一種陽(yáng)離子超支化多糖衍生物及其在增強(qiáng)血卟啉類(lèi)光敏劑對(duì)腫瘤細(xì)胞光毒性方面的應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種通過(guò)制備血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒從而增強(qiáng)血卟啉類(lèi)光敏劑對(duì)腫瘤細(xì)胞光毒性的技術(shù)。所述復(fù)合物納米粒具有以下特性，在通過(guò)光動(dòng)力療法高效、安全治療腫瘤方面具有很好的應(yīng)用前景：1）在較低血卟啉類(lèi)光敏劑濃度下具有較高的腫瘤細(xì)胞殺傷性，有利于降低血卟啉類(lèi)光敏劑的劑量，提高了其對(duì)正常細(xì)胞和組織在光照射下的安全性；2）粒徑為200～250nm，對(duì)腫瘤組織具有被動(dòng)靶向性，有利于提高血卟啉類(lèi)光敏劑對(duì)正常細(xì)胞和組織的安全性；3）顯正電性，有利于攜帶血卟啉類(lèi)光敏劑跨越負(fù)電性的細(xì)胞膜進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，從而提高血卟啉類(lèi)光敏劑被腫瘤細(xì)胞胞吞的效率；4）制備條件溫和、簡(jiǎn)單、方便、成本低。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種陽(yáng)離子超支化多糖衍生物及其在増強(qiáng)血卟啉類(lèi)光敏劑對(duì) 腫瘤細(xì)胞光毒性方面的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥材料技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及一種陽(yáng)離子超支化多糖衍生 物及其在增強(qiáng)血卟啉類(lèi)光敏劑對(duì)腫瘤細(xì)胞光毒性方面的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 作為一種新興的腫瘤組織定位治療法，光動(dòng)力療法(Photodynamic Therapy，Η)Τ) 在皮膚癌、胃腸癌、頭頸腫瘤、婦科腫瘤等的治療方面顯示出一定的療效(Brown S.B., et al，Lancet Oncol. 2004，5, 497-508)。其治療原理是，光敏劑藥物靜脈注射后，在腫瘤 部位給予激光照射(波長(zhǎng)一般為600~800 nm)，光敏劑經(jīng)光化學(xué)反應(yīng)生成活性氧(〇2_和022_) 或者單線態(tài)氧(^2)等光毒性物質(zhì)，殺傷或殺死腫瘤細(xì)胞，從而破壞腫瘤組織(Stojadinovic A., et al, Journal of the American College of Surgeons, 2003, 196, 954-964; Nishiyama N., et al, Advanced Drug Delivery Reviews, 2009, 61, 327-338)〇
[0003] 血卟啉類(lèi)化合物是目前臨床上常用的光敏劑藥物（例如Photsan和喜泊芬等血卟 啉注射液），它們是由4個(gè)吡咯環(huán)和4個(gè)次甲基橋聯(lián)起來(lái)形成大π共輒體系的卟啉衍生物(血 卟啉化學(xué)結(jié)構(gòu)如式I所示）(邵紅霞等，醫(yī)學(xué)綜述，2008，14(22)，3404-3407)。血卟啉類(lèi)光敏 劑的主要優(yōu)點(diǎn)在于能選擇性地消滅局部或淺表性的原發(fā)和復(fù)發(fā)腫瘤，與放療和化療存在協(xié) 同作用。目前臨床上主要用于治療皮膚癌、胃腸癌、頭頸腫瘤、婦科腫瘤等(Brown S.B.，et al， Lancet Oncol. 2004， 5(8)， 497-508)。
[0004] 然而，由于血卟啉類(lèi)光敏劑存在以下缺陷，導(dǎo)致光動(dòng)力療效受到影響：（1)血卟啉 類(lèi)光敏劑在紅光區(qū)域吸收弱，為達(dá)到治療效果，通常需要較大劑量，導(dǎo)致增大了對(duì)正常組織 的毒副作用，并對(duì)皮膚產(chǎn)生較長(zhǎng)的光過(guò)敏期（于克貴等，化學(xué)研究與應(yīng)用，2007,19(12)， 1298-1303); (2)血卟啉類(lèi)光敏劑缺乏腫瘤組織靶向性，容易對(duì)正常組織產(chǎn)生毒副作用 (BaeB., et al, Biomaterials, 2010, 31, 6325-6335; Li, S. J., et al, Biomaterials , 2009, 30, 2929-2939); (3)血卟啉類(lèi)光敏劑大多數(shù)含有-C00H負(fù)電荷基 團(tuán)，親水性較強(qiáng)，因細(xì)胞膜帶負(fù)電，不容易進(jìn)入腫瘤細(xì)胞（Li Y. et al, Chemistry of Materials 2007， 19， 5557-5562; Ding H., et al. Journal of Controlled Release 2011，151，271-277) ; (4)血卟啉類(lèi)光敏劑由于含有疏水性的卟吩環(huán)和親水性的-COOH(即 具有兩親性），容易堆積在腫瘤細(xì)胞膜中，難以進(jìn)入腫瘤細(xì)胞發(fā)揮光動(dòng)力治療的效果 (Eshghi H., et al, Photodiagnosis and Photodynamic Therapy, 2013, 10，304-312; Hogset A.， et al， Advanced Drug Delivery Reviews, 2004， 56， 95-115)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有技術(shù)中血卟啉類(lèi)光敏劑存在的缺陷和不足， 提供一種通過(guò)制備血卟啉類(lèi)光敏劑與陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒的方法來(lái)增 強(qiáng)血卟啉類(lèi)光敏劑對(duì)腫瘤細(xì)胞光毒性的技術(shù)。
