国产精品1024永久观看,大尺度欧美暖暖视频在线观看,亚洲宅男精品一区在线观看,欧美日韩一区二区三区视频,2021中文字幕在线观看

  • <option id="fbvk0"></option>
    1. <rt id="fbvk0"><tr id="fbvk0"></tr></rt>
      <center id="fbvk0"><optgroup id="fbvk0"></optgroup></center>
      <center id="fbvk0"></center>

      <li id="fbvk0"><abbr id="fbvk0"><dl id="fbvk0"></dl></abbr></li>

      環(huán)氧蟾毒烯酮的制備方法及其作為抗腫瘤藥物的用圖

      文檔序號(hào):10605943閱讀:702來(lái)源:國(guó)知局
      環(huán)氧蟾毒烯酮的制備方法及其作為抗腫瘤藥物的用圖
      【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明屬于中藥蟾酥中抗腫瘤活性成份制備領(lǐng)域。本發(fā)明提取的化合物分子式C24H28O,化學(xué)名7,14?epoxy?3α?hydroxy?7?en?15?bufalinone,命名為環(huán)氧蟾毒烯酮。獲得方法為:將片狀蟾酥研成粗粉,分別用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和水加熱回流提取,丙酮提取液減壓回收得浸膏;將丙酮部位浸膏通過(guò)MCI柱,甲醇?水梯度洗脫,薄層層析檢測(cè)得到8個(gè)部分Fr1?Fr8;將Fr1部位通過(guò)二醇基硅膠柱 CH2Cl2?MeOH 梯度洗脫,Sephadex LH?20柱甲醇洗脫,薄層層析檢測(cè),收集含有化合物的流份;濃縮后,析出結(jié)晶,抽濾出結(jié)晶即得。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明該化合物具有抗腫瘤的功效。
      【專(zhuān)利說(shuō)明】
      環(huán)氧蟾毒烯酮的制備方法及其作為抗腫瘤藥物的用途
      技術(shù)領(lǐng)域
      [0001] 本發(fā)明屬于中藥有效成份的提取和運(yùn)用領(lǐng)域,尤其是中藥蟾酥中的具體抗腫瘤活 性成份化合物的制備領(lǐng)域。
      【背景技術(shù)】
      [0002] 蟾酥是蟾蜍表皮腺體的分泌物,白色乳狀液體,有毒,干燥后可以入藥。味甘、辛, 性溫,有毒,主治小兒疳疾、腦疳以及背部疔瘡。蟾酥的化學(xué)成分比較復(fù)雜,現(xiàn)代藥理研究發(fā) 現(xiàn)蟾酥中主要含有多種強(qiáng)心留體類(lèi)化合物。通過(guò)對(duì)蟾酥的分離和鑒定,目前已確定其主要 化學(xué)成分按結(jié)構(gòu)分類(lèi)如下:
      [0003] (1)強(qiáng)心甾體類(lèi)化合物,可分為:蟾毒配基類(lèi)(131^(^61^1^,868)、脂蟾毒配基 (resibufogenin,RBG)、華蟾毒配基(cinobufagin,CBG)、遠(yuǎn)華蟾毒配基(telocinobufagin, TCBG)、蟾毒靈(bufalin,BL)、華蟾毒它靈(cinobufatalin)、日蟾毒它靈 (gamabufotalinin)及南美蟾毒精等。
      [0004] (2)吲哚類(lèi)生物堿及其衍生物,此類(lèi)化合物含有吲哚環(huán),是具有一定生物活性的水 溶性吲哚生物堿,包含:蟾酥堿、蟾酥甲堿、5 -羥色胺、去氫蟾酥堿等。
      [0005] (3)甾醇類(lèi),蟾酥含有膽甾醇、7a -羥基膽甾醇、70-羥基膽甾醇』一谷甾醇、麥角 留醇等。
      [0006] (4)其他類(lèi):近年來(lái)新發(fā)現(xiàn)的一些成分,有20,21-環(huán)氧蟾毒內(nèi)酯、20S,21 -環(huán)氧蟾 毒配基、20R,21 -環(huán)氧瞻毒配基、3 - 0一甲駿基一20S,21環(huán)氧瞻毒配基、3 - 0一20S,21 -環(huán) 氧蟾毒配基等;蟾酥中尚含有腎上腺素及多種氨基酸。目前研究表明,蟾酥及其活性成分具 有抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)、誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡等作用。其中以有脂蟾毒配基、蟾毒靈和華蟾毒配 基類(lèi)化合物被認(rèn)為是蟾酥抗腫瘤作用的主要活性成份。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0007] 發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題
