羧基麥芽糖鐵注射液及其在治療肺氣腫中的應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明公開了羧基麥芽糖鐵注射液及其在治療肺氣腫中的應(yīng)用，本發(fā)明提供的羧基麥芽糖鐵注射液中含有羧基麥芽糖鐵和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，羧基麥芽糖鐵、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時，對肺氣腫具有治療作用；羧基麥芽糖鐵和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時，治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療肺氣腫的注射液，與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【專利說明】
羧基麥芽糖鐵注射液及其在治療肺氣腫中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及羧基麥芽糖鐵注射液及其在治療肺氣腫中的 應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 羧基麥芽糖鐵是一種新型的鐵絡(luò)合物，用麥芽糊精將鐵離子穩(wěn)定地絡(luò)合在其中， 控制鐵的釋出，鐵離子能與鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和鐵蛋白結(jié)合以發(fā)揮作用，并防止釋放大量的游離 鐵，減少有毒氧化物形成。羧基麥芽糖鐵能有效提高輕到中度缺鐵性貧血患者Hb和血清鐵 蛋白濃度。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種羧基麥芽糖鐵注射液及其在治療肺氣腫中的應(yīng)用。
[0004] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實現(xiàn)的：
[0005] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物a)，
[0006]
[0007] -種羧基麥芽糖鐵注射液，包括羧基麥芽糖鐵、如權(quán)利要求1所述的化合物（I)和 藥學(xué)上可以接受的載體。
[0008] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將紅大戟粉碎，用85~95%乙 醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃 取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇取物用 大孔樹脂除雜，先用35 %乙醇洗脫8個柱體積，再用90 %乙醇洗脫12個柱體積，收集90 %洗 脫液，減壓濃縮得90%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中90%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分 離，依次用體積比為120:1、60:1、30:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個組分；（d) 步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為40:1、30:1和10:1的二氯甲烷-甲 醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體 積百分濃度為85%的甲醇水溶液等度洗脫，收集14~18個柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮 得到化合物(I)。
[0009] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用90%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0010] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為DlOl型大孔吸附樹脂。
[0011] 進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0012] 上述化合物(I)在制備治療肺氣腫的藥物中的應(yīng)用。
[0013] 上述羧基麥芽糖鐵注射液在制備治療肺氣腫的藥物中的應(yīng)用。
[0014] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0015] 本發(fā)明提供的羧基麥芽糖鐵注射液中含有羧基麥芽糖鐵和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然 產(chǎn)物，羧基麥芽糖鐵和該天然產(chǎn)物單獨(dú)作用時，對肺氣腫具有治療作用；二者聯(lián)合作用時， 對肺氣腫的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療肺氣腫的注射液。
【具體實施方式】
[0016] 下面結(jié)合實施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。