[0006] 本發(fā)明目的是提供一種陽(yáng)離子超支化多糖衍生物。
[0007] 本發(fā)明的另一目的是提供上述陽(yáng)離子超支化多糖衍生物在增強(qiáng)血卟啉類(lèi)光敏劑 對(duì)腫瘤細(xì)胞光毒性方面的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明的再一目的是提供一種血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物 納米粒。
[0009] 本發(fā)明的再一目的是提供上述血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物 納米粒在制備增強(qiáng)血卟啉類(lèi)光敏劑對(duì)腫瘤細(xì)胞光毒性的藥物方面的應(yīng)用。
[0010] 本發(fā)明上述目的通過(guò)以下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)： 一種陽(yáng)離子超支化多糖衍生物，是含有正電性胺類(lèi)基團(tuán)的超支化多糖衍生物，具體是 陽(yáng)離子超支化支鏈淀粉衍生物或陽(yáng)離子超支化糖原衍生物，所述正電性胺類(lèi)基團(tuán)（即陽(yáng)離 子取代基團(tuán)）為乙二胺基、二乙烯三胺基、3-二甲胺基丙胺基、三乙烯四胺基或，氨乙基哌 嗪基，陽(yáng)離子取代基的取代度為0.5~3.0。
[0011] 所述陽(yáng)離子超支化多糖衍生物的結(jié)構(gòu)式如下所示：
其中，R為胺類(lèi)基團(tuán)。
[0012] 所述陽(yáng)離子超支化多糖衍生物可以與負(fù)電性的血卟啉類(lèi)光敏劑通過(guò)靜電相互作 用而形成復(fù)合物納米粒。
[0013] 另外，上述陽(yáng)離子超支化多糖衍生物的制備方法，包括如下步驟： 51. 按照多糖：除水有機(jī)溶劑=0.1~1.0g: 10~50mL的比例，向多糖中加入除水有機(jī)溶 劑，在氮?dú)狻鍤饣蚝獗Ｗo(hù)下100~500r/min室溫?cái)嚢?~24小時(shí)溶解，得到多糖溶液； 52. 按照-羰基二咪唑：除水有機(jī)溶劑=1.0~5.0g: 5~20mL的比例，向-羰基二 咪唑中加入除水有機(jī)溶劑溶解； 53. 將步驟S2所得溶液緩慢加入到步驟S1的多糖溶液中，在氮?dú)?、氬氣或氦氣保護(hù)下， 100~500r/min室溫活化反應(yīng)0.5~2小時(shí)； 54. 向步驟S3的反應(yīng)液中緩慢滴加提供正電性胺類(lèi)基團(tuán)的試劑，在氮?dú)?、氬氣或氦氣?護(hù)下，100~500r/min室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1~24小時(shí)； 55. 步驟S4的反應(yīng)液用水透析1~5天，冷凍干燥，得到含有正電性胺類(lèi)基團(tuán)的陽(yáng)離子超 支化糖原衍生物。
[0014] 其中，優(yōu)選地，步驟S1所述多糖為糖原或支鏈淀粉。
[0015] 更優(yōu)選地，當(dāng)多糖為糖原時(shí)，糖原：除水有機(jī)溶劑=0.3~0.8g: 10~50mL，當(dāng)多糖為 支鏈淀粉時(shí)，支鏈淀粉:除水有機(jī)溶劑=〇. 1~1. 〇g: 10~50mL。
[0016] 優(yōu)選地，步驟S1所述有機(jī)溶劑為二甲基甲酰胺、乙酸乙酯、二氯甲烷或二甲基亞 砜。
[0017] 優(yōu)選地，步驟S2所述有機(jī)溶劑為二甲基甲酰胺、乙酸乙酯、二氯甲烷或二甲基亞 砜。
[0018] 更優(yōu)選地，步驟S1所述有機(jī)溶劑和步驟S2所述有機(jī)溶劑相同。
[0019] 優(yōu)選地，步驟S3所述步驟S2所得溶液緩：步驟S1的多糖溶液的體積比=1~4: 2~ 10。
[0020]優(yōu)選地，步驟S4所述提供正電性胺類(lèi)基團(tuán)的試劑為乙二胺、二乙烯三胺、3-二甲胺 基丙胺、三乙烯四胺或，氨乙基哌嗪。
[0021] 優(yōu)選地，步驟S1所述除水有機(jī)溶劑:步驟S2所述除水有機(jī)溶劑:步驟S4所述提供正 電性胺類(lèi)基團(tuán)的試劑的體積比=10~50:5~20:3~15。
[0022] 優(yōu)選地，步驟S5所述水為去離子水、超純水或蒸餾水。
[0023] 更優(yōu)選地，步驟S1、S3、S4中同時(shí)選擇氮?dú)狻鍤饣蚝狻?br>[0024] 另外，上述陽(yáng)離子超支化多糖衍生物在增強(qiáng)血卟啉類(lèi)光敏劑對(duì)腫瘤細(xì)胞光毒性方 面的應(yīng)用，也在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0025] -種血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒，由包括如下步驟 的方法制備得到： 51. 在緩沖溶液中分別配制1~10mg/mL的陽(yáng)離子超支化多糖衍生物母液A和0.1~ 5. Omg/mL的血卟啉類(lèi)光敏劑母液B; 52. 按照陽(yáng)離子超支化多糖衍生物:血卟啉類(lèi)光敏劑=1~50:1質(zhì)量比，將母液A和母液B 混合，漩渦震蕩5~60s，避光靜置0.5~24小時(shí)，得到血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍 生物復(fù)合物納米粒溶液。
[0026] 其中，為了使血卟啉類(lèi)光敏劑和陽(yáng)離子超支化多糖衍生物能充分溶解，作為一種 優(yōu)選方案，步驟S1所述緩沖溶液的pH值為6.0~8.0。
