蠶沙在作為微生物菌的載體方面的應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了蠶沙在作為微生物菌的載體方面的應(yīng)用，尤其是蠶沙在制備農(nóng)藥降解菌制劑中的應(yīng)用，還提供了一種農(nóng)藥降解菌制劑及其制備方法和應(yīng)用。該農(nóng)藥降解菌制劑包含有以下組分：（1）對(duì)農(nóng)藥有降解作用的菌株，（2）微生物制劑載體：上述蠶沙。本發(fā)明提供的農(nóng)藥降解菌制劑使用蠶沙作為微生物制劑載體，為制劑中的微生物提供了穩(wěn)定載體，能夠保證制劑的持效性，而且極大程度提高了蠶絲工業(yè)廢料的利用率，生產(chǎn)成本低。本發(fā)明農(nóng)藥降解菌制劑使用操作簡(jiǎn)單，降解效果好，具有很好的推廣應(yīng)用價(jià)值。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
蠶沙在作為微生物菌的載體方面的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001]本發(fā)明涉及微生物菌劑及農(nóng)藥降解技術(shù)領(lǐng)域。更具體地，涉及蠶沙在作為微生物菌的載體方面的應(yīng)用?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]我國(guó)是農(nóng)業(yè)大國(guó)，農(nóng)藥的生產(chǎn)與使用量占世界總量的十分之一。在現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，政府及農(nóng)業(yè)科學(xué)家們都極力提倡采用病蟲(chóng)害綜合防治(Integrated Pest Management， IPM)，改變用破壞生態(tài)環(huán)境來(lái)?yè)Q取經(jīng)濟(jì)發(fā)展的陳舊模式，在可持續(xù)地防治病蟲(chóng)草害的同時(shí)， 穩(wěn)步發(fā)展農(nóng)業(yè)生產(chǎn)與經(jīng)濟(jì)?？墒牵脐惓鲂碌霓r(nóng)藥品種和逐年增長(zhǎng)的農(nóng)藥產(chǎn)量卻揭示了一個(gè)不可回避的事實(shí)，化學(xué)藥劑在作物病蟲(chóng)草治理中仍占據(jù)不可動(dòng)搖的重要地位。研究表明， 施入農(nóng)田的農(nóng)藥將大部分殘留于土壤環(huán)境介質(zhì)中。農(nóng)藥本身雖具有不同程度的自然降解特性，但長(zhǎng)時(shí)間大量使用必然導(dǎo)致環(huán)境污染;此外，有些農(nóng)藥由于自身特性的原因，降解周期長(zhǎng)，且有一些種類(lèi)其自身降解產(chǎn)物毒性更甚，因此，如何降低或消除農(nóng)藥在環(huán)境中的累積， 從而杜絕生態(tài)安全問(wèn)題的發(fā)生，已經(jīng)成為許多國(guó)家和地區(qū)亟待解決的問(wèn)題。
[0003]利用微生物修復(fù)污染土壤是解決農(nóng)藥殘留富集的新方法、新途徑，自然界微生物資源極為豐富，微生物修復(fù)法因其具有二次污染少、操作簡(jiǎn)單、成本低等優(yōu)勢(shì)，擁有修復(fù)生態(tài)環(huán)境中農(nóng)藥污染的強(qiáng)大潛力，值得深入研究開(kāi)發(fā)。然而，微生物修復(fù)農(nóng)藥污染土壤的技術(shù)難點(diǎn)在于微生物制劑的開(kāi)發(fā)與研制。如何將活性微生物集中、固定在制劑中，保證微生物的活性，同時(shí)對(duì)環(huán)境友好，對(duì)人畜無(wú)害，是開(kāi)發(fā)農(nóng)藥降解菌制劑的突破口和關(guān)鍵之處。由于傳統(tǒng)農(nóng)藥劑型中各種助劑對(duì)微生物有機(jī)體的優(yōu)劣影響并不明確，因此傳統(tǒng)農(nóng)藥劑型的配制并不完全適用于微生物劑型的開(kāi)發(fā)。
