2-(噻唑-2-基)亞氨基-5-亞芐基噻唑啉酮及其制備方法與應(yīng)用
【專利摘要】本發(fā)明涉及化學(xué)結(jié)構(gòu)式化學(xué)結(jié)構(gòu)式Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ或Ⅳ所示的2-(噻唑-2-基)亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮或其混合物：其中，R1選自：氫、C1～C2烷基、C3～C4直鏈或支鏈烷基；R2選自：氫、C1～C2烷基、C3～C4直鏈或支鏈烷基；X1～X5選自：氫、C1～C2烷基、C3～C4直鏈或支鏈烷基、硝基、氨基或NHCOR，其中R選自：氫、C1～C2烷基、C3～C4直鏈或C3～C4支鏈烷基。2-(噻唑-2-基)亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮或其混合物在制備神經(jīng)氨酸酶抑制劑中的應(yīng)用。
【專利說(shuō)明】
2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉酮及其制備方 法與應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及一類新化合物的制備與應(yīng)用，具體是2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞 芐基噻唑啉-4-酮的制備及其在作為流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑的應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002] 禽流感病毒可引起禽類的呼吸器官或全身性感染，高致病性禽流感病毒可直接感 染禽類，也能直接或間接感染人類。高致病性禽流感病毒是在人群中引發(fā)流感的一個(gè)潛在 危險(xiǎn)因素，并會(huì)嚴(yán)重地威脅人類健康。20世紀(jì)人類曾發(fā)生過(guò)4次流感大流行：1918年到 1919年的"西班牙流感" (H^亞型）、1957年到1958年的"亞洲流感" (H 2N2亞型）、1968年 到1969年的"香港流感" (H3N2亞型）和1977年的"俄羅斯流感" (H M亞型）。禽流感病毒 含有兩個(gè)表面蛋白：血凝素（HA)和神經(jīng)氨酸酶（NA)，根據(jù)這兩個(gè)蛋白抗原性的不同，可將 禽流感病毒分為16個(gè)HA亞型（氏~H 16)和9個(gè)NA亞型（&~N 9)。至今發(fā)現(xiàn)能直接感染 人的禽流感病毒亞型有：HA、HA、H7N2、H 7N3、H7N7、H9N2、屮隊(duì)和H 1QNS亞型。其中，高致病性 H5Ni亞型于1997年在香港首次發(fā)現(xiàn)能直接感染人類，2003年7月之后，H 禽流感疫情呈 現(xiàn)前所未有的暴發(fā)，波及亞洲、北美洲、歐洲和非洲17個(gè)國(guó)家和地區(qū)，造成數(shù)百人感染及死 亡，直接經(jīng)濟(jì)損失高達(dá)100億美元。2003年3月，荷蘭發(fā)生H 7N7型禽流感并波及整個(gè)歐洲， 人類感染者達(dá)83例，不僅造成了人類的傷亡，同時(shí)重創(chuàng)了家禽養(yǎng)殖業(yè)。2009年3月底，墨西 哥暴發(fā)人感染H&型豬流感疫情并擴(kuò)散到世界各地，據(jù)世界衛(wèi)生組織于2010年2月26日 發(fā)布的甲型流感全球情況報(bào)告，至少有213個(gè)國(guó)家和地區(qū)的16226例病人死于這場(chǎng)大 流感[曾祥興，李康生。醫(yī)學(xué)與社會(huì)，2010，11，4-6。]。經(jīng)過(guò)基因序列分析，H&型病毒包 含人流感病毒、北美禽流感病毒和北美、歐、亞豬流感病毒基因片段，為幾種不同物種流感 病毒的混合毒株，而非單獨(dú)一種豬流感或禽流感病毒。2013年3月，我國(guó)首次發(fā)現(xiàn)人感染 H7N9禽流感病例，截止2015年1月25日，世界衛(wèi)生組織公布的H 7N9禽流感確診494人，死 亡221人。因此對(duì)抗禽流感病毒藥物的研發(fā)，已成為世界各國(guó)政府及衛(wèi)生防疫部門日益關(guān) 注和積極著手解決的重大問(wèn)題之一。
