一種提高dc-cik細(xì)胞制劑活率的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種提高DC?CIK細(xì)胞制劑活率的方法，包括如下步驟：將培養(yǎng)擴(kuò)增后的T細(xì)胞進(jìn)行第一次離心，得到一次離心細(xì)胞；將一次離心細(xì)胞用生理鹽水清洗后，進(jìn)行第二次離心，得到二次離心細(xì)胞；將二次離心細(xì)胞用生理鹽水清洗后，進(jìn)行第三次離心，得到DC?CIK細(xì)胞制劑。本發(fā)明可有效去除死細(xì)胞，增加收獲細(xì)胞制劑的細(xì)胞活率，獲得的細(xì)胞活率能大于90％，有利于臨床回輸。
【專利說明】
-種提高DC-CIΚ細(xì)胞制劑活率的方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及DC-CIK細(xì)胞制劑活率技術(shù)領(lǐng)域，尤其設(shè)及一種提高DC-CIK細(xì)胞制劑活 率的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 自體免疫Τ細(xì)胞技術(shù)，是從患者患者的外周血中分離出Τ細(xì)胞，通過體外培養(yǎng)、擴(kuò) 增、制劑，回輸患者體內(nèi)，誘導(dǎo)人體自身產(chǎn)生免疫應(yīng)答。目前，DC-CIK技術(shù)的整個(gè)培養(yǎng)周期大 約為14天左右，隨著培養(yǎng)時(shí)間的增加和個(gè)體差異，后期的培養(yǎng)后細(xì)胞活率會(huì)下降，有可能會(huì) 低于標(biāo)準(zhǔn)（大于80%)，細(xì)胞數(shù)大量回輸時(shí)，死細(xì)胞的增加，在臨床上會(huì)增加其他的一些風(fēng) 險(xiǎn)。前人在制劑時(shí)使用的是500g的離屯、力，如此之高的離屯、力即可分離活細(xì)胞與死細(xì)胞，也 可造成活細(xì)胞裂解，進(jìn)而降低活細(xì)胞的獲取率，影響制劑質(zhì)量。如何提高DC-CIK細(xì)胞制劑中 細(xì)胞的活率，成為目前需要解決的技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明提出了一種提高DC-CIK細(xì)胞制劑活率的方法，本發(fā)明可有效去除死細(xì)胞， 增加收獲細(xì)胞制劑的細(xì)胞活率，獲得的細(xì)胞活率能大于90%，有利于臨床回輸。
[0004] 本發(fā)明提出的一種提高DC-CIK細(xì)胞制劑活率的方法，包括如下步驟：
[0005] S1、將培養(yǎng)擴(kuò)增后的T細(xì)胞進(jìn)行第一次離屯、，得到一次離屯、細(xì)胞；
[0006] S2、將一次離屯、細(xì)胞用生理鹽水清洗后，進(jìn)行第二次離屯、，得到二次離屯、細(xì)胞；
[0007] S3、將二次離屯、細(xì)胞用生理鹽水清洗后，進(jìn)行第Ξ次離屯、，得到DC-CIK細(xì)胞制劑。 [000引優(yōu)選地，在S1中，離屯、力為300-500g，離屯、時(shí)間為5-15min。
[0009] 優(yōu)選地，在S1中，離屯、力為400g，離屯、時(shí)間為1 Omin。
[0010] 優(yōu)選地，在S2中，離屯、力為300-500g，離屯、時(shí)間為2-lOmin。
[0011] 優(yōu)選地，在S2中，離屯、力為400g，離屯、時(shí)間為5min。
[001^ 優(yōu)選地，在S3中，離屯、力為300-500g，離屯、時(shí)間為2-lOmin。
[0013] 優(yōu)選地，在S3中，離屯、力為400g，離屯、時(shí)間為5min。
[0014] 本發(fā)明通過改變收獲細(xì)胞時(shí)的離屯、力，去除死細(xì)胞，增加收獲細(xì)胞的細(xì)胞活率。通 過本發(fā)明獲得的細(xì)胞活率能大于90%，有效的去除死細(xì)胞，有利于臨床回輸。
【具體實(shí)施方式】
[0015] 下面，通過具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0016] 實(shí)施例1
[0017] 一種提高DC-CIK細(xì)胞制劑活率的方法，包括如下步驟：
[0018] S1、將培養(yǎng)擴(kuò)增后的T細(xì)胞進(jìn)行第一次離屯、，得到一次離屯、細(xì)胞；
[0019] S2、將一次離屯、細(xì)胞用生理鹽水清洗后，進(jìn)行第二次離屯、，得到二次離屯、細(xì)胞；
[0020] S3、將二次離屯、細(xì)胞用生理鹽水清洗后，進(jìn)行第Ξ次離屯、，得到DC-CIK細(xì)胞制劑。
[0021] 實(shí)施例2
[0022] 一種提高DC-CIK細(xì)胞制劑活率的方法，包括如下步驟：
[0023] S1、將培養(yǎng)擴(kuò)增后的T細(xì)胞進(jìn)行第一次離屯、，得到一次離屯、細(xì)胞，離屯、力為300g，離 屯、時(shí)間為15min;