[0004]我國(guó)是世界蠶絲業(yè)的發(fā)源地，資源豐富，優(yōu)勢(shì)顯著。養(yǎng)蠶中蠶排出的糞便和食剩的殘桑及蠶座中的墊料統(tǒng)稱(chēng)為蠶沙，是一種富含粗蛋白及碳水化合物的多組分物質(zhì)。蠶沙干品中含粗蛋白15.4%、粗脂肪3.9%、無(wú)氮浸出物36.2%、粗纖維19.6%，還含有銅、鐵和鋅等微量元素，并富含葉綠素、果膠、黃酮、生物堿和類(lèi)腎上腺皮質(zhì)激素等。目前對(duì)蠶沙再利用的研究主要集中于各種有效成分的提取，如葉綠素和果膠。由于蠶沙中還含有一定數(shù)量的植物生長(zhǎng)激素吲哚乙酸類(lèi)似物，因此以蠶沙為原料，開(kāi)發(fā)養(yǎng)分豐富的有機(jī)肥料技術(shù)也成為了行業(yè)熱點(diǎn)。不難看出，蠶沙是一種成本低廉，環(huán)保友好，極具開(kāi)發(fā)價(jià)值的資源，目前未見(jiàn)其在農(nóng)藥降解菌制劑中的應(yīng)用的報(bào)道。
【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題是克服現(xiàn)有農(nóng)藥降解菌制劑的技術(shù)不足，提供，提供蠶沙在作為微生物菌的載體中的應(yīng)用，尤其是蠶沙在制備農(nóng)藥降解菌制劑中的應(yīng)用。
[0006]本發(fā)明的另一目的在于提供一種農(nóng)藥降解菌制劑。
[0007]本發(fā)明的再一目的是提供所述農(nóng)藥降解菌制劑的制備方法。
[0008]本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供所述農(nóng)藥降解菌制劑的應(yīng)用。
[0009]本發(fā)明的目的通過(guò)以下技術(shù)方案予以實(shí)現(xiàn):本發(fā)明提供蠶沙在作為微生物菌的載體方面的應(yīng)用。
[0010]本發(fā)明還提供蠶沙在制備農(nóng)藥降解菌制劑中的應(yīng)用。
[0011]優(yōu)選地，所述微生物菌為短小芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌或金色鏈霉菌。[〇〇12]更優(yōu)選地，所述微生物菌為短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的HZ-2菌株、枯草芽抱桿菌(1^(3；[11113 311131:；[118)的133?01菌株、錯(cuò)狀芽抱桿菌(1^(3；[11113〇6代118)的211-3菌株或金色鏈霉菌(Streptomyces aureus)的HP-S-01菌株。另外，優(yōu)選地，所述的蠶沙為蠶絲工業(yè)廢料蠶沙。
[0013]本發(fā)明將蠶沙制成微生物制劑所需載體，不僅實(shí)現(xiàn)了能源再利用，也降低了生物制劑影響環(huán)境的風(fēng)險(xiǎn)。
[0014]—種農(nóng)藥降解菌制劑，包含以下組分:(1)可用于降解農(nóng)藥的菌株；(2)微生物制劑載體;所述微生物制劑載體為上述蠶沙。
[0015]其中，組分(1)所述菌株可采用對(duì)農(nóng)藥有降解作用的常規(guī)菌。[〇〇16]優(yōu)選地，本發(fā)明提供幾種優(yōu)選的技術(shù)方案，所述的菌株為短小芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌或金色鏈霉菌。[〇〇17]更優(yōu)選地，所述菌株為短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的HZ-2菌株、枯草芽孢桿菌(Bacillus subtil is)的BSF01菌株、錯(cuò)狀芽抱桿菌(Bacillus cereus)的ZH-3菌株或金色鏈霉菌(31:代。1:〇1115^68&11代118)的]3:)-3-01菌株。[〇〇18]其中，短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的HZ-2菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，菌種保藏編號(hào)為CCTCC N0:M 2013380;枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的BSF01 菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC N0:AB 2014103;金色鏈霉菌 (Streptomyces aureus)的HP-S-01菌株保藏于中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏號(hào)為CCTCC N0:M 2010096。