[0027]更優(yōu)選地，步驟S1所述緩沖溶液為pH6.0的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、pH6.8的巴比 妥鈉-鹽酸緩沖液、PH7.2的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液、pH7.6的硼酸-硼砂緩沖液或 pH8.0的Tris-鹽酸緩沖液。
[0028] 作為一種優(yōu)選方案，步驟S1所述血卟啉類(lèi)光敏劑為Photofrin、Photsan、喜泊芬或 原卟啉(ΡρΙΧ)。
[0029]優(yōu)選地，為了使血卟啉類(lèi)光敏劑和陽(yáng)離子超支化多糖衍生物形成穩(wěn)定的復(fù)合物納 米粒，步驟S2所述避光靜置時(shí)的復(fù)合溫度為5~40°C。
[0030] 另外，所述血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒的結(jié)構(gòu)式如 下所示：
其中，R為胺類(lèi)基團(tuán)，橄欖形狀的灰色部分為血卟啉類(lèi)光敏劑。
[0031] 另外，上所述血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒在制備增 強(qiáng)血卟啉類(lèi)光敏劑對(duì)腫瘤細(xì)胞光毒性的藥物方面的應(yīng)用，以及在制備腫瘤治療藥物方面的 應(yīng)用，也都在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
[0032] 優(yōu)選地，所述藥物是指光動(dòng)力療法高效、安全治療腫瘤的藥物。
[0033] 多糖(Polysaccharide)是由十個(gè)以上單糖基通過(guò)糖苷鍵連接而成的天然高分子， 廣泛地存在于自然界中，例如纖維素、淀粉、糖原和海藻酸鈉等(Edgar K.，et al，ACS Symposium Series. 2010，1017，3-12)。由于多糖安全無(wú)毒，具有非常好的生物相容性和 可降解性，所以非常適合用作生物材料，在生物醫(yī)學(xué)領(lǐng)域備受關(guān)注（Liu J.，et al， Bioactive Carbohydrates and Dietary Fibre, 2015，5，31-61)。為了進(jìn)一步將多糖開(kāi) 發(fā)成為具有不同功能的生物材料，通常經(jīng)過(guò)化學(xué)反應(yīng)合成各種多糖衍生物。自然界中有一 些超支化多糖（例如支鏈淀粉和糖原）具有類(lèi)似于超支化聚合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)（1?〇11311(1-Sabat6 A·, et al, Biomacromolecules, 2007，8，2520-2532·)，它們的支化空腔可用 于負(fù)載藥物等（Zhou Υ· et al, Advanced Materials 2010，22，4567-4590)。
[0034] 為了增強(qiáng)血卟啉類(lèi)光敏劑對(duì)腫瘤細(xì)胞光毒性，本發(fā)明首先合成含有正電性胺類(lèi)基 團(tuán)的超支化多糖衍生物，然后它們與負(fù)電性的血卟啉光敏劑通過(guò)靜電相互作用，制備得到 血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒，可以顯著增強(qiáng)血卟啉類(lèi)光敏劑 對(duì)腫瘤細(xì)胞的光毒性，可應(yīng)用于通過(guò)光動(dòng)力療法高效、安全治療腫瘤方面。
[0035]本發(fā)明具有以下有益效果： (1) 血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒在較低血卟啉類(lèi)光敏劑 濃度下具有較高的腫瘤細(xì)胞殺傷性，有利于降低血卟啉類(lèi)光敏劑的劑量，提高了其對(duì)正常 細(xì)胞和組織在光照射下的安全性； (2) 血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物粒徑約為200~250 nm，對(duì)腫瘤 組織具有被動(dòng)靶向性，有利于提高血卟啉類(lèi)光敏劑對(duì)正常細(xì)胞和組織的安全性； (3) 血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒顯正電性，有利于攜帶血 卟啉類(lèi)光敏劑跨越負(fù)電性的細(xì)胞膜進(jìn)入腫瘤細(xì)胞，從而提高血卟啉類(lèi)光敏劑被腫瘤細(xì)胞胞 吞攝取的效率； (4) 所述血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒的制備條件溫和，工 藝簡(jiǎn)單，操作方便，所需設(shè)備及原材料廉價(jià)，在通過(guò)光動(dòng)力療法高效、安全治療腫瘤方面具 有一定的應(yīng)用前景。
【附圖說(shuō)明】
[0036] 圖1為陽(yáng)離子超支化多糖衍生物的制備工藝流程圖。
[0037] 圖2為血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒的制備工藝流程 圖。
[0038] 圖3為陽(yáng)離子超支化多糖衍生物及血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù) 合物納米粒的結(jié)構(gòu)示意圖。
[0039] 圖4為本發(fā)明（a)糖原原料以及(b)含有3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的陽(yáng)離子超支化糖原 衍生物(DMAPA-Glyp)的紅外光譜(FTIR)圖。
[0040] 圖5為本發(fā)明（a)糖原原料以及(b)DMAPA-Glyp衍生物的核磁共振氫譜(? NMR)圖 (溶劑:D20)。