[0017] 實施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0018]分離方法：（a)將紅大戟(2kg)粉碎，用90 %乙醇熱回流提?。?5L X 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 乙酸乙酯萃取物用DlOl型大孔樹脂除雜，先用35%乙醇洗脫8個柱體積，再用90%乙醇洗脫 12個柱體積，收集90%洗脫液，減壓濃縮得90%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中90%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為120:1 (11個柱體積）、60:1 (9個柱體積）、30:1 (9 個柱體積)和15:1 (8個柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得至1」4個組分；（d)步驟(c)中組分 3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為40:1(6個柱體積）、30:1(8個柱體積)和10:1(6個 柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合 的反相硅膠分離，用體積百分濃度為85 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集14~18個柱體積洗 脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (HPLC歸一化純度大于98% )。
[0019] 結(jié)構(gòu)確證:HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z 221.1563,結(jié)合核磁特征可得分子式為 C15H24〇,不飽和度為4。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ρρπι，CDCl 3,500MHz) :Η-1α( 1.32，m)，Η-1β (1.55，m)，H-2a(1.21，m)，H-20(1.33，m)，H-3a(2.25，br，d，J=12.9Hz)，H-30(2.Ol，m)，H-5 (2.22，br，d，J = 9.OHz)，H-6a(1.88，m)，H-60(2.11，m)，H-8a(5.52，br，d，J = 7.5Hz)，H-9a (1.72，m)，H-90(1.79，m)，H-12(1.34，s)，H-13(1.39，s)，H-14(O.66，s)，H-15a(4.45，s)，H-15a(4.82, s);核磁共振碳譜數(shù)據(jù) ^(ppm，CDCl3,125MHz ):41.6(CH2，1-C)，23.8(CH2,2-C)， 36.2(CH2,3-C)，151.4(C，4-C)，44.5(CH，5-C)，29.1(CH2,6-C)，146.2(C，7-C)，126.4(CH，8-C)，38.1(CH2,9-C)，35.1(C，10-C)，75.1(C，11-C)，24.3(CH 3，12-C)，24.5(CH3，13-C)，15.5 (CH3，14-C)，105.6(CH 2，15-C)。紅外吸收光譜(3426CHT1)表明該化合物含有羥基基團(tuán)?；?物的氫譜中顯示該化合物有三個單峰甲基信號（S H1.34,1.39和0.66)，一組末端雙鍵質(zhì)子 信號（δΗ4.45和4.82)以及一個烯屬次甲基質(zhì)子信號（δ Η5.52，br，d，J = 7.5Hz)。該化合物的 碳譜顯示15個碳信號，其中有兩組雙鍵碳信號，以及一個連氧碳信號。綜合高分辨質(zhì)譜以及 核磁數(shù)據(jù)，該化合物可能為一個倍半萜類化合物。HMBC譜中，H-9/C-8，H-9/C-7，H-6/C-7，以 及H-6/C-8的相關(guān)性說明C-7和C-8為雙鍵。末端雙鍵位于C-4和C-15之間，HMBC譜中H-15 (δ η4.45)與C_3(3(；36.2)和C_5(3(；44.5)的相關(guān)性驗證了上述推論。此外，氫質(zhì)子信號3h1.34 (3H，s，H-12)和1.39(3H，s，H-13)與季碳信號&75.1的相關(guān)性表明C-Il位連有一個羥基。 NOE差譜試驗中照射H-14可以發(fā)現(xiàn)H-12，H-13有明顯增益，表明H-12、H-13和H-14為β構(gòu)型。 此外，通過NOE差譜試驗可知Η-5為α構(gòu)型，表明桉烷環(huán)為反式連接。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜 和ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn) 一步通過E⑶試驗確定，理論值與實驗值基本一致。
[0020] 該化合物化學(xué)式及碳原子編號如下：
[0021]
[0022] 實施例2:藥理作用
[0023]本實施例使用氣管一次注入彈性蛋白酶750UkgBW制備肺氣腫大鼠模型，觀察藥物 改善動物肺總?cè)萘?TVL)、平均肺泡面積、纖維橫截面積等方面的抗肺氣腫作用。
[0024] 1、材料與方法
[0025] 1.1動物
[0026] 8~10周齡SD大鼠，雌雄各半，體重170~190g。由四川省醫(yī)學(xué)科學(xué)院實驗動物研究 所提供。實驗動物設(shè)施條件:成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院動物觀察室。
[0027] 1.2試劑與樣品
[0028] 駿基麥芽糖鐵購自中國藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實施例 1〇
[0029] 1.3儀器
[0030] 用IEICa Q500MC型圖像分析儀(Leica公司，德國）。
[0031] 1.4大鼠分組及模型制備
[0032]大鼠隨機(jī)分5組，每組12只，分別為正常對照組、模型對照組、羧基麥芽糖鐵組 (80mg · kg-1K化合物（I)組(80mg · kg-1K羧基麥芽糖鐵與化合物（I)組合物組【40mg · kg一1 羧基麥芽糖鐵+40mg · kg+1化合物（I)】。正常對照組注入生理鹽水lml，其余組經(jīng)氣管一次注 入彈性蛋白酶750U/kg BW。造模并適應(yīng)環(huán)境1周后，按照上述劑量連續(xù)靜脈注射給藥7d，正 常對照組與模型對照組大鼠靜脈注射生理鹽水，每日一次。
[0033] 1.5病理檢查實驗
[0034]最后一次給藥的第2天，大鼠麻醉后脫臼處死，開胸游離氣管，取出肺臟，在25cm H2O壓力下經(jīng)氣管以10%中性福爾馬林液灌注肺臟至體積不再增大時，以排水法測肺總?cè)?量(TVL)。右下肺最大縱切面取材，HE染色，圖像分析測平均肺泡面積。
