用于結(jié)合血小板特異性糖蛋白iib/iiia的金屬螯合物的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及與糖蛋白IIb/IIIa結(jié)合并可用于血栓的診斷成像，特別是磁共振成像的化合物。所公開(kāi)的化合物能夠與糖蛋白IIb/IIIa受體結(jié)合，兼具足夠的成像靈敏度。
【專利說(shuō)明】用于結(jié)合血小板特異性糖蛋白I IB/I I ΙΑ的金屬螯合物 發(fā)明領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及專利權(quán)利要求中表征的主題，即可用于血栓的磁共振成像的金屬螯合 物及其用于使哺乳動(dòng)物體內(nèi)的血栓成像的用途。更具體地，本發(fā)明涉及用于使血栓成像的 用順磁性螯合物標(biāo)記的高親合性特異性結(jié)合糖蛋白Ilb/IIla詰抗劑。
【背景技術(shù)】
[0002] 1.介紹 心肌梗塞(MI)、中風(fēng)、短暫性腦缺血發(fā)作(TIA)和肺栓塞(PE)是全世界范圍發(fā)病率和死 亡率的主要原因。這些危及生命的臨床事件主要是由血栓所引起的，血栓可能位于遍及全 身的不同血管并且可具有不同的尺寸和組成。中風(fēng)或TIA的起因可能例如為心臟左心房 (LA)中的血栓或者心臟與腦之間的大動(dòng)脈之一(例如頸動(dòng)脈）中的血栓。在PE的情況下，通 常位于小腿中的靜脈血栓形成可能是病因。
[0003] 在血栓生長(zhǎng)中，血小板凝聚的最終常見(jiàn)步驟的特征在于活化的糖蛋白Ilb/IIIa (GPIIb/II la)與血液纖維蛋白原結(jié)合，導(dǎo)致在血小板內(nèi)交聯(lián)。糖蛋白Ilb/II la抑制劑的設(shè) 計(jì)和開(kāi)發(fā)（Scarborough R.M·，Gretler D.D·，2000，妨，3453-3473)已 經(jīng)在抗血小板和抗血栓活性方面的藥物學(xué)研究中引起極大關(guān)注。
[0004] 但是，健康護(hù)理專業(yè)人員不僅需要在急性護(hù)理設(shè)置中防止血栓形成的化合物，而 且需要令人滿意的使血栓成像的方法。
[0005] 更具體地，血栓成像對(duì)于臨床應(yīng)用（例如溶栓干預(yù)）而言非常重要，其中血栓形成 部位的確定對(duì)監(jiān)測(cè)治療效果是至關(guān)重要的。
[0006] 因此血栓成像有助于避免不必要的預(yù)防性應(yīng)用和隨之而來(lái)的危險(xiǎn)的抗凝血?jiǎng)┲?療(例如由于凝血能力降低而嚴(yán)重失血）。
[0007] 可受益于這種診斷程序的患者人數(shù)眾多。根據(jù)American Heart Association的 "Heart disease and Stroke Statistics-2010 Update"，僅美國(guó)就有17.6百萬(wàn)人受冠心 病困擾。每年估計(jì)有785,000名美國(guó)人將患有首發(fā)的冠心病發(fā)作，并且約有470,000人將患 有復(fù)發(fā)性發(fā)作。每年約有795，000名患者經(jīng)歷首發(fā)或復(fù)發(fā)性中風(fēng)。這些患者中約610，000人 為首次發(fā)作。所有中風(fēng)之中87%為缺血性中風(fēng)，其中大部分是由于血栓栓塞病因?qū)е?(Lloyd-Jones, D.等，Ci_rct/_/aiio/3, 2010，(7):第e46_215頁(yè)）。在美國(guó)，短暫性腦 缺血發(fā)作(TIA)的發(fā)生率已經(jīng)估計(jì)為每年大約200,000至500,000人，2.3%的人群患病率，轉(zhuǎn) 換為約5百萬(wàn)人(Easton, J.D.等，Stroke, 2009，你（6):第2276-2293頁(yè)）?；加蠺IA的 個(gè)體具有3.0%至17.3%的90天中風(fēng)風(fēng)險(xiǎn)和18.8%的10年中風(fēng)風(fēng)險(xiǎn)。經(jīng)合并10年中風(fēng)、心肌梗 塞或血管性死亡風(fēng)險(xiǎn)甚至達(dá)到42.8%(Clark, T.G·，M.F.G. Murphy和P.M. Rothwell, Journal of Neurology, Neurosurgery & Psychiatry, 2003. 74 (5):第577-580頁(yè)）〇
[0008] 成像是識(shí)別血栓的最前沿。目前，血栓成像依賴于不同的模式，這取決于血管分布 區(qū)。頸動(dòng)脈超聲用于搜尋頸動(dòng)脈血栓，經(jīng)食道超聲心動(dòng)描記術(shù)(TEE)用于搜尋心腔凝塊，超 聲用于搜尋深靜脈血栓形成，CT已經(jīng)變成PE檢測(cè)的黃金標(biāo)準(zhǔn)。
[0009] 2.現(xiàn)有技術(shù)，要解決的問(wèn)題及其解決方案的描述 盡管有上述技術(shù)的成功，仍然強(qiáng)烈需要一種用于血栓檢測(cè)和監(jiān)測(cè)的成像方案:首先，仍 存在某些血管分布區(qū)不能成像。例如，即使盡最大努力來(lái)成像，但仍然有30%至40%的缺血性 中風(fēng)是"成因不明的"，即病因不確定，或換言之仍令人遺憾地未能識(shí)別血栓栓塞的來(lái)源 (Guercini, F.等，Journal of Thrombosis and Hemostasis, 2008. 6 (4):第549-554 頁(yè)）。成因不明的中風(fēng)的潛在來(lái)源包括主動(dòng)脈弓或顱內(nèi)動(dòng)脈中的動(dòng)脈粥樣硬化。主動(dòng)脈弓或 其它主要血管中的斑塊破裂(plaque rupture)據(jù)信是成因不明的中風(fēng)的主要來(lái)源，并且用 常規(guī)方法很難檢測(cè)。來(lái)自經(jīng)食道超聲心動(dòng)描記術(shù)(TEE)研究的最新臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)顯示，雖然 潰瘍型主動(dòng)脈弓斑塊與成因不明的中風(fēng)有關(guān)，但是主動(dòng)脈弓中存在增厚血管壁并不是缺血 性中風(fēng)的先兆。血栓靶向的特異性成像方法對(duì)于在動(dòng)脈粥樣硬化斑塊存在下識(shí)別凝塊具有 重大潛力。
[0010] 另外，仍然強(qiáng)烈需要一種方法，其中使用單一模式來(lái)識(shí)別全身的血栓。例如，在TIA 或中風(fēng)返診(follow-up)中，目前需要多種檢查來(lái)搜尋栓塞來(lái)源(Ciesienski，K.L.和P. Caravan, Curr Cardiovasc Imaging Rep., 2010. 4 (1):第77-84頁(yè)）。
[0011] 糖蛋白 Ilb/IIIa抑制劑的治療應(yīng)用（Scarborough R.M. , Gretler D.D.,, CAeffi. 2000，妨，3453-3473)在過(guò)去已受到相當(dāng)大的關(guān)注。同時(shí)，三種糖蛋白lib/ 111 a詰抗劑是市售的：重組抗體（阿昔單抗（Ab c i X i mab ))、環(huán)狀七肽（依替巴肽 (Ept i f ibat i d))和合成的非肽抑制劑（替羅非班（Tirof iban ))。替羅非班（商標(biāo)名 AGGRASTAT ? )屬于磺酰胺類，并且是上述藥物中唯一的合成小分子。Duggan等，1994，US 5， 292,756公開(kāi)了作為治療劑的磺酰胺纖維蛋白原受體拮抗劑，其用于預(yù)防和治療由血栓形 成引起的疾病。
[0012]高度特異性非肽糖蛋白Ilb/IIIa詰抗劑已經(jīng)描述在現(xiàn)有技術(shù)（Damiano等， 7?esea_rcA 2001 川4，113_126;Hoekstra, W.J.等，上 ifec/. CAe?·，1999， 4足5254-5265)中。已知這些化合物是GPIIb/IIla拮抗劑，有效用作具有抗血小板和抗血 栓活性的治療劑（參見(jiàn) W099/21832、W097/41102、W095/08536、W096/29309、W097/33869、 W09701/60813、US 6,515,130)。
[0013]迄今為止，只有少數(shù)出版物報(bào)道用于血栓成像的糖蛋白Ilb/IIIa特異性造影劑 ((3〇1181:抑8〖386111:)。1]3 5,508,020描述了放射性標(biāo)記的肽，制造此類肽的方法及試劑盒， 以經(jīng)由Tc-99m結(jié)合部分使哺乳動(dòng)物體內(nèi)用锝-99m標(biāo)記的部位成像。SPECT示蹤劑阿替塞得 (Apticide)(AcuTect ? )是一種滿足血栓成像需要的方法。Apticide為T(mén)c-99m標(biāo)記的肽，其 與GPIIb/IIIa受體特異性結(jié)合。Dean和Lister-James描述了與活化血小板表面上的GPIIb/ Ilia受體特異性結(jié)合的肽(US 5,645,815;US 5,830,856和US 6,028,056)。作者展示了使 用Apticide檢測(cè)深靜脈血栓形成。但是，經(jīng)锝標(biāo)記的肽的非特異性結(jié)合和低信噪比是該方 法的缺點(diǎn)，導(dǎo)致血栓成像的分辨率低。US 2007/0189970描述了能夠與糖蛋白Ilb/IIIa結(jié)合 的化合物。所公開(kāi)的化合物用正電子發(fā)射同位素或nC標(biāo)記。W02013/023795公開(kāi)了用于與 GPIIb/IIIa受體結(jié)合的18F標(biāo)記化合物，及其作為特別用于通過(guò)使用正電子發(fā)射斷層成像 (PET)使血栓成像的診斷劑的用途。除了用于特異性血栓成像的核醫(yī)學(xué)方法之外，US 2004/ 112839 A2和US 2006/0239926 A1中描述了可用于多種病理(特別是心血管、癌癥相關(guān)和炎 性病理)診斷的磁共振成像用的特異性高弛豫效能化合物。K1 ink等(Arierioscier Kasc5io_/. 2010，30 (3): 403-410)描述了通過(guò)經(jīng)由小的連接體（small linker)將環(huán)肽 (環(huán)[Cys-Arg-Gly-Asp-Cys])與Gd-DOTA(P975)偶聯(lián)的釓基造影劑。P975的弛豫效能/釓為9 L/(mmol s)，對(duì)于血栓形成的MRI檢測(cè)使用標(biāo)準(zhǔn)IL劑量（100 μπιο? Gd/kg體重）。
[0014] Uppal等如2010，41 (6): 1271-1277)描述了通過(guò)偶聯(lián)纖維蛋白靶向肽 (EP2104R)的IL基造影劑。EP2104R的弛豫效能/IL為10·6 L/(mmol s)(Overoye-Chan等， J.Am. Chem. Soc. 2008，130，6025-6039)。對(duì)于血栓形成的MRI成像，使用30 μπιο? Gd/ kg體重的,L劑量（7.5 μπιο? EP2104R/kg bw) t〇
[00?5]雖然使革E向特異性結(jié)合劑（biovector)與順磁性螯合物締合的原理已經(jīng)久為人 知，但是在臨床試驗(yàn)中尚未測(cè)試特異性MRI造影劑。
[0016] 然而，靶向MRI方法存在一些難點(diǎn)。主要難點(diǎn)源于MRI技術(shù)的相對(duì)較低的靈敏度。由 于MRI的固有低靈敏度，要求造影劑在靶向部位處的局部濃度高，以產(chǎn)生可檢測(cè)的MR對(duì)比。 對(duì)于體外和臨床前動(dòng)物試驗(yàn)，臨床可用造影劑的檢測(cè)限為約20 μπιο? Gd/L(Ciesienski等， Ckrr Ca_rc/iorasc 2010，4 (1)，77-84)，并且對(duì)于實(shí)用臨床應(yīng)用（robust clinical application)，為125 μπιο? Gd/L(Caravan等，Chem. Soc. Rev. , 2006, 35， 512-523)。