[0041] 圖6為本發(fā)明制備的DMAPA-Glyp衍生物/喜泊芬不同質(zhì)量比的復(fù)合物納米粒凝膠 電泳圖。
[0042]圖7為本發(fā)明制備的DMAPA-Glyp衍生物/喜泊芬不同質(zhì)量比的復(fù)合物納米粒zeta 電位圖。
[0043]圖8為本發(fā)明制備的喜泊芬/DMAPA-Glyp衍生物復(fù)合物納米粒(質(zhì)量比為20)的掃 描電鏡照片：（3)放大3.5萬(wàn)倍(標(biāo)尺:20〇11111)，（13)放大15萬(wàn)倍(標(biāo)尺:6〇11111)〇
[0044]圖9為本發(fā)明合成的DMAPA-Glyp衍生物與支化聚醚酰亞胺(bPEI)對(duì)照物在不同濃 度下對(duì)胰腺癌細(xì)胞(Panc-Ι)的毒性分析。
[0045]圖10為本發(fā)明制備的喜泊芬/DMAPA-Glyp衍生物復(fù)合物納米粒(DMAPA-Glyp衍生 物/喜泊芬質(zhì)量比=20)在無(wú)激光照射下對(duì)Panc-Ι細(xì)胞的毒性(暗毒性）以及激光照射下(波 長(zhǎng)為650nm)對(duì)Panc-Ι細(xì)胞的毒性(光毒性）。
[0046] 圖11為本發(fā)明制備的喜泊芬/DMAPA-Glyp衍生物復(fù)合物納米粒對(duì)Panc-Ι細(xì)胞光毒 性的倒置熒光顯微鏡照片(標(biāo)尺：100 ym):(a)正常生長(zhǎng)的Panc-Ι細(xì)胞對(duì)照組，（b)喜泊芬組 (喜泊芬濃度為6yg · ml/1)，（c)喜泊芬/DMAPA-Glyp衍生物復(fù)合物納米粒組(喜泊芬濃度為6 yg · mL-工）。
【具體實(shí)施方式】
[0047] 以下結(jié)合說(shuō)明書(shū)附圖和具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明 做任何形式的限定。除非特別說(shuō)明，本發(fā)明采用的試劑、方法和設(shè)備為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)試 劑、方法和設(shè)備，以下實(shí)施例所用試劑和材料均為市購(gòu)。
[0048]實(shí)施例1制備陽(yáng)離子超支化多糖衍生物及血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍 生物復(fù)合物 1、制備陽(yáng)離子超支化多糖衍生物 (1)方法 陽(yáng)離子超支化多糖衍生物的制備工藝流程如附圖1所示，具體步驟如下： S1.按照多糖：除水有機(jī)溶劑=0.1~1.0g: 10~50mL的比例，向多糖中加入除水有機(jī)溶 劑，在氮?dú)?、氬氣或氦氣保護(hù)下100~500r/min室溫?cái)嚢?~24小時(shí)溶解，得到多糖溶液； 52. 按照#，#' -羰基二咪唑：除水有機(jī)溶劑=1.0~5. Og: 5~20mL的比例，向#，#' -羰基二 咪唑中加入除水有機(jī)溶劑溶解； 53. 將步驟S2所得溶液緩慢加入到步驟S1的多糖溶液中，在氮?dú)?、氬氣或氦氣保護(hù)下， 100~500r/min室溫活化反應(yīng)0.5~2小時(shí)； 54. 向步驟S3的反應(yīng)液中緩慢滴加提供正電性胺類(lèi)基團(tuán)的試劑，在氮?dú)?、氬氣或氦氣?護(hù)下，100~500r/min室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1~24小時(shí)； 55. 步驟S4的反應(yīng)液用水透析1~5天，冷凍干燥，得到含有正電性胺類(lèi)基團(tuán)的陽(yáng)離子超 支化糖原衍生物。
[0049] 其中，步驟S1所述多糖為糖原或支鏈淀粉。
[0050] 更優(yōu)選地，當(dāng)多糖為糖原時(shí)，糖原：除水有機(jī)溶劑=0.3~0.8g: 10~50mL，當(dāng)多糖為 支鏈淀粉時(shí)，支鏈淀粉:除水有機(jī)溶劑=〇. 1~1. 〇g: 10~50mL。
[0051] 步驟S1、S2所述有機(jī)溶劑相同，均為二甲基甲酰胺、乙酸乙酯、二氯甲烷或二甲基 亞砜。
[0052] 步驟S3所述步驟S2所得溶液緩:步驟S1的多糖溶液的體積比=1~4:2~10。
[0053]步驟S4所述提供正電性胺類(lèi)基團(tuán)的試劑為乙二胺、二乙烯三胺、3-二甲胺基丙胺、 三乙烯四胺或，氨乙基哌嗪。
[0054]步驟S1所述除水有機(jī)溶劑:步驟S2所述除水有機(jī)溶劑:步驟S4所述提供正電性胺 類(lèi)基團(tuán)的試劑的體積比=10~50:5~20:3~15。
[0055]步驟S5所述水為去離子水、超純水或蒸餾水。
[0056] 步驟S1、S3、S4中均同時(shí)選擇氮?dú)?、氬氣或氦氣?br>[0057] (2)陽(yáng)離子超支化多糖衍生物的結(jié)構(gòu)示意圖如附圖3所示。
[0058] 2、制備血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒 (1)方法 血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒的制備工藝流程如附圖2所 示，具體步驟如下： 51. 在6.0~8.0的緩沖溶液中分別配制1~10mg/mL的陽(yáng)離子超支化多糖衍生物母液A 和0.1~5. Omg/mL的血卟啉類(lèi)光敏劑母液B; 52. 按照陽(yáng)離子超支化多糖衍生物:血卟啉類(lèi)光敏劑=1~50:1質(zhì)量比，將母液A和母液B 混合，漩渦震蕩5~60s，5~40 °C避光靜置0.5~24小時(shí)，得到血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支 化多糖衍生物復(fù)合物納米粒溶液。
