雷公藤內酯甲的提取方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種雷公藤內酯甲的提取方法，其以雷公藤植株的根心、根皮、莖和葉為原料，經粉碎、浸泡、滲漉、萃取、硅膠柱層析分離純化、重結晶等多個步驟，可提取得到純度達99%以上的雷公藤內酯甲，得率為萬分之一，比現(xiàn)有文獻報道的提取工藝提高10?20倍，是一種大量獲得雷公藤內酯甲的有效方法，可為闡明雷公藤中的化學成分、藥理作用等研究提供物質基礎和科學依據(jù)。
【專利說明】
雷公藤內酯甲的提取方法
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于中醫(yī)藥研究技術領域，具體涉及一種雷公藤內酯甲的提取方法。
【背景技術】
[0002] 雷公藤（TrijOteiii? ri71forc/ii Hook.f)系衛(wèi)矛科雷公藤屬植物，以全根或去 皮根木質部入藥。雷公藤具有活血化瘀、清熱解毒、消腫散結、祛風除濕、殺蟲止血的作用， 臨床用于治療類風濕性關節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡、腎炎、強制性脊柱炎等，但其有大毒，且其 臨床有效劑量與中毒劑量相近，這使雷公藤的全藥應用至今未能得到廣泛推廣。為了充分 發(fā)揮雷公藤的藥用功效，國內外學者已從雷公藤屬植物中分離出幾十種化學成分，主要有 二萜、三萜、倍半萜、生物堿、苷類、糖類和醇類等。

【發(fā)明內容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種雷公藤內酯甲的提取方法，其所得雷公藤內酯甲的純 度高、產量大，可為雷公藤內酯類化合物的化學結構、藥理作用等研究提供物質基礎。
[0004] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案： 一種雷公藤內酯甲的提取方法，其包括以下步驟： 1) 將雷公藤粉碎，過20目篩，加其重量5倍體積的乙醇浸泡24h后進行滲漉，然后將滲漉 液合并、濃縮至原體積1/10，得乙醇濃縮液； 2) 按體積比1:1在所得乙醇濃縮液中加水混合后，再按體積比1:1.5加乙酸乙酯，萃取 4-6次，然后將萃取得到的乙酸乙酯溶液合并、濃縮，經微波干燥制得干粉； 3) 將所得干粉加等體積三氯甲烷溶解后，采用硅膠柱層析進行分離，以三氯甲烷作為 洗脫劑進行洗脫，每500mL洗脫液收集一份，經濃縮后采用TLC對濃縮液進行定性檢測，合并 含有相同成分的濃縮液，回收溶劑后微波干燥，得粗提干粉； 4) 將所得粗提干粉加等體積乙酸乙酯溶解后，采用硅膠柱層析進行分離，將乙酸乙酯 與石油醚按體積比1:9混合作為洗脫劑進行洗脫，每200mL洗脫液收集一份，經濃縮后采用 TLC對濃縮液進行定性檢測，合并含有相同成分的濃縮液，回收溶劑至干，得精提物； 5) 將所得精提物加二氯甲烷溶解后，在二氯甲烷和乙醚的混合液中重結晶3-5次，得無 色針狀結晶，即為雷公藤內酯甲(Wilforlide A)。
[0005] 步驟1)所述雷公藤采用雷公藤植株的根心、根皮、莖和葉。
[0006] 步驟1)中用雷公藤重量28-30倍體積的乙醇進行滲漉，滲漉液每500mL收集一次， 濃縮至干，加 lmL三氯甲烷溶解后采用TLC對其進行定性檢測，直至檢測為陰性時停止?jié)B漉。
[0007] 步驟2)中每次萃取需振搖20次，每次萃取后將收集的乙酸乙酯溶液濃縮，采用TLC 對其進行定性檢測，直至檢測為陰性時停止萃取。
[0008] 步驟2)所述微波干燥的功率為500W，頻率為2450MHz，溫度為60 °C，干燥時間為 20min〇
[0009] 步驟3)中干粉與硅膠柱層析所用硅膠的重量比為1:120;采用濕法上柱。
[0010] 步驟3)所述微波干燥的功率為500W，頻率為2450MHz，溫度為60°C，干燥時間為 10min〇
