南芥愈傷組織的黃烷醇類化合物含量為21.604mg/kg。 本段中的"kg"指的均為愈傷組織鮮重。
【主權(quán)項】
1. 一種蛋白質(zhì)，是如下(al)或(a2): (al)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質(zhì)； (a2)將序列1的氨基酸序列經(jīng)過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且 與植物黃烷醇類化合物含量相關(guān)的由序列1衍生的蛋白質(zhì)。2. 編碼權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的基因。3. 如權(quán)利要求2所述的基因，其特征在于:所述基因為如下（1)或(2)或(3): (1) 編碼區(qū)如序列表中序列2所示的DNA分子； (2) 在嚴(yán)格條件下與（1)限定的DNA序列雜交且編碼與植物黃烷醇類化合物含量相關(guān)的 蛋白質(zhì)的DNA分子； (3) 與（1)限定的DNA序列具有90%以上同源性且編碼與植物黃烷醇類化合物含量相關(guān) 的蛋白質(zhì)的DNA分子。4. 含有權(quán)利要求2或3所述基因的重組表達(dá)載體、表達(dá)盒、轉(zhuǎn)基因細(xì)胞系、轉(zhuǎn)基因植物組 織或重組菌。5. 權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)的應(yīng)用，為如下(bl)或(b2): (bl)調(diào)控植物的黃烷醇類化合物含量； (b2)增加植物的黃烷醇類化合物含量。6. 權(quán)利要求2或3所述基因在培育黃烷醇類化合物含量增加的轉(zhuǎn)基因植物中的應(yīng)用。7. -種培育轉(zhuǎn)基因植物的方法，包括如下步驟:將權(quán)利要求2或3所述基因?qū)氤霭l(fā)植 物，得到黃烷醇類化合物含量高于所述出發(fā)植物的轉(zhuǎn)基因植物。8. -種培育轉(zhuǎn)基因植物組織的方法，包括如下步驟:將權(quán)利要求2或3所述基因?qū)氤?發(fā)植物組織，得到黃烷醇類化合物含量高于所述出發(fā)植物組織的轉(zhuǎn)基因植物組織。9. 如權(quán)利要求8所述的方法，其特征在于:所述植物組織為植物愈傷組織。10. 權(quán)利要求1所述蛋白質(zhì)，或，權(quán)利要求2或3所述基因，或，權(quán)利要求7或8或9所述方 法，在植物育種中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12N15/82GK105949289SQ201610300919
【公開日】2016年9月21日
【申請日】2016年5月6日
【發(fā)明人】王楠, 陳學(xué)森, 姜生輝, 許海峰, 王意程, 毛志泉, 姜遠(yuǎn)茂
【申請人】山東農(nóng)業(yè)大學(xué)