一種斜生柵藻藻株及其分離純化方法、培養(yǎng)方法及應(yīng)用
【專利摘要】一種斜生柵藻藻株SoHNCJ2的分離純化方法，將采集的水樣稀釋后均勻涂布在1.5?2%瓊脂的BG11培養(yǎng)基平板上，放置在培養(yǎng)箱中進(jìn)行連續(xù)光照培養(yǎng)；待平板上長出單藻落后，用牙簽挑取單藻落在BG11平板上劃短線培養(yǎng)；再將所得劃短線培養(yǎng)的藻種用接種針劃Z型線進(jìn)行藻種的分離和除菌，然后用稀釋涂平板的方法進(jìn)一步純化藻種；挑取單藻落劃短線和挑取短線藻落劃Z線交替進(jìn)行2～4次后得到純凈的單一藻落。一種斜生柵藻藻株SoHNCJ2的培養(yǎng)方法，將淡水藍(lán)藻培養(yǎng)基BG11的N或P濃度降低到原來的1/4或增加到原來的三倍，即采用1/4 N或3倍N、P濃度的BG11培養(yǎng)基。本發(fā)明的斜生柵藻能夠在較低濃度的N源條件下持續(xù)快速生長，藻細(xì)胞能夠有效積累大量油脂，可進(jìn)行轉(zhuǎn)脂化生產(chǎn)生物柴油。CCTCC NO：M 201625320160506
【專利說明】
_種斜生柵藻藻株及其分禹純化方法、培養(yǎng)方法及應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于微生物和生物能源領(lǐng)域，尤其是涉及一種斜生柵藻藻株及其分離純 化、培養(yǎng)、收集方法及其用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 隨著社會經(jīng)濟(jì)的日益繁榮，人類可利用資源日漸枯竭，為了社會的可持續(xù)發(fā)展，當(dāng) 今世界各國政府及有關(guān)技術(shù)人員逐漸將研究方向轉(zhuǎn)向了可再生能源。
[0003] 因?yàn)榈厍蛏系脑孱愘Y源物種豐富，其中不乏富油藻種。因此從油藻中提取油脂用 于生物柴油的生產(chǎn)，以代替日漸枯竭的石油來源，成為科學(xué)界十分關(guān)注的課題。而現(xiàn)有技術(shù) 已有富油藻類的培養(yǎng)提取方法及其有關(guān)應(yīng)用公開，但對于其豐富應(yīng)用而言，僅僅是九牛一 毛。因此，對這類技術(shù)的研究仍在不斷地持續(xù)深入和擴(kuò)大中，尚有大量的富油藻類物種，需 要去發(fā)現(xiàn)，需要去實(shí)現(xiàn)有效的培養(yǎng)和分離，需要去進(jìn)行深入的應(yīng)用研究。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)不足，提出了一種斜生柵藻藻株的分離純化和培養(yǎng)方法，并 對其應(yīng)用進(jìn)行了研究。從野外采集水樣，通過培養(yǎng)、分離、純化得到一種斜生柵藻藻株 皿AS oWigut/s)，并進(jìn)行了保藏，其保藏編號為CCTCC Ν0:Μ 2016253,分 類命名：5^/360^5皿/s SoHNCJ2,保藏日期為2016年5月6日，保藏單位為中國典 型培養(yǎng)物保藏中心，地址：中國.武漢.武漢大學(xué)。
[0005] 本發(fā)明所采用的技術(shù)方案： 一株斜生柵藻藻株S0HNCJ2,其保藏編號為CCTCC N0:M2016253,保藏日期為2016年5 月6日，保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心。
[0006]
