一種高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑及其制備方法和應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明提供了一種高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑以及該高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備和應(yīng)用方法。其中本發(fā)明所述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，脫脂奶粉、聚乙二醇、藻蛋白粉、羧甲基纖維素、膨潤土形成整個(gè)保存保護(hù)劑的骨架，還包含多種糖類和鹽，組分合理，原料來源廣，易于獲得，成本低，并且可以用于多種噬菌體的保存，適應(yīng)性好。本發(fā)明所述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，方法合理，工藝簡(jiǎn)單易行，效率高，應(yīng)用成本低，操作簡(jiǎn)單、易于實(shí)現(xiàn)。高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑具有極高的應(yīng)用前景，并且使用方便，應(yīng)用便捷。
【專利說明】
一種高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑及其制備方法和應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物技術(shù)和微生物制品領(lǐng)域，具體地，涉及一種高質(zhì)量噬菌體保存保 護(hù)劑，以及該高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法和應(yīng)用方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 噬菌體是一類能感染細(xì)菌、放線菌、螺旋體等微生物的病毒的總稱，對(duì)一些細(xì)菌具 有高度的專一性，當(dāng)噬菌體侵染這些細(xì)菌時(shí)，可在細(xì)菌中繁殖并殺死細(xì)菌，而它對(duì)動(dòng)植物沒 有毒性。隨著分子生物學(xué)技術(shù)的發(fā)展，噬菌體已經(jīng)廣泛用于疾病診斷、水處理等多個(gè)領(lǐng)域。 由于噬菌體可以將基因插入宿主DNA內(nèi)的特性，使得它還成為了重要的分子和遺傳學(xué)研究 工具。利用噬菌體，可以設(shè)計(jì)很多精巧的實(shí)驗(yàn)。
[0003] 然而在上述過程中，都需要對(duì)噬菌體進(jìn)行保存，在噬菌體的保存過程中，往往需要 加入保存保護(hù)劑從而保證噬菌體的活性?，F(xiàn)有技術(shù)中的保護(hù)劑常常保存效果差，噬菌體的 保存時(shí)間短，存活率低，噬菌體容易被污染，并且必須在低溫條件下進(jìn)行保存，嚴(yán)重制約了 對(duì)噬菌體應(yīng)用的發(fā)展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 發(fā)明目的：為了克服以上不足，本發(fā)明提供了一種高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑以及 該高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備和應(yīng)用方法。
[0005] 技術(shù)方案:本發(fā)明提供了一種高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，以重量組分計(jì)，包括以下 組分：
[0006] 脫脂奶粉5-12份
[0007] 聚乙二醇2-8份
[0008] 藻蛋白粉0.2-0.6份
[0009] 谷氨酸鈉0.3-0.8份
[0010] 羧甲基纖維素0.3-0.5份
[0011] 膨潤土 0.08-0.15份
[0012] 氫氧化鋁膠0.03-0.18份
[0013] 棉子糖 0.3-1.2份
[0014] 硫酸鎂 0.1-0.6份 [0015]氯化鈣 0.6-1.2份
[0016] 硫酸鈉 0.3-0.8份
[0017] 甘露醇 0.5-1.2份
[0018] 磷酸氫二鉀0.03-0.2份
[0019] 磷酸二氫鈉0.05-0.3份
[0020] 甘油 0.02-0.08份
[0021] 二甲基亞砜 0.01-0.04份