[0011] 步驟4)中粗提干粉與硅膠柱層析所用硅膠的重量比為1:80;采用濕法上柱。
[0012] 所得雷公藤內酯甲的結構式為：
無色針狀結晶，mp 319-321°C，Liebermanin_Burchard反應陽性(反應紫紅色），分子 式〇3〇1146〇3，]^，111/2:454(]\1+)，439,436,421，410,246(基峰），231，228,218,213,208,207， 203,201，190，185，175，159，147，145，133，120，119，107,55<aH-NMR(CDCl3,400MHz):0.79 (3H，S，H-24)，0.87(3H，S，H-28)，0.93(3H，S，H-26)，0.94(3H，S，H-25)，0.99(3H，S，H-23), 1.08(3H，S，H-27)，1.21(3H，S，H-30)，3.22(lH，dd，J=11.7， 4.9Hz，H-3)4.15(lH，d，J= 5.4泡，11-22)，5.30(111，^=3.3抱，11-12)。 13(：-匪1?(〇)(：13，100抱）：38.6((：-1)，27.3((：-2)， 78.9(C-3)，38.9(C-4)，55.3(C-5)，18.3(C-6)，33.3(C-7)，39.6(C-8)，47.5(C-9)，37.1(C-10)，23 ? 6(C-10)，124 ? 7(C-12)，140.3(C-13)，42.5(C-14)，24.3(015)，24.1(016)35.3 (C-17)，39 ? 8( (C-18)，43 ? 5(C-19)，39.3(020)，33.9(021)，83.1(022)，28 .l((C-23)， 15.6(C-24)，15.7(C-25)，17.0(C-26)，25.3(C-27)，24.9(C-(C-28)，182.5(C-29)，21.0(C-30)。IR(cm-b :3500，2980，2950，2900，1760，1658，1490，1460，1380，1180，1100，956。
[0013]本發(fā)明的顯著優(yōu)點在于:按本發(fā)明方法制得的雷公藤內酯甲純度可達99%以上，得 率為萬分之一，比現(xiàn)有文獻報道的提取工藝提高10-20倍，是一種大量獲得雷公藤內酯甲的 有效方法，所提取的雷公藤內酯甲已被中國食品藥品檢定研究院用于作為雷公藤內酯甲的 標準品，這不僅說明了該方法的高效性和科學性，也為雷公藤中化學成分、藥理作用等研 究，雷公藤臨床應用及雷公藤系列藥品質量控制提供了物質基礎和科學依據(jù)。
【具體實施方式】
[0014] 為了使本發(fā)明所述的內容更加便于理解，下面結合【具體實施方式】對本發(fā)明所述的 技術方案做進一步的說明，但是本發(fā)明不僅限于此。
[0015] 實施例1 1) 將1 Okg含根、莖、葉的雷公藤植株粉碎，過20目篩，按5 L/kg的量加入乙醇浸泡24h 后，再按28 L/kg量緩慢加入乙醇進行滲漉，滲漉液每500mL收集一次，濃縮至干，加 lmL三氯 甲烷溶解后采用TLC對其進行定性檢測，直至檢測為陰性時停止?jié)B漉，然后將滲漉液合并、 濃縮至原體積1/10,得乙醇濃縮液； 2) 按體積比1:1在所得乙醇濃縮液中加水混合后，再按體積比1:1.5加乙酸乙酯進行萃 取，每次萃取需振搖20次，每次萃取后將收集的乙酸乙酯溶液濃縮，采用TLC對其進行定性 檢測，萃取4次后檢測萃取液為陰性，停止萃取，然后將萃取得到的乙酸乙酯溶液合并、濃 縮，經微波干燥制得干粉，微波干燥的功率為500W，頻率為2450MHz，溫度為60 °C，干燥時間 為20min; 3) 將所得干粉加等體積三氯甲烷溶解后，采用硅膠柱層析進行分離，干粉與柱層析所 用硅膠的重量比為1:120,濕法上柱，以三氯甲烷作為洗脫劑進行洗脫，每500mL洗脫液收集 