[0007] -種如上所述的斜生柵藻藻株SoHNCJ2的分離純化方法，1)將采集的水樣稀釋后 均勻涂布在1.5-2%瓊脂的BG11培養(yǎng)基平板上，放置在培養(yǎng)箱中進(jìn)行連續(xù)光照培養(yǎng);2)待平 板上長出單藻落后，用牙簽挑取單藻落在BG11平板上劃短線培養(yǎng);3)再將所得劃短線培養(yǎng) 的藻種用接種針劃Z型線進(jìn)行藻種的分離和除菌，然后用稀釋涂平板的方法進(jìn)一步純化藻 種;4)挑取單藻落劃短線和挑取短線藻落劃Z線交替進(jìn)行2~4次后得到純凈的單一藻落;所 述培養(yǎng)基采用淡水藍(lán)藻培養(yǎng)基BG11。
[0008] 一種如上所述的斜生柵藻的培養(yǎng)方法，將淡水藍(lán)藻培養(yǎng)基8611的咐農(nóng)度降低到原 來的1/4,即采用1/4N濃度的BG11培養(yǎng)基，所述BG11培養(yǎng)基的成分及用量如下：
[0009] NaN03,0.375g
[0010] K2HP04,0.04g
[0011] MgS〇4.7H2〇,0.075g
[0012] CaCl2.7H20,0.036g
[0013] Na2C03,0.02g
[0014] 朽1 檬酸，0.006g
[0015] 檸檬酸鐵，0.006g
[0016] 微量元素溶液，A5 lmL
[0017] 采用蒸餾水定容至1000mL。
[0018] 一種如上所述的斜生柵藻的培養(yǎng)方法，將淡水藍(lán)藻培養(yǎng)基8611的咐農(nóng)度增加到原 來的三倍，即采用3對農(nóng)度的BG11培養(yǎng)基，所述BG11培養(yǎng)基的成分及用量如下：
[0019] NaN03,4.5g
[0020] K2HP〇4,0.04g
[0021] MgS〇4.7H20,0.075g
[0022] CaCl2.7H20,0.036g
[0023] Na2C〇3,0.02g
[0024] 檸檬酸，0.006g
[0025] 檸檬酸鐵，0.006g
[0026] 微量元素溶液，A5 lmL
[0027] 采用蒸餾水定容至1000mL。
[0028] 一種如上所述的斜生柵藻的培養(yǎng)方法，將淡水藍(lán)藻培養(yǎng)基BG11的P濃度增加到原 來的三倍，即采用3P濃度的BG11培養(yǎng)基，所述BG11培養(yǎng)基的成分及用量如下：
[0029] NaN03，1.5g
[0030] K2HP〇4,0.12g
[0031] MgS〇4.7H20,0.075g
[0032] CaCl2.7H20,0.036g
[0033] Na2C〇3,0.02g
[0034] 檸檬酸，0.006g
[0035] 檸檬酸鐵，0.006g
[0036] 微量元素溶液，A5 lmL
[0037] 采用蒸餾水定容至1000mL。
[0038] 所述的斜生柵藻的培養(yǎng)方法，使藻株在溫度15~40°C，光強(qiáng)500~25001ux，pH7-9 的條件下生長，培養(yǎng)至對數(shù)生長后期，藻細(xì)胞在6~12h內(nèi)完全自然沉降，倒出上層的培養(yǎng) 基，即得到高濃度的藻液。
[0039]所述的斜生柵藻藻株S〇HNCJ2,其在1/4N BG11培養(yǎng)基中大量培養(yǎng)，生長不受影響， 油脂含量最高，獲得的含油藻細(xì)胞在轉(zhuǎn)脂化生產(chǎn)生物柴油中的應(yīng)用。
[0040]所述的斜生柵藻藻株S〇HNCJ2,其大量培養(yǎng)獲得的斜生柵藻S〇HNCJ2的多不飽和脂 肪酸含量較高，用于動物飼料的添加。