[0022] 水 100 份。
[0023] 本發(fā)明所述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，其組分合理，其中脫脂奶粉、聚乙二醇、 藻蛋白粉、羧甲基纖維素、膨潤土形成整個(gè)保存保護(hù)劑的骨架，防止低分子物質(zhì)的碳化和氧 化，同時(shí)保護(hù)活性物質(zhì)不受溫度影響，使保護(hù)劑形成多孔性、疏松的海綿狀物且具有一定的 含水量，在凍存過程中保持原有的構(gòu)架，從而增加溶解度。此外，多種糖類和鹽使噬菌體保 持存活狀態(tài)以及對(duì)水分起緩解作用，并且保持電解質(zhì)濃度。噬菌體保存保護(hù)劑可以使噬菌 體低溫保存下免受溶液損傷和冰晶損傷等物理因素的損傷，并且維持噬菌體極高的存活率 和活性，使噬菌體的活動(dòng)處于半靜止或靜止?fàn)顟B(tài)。此外，保護(hù)劑同溶液中的水分子結(jié)合，發(fā) 生水合作用，弱化水的結(jié)晶過程使溶液的粘性增加從而減少冰晶的形成，同時(shí)冷凍保護(hù)劑 可以通過在噬菌體內(nèi)外維持一定的摩爾濃度，降低內(nèi)外未結(jié)冰溶液中電解質(zhì)的濃度，使細(xì) 胞免受溶質(zhì)的損傷。此外，保護(hù)劑還可以在室溫條件下用于多種噬菌體的保存，適應(yīng)性好。
[0024] 進(jìn)一步的，上述的高質(zhì)量菌體保存保護(hù)劑，以重量組分計(jì)，還包括0.2-0.6份的 抗氧化劑，
[0025]所述抗氧化劑以重量組分計(jì)，包括以下組分：
[0026] 維生素 C 2-8份 [0027] 維生素 E 3-10份 [0028] 硫脲3-7份 [0029] 碘化鉀2-5份 [0030] 硫代硫酸鈉0.3-1份
[0031] 鉬酸銨0.5-2份。
[0032] 通過增加抗氧化劑，使噬菌體長期保持溫度的存活狀態(tài)，保存效果好。
[0033]進(jìn)一步的，上述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，所述甘油為20%_40%的甘油。20%-40 %的甘油流動(dòng)性好，易于應(yīng)用。
[0034] 進(jìn)一步的，上述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，所述的水為去離子水或純化水。去離 子水或純化水可以保證高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑質(zhì)量穩(wěn)定、可控。
[0035] 本發(fā)明還提供一種高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，包括以下步驟：
[0036] 1)將脫脂奶粉、聚乙二醇、藻蛋白粉、谷氨酸鈉、棉子糖、硫酸鎂和氯化鈣加入到1/ 2重量的水中，升溫到20_30°C，磁力攪拌混勻后備用；
[0037] 2)將羧甲基纖維素、膨潤土、氫氧化鋁膠、硫酸鈉、甘露醇、磷酸氫二鉀和磷酸二氫 鈉加入到1/2重量的水中，磁力攪拌混勻后備用；
[0038] 3)將步驟1)的混合液加入到步驟2)得到的溶液中混合，磁力攪拌均勻；
[0039] 4)向混合步驟3)的溶液中再滴加甘油和二甲基亞砜，磁力攪拌20-30min;
[0040] 5)調(diào)節(jié)步驟4)得到的溶液的pH到5.5-7.5后于115-121°C加熱滅菌20-30min，得所 述高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑。
[0041] 本發(fā)明所述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，工藝簡(jiǎn)單易行，效率高，應(yīng)用 成本低，操作簡(jiǎn)單、易于實(shí)現(xiàn)，應(yīng)用方便。
[0042]進(jìn)一步的，上述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，熱滅菌液冷卻到室溫后， 在無菌條件下加入抗氧化劑，磁力攪拌混勾。后添加抗氧化劑，保證抗氧化劑的成分不被破 壞。
[0043] 進(jìn)一步的，上述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，所述攪拌速度為50-200r/min。條件溫和，易于實(shí)現(xiàn)。
[0044] 進(jìn)一步的，上述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，使用稀鹽酸和/或氫氧化 鈉調(diào)節(jié)溶液pH。原料來源廣，調(diào)節(jié)十分方便，并且應(yīng)用成本低。