一份，經濃縮后采用TLC對濃縮液進行定性檢測，合并含有相同成分的濃縮液，回收溶劑后 微波干燥，得粗提干粉，微波干燥的功率為500W，頻率為2450MHz，溫度為60 °C，干燥時間為 lOmin； 4) 將所得粗提干粉加等體積乙酸乙酯溶解后，采用硅膠柱層析進行分離，粗提干粉與 柱層析所用硅膠的重量比為1:80,濕法上柱，將乙酸乙酯與石油醚按體積比1:9混合作為洗 脫劑進行洗脫，每200mL洗脫液收集一份，經濃縮后采用TLC對濃縮液進行定性檢測，合并含 有相同成分的濃縮液，回收溶劑至干，得精提物； 5) 將所得精提物加二氯甲烷溶解后，在二氯甲烷和乙醚的混合液中重結晶3次，得 1.09g雷公藤內酯甲的無色針狀結晶，其純度為99.00%。
[0016] 實施例2 1) 將1 Okg含根、莖、葉的雷公藤植株粉碎，過20目篩，按5 L/kg的量加入乙醇浸泡24h 后，再按29 L/kg量緩慢加入乙醇進行滲漉，滲漉液每500mL收集一次，濃縮至干，加 lmL三氯 甲烷溶解后采用TLC對其進行定性檢測，直至檢測為陰性時停止?jié)B漉，然后將滲漉液合并、 濃縮至原體積1/10,得乙醇濃縮液； 2) 按體積比1:1在所得乙醇濃縮液中加水混合后，再按體積比1:1.5加乙酸乙酯進行萃 取，每次萃取需振搖20次，每次萃取后將收集的乙酸乙酯溶液濃縮，采用TLC對其進行定性 檢測，萃取5次后檢測萃取液為陰性，停止萃取，然后將萃取得到的乙酸乙酯溶液合并、濃 縮，經微波干燥制得干粉，微波干燥的功率為500W，頻率為2450MHz，溫度為60 °C，干燥時間 為20min; 3) 將所得干粉加等體積三氯甲烷溶解后，采用硅膠柱層析進行分離，干粉與柱層析所 用硅膠的重量比為1:120,濕法上柱，以三氯甲烷作為洗脫劑進行洗脫，每500mL洗脫液收集 一份，經濃縮后采用TLC對濃縮液進行定性檢測，合并含有相同成分的濃縮液，回收溶劑后 微波干燥，得粗提干粉，微波干燥的功率為500W，頻率為2450MHz，溫度為60 °C，干燥時間為 lOmin； 4) 將所得粗提干粉加等體積乙酸乙酯溶解后，采用硅膠柱層析進行分離，粗提干粉與 柱層析所用硅膠的重量比為1:80,濕法上柱，將乙酸乙酯與石油醚按體積比1:9混合作為洗 脫劑進行洗脫，每200mL洗脫液收集一份，經濃縮后采用TLC對濃縮液進行定性檢測，合并含 有相同成分的濃縮液，回收溶劑至干，得精提物； 5) 將所得精提物加二氯甲烷溶解后，在二氯甲烷和乙醚的混合液中重結晶4次，得 1.02g雷公藤內酯甲的無色針狀結晶，其純度為99.31%。
[0017] 實施例3 1)將1 Okg含根、莖、葉的雷公藤植株粉碎，過20目篩，按5 L/kg的量加入乙醇浸泡24h 后，再按30 L/kg量緩慢加入乙醇進行滲漉，滲漉液每500mL收集一次，濃縮至干，加 lmL三氯 甲烷溶解后采用TLC對其進行定性檢測，直至檢測為陰性時停止?jié)B漉，然后將滲漉液合并、 濃縮至原體積1/10,得乙醇濃縮液； 2) 按體積比1:1在所得乙醇濃縮液中加水混合后，再按體積比1:1.5加乙酸乙酯進行萃 取，每次萃取需振搖20次，每次萃取后將收集的乙酸乙酯溶液濃縮，采用TLC對其進行定性 檢測，萃取6次后檢測萃取液為陰性，停止萃取，然后將萃取得到的乙酸乙酯溶液合并、濃 縮，經微波干燥制得干粉，微波干燥的功率為500W，頻率為2450MHz，溫度為60 °C，干燥時間 為20min; 3) 將所得干粉加等體積三氯甲烷溶解后，采用硅膠柱層析進行分離，干粉與柱層析所 用硅膠的重量比為1:120,濕法上柱，以三氯甲烷作為洗脫劑進行洗脫，每500mL洗脫液收集 一份，經濃縮后采用TLC對濃縮液進行定性檢測，合并含有相同成分的濃縮液，回收溶劑后 微波干燥，得粗提干粉，微波干燥的功率為500W，頻率為2450MHz，溫度為60 °C，干燥時間為 lOmin； 4) 將所得粗提干粉加等體積乙酸乙酯溶解后，采用硅膠柱層析進行分離，粗提干粉與 柱層析所用硅膠的重量比為1:80,濕法上柱，將乙酸乙酯與石油醚按體積比1:9混合作為洗 脫劑進行洗脫，每200mL洗脫液收集一份，經濃縮后采用TLC對濃縮液進行定性檢測，合并含 有相同成分的濃縮液，回收溶劑至干，得精提物； 5) 將所得精提物加二氯甲烷溶解后，在二氯甲烷和乙醚的混合液中重結晶5次，得 0.99g雷公藤內酯甲的無色針狀結晶，其純度為99.48%。