[0017] 滿足該要求的一種方法是提高弛豫效能或每分子釓含量。
[0018] 在W02004/112839中，在第9頁(yè)，1.10-15陳述"發(fā)明人反對(duì)優(yōu)選將小分子用于特異 性醫(yī)學(xué)成像產(chǎn)物的技術(shù)偏見(jiàn)。實(shí)際上，他們能夠注意到所使用的HR螯合物的位阻并不損害 特異性產(chǎn)物對(duì)于其靶標(biāo)的親合性。盡管分子量為大約8至20 kD，但是該產(chǎn)物有效地到達(dá)其 特異性靶向部位。" 現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，盡管大的釓螯合物標(biāo)記物有位阻，但是本發(fā)明的化合物對(duì)于GPIIbllla靶標(biāo) 具有尚她豫效能和尚未合性。
[0019] 本發(fā)明的化合物的令人驚訝的技術(shù)效果是其顯著降低劑量的潛力。
[0020] 這種令人驚訝的效果通過(guò)磁共振成像實(shí)驗(yàn)得以證實(shí)。本發(fā)明的高親合性結(jié)合劑的 所用濃度顯著低于(數(shù)量級(jí))所用的臨床標(biāo)準(zhǔn)劑量。所確立的造影劑的所用標(biāo)準(zhǔn)劑量為1〇〇 μπιο? Gd/kg體重，施用后2分鐘導(dǎo)致約590 μπιο? Gd/L的平均血衆(zhòng)濃度（產(chǎn)品特征概要： Gadovi st 1.0 mmo1/ml 注身才溶液，F(xiàn)achinformation Gadovi st ?'1,0 mmo1/ml Injektionsl6sung)。所述化合物的所用血衆(zhòng)體濃度(0.8 μπιο? Gd/L)在數(shù)量級(jí)上低于批準(zhǔn) 的市售產(chǎn)品。
[0021] 使用極低劑量的令人驚訝的效果在猴子體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中得以證實(shí)。（總劑量:4 μπιο? Gd/kg體重等于0.5 μπιο?分子/kg bw)。
[0022] 與Klink等（100 μπιο? Gd/kg bw, Arie_riosc_/e_r ΓΑι?λ;/? Kasc 2010，30 (3): 403-410)和Uppal等（30ymol Gd/kg/bw, *Siro々e2010，41 (6): 1271-1277)所述 的最先進(jìn)的臨床前血栓特異性成像MRI實(shí)驗(yàn)相比，劑量低至少7.5倍直至25倍。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0023] 本發(fā)明涉及與糖蛋白Ilb/IIIa結(jié)合并可用于血栓的診斷成像，特別是磁共振成像 的化合物。所公開(kāi)的化合物能夠與糖蛋白Ilb/IIIa受體結(jié)合，兼具充足的成像靈敏度。 [0024]發(fā)明描述 根據(jù)第一個(gè)方面，本發(fā)明涵蓋通式(I)的化合物：
其中： X表示選自以下的基團(tuán)：

其中： R1表示氫、甲基、乙基、丙基或異丙基； R2表示氫、甲基、乙基、丙基或異丙基； R3表示氫、甲基、乙基、丙基或異丙基； G表；^基團(tuán)：
其中： R4表示氫、甲基、乙基、丙基、異丙基或芐基； R5表示氫、甲基、乙基或丙基； R6表示氫、甲基、乙基、丙基、異丙基或芐基； Μ表示,L; m表示1或2; η表示2、3、4、5或6的整數(shù)； q表示0或1; 或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、N-氧化物、水合物、溶劑合物或鹽，或者它們的混合物。 [0025]本發(fā)明的化合物可以含有一個(gè)或多個(gè)不對(duì)稱中心，取決于所需的各種取代基的位 置和性質(zhì)。不對(duì)稱碳原子可以以（R)或(S)構(gòu)型存在，在單個(gè)不對(duì)稱中心的情況下產(chǎn)生外消 旋混合物，在多個(gè)不對(duì)稱中心的情況下產(chǎn)生非對(duì)映混合物。在某些情況下，由于圍繞給定鍵 (例如連接所指定化合物的兩個(gè)取代芳族環(huán)的中心鍵)的受限旋轉(zhuǎn)，也可能存在不對(duì)稱性。 [0026]優(yōu)選的化合物是產(chǎn)生更理想的生物活性的那些化合物。本發(fā)明化合物的單獨(dú)的、 純凈的或部分純化的同分異構(gòu)體和立體異構(gòu)體或者外消旋或非對(duì)映混合物也包括在本發(fā) 明范圍內(nèi)。這種材料的純化和分離可以通過(guò)本領(lǐng)域中已知的標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)來(lái)實(shí)現(xiàn)。
[0027] 可以通過(guò)根據(jù)常規(guī)方法拆分外消旋混合物，例如通過(guò)使用光學(xué)活性酸或堿形成非 對(duì)映異構(gòu)鹽或者形成共價(jià)非對(duì)映異構(gòu)體，來(lái)獲得旋光異構(gòu)體。合適的酸的實(shí)例為酒石酸，二 乙?；剖?，二甲苯?；剖岷驼聊X磺酸。非對(duì)映異構(gòu)體的混合物可以通過(guò)本領(lǐng)域中 已知的方法，例如通過(guò)色譜法或分步結(jié)晶法，基于它們的物理和/或化學(xué)差異分離成它們的 獨(dú)立非對(duì)映異構(gòu)體。光學(xué)活性堿或酸因此由分離的非對(duì)映異構(gòu)鹽釋放。分離旋光異構(gòu)體的 不同方法涉及在有或沒(méi)有常規(guī)衍生化下使用手性色譜法(例如手性HPLC柱），其經(jīng)過(guò)優(yōu)選以 使對(duì)映異構(gòu)體的分離最大化。合適的手性耶]^柱由〇3；[06 1制造，例如01；^306 100和 Chiracel 0J，以及許多其它手性HPLC柱，所有這些都可常規(guī)選擇。還可使用有或沒(méi)有衍生 化的酶分離。本發(fā)明的光學(xué)活性化合物同樣可以由利用光學(xué)活性起始材料的手性合成獲 得。
[0028] 為了限制彼此不同類型的異構(gòu)體，參考IUPAC Rules Section E(Pure Appl Chem 45， 1卜30， 1976)〇
[0029] 本發(fā)明包括本發(fā)明化合物的所有可能的立體異構(gòu)體，其為單一立體異構(gòu)體的形 式，或?yàn)樗隽Ⅲw異構(gòu)體(例如R-或S-異構(gòu)體，或E-或Z-異構(gòu)體）以任何比率的任何混合物 的形式。本發(fā)明化合物的單一立體異構(gòu)體，例如單一對(duì)映異構(gòu)體或單一非對(duì)映異構(gòu)體的分 離可以由任何合適的現(xiàn)有技術(shù)方法，例如色譜法，特別是例如手性色譜法來(lái)實(shí)現(xiàn)。
[0030] 此外，本發(fā)明的化合物可以以N-氧化物的形式存在，其定義為本發(fā)明化合物的至 少一個(gè)氮被氧化。本發(fā)明包括所有此類可能的N-氧化物。
[0031] 本發(fā)明還涉及如本文所公開(kāi)的化合物的有用形式，例如代謝物、水合物、溶劑合 物、前體藥物、鹽(特別是可藥用鹽)和共沉淀物。
[0032] 本發(fā)明的化合物可以以水合物或溶劑合物的形式存在，其中本發(fā)明的化合物含有 作為所述化合物晶格的結(jié)構(gòu)要素的極性溶劑，特別是例如水、甲醇或乙醇。極性溶劑(特別 是水）的量可以以化學(xué)計(jì)量比或非化學(xué)計(jì)量比存在。在化學(xué)計(jì)量的溶劑合物（例如水合物） 的情況下，可能分別是，半(hemi-)溶劑合物或水合物、半（semi-)溶劑合物或水合物、一溶 劑合物或水合物、倍半溶劑合物或水合物、二溶劑合物或水合物、三溶劑合物或水合物、四 溶劑合物或水合物、五溶劑合物或水合物等。本發(fā)明包括所有此類水合物或溶劑合物。
[0033] 此外，本發(fā)明的化合物可以以鹽的形式存在。所述鹽可以為任何鹽，其可為有機(jī)或 無(wú)機(jī)加成鹽，特別是藥學(xué)中通常使用的任何可藥用有機(jī)或無(wú)機(jī)加成鹽。
[0034] 術(shù)語(yǔ)"可藥用鹽"是指本發(fā)明化合物的相對(duì)無(wú)毒的無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸加成鹽。例如， 參見(jiàn)S. M. Berge等，"Pharmaceutical Salts"，J. Pharm. Sci. 1977,66,1-19。特別地， 中性鹽的制造描述在US 5,560,903中。
[0035] 本發(fā)明化合物的合適的可藥用鹽可以為，例如，在鏈或環(huán)中帶有氮原子的具有足 夠堿性的本發(fā)明化合物的酸加成鹽，例如與以下無(wú)機(jī)酸形成的酸加成鹽:例如，鹽酸、氫溴 酸、氫碘酸、硫酸、焦硫酸(bisulfuric)、磷酸或硝酸，或者與以下有機(jī)酸形成的酸加成鹽： 例如，甲酸、乙酸、乙酰乙酸、丙酮酸、三氟乙酸、丙酸、丁酸、己酸、庚酸、十一烷酸、月桂酸、 苯甲酸、水楊酸、2-(4-羥基苯甲?；┍郊姿?、樟腦酸、肉桂酸、環(huán)戊烷丙酸、二葡糖酸 (digluC〇nic)、3-羥基-2-萘甲酸、煙酸、撲酸、果膠酯酸、過(guò)硫酸、3-苯基丙酸、苦味酸、特戊 酸、2-羥基乙磺酸、衣康酸、氨基磺酸、三氟甲磺酸、十二烷基硫酸、乙磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯 磺酸、甲磺酸、2-萘磺酸、萘二磺酸、樟腦磺酸、檸檬酸、酒石酸、硬脂酸、乳酸、草酸、丙二酸、 琥珀酸、蘋(píng)果酸、己二酸、海藻酸、馬來(lái)酸、富馬酸、D-葡糖酸、扁桃酸、抗壞血酸、葡庚糖酸 (glucoheptanoic)、甘油磷酸、天冬氨酸、磺基水楊酸、半硫酸(hemisulfuric)、或硫氰酸。
[0036] 此外，具有足夠酸性的本發(fā)明化合物的另一種合適的可藥用鹽為堿金屬鹽，例如 鈉鹽或鉀鹽;堿土金屬鹽，例如鈣鹽或鎂鹽;銨鹽或與提供生理學(xué)上可接受的陽(yáng)離子的有機(jī) 堿形成的鹽，例如與以下物質(zhì)形成的鹽:N-甲基葡糖胺、二甲基葡糖胺、乙基葡糖胺、賴氨 酸、二環(huán)己基胺、1，6_己二胺、乙醇胺、葡糖胺、肌氨酸、絲氨醇、三羥基甲基氨基甲烷、氨基 丙二醇、sovak堿、1-氨基_2,3,4_ 丁三醇。另外，堿性含氮基團(tuán)可以用以下試劑季銨化:低級(jí) 烷基鹵，例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物;硫酸二烷基酯，例如硫酸二 甲酯、硫酸二乙酯、硫酸二丁酯和硫酸二戊酯；長(zhǎng)鏈鹵化物，例如癸基，月桂基，肉豆蔻基和 硬脂基氯化物、溴化物和碘化物;芳烷基鹵化物，例如芐基和苯乙基溴化物等。
[0037]本領(lǐng)域技術(shù)人員還會(huì)認(rèn)識(shí)到，所要求保護(hù)的化合物的酸加成鹽可以通過(guò)多種已知 方法中的任一種使該化合物與合適的無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸反應(yīng)來(lái)制備。或者，本發(fā)明的酸性化 合物的堿金屬鹽和堿土金屬鹽通過(guò)各種已知的方法使本發(fā)明化合物與合適的堿反應(yīng)來(lái)制 備。
[0038]本發(fā)明包括本發(fā)明化合物的所有可能的鹽，其可為單一鹽的形式，或?yàn)樗鳆}以 任何比率的任何混合物的形式。
