一種以枸杞蜂花粉為原料制備富鋅中性糖蛋白的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種熱水浸提、制備富鋅枸杞蜂花粉中性糖蛋白的方法。該方法包括花粉的烘干，粉碎，熱水浸提，抽濾并離心取上清，減壓濃縮，乙醇沉淀，離心取沉淀，沉淀復溶，透析，冷凍干燥，DEAE?52柱層析等工序制備枸杞蜂花粉中性糖蛋白。采用ICP?AES檢測分析枸杞蜂花粉中性糖蛋白中微量元素的含量，證明了制備的中性糖蛋白為一種富鋅中性糖蛋白。本發(fā)明的枸杞蜂花粉中性糖蛋白的制備方法具有提取工藝簡單、溫和、成本低、不污染環(huán)境等優(yōu)點，且制備的中性糖蛋白富含鋅元素，在保健食品及醫(yī)藥行業(yè)具有廣闊的應(yīng)用前景。
【專利說明】
一種以枸杞蜂花粉為原料制備富鋅中性糖蛋白的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及從茄科枸杞屬枸杞的蜂花粉中提取相關(guān)成分的技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一 種富鋅元素的中性糖蛋白的制備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 枸杞為前科枸杞屬多年生灌木，在我國主要分布于寧夏、甘肅、新疆、河北、陜西等 地。枸杞既是一種傳統(tǒng)的中藥藥材，又是一種營養(yǎng)滋補品?，F(xiàn)代研究表明，枸杞里含有眾多 的功能成分，如枸杞多糖、多酚、維生素、不飽和脂肪酸、留醇類及萜類等，這些功能成分與 枸杞具有的抗氧化、降血糖、抗腫瘤、抗炎等活性作用有著密切的聯(lián)系。枸杞蜂花粉作為枸 杞植物的遺傳基因源，具有抗衰老、提高免疫力、增強大腦發(fā)育、促進胃腸消化等作用。近年 來，關(guān)于枸杞蜂花粉中活性成分的研究逐漸增多，但迄今為止，國內(nèi)外對于枸杞蜂花粉中糖 蛋白的提取制備研究鮮見報道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明旨在提供一種低成本、無污染、高效便捷的制備富鋅中性糖蛋白的方法：
[0004] (1)將枸杞蜂花粉置于60°C下烘干，粉碎，過60目篩，得到顆粒均勻的粉碎物；
[0005] (2)將步驟（1)制得的粉碎物，按液料比20mL/g，加去離子水進行熱水浸提，提取溫 度為90°C，時間4h，提取次數(shù)2次，得到提取液；
[0006] (3)將步驟(2)所得到的提取液抽濾、離心(5000rpm，10min)，得到上清液；
[0007] (4)將步驟(3)所得上清液在45°C條件下，減壓濃縮至合適的體積，然后在濃縮液 中加4倍體積的95 %乙醇，4 °C沉淀24h，離心(4000rpm，15min)取沉淀；
[0008] ( 5 )將步驟（4)所得沉淀物用合適體積的去離子水溶解，并裝入8 0 0 0 KDa~ 14000Kda的透析袋中透析3天；
[0009] (6)將步驟(5)所得的透析液于45°C下濃縮至合適體積，并凍干得到枸杞蜂花粉糖 蛋白粗品；
[0010] (7)稱取一定量的糖蛋白粗品，用去離子水溶解，上樣于DEAE-52纖維素柱，并用去 離子水、0. lmol/L NaCl和0.3mol/L NaCl溶液洗脫;洗脫液分別用苯酚-硫酸法，紫外分光 光度法隔管追蹤檢測其中的多糖和蛋白質(zhì)含量;結(jié)果去離子水洗脫出來的組分1為一種中 性糖蛋白，0. lmol/L NaCl洗脫出來組分2為一種酸性糖蛋白，0.3mol/L NaCl洗脫出來的組 分3為另外一種酸性糖蛋白；然后將去離子水洗脫出來的中性糖蛋白組分收集，將液體減壓 濃縮至合適的體積，并用去離子水透析3天，濃縮后冷凍干燥制得枸杞蜂花粉中性糖蛋白。 制備的中性糖蛋白為白色絮狀物，其中多糖含量為50.41 %，蛋白質(zhì)含量為1.64% ;
