一種新的倍半萜化合物及其在貧血中的應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種新的倍半萜化合物及其在貧血中的應(yīng)用，提供了該化合物結(jié)構(gòu)，含其的藥物組合物及其制備方法和應(yīng)用。該化合物為首次報(bào)道，是一種結(jié)構(gòu)新穎的倍半萜化合物，可從蒙古黃芪根中提取、分離純化得到。該化合物對(duì)溶血性貧血或再生障礙性貧血具有治療作用，可以開(kāi)發(fā)成治療溶血性貧血或再生障礙性貧血的藥物，為臨床上溶血性貧血和再生障礙性貧血的治療提供新的治療方案。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種新的倍半萜化合物及其在貧血中的應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于藥物技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種新的天然產(chǎn)物，具體涉及一種從蒙古黃芪中 分離得到的新的倍半萜化合物及其在貧血中的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 蒙古黃芪屬于薔薇亞綱、豆科植物，是中國(guó)特有植物。分布于黑龍江、吉林、內(nèi)蒙 古、河北、山西。
[0003] 生藥蒙古黃芪為雙子葉植物藥豆科植物蒙古黃芪的根。根橫切面，木栓層為多列 木栓細(xì)胞。皮層為2-3列切向延長(zhǎng)細(xì)胞。韌皮部纖維成束或單個(gè)散在，纖維壁厚，非木化或微 木化，與篩管群及韌皮薄壁細(xì)胞呈交互排列;韌皮射線(xiàn)寬2-5列細(xì)胞，外側(cè)常彎曲，有裂隙； 近皮層處有時(shí)可見(jiàn)木栓組織環(huán)（縱向呈管狀)及厚壁細(xì)胞。形成層成環(huán)。木質(zhì)部導(dǎo)管單個(gè)散 在或2-3個(gè)相聚;木纖維成束;木薄壁細(xì)胞具單紋孔。本品薄壁細(xì)胞含淀粉粒。（1)蒙古黃苗 粉末:米黃色。①纖維多成束，細(xì)長(zhǎng)，稍彎曲，直徑8_30μπι，壁極厚，非木化或微木化，表面有 較多不規(guī)則縱裂紋，孔溝不明顯，纖維束斷端?？v裂成帚狀。②具緣紋孔導(dǎo)管直徑24-160μ m，具緣紋孔排列緊密，可見(jiàn)3-10個(gè)紋孔連成線(xiàn)狀，也有具緣紋孔橫向延長(zhǎng)成梯紋狀。另有較 細(xì)的網(wǎng)紋導(dǎo)管。③淀粉粒單粒類(lèi)圓形、橢圓形或類(lèi)腎形，直徑3_13μπι;復(fù)粒由2-4分粒組成。 ④木栓細(xì)胞微黃綠色，表面觀多角形或類(lèi)多角形，垂周壁薄，有的細(xì)波狀彎曲。⑤厚壁細(xì)胞 較少，直徑約至60μπι，壁木化，層紋可見(jiàn)，孔溝稀少。（2)膜莢黃芪粉末:灰棕色。纖維直徑6-22μπι，斷端較平截;具緣紋孔導(dǎo)管有的顯橙黃色，直徑約至224μπι，斷端較平截;具緣紋孔導(dǎo) 管有的顯橙色，直徑約至224μηι，也有的內(nèi)含橙紅色色素塊，或色素塊，或色素塊散出；淀粉 粒較少;木栓細(xì)胞無(wú)色或黃棕色。
[0004] 關(guān)于蒙古黃芪化學(xué)成分的研究很多，目前尚未從蒙古黃芪中分離得到對(duì)于貧血治 療效果顯著的化學(xué)成分。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的第一目的在于提供一種從蒙古黃芪的干燥根中分離得到的倍半萜化合 物，該化合物為首次從自然界發(fā)現(xiàn)；
[0006] 本發(fā)明的第二目的在于提供上述倍半萜的制備方法；
[0007] 本發(fā)明的第三目的在于提供上述倍半萜的醫(yī)藥用途。
[0008] 本發(fā)明的上述目的是通過(guò)下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0009] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物a)，
[0010]
[0011] -種藥物組合物，含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物（I)和藥學(xué)上可接受 的載體。
[0012] 所述的化合物（I)的制備方法包含以下操作步驟：（a)將蒙古黃芪的干燥根粉碎， 用乙醇水溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和 的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正 丁醇取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用15%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用75%乙醇洗脫14個(gè)柱體積， 收集75 %洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中75 %乙醇洗脫濃縮物用 正相硅膠分離，依次用體積比為90:1、50:1、30 :1和15:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得至1」4個(gè) 組分；（d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為40:1、30:1和20:1的二 氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠 分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~13個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液 減壓濃縮得到化合物(I)。