[0059]其中，步驟S1所述6.0~8.0的緩沖溶液為pH6.0的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、pH6.8 的巴比妥鈉-鹽酸緩沖液、pH7.2的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液、pH7.6的硼酸-硼砂緩沖 液或PH8.0的Tris-鹽酸緩沖液。
[0060] 步驟S1所述血卟啉類(lèi)光敏劑為?11〇1:〇;^;[11、？11(^8311、喜泊芬或原卟啉(？口1父）。
[00611 (2)血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒的結(jié)構(gòu)示意圖如附 圖3所示。
[0062]實(shí)施例2血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒的制備和表征 1、制備陽(yáng)離子超支化糖原衍生物 (1)稱(chēng)取0.5 g糖原于干燥的50 mL圓底燒瓶中，加入10 mL除水二甲基甲酰胺，蓋上反 口膠塞，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫?cái)嚢?0小時(shí)（1 OOr/min)溶解。
[0063] (2)稱(chēng)取#，#' -羰基二咪唑4. Og加入至干燥的燒瓶中，加入10mL除水二甲基甲酰 胺，蓋上玻璃塞，搖晃溶解。
[0064] (3)用注射器緩慢將所得溶液加入到糖原溶液中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫活化1小時(shí) (100r/min)〇
[0065] (4)用注射器緩慢滴加3-二甲胺基丙胺12.0 mL至上述反應(yīng)液中，用氮?dú)獗Ｗo(hù)，室 溫?cái)嚢?4小時(shí)（100r/min)反應(yīng)。
[0066] (5)去離子水透析反應(yīng)液5天，冷凍干燥，得到含有3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的陽(yáng)離子 超支化糖原衍生物(DMAPA-Glyp)，進(jìn)行FTIR和 1H NMR分析，確定產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
[0067] 2、制備血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化糖原衍生物復(fù)合物納米粒 (1)以硼酸-硼砂緩沖液(ΡΗ7.6)為溶劑，分別配制1 mg/mL DMAPA-Glyp衍生物母液Α以 及3 mg/mL喜泊芬母液B。
[0068] (2)按照DMAPA-Glyp衍生物/喜泊芬一定質(zhì)量比，將A和B兩種母液在25°C混合，漩 渦震蕩60 s，避光靜置1小時(shí)，得到喜泊芬/ DMAPA-Glyp衍生物復(fù)合物溶液。
[0069] 3、血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化糖原衍生物復(fù)合物納米粒的表征 圖4為糖原原料以及DMAPA-Glyp衍生物的FTIR譜圖，可看出DMAPA-Glyp衍生物出現(xiàn)了 一些新吸收峰，其中1711 cnf1處吸收峰為氨基甲酸酯的羰基(C=0)特征峰，表明3-二甲胺基 丙胺基團(tuán)通過(guò)氨基甲酸酯鍵與糖原鏈發(fā)生偶聯(lián)。
[0070] 圖5為糖原原料以及DMAPA-Glyp衍生物的1H NMR譜圖，與糖原的1H NMR譜圖（圖5a) 相比，DMAPA-Glyp衍生物的1H NMR譜圖（圖5b沖出現(xiàn)了4個(gè)3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的特征共 振峰：（a)峰（1.6 ppm)、（b)峰（2.2 ppm)、（c)峰（2.3 ppm)和(d)峰（3.1 ppm)，進(jìn)一步證實(shí) 了3-二甲胺基丙胺基團(tuán)與糖原發(fā)生偶聯(lián)，合成出DMAPA-Glyp衍生物。通過(guò)咕NMR譜的質(zhì)子 積分法，即分別對(duì)陽(yáng)離子超支化糖原衍生物中異頭Hl(5.3-4.8 ppm)共振峰和3-二甲胺基 丙胺基團(tuán)中亞甲基質(zhì)子[(a)峰]進(jìn)行積分，根據(jù)公式（1)可計(jì)算出DMAPA-Glyp衍生物中3-二 甲胺基丙胺基團(tuán)的取代度DS(即每個(gè)糖單元中偶聯(lián)的配體基團(tuán)數(shù)目）。本實(shí)施例所得DMAPA-Glyp衍生物的取代度為1.4。
[0071] 式中，似/?)是DMAPA-Glyp衍生物中3-二甲胺基丙胺基團(tuán)的數(shù)目，是 DMAPA-Glyp衍生物中葡萄糖單元的數(shù)目是3-二甲胺基丙胺基團(tuán)中亞甲基質(zhì)子 [(a)峰]的積分面積，衍生物中異頭H1共振峰的積分面積。
[0072]圖6和圖7分別為DMAPA-Glyp衍生物/喜泊芬不同質(zhì)量比的復(fù)合物納米粒的凝膠電 泳和zeta電位分析圖。從圖6中可以看出當(dāng)DMAPA-Glyp衍生物/喜泊芬質(zhì)量比=20時(shí)，未能觀 察到游離喜泊芬的條帶，表明DMAPA-Glyp衍生物與喜泊芬形成了穩(wěn)定的復(fù)合物。圖7中當(dāng) DMAPA-Glyp衍生物/喜泊芬質(zhì)量比彡15時(shí)，zeta電位趨于平穩(wěn)，約為+25mV，證實(shí)DMAPA-Glyp 衍生物與喜泊芬形成了表面為正電性的復(fù)合物。
[0073]圖8為喜泊芬DMAPA-Glyp衍生物復(fù)合物納米粒的掃描電鏡照片，可觀察到該復(fù)合 物呈不規(guī)則的球狀粒子，粒徑約為200~250 nm。