      [0008] 在中藥蟾酥中分離出一種具有抗腫瘤活性的化合物,并能確定其結(jié)構(gòu)式。
      [0009] 發(fā)明采取的技術(shù)方案
      [0010] 具有以下結(jié)構(gòu)式I所代表的化合物,
      [0012] 進(jìn)一步,獲得該化合物的方法為:將片狀蟾酥研成粗粉,分別用石油醚、乙酸乙酯、 丙酮、甲醇和水加熱回流提取,丙酮提取液減壓回收得浸膏;將丙酮部位浸膏通過(guò)MCI柱,甲 醇-水梯度洗脫,薄層層析檢測(cè),得到8個(gè)部分Frl-Fr8;將Fr 1部位通過(guò)二醇基硅膠柱CH2C12-MeOH梯度洗脫,Sephadex LH-20柱甲醇洗脫,薄層層析檢測(cè),收集含有化合物的流份;濃縮 后,析出結(jié)晶,抽濾出結(jié)晶即得。
      [0013] 更進(jìn)一步,該化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
      [0014] 發(fā)明的有益效果
      [0015] 首次公開(kāi)了本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)及其制備方法,并且將其應(yīng)用到抗腫瘤藥物領(lǐng) 域。
      【附圖說(shuō)明】
      [0016] 圖1環(huán)氧蟾毒烯酮的H-H COSY相關(guān)數(shù)據(jù)(H-H)
      [0017]具體實(shí)施方法
      [0018] 一、本發(fā)明化合物的結(jié)構(gòu)
      [0019]本發(fā)明為從中華大蟾蜍耳后腺分泌物干燥品蟾酥中分離得到的1個(gè)新的蟾毒甾二 烯類(lèi)新化合物,結(jié)構(gòu)式(I)如下:
      [0021 ]命名為環(huán)氧蟾毒稀酮(epoxybufal inenone),英文化#SS:7,14-epoxy_3a-hydroxy-7-en-l5-bufalinone 〇
      [0022] 本發(fā)明的環(huán)氧蟾毒烯酮為白色針晶,mp 127.8-129.0°C,ESI-MS:m/z 397[M+H]+, 結(jié)合1H NMR(400MHz)和13C NMR(lOOMHz)數(shù)據(jù)推斷化合物分子式為C24H28〇5</3C NMR中有一 組8162.6,150.5,147.1,121.2,115.5信號(hào)以及111匪1?中的57.46(111,(1,了=1.8他,11-21), 7.76(lH,dd,J = 9.7,1.8Hz,H-22),6.25(lH,d,J = 9.7Hz,H-23)信號(hào)是蟾毒甾二烯類(lèi)的特 征信號(hào),因此推定為蟾毒留二烯類(lèi)化合物。S200.3(C-15)提示酮羰基結(jié)構(gòu),S66.7(C-3)及 4.06(br s,H-3)提示氧取代次甲基結(jié)構(gòu),S141.0(C-7)、133.8(C_8)季碳信號(hào)提示為四取代 烯結(jié)構(gòu),結(jié)合分子式及不飽和度分析,化合物分子中還含有1個(gè)含氧環(huán)結(jié)構(gòu)。通過(guò)H-H COSY 對(duì)化合物H信號(hào)進(jìn)行歸屬(見(jiàn)圖1),通過(guò)2D-NMR(HSQC,HMBC)對(duì)C譜和H譜的化學(xué)位移進(jìn)行完 全歸屬(見(jiàn)表 1),推定化合物為7,14-epoxy-3a-hydroxy-7-en-15_bufalinone。
      [0023]表 1 環(huán)氧蟾毒烯酮的1H NMR(400MHz),13C NMR(100MHz),HMBC數(shù)據(jù)(CDC13)
      [0025]
      [0026] *表示H化學(xué)位移和積分面積重疊。
      [0027]二、本發(fā)明化合物的提取方法:
      [0028]將片狀蟾酥研成粗粉,分別用石油醚、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和水加熱回流提取,丙 酮提取液減壓回收得浸膏;將丙酮部位浸膏通過(guò)MCI柱,甲醇-水梯度洗脫,薄層層析檢測(cè), 得到8個(gè)部分Fr 1-Fr8;將Frl部位通過(guò)二醇基硅膠柱CH2Cl2_MeOH梯度洗脫,S印hadex LH-20 柱甲醇洗脫,薄層層析檢測(cè),收集含有化合物的流份;濃縮后,析出結(jié)晶,抽濾出結(jié)晶即得。 [0029]三、本發(fā)明化合物抑制腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的用途 [0030] 實(shí)驗(yàn)方法:MTT測(cè)活法
      [0031]實(shí)驗(yàn)材料:人非小細(xì)胞肺癌細(xì)胞株A549 (中國(guó)科學(xué)院細(xì)胞庫(kù)),MTT,DMEM高糖培養(yǎng) 基(Gibco),胎牛血清(Gibco),96孔板(Corning)
      [0032] 1.接種肺癌細(xì)胞株A549細(xì)胞:用含10%胎小牛血清得培養(yǎng)液配成單個(gè)細(xì)胞懸液, 以每孔5000個(gè)細(xì)胞接種到96孔板,每孔體積100u 1。
      [0033] 2.5 %⑶2,37°C孵育,至細(xì)胞單層鋪滿孔底(96孔平底板),加入濃度梯度的藥物, 設(shè)5個(gè)梯度,2-3個(gè)復(fù)孔。
      [0034] 3.5%C〇2,37°C繼續(xù)孵育44小時(shí),在蔡司倒置熒光顯微鏡下觀察。
      [0035] 4?每孔加入10ul MIT溶液(5mg/ml),繼續(xù)培養(yǎng)4h。
      [0036] 5 ?終止培養(yǎng),小心吸去孔內(nèi)培養(yǎng)液。
      [0037] 6.每孔加入150ul DMS0(二甲基亞砜),置搖床上低速振蕩10min,使結(jié)晶物充分溶 解。在全波長(zhǎng)酶標(biāo)儀〇D490nm處測(cè)量各孔的吸光值。
      [0038] 8.統(tǒng)計(jì)細(xì)胞生長(zhǎng)抑制狀況,抑制率計(jì)算公式:
      [0039] 抑制率=(control 組-加藥組)/(control 組-blank)
      [0040] 計(jì)算結(jié)果見(jiàn)表2
      [0041 ]表2不同濃度藥物刺激48h對(duì)A549損傷的影響(n = 5)
      [0043]四、結(jié)論
      [0044]分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果及與文獻(xiàn)對(duì)照,可得到本發(fā)明的化合物環(huán)氧蟾毒烯酮具有明顯的抑 制肺癌細(xì)胞作用,其顯著細(xì)胞毒活性的IC50值在0.226±0.175yM(無(wú) tSD),
      【主權(quán)項(xiàng)】
      1. 具有W下結(jié)構(gòu)式I所代表的化合物:2. 如權(quán)利要求1所述的化合物的制備方法,具體為:將片狀贍酥研成粗粉,分別用石油 酸、乙酸乙醋、丙酬、甲醇和水加熱回流提取,丙酬提取液減壓回收得浸膏;將丙酬部位浸膏 通過(guò)MCI柱,甲醇-水梯度洗脫,薄層層析檢測(cè),得到8個(gè)部分Frl-扣8;將Frl部位通過(guò)二醇基 硅膠柱C出Cl2-MeOH梯度洗脫,Sephadex LH-20柱甲醇洗脫,薄層層析檢測(cè),收集含有化合物 的流份;濃縮后,析出結(jié)晶,抽濾出結(jié)晶即得。3. 如權(quán)利要求1所述的化合物在制備抗腫瘤藥物中的用途。
      【文檔編號(hào)】A61P35/00GK105968167SQ201610291860
      【公開(kāi)日】2016年9月28日
      【申請(qǐng)日】2016年5月5日
      【發(fā)明人】錢(qián)士輝, 趙彥敏, 李振麟, 曹鵬, 孫曉艷, 左其艷
      【申請(qǐng)人】江蘇省中醫(yī)藥研究院
      網(wǎng)友詢(xún)問(wèn)留言 已有0條留言
      • 還沒(méi)有人留言評(píng)論。精彩留言會(huì)獲得點(diǎn)贊!
      1