[0041 ]所述的斜生柵藻藻株SOHNCJ2,其在3N和3P培養(yǎng)基中生長不受影響，其培養(yǎng)方法在 有機(jī)污染污水處理中的應(yīng)用。
[0042]本發(fā)明的有益效果：
[0043] 1、本發(fā)明的斜生柵藻能夠在較低濃度的對原條件下持續(xù)快速生長，節(jié)約成本。在較 低對農(nóng)度條件下，藻細(xì)胞能夠有效積累大量油脂，能夠進(jìn)行轉(zhuǎn)脂化生產(chǎn)生物柴油。
[0044] 2、本發(fā)明斜生柵藻藻株S〇HNCJ2的培養(yǎng)方法，藻細(xì)胞能夠在6~12h內(nèi)自然沉降，無 需添加絮凝劑，收集方法簡單，節(jié)約成本，減少對環(huán)境的污染。
[0045] 3、本發(fā)明斜生柵藻藻株S〇HNCJ2的培養(yǎng)方法，藻細(xì)胞內(nèi)油脂中多不飽和脂肪酸含 量高，能夠作為動物飼料的直接營養(yǎng)添加劑。
[0046] 4、本發(fā)明斜生柵藻藻株S〇HNCJ2的培養(yǎng)方法，應(yīng)用于有機(jī)污染污水處理，具有一定 的水體凈化效果，可以降低水體的富營養(yǎng)化。因?yàn)闁旁鍖τ袡C(jī)污染物具有較強(qiáng)的耐性，因此 可在培養(yǎng)基中添加一定比例的有機(jī)污染污水，既凈化水體，又減少成本。
【附圖說明】
[0047] 圖1是本發(fā)明分離純化的藻細(xì)胞在高倍顯微鏡下的藻細(xì)胞形態(tài)示意圖；
[0048]圖2是本發(fā)明分離純化的藻株16SrDNA序列的進(jìn)化樹分析；
[0049] 圖3是本發(fā)明分離純化藻株在不同對農(nóng)度下的生長曲線；
[0050] 圖4是本發(fā)明分離純化藻株大量培養(yǎng)后自然沉降示意圖；
[0051] 圖5是本發(fā)明分離純化的斜生柵藻在高N、P濃度中的生長曲線。
【具體實(shí)施方式】 [0052] 實(shí)施例1 一株斜生柵藻藻株SoHNCJ2,其保藏編號為CCTCC N0:M2016253,保藏日期為2016年5 月6日，保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心。
[0053]
[0054] 實(shí)施例2
[0055] -種斜生柵藻藻株S〇HNCJ2的分離純化方法，包括如下步驟：
[0056] 1)從平頂山市新城區(qū)平西湖水庫多點(diǎn)采集水樣，將采集的水樣稀釋后均勻涂布在 1.5~2%瓊脂的BG11培養(yǎng)基平板上，放置在培養(yǎng)箱中進(jìn)行連續(xù)光照培養(yǎng)；
[0057] 2)待平板上長出單藻落后，用牙簽挑取單藻落在BG11平板上劃短線培養(yǎng)；
[0058] 3)再將所得劃短線培養(yǎng)的藻種用接種針劃Z型線進(jìn)行藻種的分離和除菌，然后用 稀釋涂平板的方法進(jìn)一步純化藻種；
[0059] 4)挑取單藻落劃短線和挑取短線藻落劃Z線交替進(jìn)行2~4次后得到較為純凈的單 一藻落。
[0060] 培養(yǎng)基采用淡水藍(lán)藻培養(yǎng)基BG11。
[0061 ]分離純化的斜生柵藻藻株SoHNCJ2的鑒定方法：
[0062] 1)藻細(xì)胞形態(tài)鑒定：
[0063] 藻細(xì)胞在在1000倍光學(xué)顯微鏡下進(jìn)行觀察，藻細(xì)胞形態(tài)見圖1所示：藻細(xì)胞黃綠 色，呈卵圓形，多為2個細(xì)胞成對排列，細(xì)胞壁平滑，細(xì)胞兩端具彎曲的長刺，細(xì)胞內(nèi)有大量 顆粒物，色素體周生，具1個蛋白核。單個細(xì)胞大小:長6-8um，寬2-3um，初步鑒定為柵藻。