[0013] 進(jìn)一步地，所述大孔樹(shù)脂為DlOl型大孔吸附樹(shù)脂。
[0014] 進(jìn)一步地，步驟(a)中所述乙醇水溶液為70~90 %乙醇。
[0015] 進(jìn)一步地，步驟(a)中所述乙醇水溶液為80 %乙醇。
[0016] 所述的化合物(I)在制備治療溶血性貧血的藥物中的應(yīng)用。
[0017] 所述的藥物組合物在制備治療溶血性貧血的藥物中的應(yīng)用。
[0018] 所述的化合物(I)在制備治療再生障礙性貧血的藥物中的應(yīng)用。
[0019] 所述的藥物組合物在制備治療再生障礙性貧血的藥物中的應(yīng)用。
[0020] 本發(fā)明化合物用作藥物時(shí)，可以直接使用，或者以藥物組合物的形式使用。
[0021] 該藥物組合物含有治療有效量的本發(fā)明化合物（I)，其余為藥物學(xué)上可接受的、對(duì) 人和動(dòng)物無(wú)毒和惰性的可藥用載體和/或賦形劑。
[0022]所述的可藥用載體或賦形劑是一種或多種選自固體、半固體和液體稀釋劑、填料 以及藥物制品輔劑。將本發(fā)明的藥物組合物以單位體重服用量的形式使用。本發(fā)明藥物可 通過(guò)口服或注射的形式施用于需要治療的患者。用于口服時(shí)，可將其制成片劑、緩釋片、控 釋片、膠囊、滴丸、微丸、混懸劑、乳劑、散劑或顆粒劑、口服液等;用于注射時(shí)，可制成滅菌的 水性或油性溶液、無(wú)菌粉針、脂質(zhì)體或乳劑等。
[0023]本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0024]本發(fā)明提供的化合物為首次報(bào)道，是一種倍半萜類(lèi)化合物，具有治療溶血性貧血 和再生障礙性貧血的作用，可以開(kāi)發(fā)成治療溶血性貧血和再生障礙性貧血的藥物，為臨床 上溶血性貧血和再生障礙性貧血的治療提供新的治療方案。
【具體實(shí)施方式】
[0025]下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性?xún)?nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作了詳細(xì)說(shuō)明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì) 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0026]實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0027]制備方法：（a)將蒙古黃芪的干燥根（2kg)粉碎，用80 %乙醇熱回流提?。?5L X 3 次），合并提取液，濃縮至無(wú)醇味(3L)，依次用石油醚(3LX3次）、乙酸乙酯(3LX3次)和水飽 和的正丁醇(3LX3次)萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b) 步驟(a)中乙酸乙酯萃取物用DlOl型大孔樹(shù)脂除雜，先用15%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用 75 %乙醇洗脫14個(gè)柱體積，收集75 %洗脫液，減壓濃縮得75 %乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b) 中75 %乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為90 :1 (10個(gè)柱體積）、50:1 (8個(gè)柱 體積）、30:1(10個(gè)柱體積)和15:1(8個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得至1」4個(gè)組分；（d) 步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為40:1(10個(gè)柱體積）、30:1(8個(gè)柱 體積)和20:1(6個(gè)柱體積）的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用 十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集 10~13個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I)(550mg，HPLC歸一化純度大于 98%)〇