[0019]組分(2)所述的蠶沙為蠶絲工業(yè)廢料蠶沙或經(jīng)其他途徑所得的蠶沙。
[0020]本發(fā)明所述農(nóng)藥降解菌劑使用普通的蠶沙就能達(dá)到非常好的效果，優(yōu)選地，所述的蠶沙為蠶絲工業(yè)廢料蠶沙。
[0021]更優(yōu)選地，所述蠶沙先經(jīng)過(guò)物理改性或化學(xué)改性，改性蠶沙具有更好的吸水性和緩釋性。[〇〇22]所述物理改性是經(jīng)物理粉碎至粒徑大小為20?200目。[〇〇23]所述化學(xué)改性的方法為:51.缺氧條件下，將蠶沙炭化3?8h燒制，冷卻后取出，混勻研磨過(guò)90?110目篩；52.將S1處理后的蠶沙用磷酸溶液處理4?8h，重復(fù)3次去除灰分，全部過(guò)濾后，再用去離子水沖洗至中性，50?70 °C烘干，得到碳化蠶沙(MCS)。
[0024]其中，優(yōu)選地，步驟S1是使用馬弗爐充氮?dú)馊毖鯒l件下，將蠶沙炭化3?8h燒制，冷卻后取出，混勻研磨過(guò)100目篩。[〇〇25]優(yōu)選地，步驟S1所述炭化的溫度為500?800 °C。[〇〇26]更優(yōu)選地，步驟S1所述炭化的溫度為700°C。[〇〇27]優(yōu)選地，步驟S1所述炭化的時(shí)間為5h。
[0028]優(yōu)選地，步驟S2所述磷酸溶液的濃度為0.05?0.5mol/L。
[0029]更優(yōu)選地，步驟S2所述磷酸溶液的濃度為0.lmol/L。
[0030]優(yōu)選地，步驟S2所述磷酸溶液處理的時(shí)間為5h。
[0031]優(yōu)選地，步驟S2中用去離子水沖洗至中性后，放入干燥器60°C烘干。
[0032]另外，優(yōu)選地，上述農(nóng)藥降解菌制劑還包含有輔料，所述輔料為所述的輔料為制糖工業(yè)廢料葡萄糖或糖蜜或其他來(lái)源的糖蜜；按照質(zhì)量百分含量計(jì)，所述輔料添加至農(nóng)藥降解菌制劑后的濃度為1 %?95%。
[0033]上述農(nóng)藥降解菌制劑的制備方法，包括以下步驟:51.將農(nóng)藥降解菌活化、接種于液體LB培養(yǎng)基中，震蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期；52.將S1所得菌液離心后去掉上清液，加入無(wú)菌水，制成菌種液；53.將S2所得菌種液接入蠶沙中，密封，震蕩掛膜，離心，常溫真空干燥至近干，分裝密封。
[0034]優(yōu)選地，將步驟S3中將菌種液接入蠶沙中后加入輔料優(yōu)選地，所述輔料為工業(yè)廢料葡萄糖或糖蜜。
[0035]本發(fā)明采用廢糖蜜或葡萄糖作為本發(fā)明農(nóng)藥降解菌劑的輔料，為菌劑中的微生物提供了穩(wěn)定的針對(duì)性的碳源，以保證制劑持效性。同時(shí)極大程度地提高了工業(yè)廢料的利用率。
[0036]另外，S1所述降解菌活化采用常規(guī)菌株活化方法，活化后培養(yǎng)。
[0037]作為一種優(yōu)選的可實(shí)施方案，本發(fā)明提供菌株的培養(yǎng)方法如下:按降解菌不同種的屬性可采用冷凍保存法保存，將農(nóng)藥降解菌的菌種活化，接種針挑取菌株接種，接種于斜面培養(yǎng)基，28°C生化培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，菌種長(zhǎng)滿(mǎn)斜面后，移至4°C冰箱保存；菌種可采用液體石蠟保存法，將菌種在培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到健壯的菌體或孢子，用滅菌吸管吸取已滅菌的液體石蠟，注入已長(zhǎng)好菌的斜面上，其用量以高出斜面頂端lcm為準(zhǔn)，使菌種與空氣隔絕，將試管直立，4°C下保存。[〇〇38]選擇菌種適宜培養(yǎng)基:按照如下配方配制LB培養(yǎng)基:氯化鈉:10g/L，蛋白胨10g/L， 酵母提取物5g/L;按照如下配方配制PDA培養(yǎng)基:馬鈴薯:200g/L;葡萄糖:20g/L。[〇〇39]按照如下配方配制查彼氏培養(yǎng)基:硝酸鈉:2g/L，氯化鉀:0 ? 5g/L，硫酸鎂:0 ? 5g/L， 磷酸氫二鉀:1.〇g/L，硫酸鐵:0.01 g/L，蔗糖:30.0g/L。在pH 7.0的液體培養(yǎng)基中，接入體積比1%的濕菌體，在氣浴恒溫振蕩器中培養(yǎng)1?7d。