[0064] 2)16S rDNA分子鑒定：
[0065] 采用CTAB法提取基因組DNA，方法如下：先將2XCTAB在65度預(yù)熱備用；12000rpm離 心收集1.5mL或更多的生長至對數(shù)后期的藻細(xì)胞于eppendorf管中；破細(xì)胞，加入約100yL的 2 X CTAB及少量石英砂渦旋震蕩，再加入約300yL預(yù)熱的2 X CTAB，置于65度溫浴0.5-2h;待 冷卻至室溫，加入400yL氯仿:異戊醇(24:1)，顛倒混勻乳濁狀，12000rpm離心10min，上清轉(zhuǎn) 入新的eppendorf管中，加入1/5體積的5M NaCl和2倍體積的無水乙醇，混勾后-20度沉降。 12000rpm離心10min，棄上清，得到的沉淀加入500yL 70%的乙醇，離心3111；[11，棄上清。得到 的總DNA在超凈臺晾干后溶于適量體積滅菌水或TE緩沖液中。
[0066] 以藻細(xì)胞基因組DNA為模板，通過引物18S-1: W -TGGTTGATCCTGCCAGTAGTC-3 〇和 18S-2: (5' -TGATCCTTCTGCAGGTTCACC-3')進(jìn)行PCR擴(kuò)增。50yL的PCR反應(yīng)體系包括：10 X Taq buffer 5yL、MgCl2 4yL、2.5mM dNTPs lyL、5U/yL的ExTaq酶（Fermentas)0.5yL、引物各 500?111〇1、以1^基因組0嫩。？0?反應(yīng)過程為:94度預(yù)變性61^11，接下來是30個循環(huán)(94度3〇86(3， 55度30sec，72度2min)，最后是72度延伸lOmin。
[0067] 擴(kuò)增得到的PCR產(chǎn)物用0.8%的瓊脂糖凝膠電泳檢測，檢測擴(kuò)增得到目的片段后， 再用0.8%的瓊脂糖凝膠電泳分離，用凝膠回收試劑盒(Bioflux)回收純化目的片段。按照 實(shí)際盒提供的說明書進(jìn)行操作，基本過程如下:切下含目的片段的膠條，向其中加入等體積 的Extraction buffer，55度溫浴lOmin左右;待樣品冷卻至室溫后轉(zhuǎn)至純化柱中，6000rpm 離心lmin，倒掉收集管中的廢液;再加入500yL Extraction buffer 12000rpm離心lmin，倒 掉收集管中的廢液;加入750yL Washing buffer 12000rpm離心lmin，倒掉收集管中的廢 液;然后12000rpm離心lmin至Washing buffer除盡；將純化柱置于干凈的1.5mL離心管中， 加入30yL預(yù)熱的滅菌水或TE緩沖液于純化柱上，放置lmin后12000rpm離心lmin，回收純化 的DNA送往上海生工進(jìn)行測序。測序結(jié)果在NCBI上進(jìn)行Blast分析，鑒定藻株所屬的種類。 [0068]分離純化的藻株的16SrDNA序列（測序結(jié)果)如下：
[0069] >SoHNCJ2
[0071]下表為分離純化的藻株16S rDNA序列比對結(jié)果：
[0073]序列比對結(jié)果顯示，所分離純化的藻株S〇HNCJ2的16S rDNA序列與斜生柵藻的相 似度最高，達(dá)到90 %。
[0074]圖2是本發(fā)明分離純化的藻株16S rDNA序列的進(jìn)化樹分析。進(jìn)化樹分析結(jié)果表明， 所分離純化的藻株與斜生柵藻的進(jìn)化關(guān)系最近。
[0075] 實(shí)施例3