[0018]按本發(fā)明方法制得的雷公藤內酯甲的純度可達99%以上，得率為萬分之一，比現(xiàn)有 文獻報道的提取工藝提高10-20倍，是一種大量獲得雷公藤內酯甲的有效方法，可為闡明雷 公藤中的化學成分、藥理作用等研究提供物質基礎和科學依據(jù)。
[0019]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與 修飾，皆應屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
【主權項】
1. 一種雷公藤內酯甲的提取方法，其特征在于:包括以下步驟： 1) 將雷公藤粉碎，過20目篩，加其重量5倍體積的乙醇浸泡24h后進行滲漉，然后將滲漉 液合并、濃縮至原體積1/10，得乙醇濃縮液； 2) 按體積比1:1在所得乙醇濃縮液中加水混合后，再按體積比1:1.5加乙酸乙酯，萃取 4-6次，然后將萃取得到的乙酸乙酯溶液合并、濃縮，經微波干燥制得干粉； 3) 將所得干粉加等體積三氯甲烷溶解后，采用硅膠柱層析進行分離，以三氯甲烷作為 洗脫劑進行洗脫，每500mL洗脫液收集一份，經濃縮后采用TLC對濃縮液進行定性檢測，合并 含有相同成分的濃縮液，回收溶劑后微波干燥，得粗提干粉； 4) 將所得粗提干粉加等體積乙酸乙酯溶解后，采用硅膠柱層析進行分離，將乙酸乙酯 與石油醚按體積比1:9混合作為洗脫劑進行洗脫，每200mL洗脫液收集一份，經濃縮后采用 TLC對濃縮液進行定性檢測，合并含有相同成分的濃縮液，回收溶劑至干，得精提物； 5) 將所得精提物加二氯甲烷溶解后，在二氯甲烷和乙醚的混合液中重結晶3-5次，得無 色針狀結晶，即為所述雷公藤內酯甲。2. 根據(jù)權利要求1所述雷公藤內酯甲的提取方法，其特征在于:步驟1)所述雷公藤采用 雷公藤植株的根心、根皮、莖和葉。3. 根據(jù)權利要求1所述雷公藤內酯甲的提取方法，其特征在于:步驟1)中用雷公藤重量 28-30倍體積的乙醇進行滲漉，滲漉液每500mL收集一次，濃縮至干，加 lmL三氯甲烷溶解后 采用TLC對其進行定性檢測，直至檢測為陰性時停止?jié)B漉。4. 根據(jù)權利要求1所述雷公藤內酯甲的提取方法，其特征在于:步驟2)中每次萃取需振 搖20次，每次萃取后將收集的乙酸乙酯溶液濃縮，采用TLC對其進行定性檢測，直至檢測為 陰性時停止萃取。5. 根據(jù)權利要求1所述雷公藤內酯甲的提取方法，其特征在于:步驟2)所述微波干燥的 功率為500W，頻率為2450MHz，溫度為60 °C，干燥時間為20min。6. 根據(jù)權利要求1所述雷公藤內酯甲的提取方法，其特征在于:步驟3)中干粉與硅膠柱 層析所用硅膠的重量比為1:120;采用濕法上柱。7. 根據(jù)權利要求1所述雷公藤內酯甲的提取方法，其特征在于:步驟3)所述微波干燥的 功率為500W，頻率為2450MHz，溫度為60 °C，干燥時間為lOmin。8. 根據(jù)權利要求1所述雷公藤內酯甲的提取方法，其特征在于:步驟4)中粗提干粉與硅 膠柱層析所用硅膠的重量比為1:80;采用濕法上柱。
【文檔編號】C07J71/00GK105968168SQ201610611187
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年7月30日
【發(fā)明人】林綏, 闕慧卿, 錢麗萍
【申請人】福建省醫(yī)學科學研究院