7-氨基-4-甲基香豆素-β-D-吡喃葡萄糖苷、其制備方法及其用圖
【專利摘要】本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及7?氨基?4?甲基香豆素?β?D?吡喃葡萄糖苷(I)，本發(fā)明公開了其制備方法：7?氨基?4?甲基香豆素與葡萄糖在含KH2PO4和MgSO4的水溶液中反應(yīng)生成。本發(fā)明還公開了其抗腫瘤方面的用途。
【專利說明】
7-氨基-4-甲基香豆素 -fH)-吡喃葡萄糖苷、其制備方法及其 用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001 ]本發(fā)明涉及藥物領(lǐng)域，具體涉及7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷及其制 備方法，本發(fā)明還公開了其抗腫瘤方面的用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 腫瘤為一類嚴(yán)重威脅人類生命健康的疾病，我國(guó)腫瘤發(fā)病人數(shù)和死亡人數(shù)均呈逐 年上升趨勢(shì)。目前，腫瘤的治療方法中，化療占有重要的地位且發(fā)展最快，但大多數(shù)化療藥 物會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的毒副作用，如肝臟、腎臟毒性等，給患者帶來了嚴(yán)重痛苦，影響了治療效果。 因此尋找新的高效、低毒的抗腫瘤藥物受到越來越多的關(guān)注。隨著對(duì)中藥的不斷地開發(fā)和 認(rèn)識(shí)以及多年的臨床和實(shí)驗(yàn)證實(shí)，很多中藥具有良好的抗腫瘤作用，毒副作用小而且資源 豐富，因此中藥單體的開發(fā)和結(jié)構(gòu)改造以及對(duì)其藥理作用機(jī)制的研究已經(jīng)成為當(dāng)今世界上 新藥開發(fā)的熱點(diǎn)。香豆素類化合物廣泛分布于各種植物中，具有廣泛的生物活性，研究顯示 香豆素糖苷在抗腫瘤方面有顯著的活性。但大部分研究都集中于香豆素〇-糖苷，而有關(guān)香 豆素 N-糖苷的抗腫瘤活性少見報(bào)道。
[0003] N-糖苷是糖類化合物的一個(gè)重要部分。許多來自于微生物的天然N-糖苷，如來自 鏈霉菌的十字孢堿，放線菌的蝴蝶霉素以及安絲菌素糖苷都具有卓越的抗腫瘤活性。與苷 元相比，糖苷的水溶性更好，同時(shí)保持或提高了活性。與〇-糖苷相比，N-糖苷與其結(jié)構(gòu)類似， 活性相同，而且更穩(wěn)定，不在酸性條件下水解也不受糖苷酶酶解。因此，化學(xué)合成N-糖苷是 目前藥物研究的熱點(diǎn)之一。到目前為止，化學(xué)合成N-糖苷主要包括疊氮還原法、由糖基供體 制備等多種方法。而這些方法一般需要多步的保護(hù)和去保護(hù)步驟，反應(yīng)過程繁瑣，結(jié)構(gòu)立體 選擇性差，而且反應(yīng)條件苛刻，甚至使用劇毒且危險(xiǎn)試劑。因此，尋找一種高效、環(huán)保、安全 的合成方法意義重大。
[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種高效環(huán)保的香豆素 N-糖苷的合成方法，以及提供一種具 有良好抗腫瘤活性的潛在藥物。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明公開了結(jié)構(gòu)式I的化合物：
[0007]命名為7-氨基-4-甲基香豆素 -0-D-吡喃葡萄糖苷。本發(fā)明同時(shí)也包括結(jié)構(gòu)式I的 化合物的溶劑化物。
[0008] 表1 7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷13C-NMR和1H-NMR數(shù)據(jù)如下：
[0010] 藥理試驗(yàn)證明，本發(fā)明的式I化合物具有明顯的抗腫瘤活性，其溶劑化物具有同樣 的藥理功效。
[0011] 本發(fā)明的式I化合物優(yōu)選用化學(xué)合成方法以7-氨基-4-甲基香豆素為原料進(jìn)行轉(zhuǎn) 化制備，方法如下：
[0013] 上述7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷的制備方法，是將7-氨基-4-甲基 香豆素溶于含KH 2P04和MgS04的緩沖溶液中，加入等摩爾比的葡萄糖反應(yīng)，再經(jīng)分離純化得 到成品。
[0014] 上述7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷的制備方法中，緩沖溶液的配制方 法如下:準(zhǔn)確稱取KH2PO4 3.0g、MgS〇4 0.75g，加蒸餾水定容至1.0L。