[0076]本實(shí)施例為所述斜生柵藻藻株S〇HNCJ2的規(guī)模化培養(yǎng)方法及其用于轉(zhuǎn)脂化生產(chǎn)生 物柴油方法。
[0077] 1.藻細(xì)胞的培養(yǎng)
[0078]培養(yǎng)基配方:淡水藍(lán)藻培養(yǎng)基BG11的對農(nóng)度降低到原來的1 /4，即為1 /4N BG11的培 養(yǎng)基。培養(yǎng)基配方:NaN03，0 · 375g; K2HPO4，0 · 04g; MgS〇4 · 7H20，0 · 075g; CaCl2 · 7H20，0 · 036g; Na2C〇3，0.02g;梓檬酸，0.006g;梓檬酸鐵，0.006g;微量元素溶液A5 lmL;將上述各成分米用 蒸餾水定容至l〇〇〇mL。
[0079] 微量元素溶液 A5: H3BO4，2 · 86g; MnCh · 4H20，1 · 8 lg; ZnS〇4，0 · 222g; Na2Mo〇4，0 · 39g; CuS〇4.5H2〇,0.079g;Co(N03)2.6H2〇,49.4g。
[0080] 藻細(xì)胞培養(yǎng)溫度3(TC，光強(qiáng)20001UX。
[0081 ] 2.1/4N濃度對藻株生長的影響
[0082] 配置1/4N濃度和正常的BG11液體培養(yǎng)基，每500mL三角瓶中裝入300nL培養(yǎng)基。藻 種培養(yǎng)至對數(shù)生長期后，離心收集洗滌一次后，接種于不同N濃度的培養(yǎng)基中，調(diào)整初始0D 值為0.05左右，然后放置于30°C、20001uX的條件下培養(yǎng)，每天搖動兩次，每隔三天測定OD730 吸光值。
[0083]圖3所示為本發(fā)明分離純化藻株在不同N濃度下的生長曲線。如圖3所示，N濃降低 不影響藻細(xì)胞的生長速率，藻細(xì)胞持續(xù)對數(shù)生長，說明斜生柵藻能夠耐受較低N濃度，在大 規(guī)模培養(yǎng)時節(jié)約對原，降低成本。
[0084] 3.藻細(xì)胞的收集
[0085]如圖4所示藻細(xì)胞在6_12h內(nèi)能夠完全沉降，因此所采用的收集方法為自然沉降， 收集方法簡單，無需添加任何絮凝劑。
[0086] 4.油脂的提取方法
[0087]培養(yǎng)至平臺期的微藻，離心收集藻細(xì)胞，80°C烘干至恒重后，按照以下方法提取總 月旨，稱取總脂的重量，然后計(jì)算油脂的百分率。
[0088]用氯仿/甲醇萃取的方法提取油脂。6000rpm離心10min收集藻細(xì)胞;棄上清，加入 lmL的1:1的氯仿/甲醇，禍旋振蕩l-2min;加入0.3mL的lmol/L的KC1+0.2mol/L的磷酸混合 液，振蕩，使相位分離;6000rpm離心10min，取下層氯仿相至稱量瓶中；置于通風(fēng)櫥中吹干溶 劑，稱取油脂的重量。
[0090] 在1 /4N濃度的BG11培養(yǎng)基中，細(xì)胞內(nèi)油脂積累增高，高達(dá)27 %，顯著高于BG11培養(yǎng) 基，因此1/4N BG11培養(yǎng)基大量培養(yǎng)斜生柵藻可用于油脂的提取，制備生物柴油，同時減少N 的使用，節(jié)約成本，減少對水體的污染。
[0091] 實(shí)施例4
[0092] 本實(shí)施例為所述斜生柵藻藻株S〇HNCJ2的規(guī)?；囵B(yǎng)方法及其用于動物飼料多不 飽和脂肪酸添加應(yīng)用。