[0039] 在本文中，特別是在實(shí)驗(yàn)部分，對(duì)于本發(fā)明的中間體和實(shí)施例的合成，當(dāng)作為與相 應(yīng)堿或酸的鹽的形式提及化合物時(shí)，如通過(guò)各制備和/或純化方法獲得的所述鹽的形式的 精確化學(xué)計(jì)量組成在大多數(shù)情況下是未知的。
[0040] 除非另外指明，否則化學(xué)名稱或結(jié)構(gòu)式的后綴，例如"氫氯化物"、"三氟乙酸鹽"、 "鈉鹽"、或"X HC1"、"X CF3C00H"、"X Na+"應(yīng)理解為并非化學(xué)計(jì)量說(shuō)明，而僅作為鹽的形 式。
[0041] 這一點(diǎn)類似地適用于其中已經(jīng)通過(guò)所述制備和/或純化方法獲得合成中間體或?qū)?施例化合物或其鹽，作為具有(如果限定)未知的化學(xué)計(jì)量組成的溶劑合物(例如水合物）的 情況。
[0042] 術(shù)語(yǔ)"血栓"描述所有類型的血塊(靜脈血栓和動(dòng)脈血栓）。術(shù)語(yǔ)"血栓"還包括短語(yǔ) 如"血栓沉積物"和"血栓形成部位"的任何術(shù)語(yǔ)。血栓通常源于止血中的凝血步驟，或者在 病理學(xué)上源于不同的病因（如血栓性疾?。Ｔ诒狙芯恐?，包括所有含血小板的血栓，以及使 阻塞在血管樹(shù)中某處的血栓(栓塞)流通。
[0043]在第二個(gè)方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： X表示選自以下的基團(tuán)：

其中： R1表示氫或甲基； R2表示氫或甲基； R3表示氫或甲基； G表；^基團(tuán)：
其中： R4表示氫或甲基； R5表示氫或甲基； R6表示氫或甲基； Μ表示,L; m表示1或2; η表示2、3、4、5或6的整數(shù)； q表示0或1; 或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、N-氧化物、水合物、溶劑合物或鹽，或者它們的混合物。 [0044]在第三個(gè)方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： X表示選自以下的基團(tuán)：

其中基團(tuán)： R1表;^氫； R2表;^氫； R3表;^氫； G表；^基團(tuán)：
其中： R4表示氫或甲基； R5表示氫或甲基； R6表示氫； Μ表示,L; m表不1; η表示2、3或4的整數(shù)； q表示0或1; 或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、N-氧化物、水合物、溶劑合物或鹽，或者它們的混合物。 [0045]在第四個(gè)方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： X表示選自以下的基團(tuán)：

其中： R1表;^氫； R2表;^氫； R3表;^氫； G表；^基團(tuán)：
其中： R4表示氫或甲基； R5表示氫； R6表示氫； Μ表示,L; m表不1; η表示3或4; q表示0或1; 或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、N-氧化物、水合物、溶劑合物或鹽，或者它們的混合物。
[0046]在第五個(gè)方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： X表示選自以下的基團(tuán)：

R3表不氫； G表不基團(tuán)：
其中： R4表示甲基； R5表示氫； R6表示氫； Μ表示,L; m表示1; η表示4; q表不1; 或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、N-氧化物、水合物、溶劑合物或鹽，或者它們的混合物。
[0047] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： X表示選自以下的基團(tuán)：
[0048] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： X表示選自以下的基團(tuán)：
[0049] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： X表示：
[0050] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： X表示：
[0051] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： Y表示：

[0052]在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式（I)的化合物，其中： Y表示：
[0053] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式（I)的化合物，其中： Y表示：
[0054] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式（I)的化合物，其中： Y表示：
[0055] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R1表示氫、甲基、乙基、丙基或異丙基。
[0056] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R1表示氫或甲基。
[0057]在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式（I)的化合物，其中： R1表不氫。
[0058]在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式（I)的化合物，其中： R1表示甲基。
[0059] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R2表示氫、甲基、乙基、丙基或異丙基。
[0060] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式（I)的化合物，其中： R2表示氫或甲基。
[0061] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R2表不氫。
[0062] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R2表示甲基。
[0063] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R3表示氫、甲基、乙基、丙基或異丙基。
[0064] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R3表示氫或甲基。
[0065] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R3表不氫。
[0066] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R3表示甲基。
[0067] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： G表不基團(tuán)：
[0068] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R4表示氫、甲基、乙基、丙基、異丙基或芐基。
[0069] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R4表示氫或甲基。
[0070] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R4表不氫。
[0071] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R4表示甲基。
[0072] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R5表示氫、甲基、乙基或丙基。
[0073] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R5表示氫或甲基。
[0074] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R5表不氫。
[0075] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R5表示甲基。
[0076] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R6表示氫、甲基、乙基、丙基、異丙基或芐基。
[0077] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R6表示氫或甲基。
[0078] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R6表不氫。
[0079] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： R6表示甲基。
[0080] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式（I)的化合物，其中： Μ表示,L 〇
[0081] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： m表示1或2。
[0082]在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： m表不1 〇
[0083]在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式（I)的化合物，其中： m表不2〇
[0084] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： η表示2、3、4、5或6的整數(shù)。
[0085] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： η表示2、3或4的整數(shù)。
[0086] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： η表示3或4。
[0087] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： η表不3〇
[0088] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： η表不4〇
[0089] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： q表示0或1。
[0090] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： q表不0。
[0091] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋在前通式(I)的化合物，其中： q表不1 〇
[0092] 在另一方面，本發(fā)明涵蓋通式(I)的化合物，其選自： 2,3-雙-{[2,3-雙（{2,3-雙[(#-{2-[4,7，10-三（羧酸根合甲基 (carboxylatomethyl) )_1，4,7，10-四氮雜環(huán)十二燒-1-基]丙?；鶀甘氨?；┌被鵠丙酰 基}氨基)丙?；鵠氨基}-，(4-{3-[(5-{(1幻-2_羧基-1-[({(37?)-1-[3-(哌啶-4-基)丙酰 基]哌啶-3-基}羰基)氨基]乙基}吡啶-3-基）乙炔基]苯基} 丁基)丙酰胺合八釓。
[0093] 本發(fā)明的另一個(gè)方面為通式(I)的化合物用于診斷成像的用途。