[0074]實(shí)施例3血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒的制備 1、制備陽(yáng)離子超支化支鏈淀粉衍生物 (1)稱(chēng)取0. lg支鏈淀粉于干燥的50 mL圓底燒瓶中，加入20mL除水乙酸乙酯，蓋上反口 膠塞，在氬氣保護(hù)下室溫?cái)嚢?小時(shí)(200r/min)溶解。
[0075] (2)稱(chēng)取見(jiàn)羰基二咪唑l.Og加入至干燥的燒瓶中，加入5 mL除水乙酸乙酯，蓋 上玻璃塞，搖晃溶解。
[0076] (3)用注射器緩慢將所得溶液加入到支鏈淀粉溶液中，在氬氣保護(hù)下室溫活化0.5 小時(shí)(200r/min)。
[0077] (4)用注射器緩慢滴加二乙烯三胺10.0 mL至上述反應(yīng)液中，用氬氣保護(hù)，室溫?cái)?拌12小時(shí)(200r/min)反應(yīng)。
[0078] (5)超純水透析反應(yīng)液3天，冷凍干燥，得到偶聯(lián)二乙烯三胺基團(tuán)的陽(yáng)離子超支化 支鏈淀粉衍生物，進(jìn)行FTIR和1H NMR分析，確定產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
[0079] 2、制備血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化支鏈淀粉衍生物復(fù)合物納米粒 (1)以巴比妥鈉-鹽酸緩沖液(ΡΗ6.8)為溶劑，分別配制3 mg/mL陽(yáng)離子超支化支鏈淀 粉衍生物母液A以及0.1 mg/mL Photofrin母液B。
[0080] (2)按照陽(yáng)離子超支化支鏈淀粉衍生物/Photofrin-定質(zhì)量比，將A和B兩種母液 在5°C混合，漩渦震蕩40 s，避光靜置2小時(shí)，得到Photofrin/陽(yáng)離子超支化支鏈淀粉衍生物 復(fù)合物溶液。
[0081]實(shí)施例4血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒的制備 1、制備陽(yáng)離子超支化支鏈淀粉衍生物 (1)稱(chēng)取l.Og支鏈淀粉于干燥的50 mL圓底燒瓶中，加入50 mL除水二氯甲烷，蓋上反口 膠塞，在氦氣保護(hù)下室溫?cái)嚢?2小時(shí)(300r/min)溶解。
[0082] (2)稱(chēng)取見(jiàn)羰基二咪唑1.2g加入至干燥的燒瓶中，加入16mL除水二氯甲烷，蓋 上玻璃塞，搖晃溶解。
[0083] (3)用注射器緩慢將所得溶液加入到支鏈淀粉溶液中，在氦氣保護(hù)下室溫活化2小 時(shí)(300r/min)。
[0084] (4)用注射器緩慢滴加乙二胺15.0 mL至上述反應(yīng)液中，用氦氣保護(hù)，室溫?cái)嚢?0 小時(shí)(300r/min)反應(yīng)。
[0085] (5)蒸餾水透析反應(yīng)液1天，冷凍干燥，得到偶聯(lián)乙二胺陽(yáng)基團(tuán)的陽(yáng)離子超支化支 鏈淀粉衍生物，進(jìn)行FTIR和1H NMR分析，確定產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
[0086] 2、制備血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化支鏈淀粉衍生物復(fù)合物納米粒 (1)以磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液(ΡΗ7.2)為溶劑，分別配制5 mg/mL陽(yáng)離子超支 化支鏈淀粉衍生物母液A以及0.5 mg/mL Photsan母液B。
[0087] (2)按照陽(yáng)離子超支化支鏈淀粉衍生物/Photsan-定質(zhì)量比，將A和B兩種母液在 35°C混合，漩渦震蕩5 s，避光靜置0.5小時(shí)，得到Photsan/陽(yáng)離子超支化支鏈淀粉衍生物復(fù) 合物溶液。
[0088] 實(shí)施例5血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒的制備 1、制備陽(yáng)離子超支化糖原衍生物 (1)稱(chēng)取0.3g糖原于干燥的50 mL圓底燒瓶中，加入50 mL除水乙酸乙酯，蓋上反口膠 塞，在氦氣保護(hù)下室溫?cái)嚢?小時(shí)(400r/min)溶解。
[0089] (2)稱(chēng)取見(jiàn)羰基二咪唑2.5g加入至干燥的燒瓶中，加入20mL除水乙酸乙酯，蓋 上玻璃塞，搖晃溶解。
[0090] (3)用注射器緩慢將所得溶液加入到糖原溶液中，在氦氣保護(hù)下室溫活化0.5小時(shí) (400r/min)〇
[0091] (4)用注射器緩慢滴加三乙烯四胺3.0 mL至上述反應(yīng)液中，用氦氣保護(hù)，室溫?cái)嚢?8小時(shí)(400r/min)反應(yīng)。
[0092] (5)去離子水透析反應(yīng)液2天，冷凍干燥，得到偶聯(lián)三乙烯四胺基團(tuán)的陽(yáng)離子超支 化糖原衍生物，進(jìn)行FTIR和1H NMR分析，確定產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
[0093] 2、制備血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化糖原衍生物復(fù)合物納米粒 (1)以Tris-鹽酸緩沖液(ρΗ8.0)為溶劑，分別配制7mg/mL陽(yáng)離子超支化糖原衍生物母 液A以及5mg/mL原卟啉母液B。
[0094] (2)按照陽(yáng)離子超支化糖原衍生物/原卟啉一定質(zhì)量比，將A和B兩種母液在40°C混 合，漩渦震蕩30s，避光靜置12小時(shí)，得到原卟啉/陽(yáng)離子超支化糖原衍生物復(fù)合物溶液。
[0095]實(shí)施例6血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒的制備 1、制備陽(yáng)離子超支化支鏈淀粉衍生物 (1)稱(chēng)取0.2g支鏈淀粉于干燥的50mL圓底燒瓶中，加入40mL除水二甲基甲酰胺，蓋上反 口膠塞，在氬氣保護(hù)下室溫?cái)嚢?4小時(shí)(500r/min)溶解。