[0035] 1.6膈肌纖維型態(tài)觀察實驗
[0036]最后一次給藥的第2天，取肋膈區(qū)膈肌纖維橫斷面切片，厚ΙΟμπι，堿性ATP酶染色。 用IEICaQ500MC型圖像分析儀對快顫搐(FT)纖維、慢顫搐(ST)纖維橫斷面積定量測定。 [0037] 1.7統(tǒng)計學(xué)方法
[0038]實驗數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(x土s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計軟件進(jìn)行單因素方差 分析和t檢驗，以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
[0039] 2、實驗結(jié)果
[0040] 2.1對肺氣腫模型大鼠肺總?cè)萘俊⑵骄闻菝娣e的影響
[0041 ]與正常對照組比，模型組肺總?cè)萘俊⑵骄闻菝娣e明顯增大(P<0.01);與模型組 比，羧基麥芽糖鐵與化合物（I)組合物組總?cè)萘俊⑵骄闻菝娣e顯著減小(P<〇. 01);與模型 組比，羧基麥芽糖鐵組、化合物（I)組總?cè)萘?、平均肺泡面積減小(P<0.05)。見表1。
[0042] 2.2對肺氣腫模型大鼠膈肌纖維橫截面積的影響
[0043]與正常對照組比，模型對照組大鼠的FT明顯降低、ST明顯升高(P<0.01)。與模型 對照組比，羧基麥芽糖鐵與化合物（I)組合物組FT明顯升高、ST明顯降低(P<0.01);與模型 對照組比較，羧基麥芽糖鐵組、化合物（I)組FT升高、ST降低(P<0.05)。見表1。
[0044]表1對肺氣腫模型大鼠肺總?cè)萘俊⑵骄闻菝娣e和膈肌纖維橫截面積的影響
[0047] 彈性蛋白酶導(dǎo)致大鼠肺氣腫模型的解剖、生理特點(diǎn)與人類肺氣腫改變一致，是觀 察肺氣腫時呼吸肌改變的理想模型。本實驗觀察到肺氣腫組與對照組動物體重、膈重均無 顯著性差異，可排除營養(yǎng)因素的影響，肺氣腫組ST纖維橫截面積顯著增大。ST纖維富含肌紅 蛋白、腺粒體及氧化酶，ATP主要來源于氧化磷酸化過程，收縮時間長，不易疲勞。肺氣腫膈 肌ST纖維橫截面積顯著增大，是肺氣腫膈肌抗疲勞能力增強(qiáng)的物質(zhì)基礎(chǔ)。可認(rèn)為是膈肌負(fù) 載加重的代償性變化。呼吸肌能量供應(yīng)是影響呼吸肌收縮力的重要因素，coro慢性病程中， 由于氣道阻力增加和肺過度充氣，呼吸肌做功明顯增加，能量物質(zhì)消耗，肌肉蛋白分解供 能，致使體重下降，膈肌萎縮是其肌力下降的一個主要原因。
[0048] 結(jié)果表明，羧基麥芽糖鐵、化合物（I)單獨(dú)作用時，對肺氣腫具有治療作用;羧基麥 芽糖鐵和化合物(I)聯(lián)合作用時，治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療肺氣腫的注射液。
[0049] 上述實施例的作用在于說明本發(fā)明的實質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。
[0050] 本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替 換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種羧基麥芽糖鐵注射液，其特征在于:包括羧基麥芽糖鐵、如權(quán)利要求1所述的化 合物(I)和藥學(xué)上可以接受的載體。3. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將紅 大戟粉碎，用85~95%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙 酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用35%乙醇洗脫8個柱體積，再用90%乙醇洗脫 12個柱體積，收集90%洗脫液，減壓濃縮得90%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中90%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為120:1、60:1、30:1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度 洗脫得到4個組分；（d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為40:1、30:1 和10:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合 的反相硅膠分離，用體積百分濃度為85 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集14~18個柱體積洗 脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用90%乙醇熱回 流提取，合并提取液。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為DlOl型 大孔吸附樹脂。6. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。7. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療肺氣腫的藥物中的應(yīng)用。8. 權(quán)利要求2所述的羧基麥芽糖鐵注射液在制備治療肺氣腫的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】C07C33/14GK106008165SQ201610331757
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月18日
【發(fā)明人】秦勇, 徐成, 馬甜甜, 周自桂, 王 琦, 陳建芳
【申請人】江蘇神龍藥業(yè)有限公司