[0094] 優(yōu)選地，本發(fā)明化合物在診斷中的用途使用磁共振成像(MRI)來(lái)實(shí)施。
[0095] 本發(fā)明還包含用于制造診斷劑的通式（I)的化合物。
[0096] 本發(fā)明的另一個(gè)方面為通式(I)的化合物或其混合物用于制造診斷劑的用途。
[0097] 本發(fā)明的另一個(gè)方面為通式(I)的化合物或其混合物用于制造血栓成像用的診斷 劑的用途。
[0098] 使患者的體組織成像的方法，包括以下步驟:給患者施用有效量的在可藥用載體 中的一種或多種通式（I)的化合物，并且對(duì)患者施以匪R斷層成像(t omo gr aphy )。這種方法 描述在US 5,560,903中。
[0099] 為了制造診斷劑，例如向人類或動(dòng)物受試者給藥，可將通式(I)的化合物或混合物 方便地與藥物載體或賦形劑一起配制。本發(fā)明的造影介質(zhì)可以方便地包含藥物配制助劑， 例如穩(wěn)定劑、抗氧化劑、pH調(diào)節(jié)劑、調(diào)味劑等。根據(jù)本發(fā)明的診斷介質(zhì)的制造同樣以本領(lǐng)域 中已知的方法進(jìn)行，參見(jiàn)US 5，560，903。它們可以經(jīng)配制以用于腸胃外給藥或經(jīng)腸給藥，或 者直接給藥至體腔中。例如，腸胃外給藥制劑包含劑量為ο. 0001 -5 mmo 1金屬/kg體重，特別 是0.005-0.5 mmol金屬/kg體重的根據(jù)本發(fā)明的式（I)化合物的無(wú)菌溶液或懸浮液。因此， 本發(fā)明的介質(zhì)可以為生理學(xué)上可接受的載體介質(zhì)，優(yōu)選注射用水中的常規(guī)藥物制劑，例如 溶液、懸浮液、分散體、糖漿等。當(dāng)造影介質(zhì)經(jīng)配制以用于腸胃外給藥時(shí)，將優(yōu)選是等滲壓或 過(guò)滲壓的，并且接近pH 7.4。
[0100] 在另一方面，本發(fā)明涉及一種診斷患者的血栓栓塞性疾病，例如心肌梗塞、肺栓 塞，中風(fēng)和短暫性腦缺血發(fā)作的方法。該方法包括a)將本發(fā)明的化合物給藥至有此診斷需 要的人，用于如上文和在此所述的那樣檢測(cè)人體中的化合物，和b)優(yōu)選通過(guò)磁共振成像 (MRI)，測(cè)量由于將該化合物給藥至人而產(chǎn)生的信號(hào)。
[0101] 在另一方面，本發(fā)明涉及一種診斷患者的危及生命的疾?。ɡ缰鲃?dòng)脈動(dòng)脈瘤 (aortic aneurism)、慢性血栓栓塞肺動(dòng)脈高血壓(CETPH)、心房纖顫和冠狀動(dòng)脈血栓形成） 的方法。該方法包括a)將本發(fā)明的化合物給藥至有此診斷需要的人，用于如上文和在此所 述的那樣檢測(cè)人體中的化合物，和b)優(yōu)選通過(guò)磁共振成像(MRI)，測(cè)量由于將該化合物給 藥至人而產(chǎn)生的信號(hào)。
[0102] 在另一方面，本發(fā)明涉及一種診斷和健康監(jiān)測(cè)心血管風(fēng)險(xiǎn)患者的方法。該方法包 括a)將本發(fā)明的化合物給藥至有此診斷需要的人，用于如上文和在此所述的那樣檢測(cè)人 體中的化合物，和b)優(yōu)選通過(guò)磁共振成像(MRI)，測(cè)量由于將該化合物給藥至人而產(chǎn)生的 信號(hào)。
[0103] -般合成 根據(jù)本發(fā)明的化合物可以按照以下方案1和2來(lái)制備。
[0104]如下所述的方案和程序舉例說(shuō)明本發(fā)明的通式（I)的化合物的合成路線，且并非 意圖加以限制。對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言明顯的是如在方案中示例的轉(zhuǎn)化順序可以以各種 方式修改。因此方案中所示例的轉(zhuǎn)化順序并非意圖限制。合適的保護(hù)基及其引入和裂解是 本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的（參見(jiàn)例如T.W. Greene和P.G.M. Wuts Jroieciire fo-ot/jDs i/3 Orga/jic 第三版，Wiley 1999)。具體實(shí)施例描述在后續(xù)段落中。
[0105]如本文中以其自身或作為另一基團(tuán)的一部分使用的，術(shù)語(yǔ)"胺-保護(hù)基"是已知的 或?qū)τ诒绢I(lǐng)域技術(shù)人而言明顯的，其選自但不限于一類保護(hù)基，即氨基甲酸酯、酰胺、酰亞 胺、N-烷基胺、N-芳基胺、亞胺、稀胺、硼燒、N-P保護(hù)基、N-亞橫酰基，N-橫?；蚇-甲硅烷 基，并且其選自但不限于教科書(shū)Greene and Wuts，Protecting groups in Organic Synthesis，第三版，第494-653頁(yè)中所描述的那些，在此將其引入作為參考。"胺-保護(hù)基"優(yōu) 選為節(jié)氧羰基(Cbz)、對(duì)甲氧基芐基羰基(Moz或MeOZ)、叔丁氧基羰基(B0C)、9-荷甲氧基羰 基(FM0C)、芐基(Bn)、對(duì)甲氧基芐基(PMB)、3,4-二甲氧基芐基(DMPM)、對(duì)甲氧基苯基(PMP)、 三苯基甲基(Trityl)、甲氧基苯基二苯基甲基(MMT)或受保護(hù)的氨基為1，3_二氧代-1，3-二 氫-2H-異吲哚-2-基(鄰苯二甲酰亞胺基)或疊氮基。
[0106]如在本文中以其自身或作為另一基團(tuán)的一部分使用的，術(shù)語(yǔ)"羧基-保護(hù)基"是已 知的或?qū)τ诒绢I(lǐng)域技術(shù)人而言明顯的，其選自但不限于一類保護(hù)基，即酯、酰胺和酰肼，并 且其選自但不限于教科書(shū)Greene and Wuts，Protecting groups in Organic Synthesis， 第三版，第369-453頁(yè)中描述的那些，在此將其引入作為參考。"羧基-保護(hù)基"優(yōu)選為甲基、 乙基、丙基、丁基、叔丁基、烯丙基、芐基、4-甲氧基芐基或4-甲氧基苯基。
[0107] 一般地，GP Ilb/IIa結(jié)合劑部分的合成記載在以下文獻(xiàn)中： 1) J. Med. Chem. 1999,^,5254-5265 2) Organic Progress Research & Development 2003,7,866-872 3) WO 2013/023795 立體選擇性合成路線詳細(xì)描述在實(shí)驗(yàn)部分。在方案1中示例了獲得溴化吡啶A的主要途 徑：
方案1 PG:保護(hù)基。
[0108] 溴化物A與連接到金屬配合物的炔經(jīng)的鈀催化的Sonogashira反應(yīng)產(chǎn)生通式（I)的 化合物，如方案2所示。優(yōu)選在使用水溶性鈀配合物，如[2-(二甲基氨基甲基)苯基][1，3，5- 三氮雜-7-磷雜金剛烷]氯化鈀iaDios 2006,25,5768-5773)或3，3'，3' 磷烷 (phosphane)三基三(4，6-二甲基苯磺酸)三鈉作為鈀配體下，在部分水性溶劑中進(jìn)行最終 偶聯(lián)反應(yīng)Uur. /. Org·. CAei 2010,3678-3683)。含釓單元通過(guò)四聚或八聚酰胺基 (amid)骨架橋接至炔烴官能的合成由本領(lǐng)域?qū)＜乙阎碾呐悸?lián)技術(shù)來(lái)完成，并在實(shí)驗(yàn)部分 中詳細(xì)描述。
方案2。
[0109] 在多釓配合物的情況下，所需的通式（I)的金屬配合物共輒物的分離和純化可以 由常規(guī)色譜法，如制備型HPLC或尺寸排阻色譜法，結(jié)合超濾法來(lái)實(shí)現(xiàn)。
【附圖說(shuō)明】
[0110] 圖1: 親合性分析:在第一步中，將由人類血小板純化的人類GPIIb/II la固定在96-孔固定板 (sol id plate)上。在48小時(shí)后，洗滌該板，用Roti ?-Block封閉非特異性結(jié)合位點(diǎn)。2.在下 一步中，該板和與提高濃度的新型化合物(抑制劑)混合的氚標(biāo)記的已知GPIIb/IIIa結(jié)合劑 (3H)同時(shí)培養(yǎng)。抑制劑的親合性越高，氚化的已知GPIIb/II la結(jié)合劑(3H)的結(jié)合率越低。在 微板閃爍計(jì)數(shù)器中測(cè)量未被抑制劑置換的氚化化合物(?)的百分率。
[0111] 圖2: 使用3D快速自旋回波序列（1.5 T，Siemens Avanto,小型肢端線圈，TR 1050ms，TE 9.1 ms，0.5 X 0.5 X 0.6 mm3)，進(jìn)行體外富血小板血栓和培養(yǎng)溶液(實(shí)施例1)的磁共振成像。在 圖2a中顯示了沒(méi)有添加造影劑的體外對(duì)照血栓。對(duì)照血栓的信號(hào)強(qiáng)度略微高于周圍的介 質(zhì)，但是明顯低于用實(shí)施例1培養(yǎng)的體外血栓的信號(hào)，如圖2b中描繪的那樣。在圖2c中，呈現(xiàn) 出最終濃度為10 μπιο?物質(zhì)/L人類血漿中的實(shí)施例1的培養(yǎng)溶液。信號(hào)強(qiáng)度高于體外富血小 板血栓2a和2b中的周圍血漿溶液。
[0112]圖2b中的體外血栓用圖2c中描繪的溶液培養(yǎng)。在20分鐘培養(yǎng)期后，用血漿溶液洗 滌血栓三次。圖2b中培養(yǎng)的體外血栓的信號(hào)強(qiáng)度顯示出比圖2a中的對(duì)照血栓明顯更高的信 號(hào)。
[0113] 圖3: 使用3D快速自旋回波序列（1.5 T，Siemens Avanto,小型肢端線圈，TR 1050ms，TE 9.1 ms，0.5 X 0.5 X 0.6 mm3)，進(jìn)行體外富血小板血栓和培養(yǎng)溶液(實(shí)施例1)磁共振成像。在圖 3a中顯示了沒(méi)有添加造影劑的體外對(duì)照血栓。對(duì)照血栓的信號(hào)強(qiáng)度略微高于周圍的介質(zhì)， 但是明顯低于用實(shí)施例1培養(yǎng)的體外血栓的信號(hào)，如圖3b中描繪的那樣。在圖3c中，呈現(xiàn)出 最終濃度為0.1 μπιο?物質(zhì)/L(0.8 nmol Gd//L)人類血漿中的實(shí)施例1的培養(yǎng)溶液。信號(hào)強(qiáng) 度與體外富血小板血栓3a和3b中的周圍血漿溶液相當(dāng)。圖3b中的體外血栓用圖3c中描繪的 溶液培養(yǎng)。在20分鐘培養(yǎng)期后，用血漿溶液洗滌血栓三次。圖3b中培養(yǎng)的體外血栓的信號(hào)強(qiáng) 度顯示出比圖3a中的對(duì)照血栓明顯更高的信號(hào)。
[0114] 實(shí)驗(yàn)部分

[0115] 材料和儀器 用于合成工作的化學(xué)品具有試劑級(jí)品質(zhì)并且原樣使用。
[0116] 分別在CDC13、D20或DMS〇-d6中測(cè)量^-NMR譜（294 K，Bruker DRX Avance 400 MHz NMR波譜儀(BO = 9.40 T)，共振頻率:對(duì)于1Η 300 MHz波譜儀對(duì)于1Η為400.20 MHz。相對(duì)于 作為內(nèi)標(biāo)物（<?= 〇 ppm)的（三甲基甲硅烷基)丙酸鈉_d4(D20)或四甲基硅烷(DMS〇-d6)，化 學(xué)位移以ppm給出。