[0045] 進(jìn)一步的，上述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，所述室溫為15-25°C。條 件溫和，易于實(shí)現(xiàn)。
[0046] 本發(fā)明還提供一種高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的應(yīng)用方法，所述高質(zhì)量噬菌體保存 保護(hù)劑應(yīng)用時(shí)，噬菌體液與高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑按照1:1-2.5的體積比混合均勻，于室 溫保存或者真空冷凍干燥后2_7°C進(jìn)行凍存。高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑使用方便，可以用于 多種不同的噬菌體凍存的使用，適應(yīng)性好，可以于室溫或者冷藏保存，對(duì)環(huán)境溫度要求低， 并非要求必須低溫才能保存，即便在15-25Γ的室溫條件下也可以進(jìn)行噬菌體的保存，可以 用于多種情況下的保存，具有極高的應(yīng)用前景。
[0047]有益效果:與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn):本發(fā)明所述的高質(zhì)量噬菌體保 存保護(hù)劑，其組分合理，原料來源廣，易于獲得，成本低，可以維持噬菌體極高的存活率和活 性，并且適應(yīng)性好。本發(fā)明所述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，方法合理，工藝簡(jiǎn) 單易行，效率高，應(yīng)用成本低，操作簡(jiǎn)單、易于實(shí)現(xiàn)。具有極高的應(yīng)用前景，對(duì)保存溫度要求 低，并且使用方便，可以用于多種情況下的保存，應(yīng)用便捷。
【附圖說明】
[0048] 圖1為本發(fā)明所述使用實(shí)施例1-4高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的噬菌體存活率圖。
【具體實(shí)施方式】
[0049] 下面將通過幾個(gè)具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡明本發(fā)明，這些實(shí)施例只是為了說明問題， 并不是一種限制。
[0050] 實(shí)施例1
[0051] -種高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，以重量組分計(jì)，包括以下組分：
[0052]脫脂奶粉5份
[0053] 聚乙二醇2份 [0054]藻蛋白粉0.2份 [0055]谷氨酸鈉 0.3份 [0056] 羧甲基纖維素 0.3份 [0057]膨潤土 0.08份 [0058]氫氧化鋁膠0.03份 [0059] 棉子糖0.3份 [0060]硫酸鎂0.1份 [0061 ] 氯化鈣0.6份 [0062]硫酸鈉 0.3份
[0063] 甘露醇0.5份
[0064] 磷酸氫二鉀0.03份
[0065] 磷酸二氫鈉 0.05份
[0066] 20 % 甘油 0.02份
[0067] 二甲基亞砜0.01份 [0068] 去離子水100份；
[0069] 此外，上述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，以重量組分計(jì)，還包括0.2份的抗氧化劑，
[0070] 所述抗氧化劑以重量組分計(jì)，包括以下組分：
[0071]維生素 C 2份
[0072]維生素 E 3份 [0073]硫脲3份 [0074] 碘化鉀2份 [0075] 硫代硫酸鈉 0.3份
[0076] 鉬酸銨0.5份。
[0077] 上述高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，包括以下步驟：
[0078] 1)將脫脂奶粉、聚乙二醇、藻蛋白粉、谷氨酸鈉、棉子糖、硫酸鎂和氯化鈣加入到1/ 2重量的水中，升溫到20°C，50r/min的攪拌速度下磁力攪拌混勻后備用；
[0079] 2)將羧甲基纖維素、膨潤土、氫氧化鋁膠、硫酸鈉、甘露醇、磷酸氫二鉀和磷酸二氫 鈉加入到1/2重量的水中，50r/min的攪拌速度下磁力攪拌混勻后備用；
[0080] 3)將步驟1)的混合液加入到步驟2)得到的溶液中混合，50r/min的攪拌速度下磁 力攪拌均勻；