[0011] (8)將步驟(7)所得中性糖蛋白用分子排阻色譜檢測其純度，得到單一對稱峰型， 表明得到的中性糖蛋白為較純品；
[0012] 制備的枸杞蜂花粉中性糖蛋白為白色絮狀物，ICP-AES檢測出其中鋅元素的含量 為6.97yg/mg，遠高于中性糖蛋白中其他微量元素的含量。
[0013] 2、根據(jù)專利要求1所述的一種熱水提取富鋅中性糖蛋白的方法，其特征在于:所述 步驟(2)的液料比20mL/g，提取溫度90 °C，提取時間4h，提取次數(shù)2次。
【附圖說明】
[0014] 圖1枸杞蜂花粉糖蛋白粗品的DEAE凝膠柱梯度洗脫曲線
[0015] 圖2枸杞蜂花粉中性糖蛋白分子排阻色譜圖
[0016] 圖3枸杞蜂花粉原料、糖蛋白粗品、中性糖蛋白中微量元素含量對比圖
【具體實施方式】
[0017] 下面通過實施例，對本發(fā)明作進一步描述。
[0018] 實施例1:
[0019] (1)將枸杞蜂花粉置于60°C下烘干，粉碎，過60目篩，得到顆粒均勻的粉碎物；
[0020] (2)將步驟（1)制得的粉碎物，按液料比20mL/g，加去離子水進行熱水浸提，提取溫 度為90°C，時間4h，提取次數(shù)2次，得到提取液；
[0021] (3)將步驟(2)所得到的提取液用真空栗抽濾、并在5000rpm的條件下離心10min， 得到上清液；
[0022] (4)將步驟(3)所得上清液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，在45°C條件下，減壓濃縮至合適的體積， 然后往濃縮液中加4倍體積的95%乙醇，4°C條件下沉淀24h，接著在4000rpm的條件下離心 15min，并取沉淀；
[0023] (5)將步驟(4)所得沉淀物用合適體積的去離子水溶解，裝入8000~14000Kda的透 析袋中透析3天，在透析過程中每隔一段時間更換新的去離子水進行透析；
[0024] (6)將步驟(5)所得的透析液于用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀于45°C條件下，濃縮至合適體積，并 凍干得到枸杞蜂花粉中性糖蛋白粗品；
[0025] (7)將步驟(6)所得糖蛋白粗品溶解后，上樣于DEAE-52纖維素柱，并用去離子水、 0. lmol/L NaCl和0.3mol/L NaCl溶液洗脫;洗脫液分別用苯酚-硫酸法，紫外分光光度法隔 管追蹤檢測其中的多糖和蛋白質(zhì)含量;結(jié)果去離子水洗脫出來的組分1為一種中性糖蛋白， 0. lmol/L NaCl洗脫出來的組分2為一種酸性糖蛋白，0.3mol/L NaCl洗脫出來的組分3為另 外一種酸性糖蛋白；然后將去離子水洗脫出來的組分1收集，并將收集液減壓濃縮至合適的 體積，去離子水透析3天，濃縮后冷凍干燥，得到枸杞蜂花粉中性糖蛋白；
[0026]制備的中性糖蛋白為白色絮狀物，采用苯酚硫酸法以及考馬斯亮藍法測定樣中總 糖和蛋白質(zhì)的含量，其總糖含量為50.41 %，蛋白質(zhì)含量為1.64%。選取一定量的中性糖蛋 白溶于去離子水，用分子排阻色譜檢測其純度，得到單一對稱峰型，表明得到的中性糖蛋白 為較純品。
[0027] 實施例2:
[0028]枸杞蜂花粉原料、糖蛋白粗品、中性糖蛋白中礦物元素含量的測定
[0029] (1)對枸杞蜂花粉原料、糖蛋白粗品、中性糖蛋白進行微波消解
[0030]稱取枸杞蜂花粉原料、糖蛋白粗品、中性糖蛋白各約50mg，設(shè)置3個平行，分別加入 5ml的優(yōu)級純濃硝酸，置于High Performance Microwave Digest System-ETOHS one中消 解，其消解條件為：
[0031]
[0032] 消解的樣品分別用去離子水定容于25ml的容量瓶中備用。