[0040]另外，優(yōu)選地，步驟S2所述無(wú)菌水的加入量為10?20mL。
[0041]優(yōu)選地，步驟S3所述菌種液、蠶沙、輔料的用量按照以下比例確定:在每lg蠶沙中， 按照V 1〇7?V 101()cfu/mL的接種量接入S2所得菌種液lmL?5mL;按照質(zhì)量百分含量計(jì)，加入1%?95%廢糖蜜或葡萄糖。[〇〇42]優(yōu)選地，步驟S3所述的震蕩掛膜方法如下:在氣浴恒溫振蕩器中震蕩培養(yǎng)24?48 小時(shí)，使菌體掛膜于蠶沙。
[0043]上述述農(nóng)藥降解菌制劑在降解農(nóng)藥中的應(yīng)用，也在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。[〇〇44] 優(yōu)選地，當(dāng)農(nóng)藥降解菌制劑中菌株為短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的HZ-2菌株時(shí)，所述的農(nóng)藥為硝磺草酮；當(dāng)農(nóng)藥降解菌制劑中菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的BSF01菌株時(shí)，所述的農(nóng)藥為高效氯氰菊酯；當(dāng)農(nóng)藥降解菌制劑中菌株為蠟狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)的ZH-3時(shí)，所述的農(nóng)藥為甲氰菊酯；當(dāng)農(nóng)藥降解菌制劑中菌株為金色鏈霉菌(Streptomyces aureus)的HP-S-01菌株時(shí)，所述的農(nóng)藥為溴氰菊酯。
[0045]本發(fā)明具有以下有益效果:本發(fā)明為工業(yè)廢料蠶沙提供了一種全新的應(yīng)用，將其應(yīng)用于作為微生物的載體，如將其應(yīng)用于制備農(nóng)藥降解菌制劑。本發(fā)明農(nóng)藥降解菌制劑制備過(guò)程中使用了蠶沙作為微生物制劑載體，不僅實(shí)現(xiàn)了能源再利用，低碳環(huán)保、成本低廉、資源豐富、操作簡(jiǎn)便，也降低了生物制劑影響環(huán)境的風(fēng)險(xiǎn)，無(wú)二次污染，為微生物制劑開(kāi)發(fā)提供了新的載體材料。[〇〇46]本發(fā)明提供的農(nóng)藥降解菌制劑可以使農(nóng)藥田間殘留量降低70%以上，具有較高的降解效果，成功地解決了農(nóng)產(chǎn)品種植過(guò)程中除草劑的使用與消除農(nóng)藥環(huán)境富集的矛盾，對(duì)保證作物、土壤、水體、非靶標(biāo)生物及生態(tài)環(huán)境安全具有重大意義。
[0047]本發(fā)明進(jìn)一步提供了工業(yè)廢料葡萄糖或糖蜜的新應(yīng)用，本發(fā)明所述農(nóng)藥降解菌制劑添加了工業(yè)廢料葡萄糖或糖蜜作為農(nóng)藥降解菌制劑的輔料，極大程度地提高了工業(yè)廢料的利用率，且為制劑中的微生物提供了穩(wěn)定碳源，能夠保證制劑的持效性，該菌劑在施用 14d后仍能具有很高的降解率，保持田間目標(biāo)農(nóng)藥殘留量處于低水平?！靖綀D說(shuō)明】
[0048]圖1為環(huán)境電鏡下掃描固菌前蠶沙表面形態(tài)。
[0049]圖2為環(huán)境電鏡下掃描固菌后蠶沙表面形態(tài)。
[0050]圖3為降解菌制劑在LB培養(yǎng)基中對(duì)硝磺草酮的降解作用。