[0081 ] 4)向混合步驟3)的溶液中再滴加甘油和二甲基亞砜，50r/min的攪拌速度下磁力 攪拌20min;
[0082] 5)使用稀鹽酸和/或氫氧化鈉調(diào)節(jié)步驟4)得到的溶液的pH到5.5后于115°C加熱滅 菌20min，熱滅菌液冷卻到15°C后，在無菌條件下加入抗氧化劑，50r/min的攪拌速度下磁力 攪拌混勻，得所述高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑。
[0083] 上述噬菌體保存保護(hù)劑用于分歧桿菌噬菌體的保存，應(yīng)用時(shí)，噬菌體液與噬菌體 保存保護(hù)劑按照1:1的體積比混合均勻，真空冷凍干燥后于2°C進(jìn)行凍存。
[0084] 實(shí)施例2
[0085] -種高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，以重量組分計(jì)，包括以下組分：
[0086]脫脂奶粉12份
[0087] 聚乙二醇8份 [0088]藻蛋白粉0.6份 [0089] 谷氨酸鈉 0.8份 [0090] 羧甲基纖維素 0.5份
[0091] 膨潤土 0.15份
[0092] 氫氧化鋁膠0.18份 [0093] 棉子糖1.2份 [0094] 硫酸鎂0.6份 [0095]氯化鈣1.2份 [0096] 硫酸鈉 0.8份
[0097] 甘露醇1.2份
[0098] 磷酸氫二鉀0.2份 [0099] 磷酸二氫鈉0.3份
[0100] 40%甘油 0.08份
[0101] 二甲基亞砜0.04份
[0102] 純化水100份；
[0103] 此外，上述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，以重量組分計(jì)，還包括0.6份的抗氧化劑，
[0104] 所述抗氧化劑以重量組分計(jì)，包括以下組分：
[0105] 維生素 C 8份 [0106] 維生素 E 10份 [0107]硫脲7份 [0108] 碘化鉀5份 [0109] 硫代硫酸鈉1份 [0110]鉬酸銨2份。
[0111] 上述高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，包括以下步驟：
[0112] 1)將脫脂奶粉、聚乙二醇、藻蛋白粉、谷氨酸鈉、棉子糖、硫酸鎂和氯化鈣加入到1/ 2重量的水中，升溫到30°C，200r/min的攪拌速度下磁力攪拌混勻后備用；
[0113] 2)將羧甲基纖維素、膨潤土、氫氧化鋁膠、硫酸鈉、甘露醇、磷酸氫二鉀和磷酸二氫 鈉加入到1/2重量的水中，200r/min的攪拌速度下磁力攪拌混勻后備用；
[0114] 3)將步驟1)的混合液加入到步驟2)得到的溶液中混合，200r/min的攪拌速度下磁 力攪拌均勻；
[0115] 4)向混合步驟3)的溶液中再滴加甘油和二甲基亞砜，200r/min的攪拌速度下磁力 攪拌30min;
[0116] 5)使用稀鹽酸和/或氫氧化鈉調(diào)節(jié)步驟4)得到的溶液的pH到7.5后于121°C加熱滅 菌30min，熱滅菌液冷卻到25°C后，在無菌條件下加入抗氧化劑，200r/min的攪拌速度下磁 力攪拌混勻，得所述高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑。
[0117] 上述噬菌體保存保護(hù)劑用于大腸桿菌噬菌體的保存，應(yīng)用時(shí)，噬菌體液與噬菌體 保存保護(hù)劑按照1:2.5的體積比混合均勻，真空冷凍干燥后于7°C進(jìn)行凍存。
[0118] 實(shí)施例3
[0119] -種高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，以重量組分計(jì)，包括以下組分：
[0120] 脫脂奶粉8份
[0121] 聚乙二醇6份
[0122] 藻蛋白粉0.4份
[0123] 谷氨酸鈉0.6份
[0124] 羧甲基纖維素0.4份
[0125] 膨潤土 0.1 份
[0126] 氫氧化鋁膠0.12份
[0127] 棉子糖0.8份
[0128] 硫酸鎂0.4份
[0129] 氯化鈣0.8份
[0130] 硫酸鈉0.6份
[0131] 甘露醇0.9份
[0132] 磷酸氫二鉀0.1份
[0133] 磷酸二氫鈉0.2份
[0134] 30%甘油 0.05份
[0135] 二甲基亞砜0.02份
[0136] 去離子水100份；
[0137] 此外，上述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，以重量組分計(jì)，還包括0.4份的抗氧化劑，
[0138] 所述抗氧化劑以重量組分計(jì)，包括以下組分：