[0093] 配置1/4N、3N、3P濃度和正常的BG11液體培養(yǎng)基，每500mL三角瓶中裝入300nL培養(yǎng) 基。藻種培養(yǎng)至對數(shù)生長期后，離心收集洗滌一次后，接種于不同N、P濃度的培養(yǎng)基中，培養(yǎng) 至平臺期后收集藻細(xì)胞，冷凍干燥用于脂肪酸成分分析 [0094]脂肪酸成分分析
[0095]油脂提取:收集藻體至10mL離心管中。加入3mL提取液(氯仿：甲醇= 2:1，含0.5mg/ mL 2，6-二叔丁基-4-甲基苯酸），試管輕柔振蕩過夜。5000rpm離心5min，分離開細(xì)胞碎片和 油脂提取液。細(xì)胞碎片再次用3mL提取液浸泡，試管輕柔振蕩過夜，再次分離細(xì)胞碎片和油 脂提取液。合并兩次的提取液即提取的油脂，用氮?dú)獯蹈桑?°C保存至分析時使用。
[0096]脂肪酸甲酯化及檢測：
[0097]脂肪酸的甲酯化反應(yīng)采用硫酸一甲醇加熱法進(jìn)行。脂肪酸的檢測采用氣相色譜 法，檢測系統(tǒng):Agilent 7890A型氣相色譜儀，F(xiàn)ID檢測器;色譜柱：
[0098] HP-5彈性石英(30m X 0.32mm)。程序升溫:初溫210 °C，保持9min，20 °C/min升溫，升 溫240 °C，保持13min。內(nèi)標(biāo)法定量，內(nèi)標(biāo)物為二十二燒酸。
[0099]脂肪酸分析結(jié)果如下表所示：
[0101] 脂肪酸成分分析結(jié)果顯示在不同的N、P濃度培養(yǎng)條件下，多不飽和脂肪酸十八碳 二烯酸和三烯酸含量較高，能夠直接添加到動物飼料中，以提高動物飼料中的不飽和脂肪 酸含量。
[0102] 實(shí)施例5
[0103]所述斜生柵藻藻株SOHNCJ2的培養(yǎng)方法在有機(jī)污染污水處理中的應(yīng)用。
[0104] 配置3N和3P濃度和正常的BG11液體培養(yǎng)基，每500mL三角瓶中裝入300nL培養(yǎng)基。 藻種培養(yǎng)至對數(shù)生長期后，離心收集洗滌一次后，接種于高N、P濃度的培養(yǎng)基中，調(diào)整初始 0D值為0.05左右，然后放置于30°C、20001u X的條件下培養(yǎng)，每天搖動兩次，每隔三天測定 0D73Q吸光值。
[0105]如圖5所示:斜生柵藻在高濃度的N、P中的生長速率與BG11培養(yǎng)基中速率基本一致 在生長后期，在高對農(nóng)度培養(yǎng)基中的生長速率甚至略高于普通BG11培養(yǎng)基，說明斜生藻能夠 耐受有機(jī)污水中的高N、P濃度。此外，如下表所示高N、P濃度對藻細(xì)胞內(nèi)油脂含量沒有顯著 的影響。
[0107]因此在培養(yǎng)過程中添加一定比例的有機(jī)污水，既節(jié)約了成本，凈化了水體。收集的 細(xì)胞又可用于油脂提取，轉(zhuǎn)脂化生產(chǎn)生物柴油。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一株斜生柵藻藻株S0HNCJ2,其保藏編號為CCTCC N0:M2016253,保藏日期為2016年 5月6日，保藏單位為中國典型培養(yǎng)物保藏中心。2. -種如權(quán)利要求1所述的斜生柵藻藻株S〇HNCJ2的分離純化方法，其特征在于： 1) 將采集的水樣稀釋后均勻涂布在1.5-2%瓊脂的BG11培養(yǎng)基平板上，放置在培養(yǎng)箱中 進(jìn)行連續(xù)光照培養(yǎng)； 2) 待平板上長出單藻落后，用牙簽挑取單藻落在BG11平板上劃短線培養(yǎng)； 3) 再將所得劃短線培養(yǎng)的藻種用接種針劃Z型線進(jìn)行藻種的分離和除菌，然后用稀釋 涂平板的方法進(jìn)一步純化藻種； 4) 挑取單藻落劃短線和挑取短線藻落劃Z線交替進(jìn)行2~4次后得到純凈的單一藻落； 所述培養(yǎng)基采用淡水藍(lán)藻培養(yǎng)基BG11。