[0003] 禽流感病毒是一種含有包膜蛋白的病毒，其基因組是包含有8節(jié)段的單股負(fù) 鏈RNA，可編碼多種病毒蛋白：病毒表面蛋白（血凝素HA，神經(jīng)氨酸酶NA)、基質(zhì)蛋白 (Ml，M2)核蛋白（NP)、非結(jié)構(gòu)蛋白（NS1，NS2)、RNA聚合酶P蛋白復(fù)合體PA，PB1，PB2) [CN101990534A]。HA是一種介導(dǎo)病毒對(duì)靶細(xì)胞的結(jié)合和病毒基因組進(jìn)入靶細(xì)胞的凝集素。 NA可催化裂解宿主細(xì)胞表面糖蛋白末端的N-乙酰氨基，從感染細(xì)胞釋放子代病毒。NA還 可通過(guò)改變表面糖蛋白HA的碳水化合物部分，增強(qiáng)毒性，促進(jìn)病毒從受感染的宿主細(xì)胞中 釋放，引起或加重流感癥狀[CN103755697A]。此外，NA在流感病毒的變異過(guò)程中具有相對(duì) 保守性，使其成為設(shè)計(jì)、合成抗流感藥物非常好的靶標(biāo)。因此，以NA為作用靶標(biāo)，通過(guò)抑制 NA活性來(lái)抑制流感病毒復(fù)制和毒性的NA抑制劑是抗禽流感病毒的第一線藥物，代表藥物 有Zanamivir、Oseltamivir和Peramivir及其衍生物，其中Oseltamivir應(yīng)用廣泛。但已 有研究發(fā)現(xiàn)一些病毒株對(duì)Oseltamivir產(chǎn)生了耐藥性。
[0004] 噻唑類和噻唑啉酮類化合物具有抗流感病毒活性：中國(guó)發(fā)明專利[ZL 200810152537. 4, 2010. 12. 22 授權(quán)，ZL 201010223400. 0, 2012. 07. 25 授權(quán)]報(bào)道了系 列具有抗流感病毒活性的噻唑衍生物和取代噻唑巰乙酰胺類衍生物；中國(guó)發(fā)明專利[CN 103830233 A，2014. 06. 04 公開(kāi)，CN 103705511 A，2014. 04. 09 公開(kāi)]描述了 5-(1，2,4_ 三 唑-1-基）-2-苯乙酰氨基噻唑和N-[5- (1，2,4-三唑-1-基）噻唑-2-基]脂肪酰胺的抗 流感活性；中國(guó)發(fā)明專利[CN 103755697 A，2014. 04. 30公開(kāi)，CN 103739599 A，2014. 04. 23 公開(kāi)]報(bào)道了 3-[[2-(2_芐亞氨基）噻唑-5-基]甲基]喹啉-2(1H)_酮和3-[[2-(2_芐 亞肼基）噻唑-5-基]甲基]喹啉-2(1H)_酮的制備與抗流感活性；此外，中國(guó)發(fā)明專利 [CN 103648282 A，2014. 03. 19 公開(kāi)，CN101990534 A，2008. 10. 3 公開(kāi)]還報(bào)道了噻唑類化 合物在預(yù)防和治療病毒感染方面的用途。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供化學(xué)結(jié)構(gòu)式I、II、III或IV所示的2_(噻唑-2-基）亞氨 基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮或其混合物：
[0007] 其中，R1選自：氫、烷基、(：3~(：4直鏈或支鏈烷基、氟代烷基、氯代 C 2烷基、溴代C廣C 2烷基或碘代C廣C 2烷基；R2選自：氫、C廣C 2烷基、C 3~C 4直鏈 或支鏈烷基；X1、X5選自：氫、C C 2烷基、C 3~C 4直鏈或支鏈烷基、硝基、氨基或NHC0R，其 中R選自：氫、烷基、C3~C4直鏈或C3~C4支鏈烷基；X 2、X4選自：硝基、二甲氨基、 氨基或NHC0R，其中R選自：氫、烷基、C3~C4直鏈或C3~C 4支鏈烷基；X3選自：硝 基、二甲氨基、氨基或NHC0R，其中R選自：氫、烷基、C 3~C4直鏈或C3~C4支鏈烷 基。
[0008] I式所示的2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮為（2E，5Z) -2-(噻 唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮；II式所示的2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞 芐基噻唑啉-4-酮為（2Z，5Z)-2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮；III式所 示的2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮為（2E，5E)-2-(噻唑-2-基）亞氨 基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮；IV式所示的2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮 為（2Z，5E)-2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮。
[0009] 本發(fā)明的目的在于提供的2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮選自 下列化合物：