[0139] 維生素 C 5份
[0140] 維生素 E 5份
[0141] 硫脲5份
[0142] 碘化鉀3份
[0143] 硫代硫酸鈉0.8份
[0144] 鉬酸銨1份。
[0145] 上述高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，包括以下步驟：
[0146] 1)將脫脂奶粉、聚乙二醇、藻蛋白粉、谷氨酸鈉、棉子糖、硫酸鎂和氯化鈣加入到1/ 2重量的水中，升溫到25°C，100r/min的攪拌速度下磁力攪拌混勻后備用；
[0147] 2)將羧甲基纖維素、膨潤土、氫氧化鋁膠、硫酸鈉、甘露醇、磷酸氫二鉀和磷酸二氫 鈉加入到1 /2重量的水中，1 OOr/min的攪拌速度下磁力攪拌混勻后備用；
[0148] 3)將步驟1)的混合液加入到步驟2)得到的溶液中混合，1 OOr/min的攪拌速度下磁 力攪拌均勻；
[0149] 4)向混合步驟3)的溶液中再滴加甘油和二甲基亞砜，lOOr/min的攪拌速度下磁力 攪拌25min;
[0150] 5)使用稀鹽酸和/或氫氧化鈉調(diào)節(jié)步驟4)得到的溶液的pH到7后于118°C加熱滅菌 25min，熱滅菌液冷卻到20°C后，在無菌條件下加入抗氧化劑，100r/min的攪拌速度下磁力 攪拌混勻，得所述高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑。
[0151] 上述噬菌體保存保護(hù)劑用于乳桿菌噬菌體的保存，應(yīng)用時(shí)，噬菌體液與噬菌體保 存保護(hù)劑按照1:2的體積比混合均勻，真空冷凍干燥后于5°C進(jìn)行凍存。
[0152] 實(shí)施例4
[0153] -種高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，以重量組分計(jì)，包括以下組分：
[0154]脫脂奶粉5份
[0155] 聚乙二醇2份 [0156]藻蛋白粉0.6份
[0157] 谷氨酸鈉0.8份
[0158] 羧甲基纖維素0.3份
[0159] 膨潤土 0.08份
[0160] 氫氧化鋁膠0.03份
[0161] 棉子糖1份
[0162] 硫酸鎂0.2份
[0163] 氯化鈣0.8份
[0164] 硫酸鈉0.3份
[0165] 甘露醇0.5份
[0166] 磷酸氫二鉀0.2份
[0167] 磷酸二氫鈉0.3份
[0168] 40%甘油 0.08份
[0169] 二甲基亞砜0.02份
[0170] 純化水100份；
[0171 ]此外，上述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，以重量組分計(jì)，還包括0.3份的抗氧化劑，
[0172] 所述抗氧化劑以重量組分計(jì)，包括以下組分：
[0173] 維生素 C 2份
[0174] 維生素 E 3份
[0175] 硫脲7份
[0176] 碘化鉀5份
[0177] 硫代硫酸鈉0.5份
[0178] 鉬酸銨2份。
[0179] 上述高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，包括以下步驟：
[0180] 1)將脫脂奶粉、聚乙二醇、藻蛋白粉、谷氨酸鈉、棉子糖、硫酸鎂和氯化鈣加入到1/ 2重量的水中，升溫到20°C，120r/min的攪拌速度下磁力攪拌混勻后備用；
[0181] 2)將羧甲基纖維素、膨潤土、氫氧化鋁膠、硫酸鈉、甘露醇、磷酸氫二鉀和磷酸二氫 鈉加入到1 /2重量的水中，120r/min的攪拌速度下磁力攪拌混勻后備用；
[0182 ] 3)將步驟1)的混合液加入到步驟2)得到的溶液中混合，120r/min的攪拌速度下磁 力攪拌均勻；
[0183] 4)向混合步驟3)的溶液中再滴加甘油和二甲基亞砜，120r/min的攪拌速度下磁力 攪拌30min;
[0184] 5)使用稀鹽酸和/或氫氧化鈉調(diào)節(jié)步驟4)得到的溶液的pH到7后于115°C加熱滅菌 30min，熱滅菌液冷卻到15 °C后，在無菌條件下加入抗氧化劑，120r/min的攪拌速度下磁力 攪拌混勻，得所述高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑。
[0185] 上述噬菌體保存保護(hù)劑用于溶藻弧菌噬菌體的保存，應(yīng)用時(shí)，噬菌體液與噬菌體 保存保護(hù)劑按照1:1.5的體積比混合均勻，于20°C進(jìn)行保存。
[0186] 對(duì)使用實(shí)施例1-4的噬菌體保護(hù)劑的保存1、3、6、9個(gè)月后的噬菌體污染情況以及 存活率分別進(jìn)行考察，如表1所示，噬菌體均未污染，并且如圖1所示，噬菌體在9個(gè)月內(nèi)保持 60%以上的存活率。