[0051]圖4為降解菌制劑在LB培養(yǎng)基中對(duì)高效氯氰菊酯的降解作用。[〇〇52]圖5為降解菌制劑和菌液對(duì)硝磺草酮田間降解作用的比較。[〇〇53]圖6為降解菌制劑和菌液對(duì)高效氯氰菊酯田間降解作用的比較。[〇〇54]圖7為降解菌制劑田間降解甲氰菊酯試驗(yàn)結(jié)果。
[0055]圖8為降解菌制劑田間降解溴氰菊酯試驗(yàn)結(jié)果?！揪唧w實(shí)施方式】
[0056]以下結(jié)合附圖和具體實(shí)施例來(lái)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明，但實(shí)施例并不對(duì)本發(fā)明做任何形式的限定。除非特別說(shuō)明，本發(fā)明采用的試劑、設(shè)備為本技術(shù)領(lǐng)域常規(guī)試劑和設(shè)備。[〇〇57] 實(shí)施例1制作碳化蠶沙MCS蠶沙經(jīng)化學(xué)改性制備得到碳化蠶沙MCS，經(jīng)化學(xué)改性后的碳化蠶沙空隙充分，具有更好的吸水性和緩釋性。[〇〇58]所述化學(xué)改性的方法為:S1.使用馬弗爐充氮?dú)馊毖跆炕?h燒制，炭化溫度分別為700°C。冷卻后取出，混勻研磨過(guò)100目篩。
[0059]S2.將蠶沙用0.lmol ? I/1的磷酸溶液處理5h，重復(fù)3次去除灰分，全部過(guò)濾后，再用去離子水沖洗至中性，放入干燥器，60°C烘干，記為碳化蠶沙(MCS)，貯存。
[0060]碳化后蠶沙如圖1所示。
[0061]實(shí)施例2農(nóng)藥降解菌制劑的制備 1、材料(1)所用蠶沙為蠶絲工業(yè)廢料蠶沙，經(jīng)機(jī)械粉碎至粒徑大小為60目。[0〇62](2)所用菌株為短小芽孢桿菌(Bacillus pumilus)的HZ-2菌株，菌種保藏單位為中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO:M 2013380。[〇〇63]2、制備步驟如下:將菌株HZ-2的菌種在培養(yǎng)皿上活化，接種于試管斜面;活化方法為常規(guī)菌株活化方法。
[0064]S1.將上述斜面上的單菌落接種于LB液體培養(yǎng)基搖瓶中，震蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期得菌液;LB液體培養(yǎng)基為常規(guī)的培養(yǎng)基；52.將S1所得菌液以4800r/min離心lOmin，去上清液，加入10?20mL無(wú)菌水，初步制成液體劑型菌種液；53.在每1 g蠶沙中，按照17109cfu/mL的接種量接入S2所得菌種液2mL，按照質(zhì)量百分含量計(jì)，加入5 %廢糖蜜，密封，在氣浴恒溫振蕩器中震蕩掛膜24h后，離心，常溫真空干燥至近干，分裝密封。
[0065]實(shí)施例3農(nóng)藥降解菌制劑的制備 1、材料(1)所用蠶沙為實(shí)施例1制備的碳化蠶沙MCS。[〇〇66](2)所用菌株為枯草芽孢桿菌(Bacillus subtilis)的BSF01菌株，菌種保藏單位為中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC NO:AB 2014103。[〇〇67]2、制備步驟如下:將菌株BSF01的菌種在培養(yǎng)皿上活化，接種于試管斜面;活化方法為常規(guī)菌株活化方法。
[0068]S1.將上述斜面上的單菌落接種于LB液體培養(yǎng)基搖瓶中，常溫下震蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期得菌液;LB液體培養(yǎng)基為常規(guī)的培養(yǎng)基；52.將S1所得菌液以4800r/min離心lOmin，去上清液，加入10?20mL無(wú)菌水，初步制成液體劑型菌種液；53.在每1 g蠶沙中，按照17109cfu/mL的接種量接入S2所得菌種液2mL，按照質(zhì)量百分含量計(jì)，加入5 %廢糖蜜，密封，在氣浴恒溫振蕩器中震蕩掛膜24h后，離心，常溫真空干燥至近干，分裝密封。