[0028] 結(jié)構(gòu)確證:HR-ESI-MS顯示[M+H]+為m/z 219.1661，結(jié)合核磁特征可得分子式為 C15H22O，不飽和度為5。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ( ppm，CDCl3，500MHz): H-2 (6.46，s)，H-3 (6.34， s)，H-5(2.11，m)，H-6a(1.71，m)，H-60(1.32，m)，H-8a(1.51，m)，H-80(1.49，m)，H-9a(1.31， m)，Η-9β( 1.48，m)，H-12( 1.13,s)，H-13( 1.23,s)，H-14( 1.26,s)，H-15( 1.79,s);核磁共振 碳譜數(shù)據(jù)Sc(ppm，CDCl3,125MHz) :142.1 (C，l-C)，124.1 (CH，2-C)，123.1 (CH，3-C)，144.2(C， 4-C)，57.8(CH，5-C)，32.4(CH2,6-C)，76.9(C，7-C)，35.1(CH2,8-C)，27.1(CH2,9-C)，38.1 (C，10-C)，33.6(C，n-C)，28.4(CH 3，12-C)，27.1(CH3，13-C)，28.4(CH3，14-C)，29.4(CH 3， 15-C)。紅外吸收光譜(3372CHT1)表明該化合物含有羥基基團(tuán)?；衔锏臍渥V中顯示該化合 物有四個(gè)單峰甲基信號(hào)（ShI. 13,1.23,1.26和1.79)以及兩個(gè)烯烴質(zhì)子信號(hào)（δΗ6.46和 6.34)。該化合物的碳譜顯示15個(gè)碳信號(hào)，其中有兩組雙鍵碳信號(hào)，以及一個(gè)連氧碳信號(hào)。綜 合高分辨質(zhì)譜以及核磁數(shù)據(jù)，該化合物可能為一個(gè)倍半萜類(lèi)化合物。首先通過(guò) 1H-1H COSY， HSQC，HMBC譜連接出一個(gè)愈創(chuàng)木烷型倍半萜類(lèi)化合物骨架。HMBC譜中，H-15/C-3，H-15/C-4， H-3/C-4以及H-5/C-4的相關(guān)性說(shuō)明C-3和C-4位為雙鍵，H-2/C-l，H-3/C-l以及H-14/C-1的 相關(guān)性證明C-I和C-2之間存在另一個(gè)雙鍵。同時(shí)，H-6/C-7，H-8/C-7，H-12/C-7，H-13/C-7之 間的HMBC相關(guān)性，以及C-7的化學(xué)位移（S C76.9)說(shuō)明C-7位為連氧碳。此外，H-14/C-11，H-12/C-10，H-9/C-ll以及H-13/C-10的相關(guān)性表明C-IO和C-Il為碳碳連接。NOE差譜試驗(yàn)中照 射H-5可以發(fā)現(xiàn)H-14，H_3a有明顯增益，表明H-5和H-14為a構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和 ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類(lèi)型核磁數(shù)據(jù)，可基本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一 步通過(guò)ECD試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。
[0029]該化合物的化學(xué)結(jié)構(gòu)式和碳原子編號(hào)如下：
[0030]
[0031 ]實(shí)施例2:對(duì)溶血性貧血的治療作用
[0032]本實(shí)施例使2 %苯肼制備貧血小鼠模型，觀察藥物增加紅細(xì)胞數(shù)，增加血紅蛋白含 量等方面的抗貧血作用。
[0033] 1、材料與方法
[0034] 1.1動(dòng)物
[0035] 昆明小鼠，體重18~22g，雌雄各半，由河南省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。
[0036] 1.2試劑與樣品
[0037] 化合物(I)自制，制備方法見(jiàn)實(shí)施例1。鹽酸苯肼購(gòu)自Sigma公司。
[0038] 1.3儀器
[0039] 血細(xì)胞分析儀NIKON KOHDEN CelItac為日本生產(chǎn)；pH計(jì)HANNApH211由意大利生 產(chǎn)。
[0040] 1.4小鼠分組及模型制備
[0041] 隨機(jī)分為3組，每組12只，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組和化合物（I)組(80mg· kg-1)。適應(yīng)環(huán)境1周后，化合物（I)組按照上述劑量連續(xù)灌胃給藥7d，正常對(duì)照組與模型對(duì)照 組小鼠灌胃給予純化水；第8天開(kāi)始，于每天灌胃給藥45min后除正常對(duì)照組給予等體積 0.9 %氯化鈉溶液外，其余各組均腹腔注射苯肼(30mg · kg^1)，分兩次，間隔時(shí)間為24h。 [0042] 1.5外周血紅細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白含量測(cè)定實(shí)驗(yàn)