[0015] 上述7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷的制備方法中，將摩爾比為1:1的 7-氨基-4-甲基香豆素和葡萄糖加入到緩沖溶液中反應(yīng)，反應(yīng)中7-氨基-4-甲基香豆素的重 量(mg)和溶劑的體積(mL)的比為1:6-1:20;室溫?cái)嚢枞芙?，溶解澄清后?5 °C攪拌，攪拌速 率為80r/min，反應(yīng)72-120小時(shí)后，終止反應(yīng)。將反應(yīng)液冷凍干燥，得到的固體粉末經(jīng)硅膠拌 樣后柱層析分離，以氯仿-甲醇為洗脫系統(tǒng)，即可得產(chǎn)物7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡 萄糖苷。
[0016] 前述的7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷的制備方法中，作為進(jìn)一步的改 進(jìn)，緩沖溶液的pH調(diào)至6 ? 0-6 ? 5。
[0017] 前述的7-氨基-4-甲基香豆素 P-D-吡喃葡萄糖苷的制備方法中，作為進(jìn)一步的改 進(jìn)，反應(yīng)體系的溫度優(yōu)選為30-45 °C。
[0018] 前述的7-氨基-4-甲基香豆素 -0-D-吡喃葡萄糖苷的制備方法中，作為進(jìn)一步的改 進(jìn)，反應(yīng)時(shí)間優(yōu)選為120-168小時(shí)。
[0019]藥理試驗(yàn)證明，本發(fā)明的結(jié)構(gòu)式I化合物具有顯著的抗腫瘤活性，以下是試驗(yàn)方法 及結(jié)果：
[0020] 7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷抗腫瘤活性研究
[0021] 1、MTT法檢測(cè)7-氨基-4-甲基香豆素 -0-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)多種腫瘤細(xì)胞株的抑制 作用
[0022] 本實(shí)驗(yàn)所測(cè)試的腫瘤細(xì)胞株有人胃癌SGC-7901、人肺癌A549、人乳腺癌MDA-MB-435s、人前列腺癌PC-3，以含10 %胎牛血清的DMEM培養(yǎng)基在37°C，5%C02條件下培養(yǎng)。取對(duì) 數(shù)期腫瘤細(xì)胞，以0.1%的胰酶消化后用RPMI 1640培養(yǎng)基(含10%新生牛血清)制成單細(xì)胞 懸液，以2X103個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種于96孔培養(yǎng)板（180yL/孔），37°C、5%C0 2培養(yǎng)過夜，每 孔加入5個(gè)不同濃度的7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷，使其終濃度分別為0.01、 0.10、1.00、10.00及100.OOwno 1 /L。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)中另設(shè)計(jì)陰性對(duì)照組(等體積不加藥物且含 有1%〇DMSO的培養(yǎng)基)和陽性對(duì)照組(5-FU即5-氟脲嘧啶的終濃度分別為分別為0.01、0.10、 1.00、10.00及 100.0 Ownol/L)。37°(：、5 %C02培養(yǎng)72h后采用MTT法檢測(cè)7-氨基-4-甲基香豆 素-0-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。具體操作如下:培養(yǎng)板于1000r/min離心5min， 換無血清的培養(yǎng)液，加入MTT母液（5mg/mL) 20此/孔，在培養(yǎng)箱中孵育3h后小心吸除MTT溶 液，加入DMS0 150yL/孔，振蕩器震蕩10min使結(jié)晶溶解，于570nm，650nm處測(cè)定吸光值，進(jìn)行 雙波長(zhǎng)檢測(cè)。采用GraphPad Prism 5.〇1軟件，計(jì)算7-氨基-4-甲基香豆素-0-〇-吡喃葡萄糖 苷的IC5Q(半數(shù)抑制濃度）。
[0023] 結(jié)果如下：
[0024]表2 7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)不同腫瘤細(xì)胞株增殖的抑制作 用 IC5Q(yM)
[0026]由表2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)測(cè)試的四種 腫瘤細(xì)胞增殖都有一定的抑制作用，且對(duì)A549細(xì)胞增殖的抑制作用優(yōu)于5-FU。
[0027] 2、7_氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)人正常肝細(xì)胞株L-02增殖的抑制 作用
[0028]由表2的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)人肺癌A549 細(xì)胞增殖具有較強(qiáng)抑制作用，因此我們檢測(cè)其對(duì)人正常肝細(xì)胞L-02增殖的抑制作用。具體 實(shí)驗(yàn)操作如下：正常肝細(xì)胞L-02以含有10%胎牛血清的培養(yǎng)基懸浮，2 X103個(gè)細(xì)胞/孔的密 度接種于96孔培養(yǎng)板（180此/孔），37°C、5%⑶2培養(yǎng)過夜，每孔分別加入不同濃度的7-氨 基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷和5-氟脲嘧啶，陰性對(duì)照組加入等體積不加藥物且含 有1%〇DMSO的培養(yǎng)基，37°C、5 % C02培養(yǎng)72h后MTT法檢測(cè)藥物對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制率。