[0069]實(shí)施例4農(nóng)藥降解菌制劑的制備 1、材料(1)所用蠶沙為蠶絲工業(yè)廢料蠶沙，經(jīng)機(jī)械粉碎至粒徑大小為60目。[0〇7〇](2)所用菌株為錯(cuò)狀芽孢桿菌(Bacillus cereus)的ZH-3,保藏于華南農(nóng)業(yè)大學(xué)昆蟲(chóng)毒理研究室。[〇〇71]2、制備步驟如下:將菌株ZH-3的菌種在培養(yǎng)皿上活化，接種于試管斜面;活化方法為常規(guī)菌株活化方法。
[0072] S1.將上述斜面上的單菌落接種于LB液體培養(yǎng)基搖瓶中，震蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期得菌液;LB液體培養(yǎng)基為常規(guī)的培養(yǎng)基；52.將S1所得菌液以4800r/min離心lOmin，去上清液，加入10?20mL無(wú)菌水，初步制成液體劑型菌種液；53.在每1 g蠶沙中，按照17109cfu/mL的接種量接入S2所得菌種液2mL，按照質(zhì)量百分含量計(jì)，加入5 %廢糖蜜，密封，在氣浴恒溫振蕩器中震蕩掛膜24h后，離心，常溫真空干燥至近干，分裝密封。[〇〇73]實(shí)施例5農(nóng)藥降解菌制劑的制備 1、材料(1)所用蠶沙為蠶絲工業(yè)廢料蠶沙，經(jīng)機(jī)械粉碎至粒徑大小為60目。
[0074](2)所用菌株為金色鏈霉菌(Streptomyces aureus)的HP-S-01菌株，菌種保藏單位為中國(guó)典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)為CCTCC N0:M 2010096。
[0075]2、制備步驟如下:將菌株HP-S-01的菌種在培養(yǎng)皿上活化，接種于試管斜面;活化方法為常規(guī)菌株活化方法。
[0076]S1.將上述斜面上的單菌落接種于LB液體培養(yǎng)基搖瓶中，震蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期得菌液;LB液體培養(yǎng)基為常規(guī)的培養(yǎng)基；52.將S1所得菌液以4800r/min離心lOmin，去上清液，加入10?20mL無(wú)菌水，初步制成液體劑型菌種液；53.在每1 g蠶沙中，按照17109cfu/mL的接種量接入S2所得菌種液2mL，按照質(zhì)量百分含量計(jì)，加入5 %廢糖蜜，密封，在氣浴恒溫振蕩器中震蕩掛膜24h后，離心，常溫真空干燥至近干，分裝密封。[〇〇77]實(shí)施例6蠶沙對(duì)降解菌HZ-2的固定能力將本發(fā)明實(shí)施例2?5隨機(jī)選取一種所得降解菌制劑置于掃描電鏡，進(jìn)行環(huán)境電鏡掃描觀察，得到其固菌形態(tài)，結(jié)果見(jiàn)附圖1?附圖2。
[0078]附圖1為固菌前的蠶沙形態(tài);附圖2為固菌后的蠶沙和菌體形態(tài)。[〇〇79]結(jié)果顯示，固菌前蠶沙表面空隙明顯，并伴有破損及碎片(如附圖1)，應(yīng)為碳化高溫?zé)七^(guò)程對(duì)蠶沙組織造成機(jī)械損傷。
[0080]固菌后蠶沙表面形態(tài)明顯變化，菌體大量附著在蠶沙空隙中(如附圖2)，分布廣泛，清晰可見(jiàn)，說(shuō)明降解菌能夠在載體蠶沙中迅速富集固定。[0081 ]實(shí)施例7本發(fā)明降解菌制劑對(duì)硝磺草酮的降解效果 1、本實(shí)施例中硝磺草酮為市購(gòu)。[〇〇82]2、將實(shí)施例2制備的降解菌制劑按體積分?jǐn)?shù)1 %接種至初始濃度50mg/L的硝磺草酮LB液體培養(yǎng)基中，分別在培養(yǎng)2、3和5d后，高效液相色譜法檢測(cè)農(nóng)藥殘留情況。同時(shí)設(shè)置沒(méi)有菌株細(xì)胞處理和單純菌液(游離的菌株細(xì)胞)處理對(duì)照組。[〇〇83]3、結(jié)果如附圖3所示。結(jié)果顯示，培養(yǎng)3d后，硝磺草酮降解率為95%以上。[〇〇84]培養(yǎng)5(1后，殘留量分別為1.051^/1，降解率為97.9%。
[0085]實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，本發(fā)明降解菌制劑對(duì)除草劑硝磺草酮有突出的降解能力，能在短時(shí)間內(nèi)迅速降低硝磺草酮?dú)埩袅俊?br>[0086]實(shí)施例8本發(fā)明降解菌制劑對(duì)高效氯氰菊酯的降解效果 1、本實(shí)施例中高效氯氰菊酯為市購(gòu)。