[0117] 由以下HPLC基分析方法分析和表征樣品以測(cè)定特征保留時(shí)間和質(zhì)譜： 方法 1:UPLC (ACN-HC00H): 儀器：Waters Acquity UPLC-MS SQD 3001;柱：Acquity UPLC BEH C18 1.7 50 X 2 · 1mm;洗脫劑A:水+ 0 · 1%甲酸，洗脫劑B:乙腈;梯度:0-1 · 6分鐘1-99%的B，1 · 6-2 · 0分鐘99% 的B;流量0.8 ml/min;溫度:60°C;進(jìn)樣:2 yhDAD掃描:210-400 nm;ELSD 方法2: UPLC (ACN-HC00H極性）： 儀器：Waters Acquity UPLC-MS SQD 3001;柱：Acquity UPLC BEH C18 1.7 50 X 2.1mm;洗脫劑A:水+ 0.1%甲酸，洗脫劑B:乙腈;梯度:0-1.7分鐘卜45%的B，1.7-2.0分鐘45- 99%的B;流量0.8 ml/min;溫度:60°C;進(jìn)樣:2 yl;DAD掃描:210-400 nm;ELSD〇 實(shí)施例
[0118] 實(shí)施例1 2,3_ 雙-{[2,3_ 雙（{2,3_ 雙[(ΛΜ2-[4,7，10-三(羧酸根合甲基)-1，4,7，10_ 四氮雜環(huán) 十二燒-1_基]丙酰基}甘氨?；?氨基]丙?；鶀氨基)丙?；鵠氨基}-Λ^(4-{3_[ (5_{ (150- 2-駿基({(37?)_1_[3_(哌啶_4_基)丙?；鵠哌啶_3_基}幾基)氨基]乙基}吡啶_3_基）乙 炔基]苯基} 丁基)丙酰胺合八釓
[0119] 實(shí)施例la氨基-3-[5_溴啦啶-3-基]丙-2-稀酸叔丁基酯
將二異丙基胺(9.2 mL，65 mmol)在0°C下加入到乙基溴化鎂在二乙醚（10.9 mL，32.7 mmo 1)中的3M溶液和附加的二乙醚(20 mL)中。在0 °C下1小時(shí)后，添加乙酸叔丁酯(4.3 mL， 32.7 mmol)，繼續(xù)攪拌30分鐘。在0°C下添加在二乙醚(42 mL)中的5-溴吡啶-3-甲腈（2.0 g，10.9 mmol)。在0°C下2小時(shí)后，添加飽和氯化銨水溶液。分離各相，用二乙醚萃取水相。用 鹽水洗滌合并的萃取液，經(jīng)硫酸鈉干燥。在減壓下濃縮該溶液，并在二氧化硅凝膠上通過(guò)色 譜法純化殘留物（己烷中的乙酸乙酯，0至60%)，產(chǎn)生1.12 g的3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基） 丙-2-烯酸叔丁基酯。 匪R (400 MHz，DMS〇-c/6):S = 1.44 (s，9 H)，4.77 (s，l H)，7.15 (br.，2 H)， 8.22 (t，l Η)，8·75 (d，l Η)，8·76 (d，l H) ppm〇
[0120] 實(shí)施例lb ^幻^-氨基^-^-溴啦啶^-基彡丙酸叔丁基酯
在氬氣氣氛下，向（1，5-環(huán)辛二烯）氯銠（I)二聚物（39 mg，80 _〇1)和 [(幻-2-二叔丁基膦基）二茂鐵基]乙基二(4-三氟甲基苯基)膦（108 mg，160 μπιο?)中添加 2，2，2-三氟乙醇（5.8 mL)，并將溶液攪拌40分鐘。向壓力容器中的脫氣2，2，2-三氟乙醇 (11.6 mL)中的3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙-2-烯酸叔丁基酯（1.59 g，5.32 mmol)中添 加銠催化劑溶液，并將該溶液在50°C，11 bar氫氣壓力下攪拌22小時(shí)。在減壓下濃縮該溶 液，并在二氧化硅凝膠上通過(guò)色譜法純化殘留物（己烷中的乙酸乙酯，12至100%，隨后是乙 酸乙酯中的甲醇，0至15%)，產(chǎn)生1.16 g的對(duì)映異構(gòu)富集的（3幻-3-氨基-3-[5-(芐氧基)吡 啶-3-基]丙酸叔丁基酯。 匪R (300 MHz，CDC13):S = 1.43 (s，9 H)，2.59 (d，2 H)，4.42 (t，l Η)，7·92 (t，l Η)，8·58 (d，l Η)，8·53 (d，l H) ppm〇 α = -17.6° (c = l.Og /100mL，CHCl3)〇
[0121] 實(shí)施例lc 4-{3-[(37?)-3-{[(2,5-二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌 啶-1-羧酸叔丁基酯
向1，2-二甲氧基乙烷（13.5 mL)中的（37?)-1-{3-[1-(叔丁氧基羰基）哌啶-4-基]丙酰 基}哌啶_3_羧酸（1.91 g，5.18 mmoUiooi^·. #ec/. 2005，D，4343-4352,化合物 10)中添加基琥泊酰亞胺(0.60 g，5.18 mmol)和1,3-二環(huán)己基碳二亞胺（1.18 g，5.7 mmol)。將溶液在室溫下攪拌4小時(shí)，同時(shí)形成沉淀物。然后將混合物冷卻至0°C，過(guò)濾，并用 二乙醚洗滌固體。將濾液與二乙醚洗滌液合并且濃縮，產(chǎn)生2.61 g的粗4- {3-[(37?) -3- {[(2,5_二氧代吡咯烷-1-基)氧基]羰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-羧酸叔丁基酯。 UPLC (ACN-HC00H):Rt. = 1.13 min〇 MS (ES+):m/e = 466.31 (Μ + H)+。
[0122] 實(shí)施例1d 4-{3-[(37?)-3-({(1幻-1-[5_溴吡啶-3-基]-3-叔丁氧基-3-氧代丙基}氨基甲酰基)哌 啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-羧酸叔丁基酯
在0°C下向DMF(17 mL)中的（3^-3-氨基-3-(5-溴吡啶-3-基)丙酸叔丁基酯（1.33 g， 4.42 mmol)中添加二氣甲燒（17 mL)中的4_{3_[ (37?)_3_{ [ (2，5_二氧代P比略燒-1-基)氧 基]羰基}哌啶-1-基]-3-氧代丙基}哌啶-1-羧酸叔丁基酯（2.54 g，4.91 mmol)和三乙胺 (1.85 mL，13.2 mmol)。在3小時(shí)后，通過(guò)添加飽和氯化銨水溶液使混合物淬滅，分離各相， 用二乙醚萃取水相。經(jīng)硫酸鈉干燥合并的有機(jī)萃取液，在減壓下濃縮，并在二氧化硅凝膠上 通過(guò)色譜法純化殘留物（己烷中的乙酸乙酯，12至100%，隨后是乙酸乙酯中的甲醇，0至 15%)，產(chǎn)生2.1 g的4-[3-( (37?)-3-{ [ 溴吡啶-3-基)-3-叔丁氧基-3-氧代丙基] 氨基甲酰基}哌啶-1-基)-3_氧代丙基]哌啶-1-羧酸叔丁基酯。 UPLC (ACN-HC00H):Rt. = 1.35 min。 MS (ES+):m/e = 651.4 / 653.4 (Μ + H)+。
[0123] 實(shí)施例le (35^-3-(5-溴啦啶-3_基)-3_[ ({(37?)-1-[3_(哌啶4-基)丙?；鵠哌啶_3_基}幾基)氨 基]丙酸
將4-[3-((37?)-3-{[(1幻-1-(5-溴吡啶-3-基)-3-叔丁氧基-3-氧代丙基]氨基甲酰基} 哌啶-1-基)-3_氧代丙基]哌啶-1-羧酸叔丁基酯(600 mg，0.94 mmol)溶于甲酸，并加熱至 100°C持續(xù)12分鐘。在真空中蒸餾出溶劑，由制備型HPLC(C18-Chromatorex-10 pm)純化殘 留物。產(chǎn)生330 mg的（3^-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-[({(37?)-1-[3-(哌啶4-基)丙?；鵠哌啶- 3-基}羰基)氨基]丙酸。 UPLC (ACN-HC00H):Rt. = 0.57 min〇 MS (ES+):m/e = 495·2,497·2 (Μ + H)+。
[0124] 實(shí)施例1f 2-[4-(3_ 羥苯基)丁基]-If 異吲哚-1,3(2//)-二酮
將3,5-二溴苯酚(6.0 g，23.8 mmol)、2-(丁-3-烯-1-基)-1"_異吲哚-1,3(2扔-二酮 (9.8 g，49 mmol)、乙酸鈀（11)(53 mg，0.24 mmol)和三（2-甲基苯基）磷烷（145 mg，0.48 mmol)在90°C下在乙腈（125 mL)和三乙胺(6.6 mL)中攪拌5小時(shí)。在室溫下攪拌15小時(shí)并濃 縮后，獲得2-[4-(3_溴-5-羥苯基)丁-3-烯-1-基]-If異吲哚-1，3(2//)-二酮和2,2'-[(5_ 羥基苯-1，3-二基)二丁-1-烯-1，4-二基]雙（1爐異吲哚-1，3(2//)-二酮）的混合物，其可以 在二氧化硅凝膠上由色譜法分離（己烷中的乙酸乙酯，0至30%)，產(chǎn)生3.47 g的溴中間體。將 2- [4-(3_溴-5-羥苯基）丁-3-烯-1-基]-1"-異吲哚-1,3(2扔-二酮溶于甲醇（230 mL)、水 (18 mL)和乙酸乙酯（192 mL)中，并在炭載鈀（10%，437 mg)存在下，在40°C、氫氣氣氛下攪 拌2.5小時(shí)。經(jīng)由硅藻土途徑過(guò)濾反應(yīng)混合物，在減壓下濃縮，并在二氧化硅凝膠上通過(guò)色 譜法純化殘留物（己烷中的乙酸乙酯，0至60%)，產(chǎn)生2.41 g的2-[4-(3-羥苯基)丁基]-1"- 異吲哚-1，3(2功-二酮。 匪R (300 MHz，DMS〇-d6):S = 1.41-1.67 (m，4H)，2.47 (m，2H)，3.58 (t，2H)， 6.47-6.65 (m，3H)，6.96-7.10 (t，lH)，7.76-7.92 (m，4H)，9.21 (s，lH) ppm。
[0125] 實(shí)施例lg 3-[4-(l，3-二氧代-1，3-二氫-2f異B引哚-2-基)丁基]苯基三氟甲磺酸酯
在0°(：下向吡啶(3〇1^)中的2-[4-(3-羥苯基)丁基]-1"-異吲哚-1，3(2功-二酮(4.24 g，14.4 mmol)中添加三氟甲磺酸酐（3.2 mL，18.7 mmol)。將混合物在0°C下攪拌1小時(shí)，添 加水和二乙醚的混合物，分離各相，并用二乙醚萃取水相。用0.5 Μ鹽酸洗滌合并的有機(jī)萃 取液，經(jīng)硫酸鈉干燥。在減壓下濃縮該溶液，同時(shí)在蒸餾結(jié)束之前兩次添加甲苯，并在二氧 化硅凝膠上通過(guò)色譜法純化殘留物（己烷中的乙酸乙酯，0至70%)，產(chǎn)生5.34 g的3-[4-(1， 3- 二氧代-1，3-二氫_2//~異Π 引噪-2-基)丁基]苯基二氣甲燒橫酸酯。 匪R (300 MHz，DMS〇-d6):S =1.50-1.69 (m，4H)，2.68 (t，2H)，3.55-3.67 (t， 2Η)，7·22-7·38 (m，3H)，7.46 (t，lH)，7.77-7.94 (m，4H) ppm。
[0126] 實(shí)施例lh 2-(4-{3-[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)-lf異吲哚-1,3(2//)-二酮
在50°C下經(jīng)11小時(shí)向DMF(20 mL)中的3-[4-(l，3-二氧代-1,3-二氫-2爐異吲哚-2-基） 丁基]苯基三氟甲烷磺酸酯（5.3 g，12.5 mmol)、雙(三苯基磷烷)二氯鈀（11)(440 mg，0.63 mmol)、鵬化亞銅（120 mg，0.63 mmol)和二異丙基乙胺（11 mL，63 mmol)中添加 DMF(11 mL)中的乙炔基(三甲基)硅烷(8.7 mL，63 mmo 1)。在50 °C下將混合物攪拌25小時(shí)，在18小時(shí) 后重復(fù)添加在DMF(5.6 mL)中的乙炔基(三甲基)硅烷(4.4 mL，32 mmol)。添加水和二乙醚 的混合物，分離各相，并用二乙醚萃取水相。用鹽水洗滌合并的有機(jī)萃取液，經(jīng)硫酸鈉干燥， 在減壓下濃縮，并在二氧化硅凝膠上通過(guò)色譜法純化殘留物（己烷中的乙酸乙酯，〇至25%)， 產(chǎn)生3.86 g的2-(4-{3_[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基}丁基)-1"_異吲哚_1，3(2扔-二 酮。 ^-NMR (400 MHz,DMS0-d6)：5 = 0.22 (s,19Η),1.48-1.65 (m,4H),2.59 (t,2H), 3.59 (t，2H)，7.17-7.33 (m，4H)，7.75-7.91 (m，4H) ppm。
