除去交聯(lián)透明質(zhì)酸中交聯(lián)劑的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種除去交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中交聯(lián)劑1，4?丁二醇二縮水甘油醚的方法，方法是用30KD中空纖維膜超濾，純化水循環(huán)體積為進(jìn)料體積的2～4倍，超濾進(jìn)料流速為4～10L/h，跨膜壓力為0.02～0.15Mpa。本發(fā)明可以使交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中交聯(lián)劑1，4?丁二醇二縮水甘油醚的殘留量小于1ppm，達(dá)到安全的范圍內(nèi)，確保交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠產(chǎn)品的安全性。
【專利說(shuō)明】
除去交聯(lián)透明質(zhì)酸中交聯(lián)劑的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一種除去交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中交聯(lián)劑1，4_ 丁二醇二縮水甘油醚的 方法，特別指的是用中空纖維膜超濾法去除交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中交聯(lián)劑1，4_ 丁二醇二縮 水甘油醚。 技術(shù)背景
[0002] 透明質(zhì)酸(hyaluronic acid)又名玻尿酸，是由葡萄糖醛酸和乙酰氨基葡萄糖雙 糖相互結(jié)合的線性大分子酸性粘多糖，廣泛存在于人和脊椎動(dòng)物組織的細(xì)胞外基質(zhì)和鏈球 菌的莢膜中，具有良好的理化性能和生物相容性，在生物體內(nèi)發(fā)揮著重要的作用。
[0003] 高純度的藥物級(jí)透明質(zhì)酸鈉已被制成注射劑，用于眼科手術(shù)、骨科手術(shù)、預(yù)防術(shù)后 粘連、治療骨性關(guān)節(jié)炎和類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎，此外，也被用于面部注射美容，改進(jìn)皮膚外觀和 結(jié)構(gòu)、減輕皺紋、阻止皮膚衰老或改進(jìn)唇部性狀。但在臨床醫(yī)學(xué)中發(fā)現(xiàn)，天然的透明質(zhì)酸易 被生物降解，在體內(nèi)存留時(shí)間較短，限制了透明質(zhì)酸的應(yīng)用。
[0004] 采用1，4_ 丁二醇二縮水甘油醚作為透明質(zhì)酸的交聯(lián)劑，將透明質(zhì)酸進(jìn)行交聯(lián)，交 聯(lián)后的透明質(zhì)酸除了可以保留透明質(zhì)酸原有的力學(xué)性能、生物降解性、生物相容性、安全 性、無(wú)免疫源性、無(wú)刺激性等特性外，還對(duì)自由基、熱和透明質(zhì)酸酶的降解作用具有更強(qiáng)的 抵抗性，這極大的提高了透明質(zhì)酸在體內(nèi)的保留時(shí)間，使其在體內(nèi)的保留時(shí)間可以延長(zhǎng)至6 個(gè)月甚至更久，這使得交聯(lián)透明質(zhì)酸的應(yīng)用獲得極大地推廣，尤其是在獲得新型醫(yī)用生物 材料方面，如防術(shù)后粘連材料、軟組織填充材料、新型藥物釋放基質(zhì)、美容和整形填充物等。
[0005] 然而交聯(lián)透明質(zhì)酸中殘留的交聯(lián)劑1，4_ 丁二醇二縮水甘油醚不能被人體降解，交 聯(lián)劑量過(guò)高，有致突變和引起不良反應(yīng)甚至癌癥的風(fēng)險(xiǎn)，故《整形手術(shù)用交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝 膠》對(duì)1，4_ 丁二醇二縮水甘油醚的殘留有嚴(yán)格的規(guī)定，限制其殘留量小于2ppm。去除交聯(lián)劑 殘留的常規(guī)方法是用乙醇侵泡洗滌，緩沖鹽溶液溶脹透析，過(guò)濾等，這些方法效率不高，不 能有效去除交聯(lián)劑的殘留。因此，開發(fā)一種有效降低1，4_丁二醇二縮水甘油醚殘留量的方 法，且能夠?qū)崿F(xiàn)大規(guī)模的放大生產(chǎn)，這對(duì)交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠的應(yīng)用具有重大的意義。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種除去交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中交聯(lián)劑1，4_ 丁二醇二縮 水甘油醚的方法，采用中空纖維膜超濾法去除交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中交聯(lián)劑1，4-丁二醇二 縮水甘油醚，使交聯(lián)劑的含量達(dá)到安全的范圍，確保交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠產(chǎn)品的安全性。
[0007] 本發(fā)明提供一種除去交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中交聯(lián)劑1，4_ 丁二醇二縮水甘油醚的 方法，包括如下步驟：
[0008] 將交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠進(jìn)行透析溶脹處理后，超濾濃縮，真空干燥，得到去除交聯(lián) 劑1，4_ 丁二醇二縮水甘油醚的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠。
[0009] 本發(fā)明中的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠，其所使用的交聯(lián)劑為1，4_ 丁二醇二縮水甘油 醚，其中交聯(lián)劑加入量與透明質(zhì)酸鈉凝膠的質(zhì)量比為〇. 〇 1 -〇. 1。
[0010] 本發(fā)明中透析溶脹是將透明質(zhì)酸鈉凝膠加入用磷酸氫二鈉和磷酸二氫鈉與0.9 % 生理鹽水配制，用0.1 m ο 1 / L的鹽酸調(diào)節(jié)ρ Η值至7.0所得到的透析液中，在2 0 °C~3 0 °C范圍 內(nèi)，透析12~15小時(shí)，直至達(dá)到透明質(zhì)酸吸水平衡，其中透明質(zhì)酸與透析液的質(zhì)量體積比為 lg/L〇