[0087]2、將實(shí)施例3制備的降解菌制劑按體積分?jǐn)?shù)1 %接種至初始濃度50mg/L的高效氯氰菊酯LB液體培養(yǎng)基中，分別在培養(yǎng)2、3和5d后，高效液相色譜法檢測(cè)農(nóng)藥殘留情況。同時(shí)設(shè)置沒(méi)有菌株細(xì)胞處理和單純菌液(游離的菌株細(xì)胞)處理對(duì)照組。
[0088]3、結(jié)果如附圖4所示。結(jié)果顯示，培養(yǎng)3d后，高效氯氰菊酯解率為85%以上。[〇〇89] 培養(yǎng)5d后，殘留量分別為6.34mg/L，降解率為87.3%。[〇〇9〇]實(shí)驗(yàn)結(jié)果說(shuō)明，本發(fā)明降解菌制劑對(duì)高效氯氰菊酯有突出的降解能力，能在短時(shí)間內(nèi)迅速降低高效氯氰菊酯殘留量。
[0091]實(shí)施例9本發(fā)明降解菌制劑田間降解硝磺草酮試驗(yàn) 1、本實(shí)施例中硝磺草酮為市購(gòu)。[〇〇92]2、選取未施用除草劑的玉米田，劃分小區(qū)，每小區(qū)面積不小于20m2,3個(gè)重復(fù)。將40 %硝磺草酮懸浮液，配制為lOOmg/L水溶液，按照50L/667m2的用量，均勻噴施于田間。 [〇〇93] 2h后，分別施用實(shí)施例2制備的降解菌制劑和單純菌液，并設(shè)立空白對(duì)照CK，按照五點(diǎn)取樣法選取五個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取樣分析，計(jì)算降解率，評(píng)價(jià)降解菌制劑對(duì)硝磺草酮的田間降解效果。[〇〇94]3、結(jié)果如附圖5所示。結(jié)果顯示，處理14d后，降解菌制劑的降解率達(dá)到76.1%，并且降解率顯著高于單純菌液處理的降解率，表明本發(fā)明方法制得的降解菌制劑，加入蠶沙作為有效的生物載體，能夠顯著的提高降解菌的降解作用，具有很高的降解效果。
[0095]實(shí)施例10本發(fā)明降解菌制劑田間降解高效氯氰菊酯試驗(yàn) 1、本實(shí)施例中高效氯氰菊酯為市購(gòu)。[〇〇96]2、選取未施用殺蟲(chóng)劑的甘藍(lán)田，劃分小區(qū)，每小區(qū)面積不小于20m2,3個(gè)重復(fù)。將4.5%的高效氯氰菊酯微乳劑，按照13.5g/ha，50L/667m2的用量，均勻噴施于田間。[〇〇97] 2h后，分別施用實(shí)施例3制備的降解菌制劑和單純菌液，并設(shè)立空白對(duì)照CK，按照五點(diǎn)取樣法選取五個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取樣分析，計(jì)算降解率，評(píng)價(jià)降解菌制劑對(duì)高效氯氰菊酯的田間降解效果。[〇〇98]3、結(jié)果如附圖6所示。結(jié)果顯示，處理15d后，降解菌制劑的降解率達(dá)到71.3%，并且降解率顯著高于單純菌液處理的降解率，表明本發(fā)明方法制得的降解菌制劑，加入蠶沙作為有效的生物載體，能夠顯著的提高降解菌的降解作用，具有很高的降解效果。
[0099]實(shí)施例11本發(fā)明降解菌制劑田間降解甲氰菊酯試驗(yàn) 1、本實(shí)施例中甲氰菊酯為市購(gòu)。
[0100]2、選取未施用殺蟲(chóng)劑的甘藍(lán)田，劃分小區(qū)，每小區(qū)面積不小于20m2,3個(gè)重復(fù)。將 20 %的甲氰菊酯可濕粉劑，按照90g/ha，50L/667m2的用量，均勻噴施于田間。
[0101]2h后，分別施用實(shí)施例4制備的降解菌制劑和單純菌液，并設(shè)立空白對(duì)照CK，按照五點(diǎn)取樣法選取五個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取樣分析，計(jì)算降解率，評(píng)價(jià)降解菌制劑對(duì)甲氰菊酯的田間降解效果。