[0043]第二次注射苯肼后2h，將尾靜脈采集的IOyL外周血加入2mL稀釋液內(nèi)混勻，進(jìn)行外 周血紅細(xì)胞（red blood cell，RBC)數(shù)量、血紅蛋白（hematoglobin，HGB)含量等指標(biāo)的檢 測(cè)。
[0044] 1.6紅細(xì)胞壓積測(cè)定實(shí)驗(yàn)
[0045] 將尾靜脈采集的IOyL外周血加入2mL稀釋液內(nèi)混勻，進(jìn)行紅細(xì)胞壓積 (hematocrit，Hct，容積％ )的檢測(cè)。
[0046] 1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0047]實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差 分析和t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0048] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0049] 2.1對(duì)貧血模型小鼠 RBC數(shù)量、HGB含量的影響
[0050]與模型對(duì)照組比較，化合物（I)組RBC數(shù)量、HGB含量均顯著增加(P<0.01)。
[0051 ] 結(jié)果見(jiàn)表1。
[0052] 2.2對(duì)貧血模型小鼠 Hct的影響
[0053]與模型對(duì)照組比較，化合物（I)組Hct顯著增加 (P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0054] 表1對(duì)貧血模型小鼠 RBC數(shù)量、HGB含量和He t的影響
[0056]貧血是指外周血液中單位容積內(nèi)血紅蛋白濃度、紅細(xì)胞計(jì)數(shù)、紅細(xì)胞壓積低于同 年齡、同性別正常個(gè)體的最低值。苯肼作為一種溶血?jiǎng)?，具有起效快、作用?qiáng)、重復(fù)性好、作 用強(qiáng)度隨注射劑量的加大而增強(qiáng)的特點(diǎn)。進(jìn)入小鼠體內(nèi)后，苯肼作用于紅細(xì)胞膜，加速膜表 面亮氨酸、賴(lài)氨酸及組氨酸的水解，使大量紅細(xì)胞迅速遭到破壞。同時(shí)，苯肼可選擇性地氧 化膜骨架和α珠蛋白，并將磷脂酰絲氨酸易位至紅細(xì)胞表面，導(dǎo)致紅細(xì)胞變形性降低，增強(qiáng) 紅細(xì)胞黏附到細(xì)胞外基質(zhì)的能力。上述作用相互疊加，使得紅細(xì)胞的破壞速度遠(yuǎn)大于機(jī)體 紅細(xì)胞再生的能力，導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生溶血性貧血，RBC、HGB、Hct均顯著降低。
[0057]結(jié)果表明，化合物（I)對(duì)溶血性貧血具有治療作用，可開(kāi)發(fā)成治療溶血性貧血的藥 物。
[0058] 實(shí)施例3:對(duì)再生障礙性貧血的治療作用
[0059] 本實(shí)施例使用皮下注射乙酰苯肼與腹腔注射環(huán)磷酰胺相結(jié)合的方法制備再生障 礙性貧血小鼠模型，觀察藥物增加血小板(PLT)計(jì)數(shù)，提高血清多能集落刺激因子(Mul t i-CSF)、紅細(xì)胞生成素(EPO)的含量等方面的抗再生障礙性貧血的作用。
[0060] 1、材料與方法
[0061 ] 1.1動(dòng)物
[0062] ICR小鼠，雌雄各半，體重18g~22g，吉林大學(xué)實(shí)動(dòng)物中心提供。
[0063] 1.2試劑與樣品
[0064] 化合物（I)自制，制備方法見(jiàn)實(shí)施例1。復(fù)方阿膠漿：山東東阿阿膠股份有限公司產(chǎn) 品；多能集落刺激因子(Multi-CSF)檢測(cè)試劑盒和促紅細(xì)胞生成素(EPO)檢測(cè)試劑盒均為美 國(guó)R&D公司產(chǎn)品；注射用環(huán)磷酰胺:Baxter Oncology GmbH公司產(chǎn)品；乙酰苯肼：國(guó)藥集團(tuán)化 學(xué)試劑有限公司。
[0065] 1.3儀器
[0066] 酶標(biāo)儀(BI0RAD-680型，日本）；血液分析儀(MEK-6318K型，日本）；臺(tái)式高速冷凍離 心機(jī)(Biofuge stratos型，德國(guó)）；恒溫箱(ULT1386-3-V41 型，美國(guó)）。
[0067] 1.4小鼠分組及模型制備
[0068] 小鼠隨機(jī)分為4組，每組12只，分別為正常對(duì)照組、模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組(復(fù)方 阿膠衆(zhòng)，50mg · kg^1)和化合物（I)組(80mg · kg^1)。采用皮下注射乙酰苯肼與腹腔注射環(huán)磷 酰胺相結(jié)合的方法復(fù)制貧血模型，具體方法:除空白對(duì)照組外，其余組動(dòng)物于實(shí)驗(yàn)第2日，經(jīng) 皮下注射乙酰苯肼20mg · kg^1，于第4日，再次皮下注射乙酰苯肼40mg · kg^1，同時(shí)從第4日 起，動(dòng)物經(jīng)腹腔注射環(huán)磷酰胺40mg · kg+1，每日1次，連續(xù)4日?？瞻讓?duì)照組動(dòng)物皮下注射等容 量生理鹽水。于實(shí)驗(yàn)第1天起開(kāi)始按上述劑量灌胃給予受試藥物，空白對(duì)照組與模型對(duì)照組 小鼠給予等容量蒸餾水。每天1次，連續(xù)給藥14天。