[0029] 結(jié)果如下：
[0030] 表3 7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷對(duì)人正常肝細(xì)胞L-02增殖的抑制 作用 IC5Q(yM)
[0032]由表3實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，與5-氟尿嘧啶相比，7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖 苷顯示出對(duì)L-02細(xì)胞較低的細(xì)胞毒性。其IC5Q值為5-FU的1.6倍。
[0033]本發(fā)明的7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷可與藥學(xué)上可接受的載體混 合，用于制備治療用藥物組合物?？芍苽涑伤巹W(xué)上通用的劑型，如膠囊、片劑、丸劑、口服 液、顆粒劑、酊劑、緩釋劑等胃腸道給藥劑型及注射劑、透皮貼劑、外用制劑等胃腸外給藥劑 型。
【具體實(shí)施方式】 [0034] 實(shí)施例1
[0035] 7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷的制備：
[0036] 取7-氨基-4-甲基香豆素200mg，溶于緩沖溶液中（KH2P〇4 3.0g/L、MgS〇4 0.75g/L， pH6.5)，其中7-氨基-4-甲基香豆素的重量(mg)和溶劑的體積(mL)的比為1:10。加入等摩爾 比的葡萄糖，室溫?cái)嚢枞芙?，溶解澄清后?0 °C攪拌，攪拌速率為80r/min，反應(yīng)120小時(shí)后， 終止反應(yīng)。將反應(yīng)冷凍干燥，得到的固體粉末383mg，稱取100-200目硅膠l.Og與殘?jiān)鶆虬?樣，柱層析200~300目20g干法裝柱，氯仿-甲醇梯度洗脫，在氯仿-甲醇=85:15的洗脫餾分 中，可得目標(biāo)產(chǎn)物7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷，經(jīng)甲醇重結(jié)晶，得到白色粉末 156mg〇
[0037]其碳譜和氫譜見表1。
[0038] 實(shí)施例2 [0039] 片劑
[0040]取實(shí)施例1制得的7-氨基-4-甲基香豆素-0-D-吡喃葡萄糖苷100g與淀粉50g，糊精 50g混合，用適量30 %乙醇作濕潤(rùn)劑，制成軟材，常規(guī)方法制粒，加入適量硬脂酸鎂混合，制 成片劑。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 結(jié)構(gòu)式I的化合物或其藥學(xué)上可接受的溶劑化物：2. 權(quán)利要求1的化合物及其制備方法，其特征是:7-氨基-4-甲基香豆素與葡萄糖在含 K出P04和MgS化的緩沖溶液中反應(yīng)生成。3. 權(quán)利要求2的制備方法，其中化學(xué)合成方法如下：將7-氨基-4-甲基香豆素溶于含 K出P04和MgS〇4的緩沖溶液中，加入葡萄糖攬拌溶解，溶解澄清后，25°C攬拌，72-120小時(shí)后， 終止反應(yīng)。將反應(yīng)液冷凍干燥，得到固體粉末，通過硅膠柱層析分離得到目標(biāo)化合物。4. 權(quán)利要求3的制備方法，其中緩沖溶液的配制方法如下：稱取K化P042.0-4 . Og、 MgS〇4〇. 5-1.5g，加蒸饋水定容至1. OL，調(diào)節(jié)pH至5.0-7.0。5. 權(quán)利要求3的制備方法，7-氨基-4-甲基香豆素的重量(mg)和緩沖溶液的體積(ml)的 比為 1:6-1:20。6. 權(quán)利要求3的制備方法，7-氨基-4-甲基香豆素與葡萄糖的摩爾比為1:1-1:10。7. 權(quán)利要求3的制備方法，溶解和攬拌溫度為20-45 °C。8. 權(quán)利要求3的制備方法，攬拌速率為20-200r/min。9. 權(quán)利要求3的制備方法，反應(yīng)時(shí)間為24-168h。10. -種藥物組合物，其中含有權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的溶劑化物及藥 學(xué)上可接受的載體。11. 權(quán)利要求1的化合物或其藥學(xué)上可接受的溶劑化物用于制備抗腫瘤藥物的用途。
【文檔編號(hào)】C07H17/075GK105968153SQ201610296687
【公開日】2016年9月28日
【申請(qǐng)日】2016年5月3日
【發(fā)明人】余伯陽, 張劍, 樊妮, 許家琦, 杜晨暉, 徐益祥
【申請(qǐng)人】中國(guó)藥科大學(xué)