[0102]3、結(jié)果如附圖7所示。結(jié)果顯示，處理15d后，降解菌制劑的降解率達(dá)到75.1%，并且降解率顯著高于單純菌液處理的降解率，表明本發(fā)明方法制得的降解菌制劑，加入蠶沙作為有效的生物載體，能夠顯著的提高降解菌的降解作用，具有很高的降解效果。
[0103]實(shí)施例12本發(fā)明降解菌制劑田間降解溴氰菊酯試驗(yàn) 1、本實(shí)施例中溴氰菊酯為市購(gòu)。
[0104]2、選取未施用殺蟲(chóng)劑的甘藍(lán)田，劃分小區(qū)，每小區(qū)面積不小于20m2,3個(gè)重復(fù)。將2.5%的溴氰菊酯微乳劑，按照7.5g/ha，50L/667m2的用量，均勻噴施于田間。[〇1〇5] 2h后，分別施用實(shí)施例5制備的降解菌制劑和單純菌液，并設(shè)立空白對(duì)照CK，按照五點(diǎn)取樣法選取五個(gè)時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行取樣分析，計(jì)算降解率，評(píng)價(jià)降解菌制劑對(duì)溴氰菊酯的田間降解效果。
[0106]3、結(jié)果如附圖8所示。結(jié)果顯示，處理15d后，降解菌制劑的降解率達(dá)到68.5%，并且降解率顯著高于單純菌液處理的降解率，表明本發(fā)明方法制得的降解菌制劑，加入蠶沙作為有效的生物載體，能夠顯著的提高降解菌的降解作用，具有很高的降解效果。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.蠶沙在作為微生物菌的載體方面的應(yīng)用。2.蠶沙在制備農(nóng)藥降解菌制劑中的應(yīng)用。3.—種農(nóng)藥降解菌制劑，其特征在于，包含以下組分:(1)可用于降解農(nóng)藥的菌株；(2) 微生物制劑載體;所述微生物制劑載體為蠶沙。4.根據(jù)權(quán)利要求3所述農(nóng)藥降解菌制劑，其特征在于，所述的菌株為短小芽孢桿菌、枯 草芽孢桿菌、蠟狀芽孢桿菌或金色鏈霉菌。5.根據(jù)權(quán)利要求3所述農(nóng)藥降解菌制劑，其特征在于，所述的蠶沙為蠶絲工業(yè)廢料蠶沙。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述農(nóng)藥降解菌制劑，其特征在于，所述的蠶沙經(jīng)物理粉碎至粒徑大 小為20?200目，或經(jīng)化學(xué)改性;所述化學(xué)改性的方法為:51.缺氧條件下，將蠶沙炭化3?8h燒制，冷卻后取出，混勻研磨過(guò)90?110目篩；52.將S1處理后的蠶沙用磷酸溶液處理4?8h，重復(fù)3次去除灰分，全部過(guò)濾后，再用去 離子水沖洗至中性，50?70°C烘干，得到碳化蠶沙。7.根據(jù)權(quán)利要求6所述農(nóng)藥降解菌制劑，其特征在于，步驟S1所述炭化的溫度為500? 800。。。8.根據(jù)權(quán)利要求3所述農(nóng)藥降解菌制劑，其特征在于，還包含有輔料，所述輔料為工業(yè) 廢料葡萄糖或糖蜜;按照質(zhì)量百分含量計(jì)，所述輔料添加至農(nóng)藥降解菌制劑后的濃度為1%?95%〇9.一種權(quán)利要求3所述農(nóng)藥降解菌制劑的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:51.將農(nóng)藥降解菌活化、接種于液體LB培養(yǎng)基中，震蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期；52.將S1所得菌液離心后去掉上清液，加入無(wú)菌水，制成菌種液；53.將S2所得菌種液接入蠶沙中，密封，震蕩掛膜，離心，常溫真空干燥至近干，分裝密 封。10.根據(jù)權(quán)利要求9所述農(nóng)藥降解菌制劑的制備方法，其特征在于，將步驟S3中將菌種 液接入蠶沙中后加入輔料。
【文檔編號(hào)】A01N25/32GK105950600SQ201610276598
【公開(kāi)日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2016年4月29日
【發(fā)明人】鐘國(guó)華, 劉婕, 楊紅霞
【申請(qǐng)人】華南農(nóng)業(yè)大學(xué)