[0033] (2)礦物元素標品的配置
[0034]將各微量元素單標(濃度為lOGOμg/ml)，先配成濃度均為lOOμg/ml的次級母液;然 后將微量元素36、211、？6、111、〇1^1配置成各濃度梯度的混標，介質(zhì)為5%顯03，其濃度梯度 %0μg/ml、0 · 2μg/ml、0 · 5iig/ml、liig/ml、2μg/ml、5iig/ml。
[0035] (3)ICP_AES 分析
[0036] 將上述消解的枸杞蜂花粉原料、糖蛋白粗品、中性糖蛋白用ICP-AES分析其中微量 元素的含量。
[0037] 從由圖3中可以看出，枸杞蜂花粉中含有眾多的微量元素，且相比于枸杞蜂花粉原 料和糖蛋白粗品，枸杞蜂花粉中性糖蛋白中鋅元素的含量更高；另外，在枸杞蜂花粉中性糖 蛋白中，鋅元素的含量要明顯高于其他微量元素的含量，其含量可高達6.97yg/mg，這表明 杞花粉中性糖蛋白為一種富鋅糖蛋白。
[0038] 綜上所述僅為本發(fā)明的較佳施例而已，并非用來限定本發(fā)明的實施范圍。即凡依 本發(fā)明申請專利范圍的內(nèi)容所做的等效變化與修飾都應(yīng)為本發(fā)明的技術(shù)范疇。
【主權(quán)項】
1. 一種以枸杞蜂花粉為原料制備富鋅中性糖蛋白的方法，其特征在于包括以下操作步 驟： (1) 將枸杞蜂花粉置于60°C下烘干，粉碎，過60目篩，得到顆粒均勻的粉碎物； (2) 將步驟（1)制得的粉碎物，按液料比20mL/g，加去離子水進行熱水浸提，提取溫度為 90°C，時間4h，提取次數(shù)2次，得到提取液； (3) 將步驟⑵所得到的提取液抽濾、在5000rpm離心機里離心10min，獲到上清液； (4) 將步驟(3)所得上清液濃縮到合適的體積，然后往濃縮液中加4倍體積的95%乙醇， 4°C沉淀24h，在4000rpm離心機里離心15min，然后取沉淀； (5) 將步驟(4)所得沉淀物用合適體積的去離子水溶解，并裝入8000~14000Kda的透析 袋中透析3天； (6) 將步驟(5)所得的透析液于45°C下濃縮至合適體積，并凍干得到枸杞蜂花粉糖蛋白 粗品； (7) 將步驟（6)所得糖蛋白粗品溶解后，上樣于DEAE-52纖維素柱，并用去離子水、 0. lmol/L NaCl和0.3mol/L NaCl溶液洗脫;洗脫液分別用苯酚-硫酸法，紫外分光光度法隔 管檢測其中的多糖和蛋白質(zhì)，去離子水洗脫出來的組分1是一種中性糖蛋白，O.lmol/L NaCl洗脫出來的組分2是一種酸性糖蛋白，0.3mol/L NaCl洗脫出來的組分3是另外一種酸 性糖蛋白；然后將去離子水洗脫出來的組分1收集，并將液體減壓濃縮至合適的體積，去離 子水透析3天，濃縮后冷凍干燥，得到枸杞蜂花粉中性糖蛋白。制備的中性糖蛋白為白色絮 狀物，其中多糖含量為50.41 %，蛋白質(zhì)含量為1.64% ; (8) 將步驟(7)所得中性糖蛋白用分子排阻色譜檢測其純度，峰型單一對稱，表明得到 的中性糖蛋白為較純品； 制備的枸杞蜂花粉中性糖蛋白為白色絮狀物，用ICP-AES檢測蜂花粉中微量元素的含 量，結(jié)果顯示，其中性糖蛋白中鋅元素的含量為6.97yg/mg，遠高于該糖蛋白中其他微量元 素的含量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種熱水提取富鋅中性糖蛋白的方法，其特征在于:所述步驟 (2)的液料比20mL/g，提取溫度90 °C，提取時間4h，提取次數(shù)2次。
【文檔編號】C08B37/00GK106008662SQ201610329786
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月16日
【發(fā)明人】曾曉雄, 周望庭, 閆亞美
【申請人】南京農(nóng)業(yè)大學