[0011] 其中，R1選自：氫、烷基、(：3~(：4直鏈或支鏈烷基、氟代烷基、氯代 C 2烷基、溴代C C 2烷基或碘代C C 2烷基；R 2選自：氫、C C 2烷基、C 3~C 4直 鏈或支鏈烷基；n 選自：1、2 或 3; (NH2) n選自：2-NH 2、3-NH2、4-NH2、2, 4- (NH2) 2、2, 5- (NH2) 2、 2, 6- (NH2) 2、3, 4- (NH2) 2、3, 5- (NH2) 2、2, 3, 4- (NH2) 3或 2, 3, 5- (NH 2) 3。
[0012] 本發(fā)明的目的在于提供的2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮選自 下列化合物：
[0014] 其中，R選自：氫、烷基、C3~C4直鏈或C3~C 4支鏈烷基；R1選自：氫、Ci~ C2烷基、C 3~C 4直鏈或支鏈烷基、氟代C C 2烷基、氯代C C 2烷基、溴代C C 2烷基 或碘代Ci~C2烷基；R2選自：氫、烷基、C3~C4直鏈或支鏈烷基；n選自：1、2或3 ; (順0?)"選自：2-NHC0R、3-NHC0R、4-NHC0R、2, 4-(NHC0R) 2、2, 5-(NHC0R)2、2, 6-(NHC0R)2、 3, 4- (NHC0R) 2、3, 5- (NHC0R) 2、2, 3, 4- (NHC0R) 3或 2, 3, 5- (NHC0R) 3。
[0015] 本發(fā)明的目的在于提供的結(jié)構(gòu)式I、II、III或IV所示的2-(噻唑-2-基）亞氨 基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮選自：2_ (4-叔丁基噻唑-2-基）亞氨基-5-(3-硝基亞芐基）噻 唑啉-4-酮、2- (4-叔丁基噻唑-2-基）亞氨基-5- (4-硝基亞芐基）噻唑啉-4-酮、5- (3-氨 基亞芐基）-2- (4-叔丁基噻唑-2-基）亞氨基噻唑啉-4-酮、5- (4-氨基亞芐基）-2- (4-叔 丁基噻唑-2-基）亞氨基噻唑啉-4-酮、5- (3-乙酰氨基亞芐基）-2- (4-叔丁基噻唑-2-基） 亞氨基噻唑啉-4-酮或5-(4-乙酰氨基亞芐基）-2-(4-叔丁基噻唑-2-基）亞氨基噻唑 啉-4-酮。
[0016] 本發(fā)明的目的在于提供2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮的制備 方法，其特征在于它的制備反應(yīng)如下：
[0018] 式中，R1選自：氫、烷基、(：3~(：4直鏈或支鏈烷基、氟代烷基、氯代 C 2烷基、溴代C廣C 2烷基或碘代C廣C 2烷基；R2選自：氫、C廣C 2烷基、C 3~C 4直鏈 或支鏈烷基；X1、X5選自：氫、C C 2烷基、C 3~C 4直鏈或支鏈烷基，或硝基；X 2、X4選自：硝 基或二甲氨基；X3選自：硝基或二甲氨基。
[0019] 本發(fā)明的目的在于提供5-(氨基亞芐基）-2-(噻唑-2-基）亞氨基噻唑啉-4-酮 和5-(酰氨基亞芐基）-2-(噻唑-2-基）亞氨基噻唑啉-4-酮的制備方法，其特征在于它 們的制備反應(yīng)如下：
[0021] 式中，R選自：氫、烷基、C3~C4直鏈或C3~C4支鏈烷基；R 1選自：氫、Ci~ C2烷基、C 3~C 4直鏈或支鏈烷基、氟代C C 2烷基、氯代C C 2烷基、溴代C C 2烷基或 碘代烷基；R2選自：氫、烷基、C3~C4直鏈或支鏈烷基；n選自1、2或3 ;(N02) "選自：2-N0 2、3-N02、4-N02、2, 4-(N02)2、2, 5-(N02)2、2, 6-(N02)2、3, 4-(N02)2、3, 5-(N02)2、 2,3,4-(吣2)3或 2,3,5-(N0 2)3;(NH2)n選自：2-NH 2、3-NH2、4-NH2、2,4-(NH2) 2、2,5-(NH2)2、 2, 6-(NH2)2、3, 4-(NH2)2、3, 5-(NH2)2、2, 3, 4-(NH2)3或 2, 3, 5-(NH 2)3; (NHCOR) "選自： 2-NH⑶R、3-NH⑶R、4-NH⑶R、2, 4-(NH⑶R)2、2, 5-(NH⑶R)2、2, 6-(NH⑶R)2、3, 4-(NH⑶R)2、 3, 5-(NHC0R)2、2, 3, 4-(NHC0R)3或 2, 3, 5-(NHC0R) 3。
[0022] 本發(fā)明的目的在于提供2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮具有流 感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制活性，在制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑中的應(yīng)用。
[0023] 本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有如下優(yōu)點(diǎn)：
[0024] 本發(fā)明的2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮具有流感病毒神經(jīng)氨 酸酶抑制活性。
【具體實(shí)施方式】
[0025] 以下實(shí)施例旨在說(shuō)明本發(fā)明而不是對(duì)本發(fā)明的進(jìn)一步限定。