[0127] 實(shí)施例li 4-{3_[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基}丁-1_胺
向THF(83 mL)中的2-(4-{3_[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基}丁基)-1"_異吲哚_1，3 (2功-二酮(3.86 g，10.3 mmol)中添加甲基肼(8.1 mL，15.4 mmol)，在40°C下將溶液攪拌 41小時(shí)，同時(shí)形成沉淀物。將反應(yīng)混合物濃縮至40 mL體積，并在0 °C下過(guò)濾。用少量冷THF洗 滌固體，在減壓下濃縮合并的濾液，同時(shí)在蒸餾結(jié)束之前兩次添加甲苯，產(chǎn)生2.63 g的4- {3_[(二甲基甲娃烷基）乙炔基]苯基} 丁_1 -胺。 ^-NMR (300 MHz,DMS0-d6)：5 = 0.22 (s,9H),1.26-1.41 (m,2H),1.47-1.64 (m, 2Η)，2·52-2·62 (m，4H)，7.10-7.33 (m，4H) ppm。
[0128] 實(shí)施例lj #_(叔丁氧基幾基)_3_[(叔丁氧基幾基)氨基]-7V-(4-{3_[(二甲基甲娃烷基）乙炔基] 苯基} 丁基)丙氨酰胺
在0°C下將DMF(40 mL)中的4-{3_[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基}丁-1-胺（2.6 g， 9.7 mmol)加入到DMF(50 mL)中的#-(叔丁氧基羰基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙氨酸jV- 環(huán)己基環(huán)己胺鹽（5.0 g，10.2 mmol)、7V，7V-二異丙基乙胺（8.2 mL，48.7 mmol)和HATU(5.2 g，13.6 mmol)的新鮮制備溶液中。在攪拌1小時(shí)后，冷過(guò)濾該混合物，將濾液濃縮，同時(shí)在甲 苯存在下蒸餾DMF的殘留痕量，并在氨基相二氧化硅凝膠上通過(guò)色譜法純化(己烷中的乙酸 乙酯，0至40%)，產(chǎn)生4.25 g的ΛΚ叔丁氧基羰基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-ΛΚ4-{3-[(三 甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)丙氨酰胺。 ^-NMR (300 MHz,DMS0-d6)：5 = 0.22 (s,9H),1.35-1.43 (m,2H),1.36 (s,18H), 1.44-1.60(m，2H)，2.92-3.21(m，4H)，3.93(dd，lH)，6.62(d，lH)，6.71(t，lH)，7.15- 7.34 (m，4H)，7.80 (t，lH) ppm〇
[0129] 實(shí)施例lk 3-氧代-3_[ (4-{3_[(二甲基甲娃烷基）乙炔基]苯基}丁基)氨基]丙烷-1，2-二銨鹽二 氯化物
將DMF(18.5 mL)中的ΛΚ叔丁氧基羰基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-，(4-{3-[(三甲 基甲硅烷基）乙炔基]苯基}丁基)丙氨酰胺(4.28 g，8.0 mmol)加入到二氧雜環(huán)己烷中的鹽 酸(4M，18 mL)中。將溶液分到2個(gè)壓力容器中，將所述壓力容器密封并在80°C下在微波反應(yīng) 器中輻照16分鐘。用1，4_二氧雜環(huán)己烷(300 mL)稀釋合并的反應(yīng)溶液，濃縮至50 mL體積， 并再次用1，4_二氧雜環(huán)己烷(200 mL)稀釋。攪拌該混合物，同時(shí)形成沉淀物，通過(guò)過(guò)濾收集 沉淀物，產(chǎn)生1 · 77 g的3-氧代-3-[ (4-{3-[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)氨基]丙 烷-1，2-二銨鹽二氯化物。 ^-NMR (300 MHz,DMS0-d6)：5 = 0.22 (s,9H),1.46 (quin,2H),1.61 (m,2H),2.58 (t，2H)，3.02-3.14 (m，lH)，3.17-3.27 (m，3H)，4.19 (t，lH)，7.15-7.38 (m，4H)，8.58 (b;r.，6H)，8.82 (t，lH) ppm〇
[0130] 實(shí)施例lm #_(叔丁氧基羰基)_3_[(叔丁氧基羰基)氨基]丙氨?；?3-( {TV-(叔丁氧基羰基)-3- [(叔丁氧基羰基)氨基]丙氨?；鶀氨基)-ΛΚ4-{3-[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基） 丙氨酰胺
在0°C下將DMF(40 mL)和二異丙基乙胺(4.4 mL)中的3-氧代-3-[(4-{3-[(三甲基 甲硅烷基）乙炔基]苯基}丁基)氨基]丙烷-1，2-二銨鹽二氯化物（1.77 g，4.38 mmol)加入 到DMF (50 mL)中的ΛΚ叔丁氧基羰基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-丙氨酸，環(huán)己基環(huán)己胺 鹽(4.4 g，9.19 πιπιο1)、7ν，Λ^二異丙基乙胺（14 mL)和HATU(4.66 g，12.3 mmol)的新鮮制備 溶液中。在攪拌60分鐘后，將混合物濃縮，并在氨基相二氧化硅凝膠上通過(guò)色譜法純化（己 烷中的乙酸乙酯，0至100%)，產(chǎn)生3.37 g的ΛΚ叔丁氧基羰基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙 氨?；?3-( {ΛΚ叔丁氧基羰基)_3_[(叔丁氧基羰基)氨基]丙氨?；鶀氨基)-7V-(4-{3-[(二 甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)丙氨酰胺。 iH-NMR (400 MHz，DMS〇-d6)j = 0.23 (s，9H)，1.39 (s，36H)，1.46 (quin，2H)，1.59 (quin，2H)，2.58 (t，2H)，3.08-3.38 (m，6H)，3.91-4.09 (m，2H)，4.19-4.36 (m，lH)，6.19 (br，lH)，6.31 (br，lH)，6.45 (br，lH)，7.14-7.32 (m，4H)，7.45-7.69 (br，2H) ppm。
[0131] 實(shí)施例1n 3-({(3-{[2,3-二銨基丙?；?0丨&1111]1〇11；[0卩1'0卩311054)]氨基}-1-氧代-1-[(4-{3-[(三 甲基甲娃烷基）乙炔基]苯基} 丁基)氨基]丙_2_基}氨基)_3_氧代丙烷-1，2-二銨鹽四氯化 物
向DMF(21 mL)中的ΛΚ叔丁氧基羰基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙氨?；?3-({，(叔 丁氧基羰基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]丙氨?；鶀氨基)-ΛΚ4-{3-[(三甲基甲硅烷基）乙 炔基]苯基}丁基）丙氨酰胺（4.48 g，4.46 mmol)中添加二氧雜環(huán)己烷中的鹽酸（4Μ，33 mL)。密封反應(yīng)容器并在80°C下在微波反應(yīng)器中輻照10分鐘。在冷卻到室溫后，將反應(yīng)混合 物在攪拌下緩慢地加入到1，4_二氧雜環(huán)己烷(360 mL)中。通過(guò)過(guò)濾收集所形成的沉淀物， 產(chǎn)生2.78 g的3-({(3-{[2,3-二銨基丙?；鵠氨基}-1-氧代-1-[(4-{3-[(三甲基甲硅烷基） 乙炔基]苯基} 丁基)氨基]丙_2_基}氨基)_3_氧代丙烷-1，2-二銨鹽四氯化物。 ^-NMR (400 MHz,DMS0-d6)：5 = 0.22 (s,9H),1.42-1.48 (m,2H),1.53-1.58 (m, 2Η)，2·53-2·62 (m，2H)，3.07-3.11(m，2H)，3.50 (br，6H)，4.26 (br.，lH)，4.33 (br·， 1Η)，4·39-4·53 (m，lH)，7.16-7.36 (m，4H)，8.40-9.10 (m，12H) ppm。
[0132] 實(shí)施例lo 2，3-雙-{[ 2，3-雙（{2，3-雙[(叔丁氧基羰基)氨基]丙酰基}氨基)丙?；鵠氨基} -7V_( 4- {3-[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)丙酰胺 在20°C下將DMF(16 mL)和二異丙基乙胺(4.7 mL)中的3-({(3-{[2,3-二銨基丙酰 基]氨基}_1_氧代_1_[ (4_{3_[(二甲基甲娃烷基）乙炔基]苯基}丁基）氨基]丙_2_基}氨 基)-3_氧代丙烷-1,2-二銨鹽四氯化物（1.0 g，1.39 mmol)加入到DMF(16 mL)和見(jiàn)妒二異 丙基乙胺(4.7 mL)中的，(叔丁氧基羰基)-3-[(叔丁氧基羰基)氨基]-丙氨酸，環(huán)己基環(huán) 己胺鹽(3.1 g，6.37 mmol)和HATIK2.95 g，7.76 mmol)的新鮮制備溶液中。在攪拌1小時(shí)和 在6 °C下存儲(chǔ)18小時(shí)后，過(guò)濾冷的混合物，用DMF洗滌沉淀物。濃縮濾液，用甲苯共蒸餾，并在 氨基相二氧化硅凝膠上通過(guò)色譜法純化殘留物（己烷中的乙酸乙酯，〇至100%)，產(chǎn)生1.38 g 的2,3-雙-{[2，3-雙（{2，3-雙[(叔丁氧基羰基)氨基]丙?；鶀氨基）丙?；鵠氨基}-7V_(4- {3-[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)丙酰胺。
iH-NMR (400 MHz，DMS〇-d6)j = 0.23 (s，9H)，1.39 (s，36H)，1.46 (quin，2H)，1.59 (quin，2H)，2.58 (t，2H)，3.08-3.38 (m，6H)，3.91-4.09 (m，2H)，4.19-4.36 (m，lH)，6.19 (br，lH)，6.31 (br，lH)，6.45 (br，lH)，7.14-7.32 (m，4H)，7.45-7.69 (br，2H) ppm。
[0133] 實(shí)施例lp 2,3-雙（{2,3-雙[(2,3-二銨基丙?；?氨基]丙?；鶀氨基)-，(4-{3-[(三甲基甲硅烷 基）乙炔基]苯基} 丁基)丙酰胺八氯化物
向DMF(7.8 mL)中的2,3-雙-{[2,3-雙（{2,3-雙[(叔丁氧基羰基)氨基]丙?；鶀氨基） 丙?；鵠氨基[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基}丁基）丙酰胺（1.15 g，0.7 mmo 1)中添加二氧雜環(huán)己烷中的鹽酸(4M，7.8 mL)。密封反應(yīng)容器并在80°C下在微波反應(yīng)器 中輻照1 〇分鐘。向混濁的混合物中添加額外的二氧雜環(huán)己烷中的鹽酸（4M，4 mL )和DMF (6 mL)，重復(fù)在80°C下在微波反應(yīng)器中輻照10分鐘。在冷卻到室溫后，將溶液在攪拌下緩慢地 加入到1,4-二氧雜環(huán)己燒（100 mL)中。通過(guò)過(guò)濾收集所形成的沉淀物，產(chǎn)生810 mg的2, β? ?α?』-雙 [(2 ，3_ 二銨基丙酰基) 氨基] 丙?；鶀 氨基)-，(4-{3-[(三甲基甲硅烷基 ） 乙炔 基]苯基} 丁基)丙酰胺八氯化物。 ^-NMR (400 MHz,DMS0-d6)：5 = 0.22 (s,9H),1.44 (br,2H),1.55 (br,2H),2.53- 2.62 (m，2H)，3.08 (br，2H)，3.30-3.78 (br. m，21H)，4.28 (br.，3H)，4.43 (br.，2H)， 4.53 (br.，lH)，4.64 (br.，lH)，7.20-7.36 (m，4H)，8.40-9.10 (br. m，24H) ppm。