[0011] 本發(fā)明中交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠進(jìn)行透析溶脹處理后的濃度<lg/L，使其具有較好的 流動(dòng)性。
[0012] 本發(fā)明中超濾以純化水為循環(huán)體系，在一定的流速與跨膜壓力下，用中空纖維膜 進(jìn)行超濾。
[0013] 本發(fā)明中純化水循環(huán)體積為進(jìn)料體積的0~4倍，超濾進(jìn)料流速為1~10L/h，跨膜 壓力為0 · 02~0 · 2Mpa，中空纖維膜〈980KD。
[0014] 本發(fā)明中純化水循環(huán)體積優(yōu)選為進(jìn)料體積的2~4倍，超濾進(jìn)料流速為4~10L/h， 跨膜壓力為〇 . 02~0.15Mpa，中空纖維膜為30KD進(jìn)行超濾，在60°C真空干燥，得到濃度為 50mg/mL的透明質(zhì)酸，可通過(guò)氣相色譜法測(cè)得交聯(lián)透明質(zhì)酸中1，4-丁二醇二縮水甘油醚的 殘留量。氣相色譜使用的是Agilent DB-170(0.32mmX30m，0.25ym)色譜柱，氣相色譜測(cè)試 條件：柱溫：初溫120°C，以30°C/min升至260°C，保持lOmin;檢測(cè)器:FID;檢測(cè)器溫度：300 °C ;進(jìn)樣口溫度:260°C ;載氣:;載氣流速:4mL/min;分流比：1:1。
[0015] 本發(fā)明提供了一種用中空纖維膜超濾除去交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中交聯(lián)劑1，4_ 丁 二醇二縮水甘油醚的方法，該方法不僅可以確保透明質(zhì)酸產(chǎn)品的安全性，且操作簡(jiǎn)單，成本 低廉，綠色無(wú)污染，可以實(shí)現(xiàn)工業(yè)化生產(chǎn)。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 實(shí)施例：
[0017] 1)交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠的制備
[00?8] 在25°C下將1 · 60mg的氫氧化鈉溶解于400mL的水中，加入0 · 5g的1，4-丁二醇二縮 水甘油醚，溶解后，加入l〇g透明質(zhì)酸(購(gòu)自山東福瑞達(dá)生物化工有限公司，平均分子量為98 萬(wàn)道爾頓），攪拌30分鐘后，升高溫度至50°C，攪拌4小時(shí)，得到交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠。
[0019] 2)透析溶脹處理
[0020] 在25 °C下，將8.55g磷酸氫二鈉和1.20g磷酸二氫鈉溶于10L含量為0.9 %生理鹽水 中，過(guò)濾，濾液用0.1m〇l/L鹽酸調(diào)節(jié)pH值至7.0,加入步驟1)得到的透明質(zhì)酸鈉凝膠，透析溶 脹12小時(shí)，直至透明質(zhì)酸達(dá)到吸水平衡。
[0021] 3)超濾
[0022]將步驟2)得到的透明質(zhì)酸鈉凝膠用30KD中空纖維膜進(jìn)行超濾，控制跨膜壓力，純 化水循環(huán)體積，進(jìn)料流速等參數(shù)，同時(shí)使各組透明質(zhì)酸鈉凝膠超濾濃縮后的體積為2L。超濾 條件與結(jié)果如表1所示：
[0023]表1:超濾條件與實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0025] 4)真空干燥
[0026] 在60°C下，對(duì)步驟3)得到的凝膠進(jìn)行真空濃縮，得到50mg/mL除去交聯(lián)劑1，4-丁二 醇二縮水甘油醚的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠。
[0027] 其中，透明質(zhì)酸凝膠濃度由硫酸咔唑法進(jìn)行檢測(cè)；1，4_丁二醇二縮水甘油醚含量 由氣相色譜法進(jìn)行檢測(cè)；
[0028]實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，該方法在保證收率不小于80%的情況下，可以有效將交聯(lián)透明質(zhì) 酸鈉凝膠中交聯(lián)劑1，4_丁二醇二縮水甘油醚殘留降至O.lppm以下，保證了該交聯(lián)透明質(zhì)酸 凝膠樣品的安全性，證明了超濾法去除交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠中1，4_丁二醇二縮水甘油醚的有 效性。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種除去交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠中交聯(lián)劑I，4-丁二醇二縮水甘油醚的方法，特征在 于： 將交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠進(jìn)行透析溶脹處理后，超濾濃縮，真空干燥，得到去除交聯(lián)劑1， 4-丁二醇二縮水甘油醚的交聯(lián)透明質(zhì)酸鈉凝膠。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠進(jìn)行透析溶脹處理后的濃度< lg/L〇3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中，所述的超濾以純化水為循環(huán)體系，在一定的流速 與跨膜壓力下，用中空纖維膜進(jìn)行超濾。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，純化水循環(huán)體積為進(jìn)料體積的0~4倍，超濾進(jìn)料 流速為1~l〇L/h，跨膜壓力為0.02~0.2Mpa，中空纖維膜<980KD。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其中，純化水循環(huán)體積為進(jìn)料體積的2~4倍，超濾進(jìn)料 流速為4~10L/h，跨膜壓力為0 · 02~0 · 15Mpa，中空纖維膜為30KD。
【文檔編號(hào)】C08L5/08GK105949478SQ201610292499
【公開日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年5月5日
【發(fā)明人】郭振權(quán), 石江水, 凌世蘭, 趙裕棟, 林小鵲, 張鴻
【申請(qǐng)人】廣東東陽(yáng)光藥業(yè)有限公司