[0096] (2)稱(chēng)取羰基二咪唑3.0g加入至干燥的燒瓶中，加入8mL除水二甲基甲酰胺， 蓋上玻璃塞，搖晃溶解。
[0097] (3)用注射器緩慢將所得溶液加入到支鏈淀粉溶液中，在氬氣保護(hù)下室溫活化1.5 小時(shí)(500r/min)。
[0098] (4)用注射器緩慢滴加，氨乙基哌嗪12.OmL至上述反應(yīng)液中，用氬氣保護(hù)，室溫?cái)?拌1小時(shí)(500r/min)反應(yīng)。
[0099] (5)超純水透析反應(yīng)液5天，冷凍干燥，得到偶聯(lián)氨乙基哌嗪基團(tuán)的陽(yáng)離子超支 化支鏈淀粉衍生物，進(jìn)行FTIR和1H NMR分析，確定產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
[0100] 2、制備血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化支鏈淀粉衍生物復(fù)合物納米粒 (1)以巴比妥鈉-鹽酸緩沖液(ΡΗ6.8)為溶劑，分別配制9 mg/mL陽(yáng)離子超支化支鏈淀 粉衍生物母液A以及2 mg/mL喜泊芬母液B。
[0101] (2)按照陽(yáng)離子超支化支鏈淀粉衍生物/喜泊芬一定質(zhì)量比，將A和B兩種母液在30 °C混合，漩渦震蕩20 s，避光靜置18小時(shí)，得到喜泊芬/陽(yáng)離子超支化支鏈淀粉衍生物復(fù)合 物溶液。
[0102] 實(shí)施例7血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒的制備 1、制備陽(yáng)離子超支化糖原衍生物 (1)稱(chēng)取0.8g糖原于干燥的50 mL圓底燒瓶中，加入20mL除水二甲基亞砜，蓋上反口膠 塞，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫?cái)嚢?0小時(shí)(250r/min)溶解。
[0103] (2)稱(chēng)取見(jiàn)羰基二咪唑5.0 g加入至干燥的燒瓶中，加入10 mL除水二甲基亞 砜，蓋上玻璃塞，搖晃溶解。
[0104] (3)用注射器緩慢將所得溶液加入到糖原溶液中，在氮?dú)獗Ｗo(hù)下室溫活化2小時(shí) (250r/min)〇
[0105] (4)用注射器緩慢滴加乙二胺7.0 mL至上述反應(yīng)液中，用氮?dú)獗Ｗo(hù)，室溫?cái)嚢?0小 時(shí)（250r/min)反應(yīng)。
[0106] (5)蒸餾水透析反應(yīng)液3天，冷凍干燥，得到偶聯(lián)乙二胺基團(tuán)的陽(yáng)離子超支化糖原 衍生物，進(jìn)行FTIR和 1H NMR分析，確定產(chǎn)物結(jié)構(gòu)。
[0107] 2、制備血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化糖原衍生物復(fù)合物納米粒 (1)以檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液(ΡΗ6.0)為溶劑，分別配制10 mg/mL陽(yáng)離子超支化糖原 衍生物母液A以及2.5 mg/mL原卟啉母液B。
[0108] (2)按照陽(yáng)離子超支化糖原衍生物/原卟啉一定質(zhì)量比，將A和B兩種母液在37°C混 合，漩渦震蕩10 s，避光靜置24小時(shí)，得到原卟啉/陽(yáng)離子超支化糖原衍生物復(fù)合物溶液。
[0109] 實(shí)施例8血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒的對(duì)腫瘤細(xì)胞 光毒性分析 以實(shí)施例2制備的喜泊芬/ DMAPA-Glyp衍生物復(fù)合物為例，研究本發(fā)明制備的血卟啉 類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒的對(duì)腫瘤細(xì)胞光毒性作用。
[0110] 1、DMAPA-Glyp衍生物復(fù)合物與bPEI對(duì)Panc-l細(xì)胞的毒性分析，結(jié)果如附圖9所示。
[0111] 在濃度5~500yg/mL范圍內(nèi)，DMAPA-Glyp衍生物對(duì)Panc-l細(xì)胞的毒性均顯著低于 bPEI的細(xì)胞毒性，并且在濃度低于15yg/mL時(shí)，細(xì)胞存活率高于80%，表明DMAPA-Glyp衍生物 復(fù)合物在低濃度時(shí)比bPEI具有更好的生物相容性。
[0112] 2、喜泊芬/DMAPA-Glyp衍生物復(fù)合物納米粒對(duì)Panc-l細(xì)胞的暗毒性和光毒性分析 結(jié)果如附圖10所示，在實(shí)驗(yàn)濃度范圍內(nèi)，喜泊芬基本上無(wú)暗毒性，而喜泊芬/DMAPA- Glyp 衍生物復(fù)合物納米粒因 DMAPA-Glyp 衍生物在較高濃度時(shí)的低毒性，而顯示出隨喜泊芬 濃度增加而增加的暗毒性。
[0113] 經(jīng)激光照射后，喜泊芬/DMAPA-Glyp衍生物復(fù)合物納米粒的光毒性明顯高于喜泊 芬的光毒性。
[0114] 值得注意的是，喜泊芬/DMAPA-Glyp衍生物復(fù)合物納米在喜泊芬實(shí)驗(yàn)最低濃度(2μ g/mL，Panc-l細(xì)胞存活率僅為21%)時(shí)，即可體現(xiàn)出比喜泊芬在臨床用藥濃度（20 yg/mL， Panc-l細(xì)胞存活率為39%)更高的光毒性(血卟啉注射液說(shuō)明書(shū)，重慶市華鼎現(xiàn)代生物制藥 有限責(zé)任公司，國(guó)藥準(zhǔn)字H20054306)。
[0115] 3、喜泊芬/DMAPA-Glyp衍生物復(fù)合物納米粒對(duì)Panc-l細(xì)胞光毒性的倒置熒光顯微 鏡照片，如附圖11所示。