[0134] 實(shí)施例lq 2,3-雙-{[2,3-雙（{2,3-雙[(AM2-[4,7，10-三(羧酸根合甲基)-l，4,7，10-四氮雜環(huán) 十二燒-1-基]丙?；鶀甘氨?；?氨基]丙酰基}氨基)丙?；鵠氨基}-#-(4-{3_[(二甲基甲 硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)丙酰胺合八釓
在60°C下將2,2'，2' '-[10-(1-{[2-(4_硝基苯氧基)_2_氧代乙基]氛基}_1_氧代丙_2_ 基)-l，4,7，10-四氮雜環(huán)十二烷-1，4,7-三基]三乙酸釓(2.43 g，3.2 mmol)以固體形式加 入到DMS0(8.5 mL)、DMF(9.0 mL)和吡啶(0.6 mL)中的2,3-雙-({2,3-雙[(2,3-二銨基丙酰 基)氨基]丙?；鶀氨基)-ΛΚ4-{3-[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)丙酰胺八氯化物 (200 mg，170 μπιο?)中。在60°C下將混合物攪拌6天，同時(shí)添加三乙胺(第1天:33 yL，第4天： 153 yL，第5天：120 uL)，并在第4天后用額外的DMF(8.0 mL)和DMS0(12 mL)稀釋。在第4天 后重復(fù)添加2,2'，2' '-[10-(1-{[2-(4_硝基苯氧基)_2_氧代乙基]氨基}_1_氧代丙_2_基)- 1，4,7，10_四氮雜環(huán)十二烷-1，4,7-三基]三乙酸釓（1.0 g，1.3 mmol)。將混合物在真空下 冷凝，用水稀釋，通過(guò)氫氧化鈉水溶液調(diào)節(jié)pH至7,并經(jīng)由超濾（醋酸纖維素膜，最低NMWL 5000 g/mol，Millipore)分離低分子量組分。收集截留物，產(chǎn)生0.69 g的部分脫甲娃基 (desilylated)的2,3-雙-{[2,3-雙（{2,3-雙[(#-{2-[4,7，10-三（羧酸根合甲基）-1，4,7， 10-四氮雜環(huán)十二燒-1-基]丙?；鶀甘氨酰基)氨基]丙?；鶀氨基)丙?；鵠氨基}-ΛΚ 4-{3- [(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基} 丁基)丙酰胺合八釓。 UPLC (ACN-HC00H極性）：Rt. = 0.81 min。 MS (ES-):m/e = 2870.0 (M-2H)2-。
[0135] 實(shí)施例lr 2,3-雙-{[2,3-雙（{2,3-雙[(ΛΜ2-[4,7，10-三(羧酸根合甲基)-l，4,7，10-四氮雜環(huán) 十二燒-1_基]丙?；鶀甘氨?；?氨基]丙?；鶀氨基)丙?；鵠氨基}-Λ^(4-{3_[ (5_{ (150- 2-駿基({(37?)_1_[3_(哌啶_4_基)丙?；鵠哌啶_3_基}幾基)氨基]乙基}吡啶_3_基）乙 炔基]苯基} 丁基)丙酰胺合八釓 向水(0.3 mL)和乙腈(0.7 mL)中的（3^-3-(5-溴吡啶-3-基)-3-[({(37?)-1-[3-(哌 啶-4-基)丙酰基]哌啶-3-基}羰基)氨基]丙酸（13 mg，26 _〇1)、三乙胺(20仙，130 _〇1) 和四甲基氟化銨（1.2 mg，13 μπιο?)的脫氣溶液中添加1.4 mL的紅色催化劑溶液，所述溶液 通過(guò)將乙酸鈀（11)(6.0 mg，27 nmol)與3,3'，3''_磷烷三基三(4,6_二甲基苯磺酸）三鈉 (70 mg，107 _〇1)在水(7 mL)中加熱至80°C持續(xù)30分鐘來(lái)制備。在60°C下經(jīng)10小時(shí)添加在 脫氣水(20 mL)中的2,3_雙-{[2,3_雙（{2,3_雙[(ΛΜ2-[4,7，10-三(羧酸根合甲基)-1，4， 7，10-四氮雜環(huán)十二燒-1-基]丙?；鶀甘氨?；?氨基]丙?；鶀氨基)丙?；鵠氨基}_Λ^( 4- {3-[(三甲基甲硅烷基）乙炔基]苯基}丁基）丙酰胺合八釓（302 mg，52 μπιο?)。在60°C下將 混合物再加熱15小時(shí)，同時(shí)重復(fù)添加預(yù)先制備的鈀催化劑溶液(0.7 mL)。在冷卻至室溫后， 使混合物冷凝，用水（150 mL)稀釋殘留物，經(jīng)由醋酸纖維素膜過(guò)濾，最低NMWL 10000 g/mol (Mi 11 ipore)。收集濾液，經(jīng)由醋酸纖維素膜重復(fù)超濾，最低NMWL 5000 g/mol (Mi 11 ipore)。 使截留物冷凝，并通過(guò)制備型HPLC純化(C18-YMC 0DS AQ-10 _，水中的乙腈+ 0.1%甲酸， 1%至25%)，冷凝后產(chǎn)生14.4 mg的標(biāo)題化合物。 UPLC (ACN-HC00H極性）：Rt. = 0.84 min。 MS (ES-):m/e = 3040.6 (M-2H)2-。
[0136] 參比化合物 (3幻-3-[({(37?)-1-[3-(哌啶-4-基)丙?；鵠哌啶-3-基}羰基)氨基]-3-{6-[3仞吡啶- 3_基}丙酸
將(3^)-3-(6-溴吡啶-3-基)-3-{[(37?)-1-(3-哌啶-4-基-丙?；?哌啶-3-羰基]氨基} 丙酸（1.85 mg，3.73 nmol)溶于DMF(500 yL)和三乙胺（25 yL)的混合物。向該溶液中添加 炭載鈀(20%) (6.45 mg)，將混合物連接到氚歧管，以用氚氣氚化整夜。然后在歧管中將反應(yīng) 混合物低溫恒溫（cryostatically)蒸發(fā)3次。在半制備型HPLC(Kromasil 100 C8 5 μηι(250 Χ4.6 mm)，洗脫劑:35 mM氨/甲醇，流量:1 mL/min)上純化獲得的粗產(chǎn)物。收集的級(jí)分包含 2061 MBq的（幻-3-{5-3,吡啶-3-基}-3-{[(7?)-1-(3_哌啶-4-基-丙?；?哌啶-3-羰基]氨 基}丙酸(放射化學(xué)產(chǎn)率:12.6%;放射化學(xué)純度:98%;比活度:7.81 Ci/mmo 1)。
[0137] 實(shí)施例2 所研究的化合物對(duì)人類GPIIb/II la受體的親合性 所用的GPIIb/IIIa親合性分析的程序在圖1中示意性說(shuō)明。
[0138] 經(jīng)純化的人類糖蛋白1113/111&(2〇111]\11^8-!1(：1，0.1]\1他(：1，0.1%1^七〇11父- 100，1 mM CaCl2,0.05% NaN3,50%甘油，pH 7.4)購(gòu)自Enzyme Research Laboratories Inc. (South Bend，IN) XPIIb/IIla受體在具有0.01%牛血清白蛋白（來(lái)自牛血清-冷凍干燥粉末 的白蛋白，彡96 %，Sigma)的磷酸鹽緩沖鹽水(Dulbecco的具有鈣和鎂的磷酸鹽緩沖鹽水 (D-PBS ( + ))，GIBC0?，Invitrogen)中稀釋。
[0139] 將GPIIb/IIIa受體在277 K至280 K，和以每孔(hi yg至每孔1 yg的濃度，在96-孔 固定板（11111]11111〇?1&七6]\^1丨3〇印11|，仙11(3，1?〇81<:;[1(16，丹麥）上固定至少48小時(shí)（100口1^每 孔，48至最大96小時(shí)）。作為陰性對(duì)照，僅用2%牛血清白蛋白（200 uL每孔，來(lái)自牛血清-冷凍 干燥粉末的白蛋白，彡96%，Sigma，在D-PBS ( + )中稀釋)培養(yǎng)該板的一排(η = 8)。
[0140] 在用洗滌緩沖液（230 yL/孔，Dulbecco的不含鈣或鎂的磷酸鹽緩沖鹽水(D-PBS (_))，GIBC0?，Invitr〇gen)洗滌三次后，通過(guò)用包含2%牛血清白蛋白（來(lái)自牛血清-冷凍干 燥粉末的白蛋白，彡96%，Sigma)的特殊封閉溶液（200 yL每孔，Roti ? -Block，Car Roth GmbH Co KG，Karlsruhe)在室溫下培養(yǎng)該板1小時(shí)來(lái)封閉殘留的暴露的適應(yīng)性(plastic)和 非特異性結(jié)合位點(diǎn)。
[0141] 在用洗滌緩沖液洗滌三次后，向每個(gè)孔中同時(shí)添加50 yL的氚化參比化合物（60 nM，3H-標(biāo)記化合物)和50 nL的新型化合物(抑制劑），并在室溫下培養(yǎng)1小時(shí)。研究每個(gè)新型 抑制劑的若干濃度（〇.1、1、2、5、10、20、50、100、200、500、1000、2000、5000、10000 和 20000 nM)。在每個(gè)抑制劑濃度下進(jìn)行四次測(cè)定。檢驗(yàn)的抑制劑的結(jié)果概括在表1中。
[0142] 在不添加抑制劑下測(cè)定氣化的參比化合物的最大值(η = 8)。為排除3H-參比化合 物的非特異性結(jié)合，沒(méi)有糖蛋白受體的孔用作陰性對(duì)照(η = 12,相同處理，僅沒(méi)有GPIIb/ II la受體）。
[0143] 在1小時(shí)后，用磷酸鹽緩沖鹽水（200 yL/孔，Dulbecco的磷酸鹽緩沖鹽水(D-PBS (+))，GI?，Invi trogen)洗滌板三次。隨后向每個(gè)孔添加140 μL的液體閃爍調(diào)配液 (liquid scintillation cocktail)(MicroScint ? 40 aqueous,Perkin Elmer)。在室溫 下 15分鐘后，在微板閃爍計(jì)數(shù)器（TopCount NXT v2.13，Perkin Elmer，Packard Instrument Company)下測(cè)量該板。
[0144] 圖1顯示GPIIb/IIIa分析的示意圖。在第一步中，將由人類血小板純化的人類糖蛋 白Ilb/IIIa固定在96-孔固定板上。在至少48小時(shí)后，洗滌該板，并用Roti ?-Block封閉非 特異性結(jié)合位點(diǎn)。2.在下一步中，用氚標(biāo)記的參比化合物和新型小分子化合物(抑制劑)培 養(yǎng)該板。3.抑制劑的親合性越高，參比化合物的結(jié)合率越小。在微板閃爍計(jì)數(shù)器中測(cè)量未 被抑制劑置換的氚化的參比化合物的百分率。抑制劑的親合性越高，氣標(biāo)記的參比化合物 的結(jié)合率越小。通過(guò)該分析，可以確定親合性(IC5Q值）。上述研究表明式(I)的化合物可用作 血栓成像的造影劑。結(jié)果概括于表1中。
[0145] 表1:化合物對(duì)人類GPIIb/IIIa受體的結(jié)合親合性。
[0146] 實(shí)施例3 所研究的化合物與人類活化血小板的結(jié)合 對(duì)于每個(gè)實(shí)驗(yàn)，使用10 mL朽1檬酸鹽-試管（Sarstedt S-Monovette 02·1067·001，10 mL，檸檬酸鹽3.13%)采集來(lái)自志愿者的新鮮血液。將10 mL檸檬酸鹽-試管小心地倒置10次， 以使血液和抗凝血?jiǎng)┗旌?。將試管保存?7 °C下恒溫箱中直到離心處理（Heraeus miniTherm CTT，具有集成的旋轉(zhuǎn)裝置和翻轉(zhuǎn)裝置，翻轉(zhuǎn)速率：每分鐘19轉(zhuǎn)，Heraeus Instruments GmbH，Hanau/德國(guó)）。
[0147] 對(duì)于血漿制劑，在室溫下以1811 g進(jìn)行試管離心處理15分鐘（Eppendorf， Centrifuge 5810R)。為產(chǎn)生富血小板血漿，將201 g血液在室溫下離心處理15分鐘。將試管 在室溫下靜置30分鐘，以獲得更好的分離。最后將453 g的分離的富血小板血漿進(jìn)一步離心 處理3分鐘，以去除殘留的紅細(xì)胞。使用最終濃度為5 μΜ的二磷酸腺苷(ADP，Sigma)活化富 血小板的血漿。用不同濃度的釓標(biāo)記化合物培養(yǎng)富活化血小板的血漿20分鐘和3分鐘，隨后 以1360 g離心處理3分鐘。取出20 uL上清液以測(cè)定濃度(η = 3)。使顆粒再懸浮，用至少750 yL血漿洗滌兩次，隨后再分散在750 uL血漿和50 uL氯化鈣(50 uL 2%)中。使用電感耦合等 離子體質(zhì)譜法（ICP-MS Agilent 7500a)測(cè)定上清液和顆粒的釓濃度。