[0024] S2、將一次離屯、細(xì)胞用生理鹽水清洗后，進(jìn)行第二次離屯、，得到二次離屯、細(xì)胞，離 屯、力為300g，離屯、時(shí)間為lOmin;
[0025] S3、將二次離屯、細(xì)胞用生理鹽水清洗后，進(jìn)行第Ξ次離屯、，得到DC-CIK細(xì)胞制劑， 離屯、力為300g，離屯、時(shí)間為lOmin。
[00%] 實(shí)施例3
[0027] 一種提高DC-CIK細(xì)胞制劑活率的方法，包括如下步驟：
[00%] S1、將培養(yǎng)擴(kuò)增后的T細(xì)胞進(jìn)行第一次離屯、，得到一次離屯、細(xì)胞，離屯、力為500g，離 屯、時(shí)間為5min;
[0029] S2、將一次離屯、細(xì)胞用生理鹽水清洗后，進(jìn)行第二次離屯、，得到二次離屯、細(xì)胞，離 屯、力為500g，離屯、時(shí)間為2min;
[0030] S3、將二次離屯、細(xì)胞用生理鹽水清洗后，進(jìn)行第Ξ次離屯、，得到DC-CIK細(xì)胞制劑， 離屯、力為500g，離屯、時(shí)間為2min。
[0031] 實(shí)施例4
[00創(chuàng)一種提高DC-CIK細(xì)胞制劑活率的方法，包括如下步驟：
[0033] S1、將培養(yǎng)擴(kuò)增后的T細(xì)胞進(jìn)行第一次離屯、，得到一次離屯、細(xì)胞，離屯、力為400g，離 屯、時(shí)間為lOmin;
[0034] S2、將一次離屯、細(xì)胞用生理鹽水清洗后，進(jìn)行第二次離屯、，得到二次離屯、細(xì)胞，離 屯、力為400g，離屯、時(shí)間為5min;
[0035] S3、將二次離屯、細(xì)胞用生理鹽水清洗后，進(jìn)行第Ξ次離屯、，得到DC-CIK細(xì)胞制劑， 離屯、力為400g，離屯、時(shí)間為5min。
[0036] 將實(shí)施例4、5中，步驟S1、S2、S3獲得的細(xì)胞活率如下表1所示：
[0037] 表1不同離屯、力下獲得的細(xì)胞活率對(duì)比 [00；3 引
[0039] W上所述，僅為本發(fā)明較佳的【具體實(shí)施方式】，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此， 任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明掲露的技術(shù)范圍內(nèi)，根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其 發(fā)明構(gòu)思加 W等同替換或改變，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種提高DC-CIK細(xì)胞制劑活率的方法，其特征在于，包括如下步驟： 51、 將培養(yǎng)擴(kuò)增后的T細(xì)胞進(jìn)行第一次離心，得到一次離心細(xì)胞； 52、 將一次離心細(xì)胞用生理鹽水清洗后，進(jìn)行第二次離心，得到二次離心細(xì)胞； 53、 將二次離心細(xì)胞用生理鹽水清洗后，進(jìn)行第三次離心，得到DC-CIK細(xì)胞制劑。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高DC-CIK細(xì)胞制劑活率的方法，其特征在于，在S1中，離心 力為300-500g，離心時(shí)間為5-15min。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的提高DC-CIK細(xì)胞制劑活率的方法，其特征在于，在S1中，離心 力為400g，離心時(shí)間為lOmin。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高DC-CIK細(xì)胞制劑活率的方法，其特征在于，在S2中，離心 力為300-500g，離心時(shí)間為2-10min。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的提高DC-CIK細(xì)胞制劑活率的方法，其特征在于，在S2中，離心 力為400g，離心時(shí)間為5min。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的提高DC-CIK細(xì)胞制劑活率的方法，其特征在于，在S3中，離心 力為300-500g，離心時(shí)間為2-10min。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的提高DC-CIK細(xì)胞制劑活率的方法，其特征在于，在S3中，離心 力為400g，離心時(shí)間為5min。
【文檔編號(hào)】C12N5/0784GK106011062SQ201610482968
【公開日】2016年10月12日
【申請(qǐng)日】2016年6月24日
【發(fā)明人】錢鵬, 趙依妮, 許國貞, 劉振云
【申請(qǐng)人】安徽未名細(xì)胞治療有限公司