[0116] 可以看出，與正常生長(zhǎng)的Panc-l細(xì)胞對(duì)照組相比，經(jīng)激光照射后，喜泊芬組的 Panc-l細(xì)胞基本能維持其形態(tài)，而喜泊芬/DMAPA-Glyp衍生物復(fù)合物納米粒組的Panc-l細(xì) 胞形態(tài)已發(fā)生變化，甚至出現(xiàn)細(xì)胞膜破裂的現(xiàn)象。
[0117] 圖10和圖11的結(jié)果均表明，與比喜泊芬相比，喜泊芬/DMAPA-Glyp衍生物復(fù)合物納 米粒對(duì)Panc-l細(xì)胞表現(xiàn)出更高的光毒性，這與DMAPA-Glyp衍生物在較高濃度時(shí)的低毒性、 喜泊芬/DMAPA-Glyp衍生物復(fù)合物納米粒對(duì)腫瘤細(xì)胞的被動(dòng)靶向性以及其正電性易于攜帶 喜泊芬跨越負(fù)電性的細(xì)胞膜進(jìn)入Panc-l細(xì)胞有關(guān)。
[0118] 上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的 限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡(jiǎn)化， 均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種陽(yáng)離子超支化多糖衍生物，其特征在于，是含有正電性胺類(lèi)基團(tuán)的超支化多糖 衍生物，具體是陽(yáng)離子超支化支鏈淀粉衍生物或陽(yáng)離子超支化糖原衍生物，所述正電性胺 類(lèi)基團(tuán)為乙二胺基、二乙烯三胺基、3-二甲胺基丙胺基、三乙烯四胺基或，氨乙基哌嗪基， 陽(yáng)離子取代基的取代度為〇. 5~3.0。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述陽(yáng)離子超支化多糖衍生物，其特征在于，是由如下方法制備得 到：51. 按照多糖：除水有機(jī)溶劑=O. 1~1.0 g: 10~50mL的比例，向多糖中加入除水有機(jī)溶 劑，在氮?dú)?、氬氣或氦氣保護(hù)下100~500r/min室溫?cái)嚢?~24小時(shí)溶解，得到多糖溶液；52. 按照-羰基二咪唑：除水有機(jī)溶劑=1.0~5. Og: 5~20mL的比例，向-羰基二 咪唑中加入除水有機(jī)溶劑溶解；53. 將步驟S2所得溶液緩慢加入到步驟Sl的多糖溶液中，在氮?dú)?、氬氣或氦氣保護(hù)下， 100~500r/min室溫活化反應(yīng)0.5~2小時(shí)；54. 向步驟S3的反應(yīng)液中緩慢滴加提供正電性胺類(lèi)基團(tuán)的試劑，在氮?dú)狻鍤饣蚝獗?護(hù)下，100~500r/min室溫?cái)嚢璺磻?yīng)1~24小時(shí)；55. 步驟S4的反應(yīng)液用水透析1~5天，冷凍干燥，得到含有正電性胺類(lèi)基團(tuán)的陽(yáng)離子超 支化糖原衍生物。3. 權(quán)利要求1或2所述陽(yáng)離子超支化多糖衍生物在增強(qiáng)血卟啉類(lèi)光敏劑對(duì)腫瘤細(xì)胞光 毒性方面的應(yīng)用。4. 一種血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒，其特征在于，由包括 如下步驟的方法制備得到：51. 在緩沖溶液中分別配制1~10 m g / m L的陽(yáng)離子超支化多糖衍生物母液A和0.1~ 5. Omg/mL的血卟啉類(lèi)光敏劑母液B;52. 按照陽(yáng)離子超支化多糖衍生物:血卟啉類(lèi)光敏劑=1~50:1質(zhì)量比，將母液A和母液B 混合，漩渦震蕩5~60s，避光靜置0.5~24小時(shí)，得到血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍 生物復(fù)合物納米粒溶液。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒，其 特征在于，步驟Sl所述緩沖溶液的pH值為6.0~8.0。6. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒，其 特征在于，步驟Sl所述緩沖溶液為pH6.0的檸檬酸-檸檬酸鈉緩沖液、pH6.8的巴比妥鈉-鹽 酸緩沖液、PH7.2的磷酸氫二鈉-磷酸二氫鈉緩沖液、pH7.6的硼酸-硼砂緩沖液或pH8.0的 Tris-鹽酸緩沖液。7. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒，其 特征在于，步驟Sl所述血卟啉類(lèi)光敏劑為Photofr in、Photsan、喜泊芬、原卟啉。8. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒，其 特征在于，步驟S2所述避光靜置時(shí)的復(fù)合溫度為5~40°C。9. 權(quán)利要求4~8任一所述血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒在 制備增強(qiáng)血卟啉類(lèi)光敏劑對(duì)腫瘤細(xì)胞光毒性的藥物方面的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求4~8任一所述血卟啉類(lèi)光敏劑/陽(yáng)離子超支化多糖衍生物復(fù)合物納米粒 在制備腫瘤治療藥物方面的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61K47/36GK105949344SQ201610314913
【公開(kāi)日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年5月13日
【發(fā)明人】羅嘉浩, 楊立群, 于鐘, 黎悅, 張黎明
【申請(qǐng)人】中山大學(xué)