[0069] 1.5外周血象測(cè)定實(shí)驗(yàn)
[0070] 末次給藥后30分，眶靜脈取血，血液分析儀檢測(cè)外周血，另取血液置入離心管管 內(nèi)，室溫靜置411后，250(^/1^11離心1〇1^11，分離出血清，-20°(：冰箱保存?zhèn)溆谩Ｑ悍治鰞x檢 測(cè)血小板(PLT)變化。
[0071 ] 1.6造血相關(guān)因子測(cè)定實(shí)驗(yàn)
[0072]采用酶聯(lián)免疫法檢測(cè)動(dòng)物血清多能集落刺激因子(Multi-CSF)，促紅細(xì)胞生成素 (EPO)的含量。
[0073] 1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0074]實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差 分析和t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0075] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0076] 2.1對(duì)再生障礙性貧血模型動(dòng)物外周血象的影響
[0077]與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠 PLT明顯減少(P<0.01);與模型對(duì)照組比較， 化合物（I)組和復(fù)方阿膠漿組PLT明顯增加(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0078] 2.2對(duì)再生障礙性貧血模型小鼠血清Multi-CSF含量及血清EPO含量的影響
[0079] 與正常對(duì)照組比較，模型對(duì)照組小鼠的血清Multi-CSF含量(pg/ml)明顯降低(P< 0.01)，血清EPO含量也明顯降低(P<0.01)。與模型對(duì)照組比較，化合物（I)組和復(fù)方阿膠漿 組小鼠的血清Multi-CSF含量明顯升高(P<0.01)。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0080] 表1對(duì)再生障礙性貧血模型小鼠 PLT、血清Multi-CSF含量及血清EPO含量的影響
[0082]機(jī)體造血是一個(gè)極其復(fù)雜的過(guò)程，其中與造血干祖細(xì)胞、骨髓造血的微環(huán)境和相 關(guān)造因子的作用關(guān)系密切，貧血主要由于骨髓紅系造血干祖細(xì)胞受到損害，或造血的微環(huán) 境改變而引起，表現(xiàn)為外周血紅細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白含量、紅細(xì)胞比容積異常。本研究外周 血檢測(cè)表明，模型組動(dòng)物紅細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白含量、紅細(xì)胞比容均明顯低于同期對(duì)照組， 說(shuō)明乙酰苯肼和環(huán)磷酰胺聯(lián)合給藥不僅可以造成血細(xì)胞的大量破壞，同時(shí)可能對(duì)骨髓造血 功能有明顯的抑制。各給藥組動(dòng)物紅細(xì)胞數(shù)量、血紅蛋白含量、紅細(xì)胞比容增加，表明參紅 補(bǔ)血顆粒對(duì)動(dòng)物的貧血狀態(tài)有明顯的改善作用。
[0083]造血因子在骨髓造血功能中起重要的調(diào)節(jié)作用，其中多能集落刺激因子(Multi-CSF)是造血干細(xì)胞增殖分化的正性調(diào)節(jié)因子。它通過(guò)與靶細(xì)胞表面的受體結(jié)合傳遞生長(zhǎng)、 分化信號(hào)，調(diào)控造血干細(xì)胞生存、增殖及向各系血細(xì)胞分化、成熟，主要由活化的CD4+T細(xì)胞 產(chǎn)生。此外，Multi-CSF還可調(diào)節(jié)多種成熟細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化及相關(guān)的基因表達(dá)，是造血功能 調(diào)節(jié)的重要影響因子。
[0084]上述結(jié)果表明，化合物（I)對(duì)再生障礙性貧血具有治療作用，可以開(kāi)發(fā)成治療再生 障礙性貧血的藥物。
[0085] 實(shí)施例4:片劑的制備
[0086] 按實(shí)施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有機(jī)酸如酒石酸、或檸檬酸或甲酸或 乙二酸等、無(wú)機(jī)酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，按其與賦形劑重量比為1:10的比例加入 賦形劑，制粒壓片。