[0148] 培養(yǎng)濃度為10 μΜ、1 μΜ和0.1 μΜ的釓標(biāo)記化合物的結(jié)果概括在表2中。
[0149] 表2:化合物與人類活化血小板的結(jié)合
[0150] 實(shí)施例4 磁共振成像 用富血小板血漿進(jìn)行MRI成像實(shí)驗(yàn)。使用新鮮血液制備富血小板血漿描述在LK Jennings等，Blood 1986 1，173-179中，但是對(duì)于離心處理程序進(jìn)行了改進(jìn)。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，使 用 10 mL檸檬酸鹽-試管（Sarstedt S-Monovette 02·1067·001，10 mL，檸檬酸鹽3.13%)采 集來(lái)自志愿者的新鮮血液。將10 mL檸檬酸鹽-試管小心地倒置10次，以使血液和抗凝血?jiǎng)?混合。將110 g血樣在室溫下離心處理15分鐘（Eppendorf，Centrifuge 5810R)。將試管在室 溫下存儲(chǔ)30分鐘，以獲得更好的分離。將240 g分離的血漿級(jí)分在室溫下離心處理3分鐘，以 去除殘留的紅細(xì)胞。消除紅細(xì)胞顆粒。使用最終濃度為5 μπιο 1 /L的二磷酸腺苷(ADP，Sigma) 活化上清液中的血小板。
[0151] 將富活化血小板的血漿溶液在37°C下用實(shí)施例1培養(yǎng)20分鐘，獲得10 μπιο?物質(zhì)/L (圖2)和0.1 μπιο?物質(zhì)/L(圖3)的最終濃度。在培養(yǎng)后，將720 g試樣離心處理3分鐘。棄去上 清液，用750 uL人類血漿通過(guò)重復(fù)再分散和后續(xù)的離心處理洗滌顆粒三次。在最后的洗滌 步驟中，向人類血漿中添加氯化鈣(70 yL 2%)，引起血小板凝聚。在40分鐘后，在2.0 mL試 管(2.0 mL Eppendorf微離心試管）中固定所得的體外富血小板血栓，在室溫下進(jìn)行人類血 漿中的磁共振成像。
[0152] 使用裝有小型肢端線圈的臨床1.5T系統(tǒng)（Siemens Avanto)進(jìn)行成像。使用T1-加 權(quán)3D快速自旋回波序列（3D TSE)，重復(fù)時(shí)間（TR)為1050 ms，回波時(shí)間為9.1 ms，快速因子 為253D模塊包含18個(gè)切片，每個(gè)切片厚度為0.6 mmdD TSE序列的空間分辨率為0.5X0.5 X0.6 mm3，圖像矩陣為256X 172X 18像素。信號(hào)平均數(shù)為16,最終全部采集時(shí)間為17分41 秒。
[0153] 磁共振成像結(jié)果描繪在圖2和圖3中。
[0154] 在圖2a中，顯示沒(méi)有添加造影劑的體外對(duì)照血栓。對(duì)照血栓的信號(hào)強(qiáng)度略微高于 周圍介質(zhì)，但是明顯低于用實(shí)施例1培養(yǎng)的體外血栓的信號(hào)，如圖2b中描繪的那樣。在圖2c 中，顯示最終濃度為10 nmol物質(zhì)/L的人類血漿中的實(shí)施例1的培養(yǎng)溶液。信號(hào)強(qiáng)度高于體 外富血小板血栓2a和2b中的周圍血漿溶液。
[0155] 圖2b中的體外血栓用圖2c中描述的溶液培養(yǎng)。在20分鐘培養(yǎng)期后，用血漿溶液洗 滌血栓三次。圖2b中培養(yǎng)的體外血栓的信號(hào)強(qiáng)度顯示比圖2a中的對(duì)照血栓明顯更高的信 號(hào)。
[0156] 在圖3a中，顯示沒(méi)有添加造影劑的體外對(duì)照血栓。對(duì)照血栓的信號(hào)強(qiáng)度略微高于 周圍介質(zhì)，但是明顯低于用實(shí)施例1培養(yǎng)的體外血栓的信號(hào)，如圖3b中描繪的那樣。在圖3c 中，顯示最終濃度為0.1 μπιο?物質(zhì)/L(0.8 nmol Gd//L)的人類血漿中的實(shí)施例1的培養(yǎng)溶 液。信號(hào)強(qiáng)度可與體外富血小板血栓3a和3b中的周圍血漿溶液相比。圖3b中的體外血栓用 圖3c中描述的溶液培養(yǎng)。在20分鐘培養(yǎng)期后，用血漿溶液洗滌血栓三次。圖3b中培養(yǎng)的體外 血栓的信號(hào)強(qiáng)度顯示比圖3a中的對(duì)照血栓明顯更高的信號(hào)。
[0157] 實(shí)施例5 食蟹猴(Cynomo 1 gus Monkey)中的特異性血栓結(jié)合 在食蟹猴(雌性，3,0 kg體重）中研究實(shí)施例1中描述的化合物的特異性結(jié)合。
[0158] 用Xylazin(Rompun ?，Bayer HealthCare，Leverkusen，德國(guó)），0· 12 mL/Kg和氯胺 酮(Ketavet ?，Pfizer)0.12 mL/Kg體重肌肉注射（i ·ηι·)的混合物使猴子麻醉。研究的同 時(shí)，如果需要已經(jīng)肌肉注射（i .m.)少量的Xylazin/Ketamine (1 + 1)。用氯化鐵III溶液 (10%)，使左頸總動(dòng)脈暴露10分鐘。在血栓誘發(fā)后，猴子接受1 μπιο?釓/ kg體重(等于0.125 μπιο?分子/kg體重)靜脈注射（i . v.)。然后，用氯化鐵III溶液（10%)，使右頸動(dòng)脈暴露8分鐘， 猴子接受1 ymolIL/ kg體重靜脈注射(iv)的重復(fù)劑量。
[0159] 在第一次施用兩種造影介質(zhì)后，通過(guò)外科手術(shù)使右頸動(dòng)脈暴露，將預(yù)先用砂紙（名 稱600-CAMI Grit)粗糖化的聚乙稀試管（INTRAMEDIC Polyethylene Tubing，Clay Adams， PE50)插入血管中，推進(jìn)至降主動(dòng)脈中，留在那里30分鐘，以在試管的粗糙表面上形成血栓。 導(dǎo)管插入術(shù)后30分鐘和90分鐘，猴子接受1 ymolIL/ kg體重（等于0.125 μπιο?分子/kg體 重)靜脈注射(i .v.)。在最后施用造影介質(zhì)后40分鐘，使用戊巴比妥(Narcoren)使動(dòng)物死亡 (sacrificed)。使用電感親合等離子體質(zhì)譜法（ICP-MS Agilent 7500a)確定血液、左右頸 動(dòng)脈的血栓、右頸動(dòng)脈、左頸動(dòng)脈、頸靜脈和主動(dòng)脈中的釓濃度。數(shù)據(jù)概括在表3中。
[0160] 表3:在實(shí)施例1的重復(fù)劑量后食蟹猴的不同組織中釓測(cè)定的電感耦合等離子體質(zhì) 譜法數(shù)據(jù)(最后注射之后40分鐘，4次1 yM|L/kg體重的重復(fù)劑量，總劑量4 yM|L/ kg體重）。
【主權(quán)項(xiàng)】
1.通式(I)的化合物：⑴， X表示選自以下的基團(tuán)：其中： Y表示：其中： R1表示氫、甲基、乙基、丙基或異丙基； R2表示氫、甲基、乙基、丙基或異丙基； R3表示氫、甲基、乙基、丙基或異丙基； G表不基團(tuán)：其中： R4表示氫、甲基、乙基、丙基、異丙基或芐基； R5表示氫、甲基、乙基或丙基； R6表示氫、甲基、乙基、丙基、異丙基或芐基； Μ表示,L; m表示1或2; η表示2、3、4、5或6的整數(shù)； q表示0或1; 或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、N-氧化物、水合物、溶劑合物或鹽，或者它們的混合物。2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中： X表示選自以下的基團(tuán)：其中： Y表示：其中： R1表示氫或甲基； R2表示氫或甲基； R3表示氫或甲基； G表不基團(tuán)：其中： R4表示氫或甲基； R5表示氫或甲基； R6表示氫或甲基； Μ表示,L; m表示1或2; η表示2、3、4、5或6的整數(shù)； q表示0或1; 或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、Ν-氧化物、水合物、溶劑合物或鹽，或者它們的混合物。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中： X表示選自以下的基團(tuán)：其中： Υ表示：其中： R1表;^氫； R2表;^氫； R3表;^氫； G表；^基團(tuán)：其中： R4表示氫或甲基； R5表示氫或甲基； R6表示氫； Μ表示,L; m表不1; η表示2、3或4的整數(shù)； q表示0或1; 或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、N-氧化物、水合物、溶劑合物或鹽，或者它們的混合物。4.根據(jù)權(quán)利要求1，2或3任一項(xiàng)的化合物，其中： X表示選自以下的基團(tuán)： 其中：Y表示：其中： R1表;^氫； R2表;^氫； R3表;^氫； G表；^基團(tuán)： 共T :R4表示氫或甲基； R5表示氫； R6表示氫； Μ表示,L; m表亦1; η表示3或4; q表示0或1; 或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、Ν-氧化物、水合物、溶劑合物或鹽，或者它們的混合物。5.根據(jù)權(quán)利要求1至4任一項(xiàng)的化合物，其中： X表示選自以下的基團(tuán)：其中： Υ表示：其中： R1表示氫； R2表;^氣； R3表不氫； G表不基團(tuán)：其中： R4表示甲基； R5表示氫； R6表示氫； Μ表示,L; m表示1; η表示4; q表不1; 或其立體異構(gòu)體、互變異構(gòu)體、N-氧化物、水合物、溶劑合物或鹽，或者它們的混合物。6. 根據(jù)權(quán)利要求1至5任一項(xiàng)的化合物，其選自： 2,3-雙-{[2,3-雙（{2,3-雙[(#-{2-[4,7，10-三(羧酸根合甲基)-1，4,7，10-四氮雜環(huán) 十二燒-1_基]丙酰基}甘氨?；?氨基]丙酰基}氨基)丙?；鵠氨基}-Λ^(4-{3_[ (5_{ (15〇- 2-駿基({(37?)_1_[3_(哌啶_4_基)丙?；鵠哌啶_3_基}幾基)氨基]乙基}吡啶_3_基）乙 炔基]苯基} 丁基)丙酰胺合八釓。7. 權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)的化合物用于診斷成像的用途.7. 根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)的化合物用于制造診斷劑。8. 根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)的化合物或其混合物用于制造診斷劑的用途。9. 根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)的化合物或其混合物用于制造血栓成像用的診斷劑的用 途。10. 使患者的體組織成像的方法，其包括以下步驟:給患者施用有效量的在可藥用載體 中的一種或多種根據(jù)權(quán)利要求1至6任一項(xiàng)的化合物，并且對(duì)患者施以NMR斷層成像。
【文檔編號(hào)】A61K49/06GK105960403SQ201580008204
【公開(kāi)日】2016年9月21日
【申請(qǐng)日】2015年2月6日
【發(fā)明人】M.貝格爾, J.洛爾克, G.約斯特, M.賴因哈特
【申請(qǐng)人】拜耳制藥股份公司