[0187] 表1噬菌體污染情況
[0188]
[0189]
[0190] 以上所述僅是發(fā)明的幾個(gè)實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員 來說，在不脫離發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)，這些改進(jìn)也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù) 范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，其特征在于：以重量組分計(jì)，包括以下組分： 脫脂奶粉5-12份 聚乙二醇2-8份 藻蛋白粉0.2-0.6份 谷氨酸鈉0.3-0.8份 羧甲基纖維素0.3-0.5份 膨潤土 0.08-0.15份 氫氧化鋁膠0.03-0.18份 棉子糖0.3-1.2份 硫酸鎂0.1-0.6份 氯化鈣0.6-1.2份 硫酸鈉0.3-0.8份 甘露醇0.5-1.2份 磷酸氫二鉀0.03-0.2份 磷酸二氫鈉0.05-0.3份 甘油0.02-0.08份 二甲基亞砜0.01-0.04份 水100份。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，其特征在于：以重量組分計(jì)，還包 括0.2-0.6份的抗氧化劑， 所述抗氧化劑以重量組分計(jì)，包括以下組分： 維生素 C 2-8份 維生素 E 3-10份 硫脲3-7份 碘化鉀2-5份 硫代硫酸鈉0.3-1份 鉬酸銨0.5-2份。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，其特征在于:所述甘油為20%-40% 的甘油。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑，其特征在于:所述的水為去離子水 或純化水。5. 根據(jù)權(quán)利1-4任一項(xiàng)所述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，其特征在于:包括 以下步驟： 1)將脫脂奶粉、聚乙二醇、藻蛋白粉、谷氨酸鈉、棉子糖、硫酸鎂和氯化鈣加入到1/2重 量的水中，升溫到20_30°C，磁力攪拌混勻后備用； 2 )將羧甲基纖維素、膨潤土、氫氧化鋁膠、硫酸鈉、甘露醇、磷酸氫二鉀和磷酸二氫鈉加 入到1/2重量的水中，磁力攪拌混勻后備用； 3) 將步驟1)的混合液加入到步驟2)得到的溶液中混合，磁力攪拌均勻； 4) 向混合步驟3)的溶液中再滴加甘油和二甲基亞砜，磁力攪拌20-30min; 5)調(diào)節(jié)步驟4)得到的溶液的pH到5.5-7.5后于115-121°(：加熱滅菌2〇-3〇1^11，得所述高 質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，其特征在于:熱滅菌液 冷卻到室溫后，在無菌條件下加入抗氧化劑，磁力攪拌混勻。7. 根據(jù)權(quán)利要求5或6所述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，其特征在于:所述 攪拌速度為50_200r/min。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，其特征在于:使用稀鹽 酸和/或氫氧化鈉調(diào)節(jié)溶液pH。9. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的制備方法，其特征在于:所述室溫 為 15-25。。。10. 根據(jù)權(quán)利要求1或5所述的高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑的應(yīng)用方法，其特征在于:所述 高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑應(yīng)用時(shí)，噬菌體液與高質(zhì)量噬菌體保存保護(hù)劑按照1:1-2.5的體 積比混合均勻，于室溫保存或者真空冷凍干燥后2-7°C進(jìn)行凍存。
【文檔編號(hào)】C12N7/00GK105950568SQ201610415957
【公開日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年6月14日
【發(fā)明人】許維素, 宋增福, 陳彪
【申請(qǐng)人】蘇州埃瑞特生物技術(shù)有限公司