[0087]實(shí)施例5: 口服液的制備
[0088]按實(shí)施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有機(jī)酸如酒石酸、或檸檬酸或甲酸或 乙二酸等、無(wú)機(jī)酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，按常規(guī)口服液制法制成口服液。
[0089]實(shí)施例6:膠囊劑或顆粒劑的制備
[0090]按實(shí)施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有機(jī)酸如酒石酸、或檸檬酸或甲酸或 乙二酸等、無(wú)機(jī)酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，按其與賦形劑重量比為1:9的比例加入賦 形劑，制成膠囊或顆粒劑。
[0091 ]實(shí)施例7:注射液的制備
[0092]按實(shí)施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有機(jī)酸如酒石酸、或檸檬酸或甲酸或 乙二酸等、無(wú)機(jī)酸如鹽酸或磷酸制成的鹽，按常規(guī)加注射用水，精濾，灌封滅菌制成注射液。 [0093]實(shí)施例8:無(wú)菌粉針的制備
[0094] 按實(shí)施例1方法先制得化合物（I)，以及利用有機(jī)酸如酒石酸、或檸檬酸或甲酸或 乙二酸等、無(wú)機(jī)酸如鹽酸或硫酸或磷酸制成的鹽，將其溶于無(wú)菌注射用水中，攪拌使溶，用 無(wú)菌抽濾漏斗過(guò)濾，再無(wú)菌精濾，分裝于安瓿中，低溫冷凍干燥后無(wú)菌熔封得粉針劑。
[0095] 上述實(shí)施例的作用在于說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性?xún)?nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種藥物組合物，其特征在于:含有治療有效量的權(quán)利要求1所述的化合物（I)和藥 學(xué)上可接受的載體。3. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將蒙 古黃芪的干燥根粉碎，用乙醇水溶液熱回流提取，合并提取液，濃縮至無(wú)醇味，依次用石油 醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃 取物；（b)步驟(a)中正丁醇取物用大孔樹(shù)脂除雜，先用15%乙醇洗脫8個(gè)柱體積，再用75% 乙醇洗脫14個(gè)柱體積，收集75%洗脫液，減壓濃縮得75%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中 75%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為90 :1、50:1、30 :1和15:1的二氯甲 烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分3用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比 為40:1、30:1和20:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷 基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為70%的甲醇水溶液等度洗脫，收集10~13 個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹(shù)脂為DlOl型 大孔吸附樹(shù)脂。5. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中所述乙醇水溶 液為70~90 %乙醇。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中所述乙醇水溶 液為80 %乙醇。7. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療溶血性貧血的藥物中的應(yīng)用。8. 權(quán)利要求2所述的藥物組合物在制備治療溶血性貧血的藥物中的應(yīng)用。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療再生障礙性貧血的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2所述的藥物組合物在制備治療再生障礙性貧血的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C07C35/37GK106008168SQ201610369587
【公開(kāi)日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年5月27日
【發(fā)明人】李月升
【申請(qǐng)人】李月升