3. -種如權(quán)利要求1所述的斜生柵藻的培養(yǎng)方法，其特征在于:將淡水藍(lán)藻培養(yǎng)基BG11 的N濃度降低到原來的1/4,即采用1/4 N濃度的BG11培養(yǎng)基，所述BG11培養(yǎng)基的成分及用量 如下： NaN03,0.375g K2HP〇4,0.04g MgS〇4.7H20,0.075g CaCl2.7H20,0.036g Na2C〇3,0.02g 梓檬酸，〇.〇〇6g 檸檬酸鐵，〇.〇〇6g 微量元素溶液，A5 1 mL 采用蒸餾水定容至1000 mL。4. 一種如權(quán)利要求1所述的斜生柵藻的培養(yǎng)方法，其特征在于:將淡水藍(lán)藻培養(yǎng)基BG11 的N濃度增加到原來的三倍，即采用3咐農(nóng)度的BG11培養(yǎng)基，所述BG11培養(yǎng)基的成分及用量如 下： NaN〇3,4.5g K2HP〇4,0.04g MgS(V7H2〇,0.075g CaCl2.7H20,0.036g Na2C〇3,0.02g 梓檬酸，〇.〇〇6g 檸檬酸鐵，〇.〇〇6g 微量元素溶液，A5 1 mL 采用蒸餾水定容至1000 mL。5. -種如權(quán)利要求1所述的斜生柵藻的培養(yǎng)方法，其特征在于:將淡水藍(lán)藻培養(yǎng)基BG11 的P濃度增加到原來的三倍，即采用3P濃度的BG11培養(yǎng)基，所述BG11培養(yǎng)基的成分及用量如 下： NaN〇3，1 · 5g K2HP〇4,0.12g MgS(V7H2〇,0.075g CaCl2.7H20,0.036g Na2C〇3,0.02g 梓檬酸，〇.〇〇6g 檸檬酸鐵，〇.〇〇6g 微量元素溶液，A5 1 mL 采用蒸餾水定容至1000 mL。6. 根據(jù)權(quán)利要求3、4或5所述的斜生柵藻的培養(yǎng)方法，其特征在于:使藻株在溫度15~ 40°C，光強(qiáng)500~2500 lux，pH7-9的條件下生長，培養(yǎng)至對數(shù)生長后期，藻細(xì)胞在6~12h內(nèi) 完全自然沉降，倒出上層的培養(yǎng)基，即得到高濃度的藻液。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的斜生柵藻的培養(yǎng)方法，其特征在于:培養(yǎng)溫度為30°C，光強(qiáng)為 20001ux〇8. 所述的斜生柵藻藻株S〇HNCJ2，其在1/4N BG11培養(yǎng)基中大量培養(yǎng)，生長不受影響，油 脂含量最高，獲得的含油藻細(xì)胞在轉(zhuǎn)脂化生產(chǎn)生物柴油中的應(yīng)用。9. 所述的斜生柵藻藻株S〇HNCJ2,其大量培養(yǎng)獲得的斜生柵藻S〇HNCJ2的多不飽和脂肪 酸含量較高，用于動物飼料的添加。10. 所述的斜生柵藻藻株S〇HNCJ2,其在3N和3P培養(yǎng)基中生長不受影響，其培養(yǎng)方法在 有機(jī)污染污水處理中的應(yīng)用。
【文檔編號】C12P7/64GK105969667SQ201610502815
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年6月28日
【發(fā)明人】王赟, 柯飛, 王紅強(qiáng), 屈二軍, 梁峰, 楊雨彬
【申請人】河南城建學(xué)院, 王赟