[0026] (2E，5E) -2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮（III)的制備方法如 實(shí)施例1~7所述。
[0027]
[0028] 實(shí)施例1
[0029] 2-[ (4-叔丁基噻唑-2-基）亞氨基]噻唑啉-4-酮⑵的制備
[0031] 4. 36g(25mmol)4-叔丁基噻唑-2-胺，30mL二氯甲烷，攪拌溶解，加入 3. 45g(25mmol)無(wú)水碳酸鉀，常溫?cái)嚢?0min，滴加2ml(25mmol)氯乙酰氯，常溫反應(yīng)1.5h。 反應(yīng)液倒入冰水，二氯甲烷萃取，飽和碳酸鈉水溶液洗滌，合并有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，脫 溶，乙醇重結(jié)晶得5. 50g白色固體1，收率87. 7%，m.p. 113~115°C。
[0032] 2. 30g(9mmol)化合物1，1. 31g(13. 5mmol)硫氰酸鉀，30ml乙醇溶解，加熱回流 反應(yīng)2. 5h。冷卻，析出固體，抽濾，干燥得2. 10g黃色固體2,收率90. 0 %，m. p. 200~ 202 °C。巾 NMR(CDC13,400MHz) S : 1.33 (s，9H，3 XCH3)，3.88 (s，2H，CH2)，6.64 (s，lH，噻唑 環(huán)），12. 24(s，1H，NH) ;13C NMR(CDC13,101MHz) S :29. 71，34. 77,107. 58,139. 38,160. 38， 162. 78,172. 66. EI-MS m/z:255. 3M+。
[0033] 實(shí)施例2
[0034] (2E，5E) -2- (4-叔丁基噻唑-2-基）亞氨基-5- (3-硝基亞芐基）噻唑啉-4-酮的 制備
[0035]
[0036] 35ml乙酸溶解0? 65g乙酸鈉配制pH = 4~5的緩沖溶液，加入2. Ommol中間體 2和4. Ommol 3-硝基苯甲醛，加熱回流反應(yīng)10h。冷卻，水洗，過(guò)濾，乙醇重結(jié)晶得黃色固 體（2E，5E)-2-(4-叔丁基噻唑-2-基）亞氨基-5-(3-硝基亞芐基）噻唑啉-4-酮，收率 66%，m. p. 225 ~226°C。4 NMR(CDC13,400MHz) S :1. 40(s，9H，3XCH3)，6. 73(s，1H，噻唑 環(huán)），7. 69(t，J = 8. 0Hz，1H，C6H4)，7. 86(d，J = 8. 4Hz，2H，= CH)，8. 28(d，J = 8. 0Hz，1H， C6H4)，8.49(s，1H，C6H 4)。
[0037] 實(shí)施例3
[0038] (2E，5E) -2- (4-叔丁基噻唑-2-基）亞氨基-5- (4-硝基亞芐基）噻唑啉-4-酮的
制備
[0039]
[0040] 操作方法同實(shí)施例2,化合物2與4-硝基苯甲醛，反應(yīng)10h，得到黃色固體 (2E，5E)-2-(4-叔丁基噻唑-2-基）亞氨基-5-(4-硝基亞芐基）噻唑啉-4-酮，收率77 %， m.p. 270 ~272 °C。4 NMR(CDC13,400MHz) S :1. 38(s，9H，3XCH3)，6. 73(s，lH，噻唑環(huán)）， 7. 72(d，J = 8. 9Hz，2H，C6H4)，7. 84(s，1H，= CH)，8. 35(d，J = 8. 6Hz，2H，C6H4)。
[0041] 實(shí)施例4
[0042] (2E，5E)-5-(3-氨基亞芐基）-2-(4-叔丁基噻唑-2-基）亞氨基噻唑啉-4-酮的 制備
[0044] 10ml二氯甲烷和10ml乙酸溶解1. Ommol (2E，5E)-2-(4-叔丁基噻唑-2-基）亞 氨基-5-(3-硝基亞芐基）噻唑啉-4-酮，加入適量鐵粉和lml水，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)5h。過(guò) 濾，水洗，二氯甲烷萃取，飽和碳酸鈉水溶液洗滌有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，脫溶得黃色固 體（2E，5E)-5-(3-氨基亞芐基）-2-(4_叔丁基噻唑-2-基）亞氨基噻唑啉-4-酮，收率 81 %，m. p. 226 ~228°C。NMR(CDC13,400MHz) S : 1. 36 (s，9H，3 X CH3)，6. 67 (s，1H，噻唑 環(huán)），6. 76(d，J = 8. 1Hz，1H，C6H4)，6. 83(s，1H，C6H4)，6. 91 ~7. 00(m，1H，C6H4)，7. 28(d，J = 8. 1Hz，1H，C6H4)，7. 75 (s，1H，= CH)，12. 30 (s，1H，NH)。
[0045] 實(shí)施例5
[0046] (2E，5E)-5-(4-氨基亞芐基）-2-(4-叔丁基噻唑-2-基）亞氨基噻唑啉-4-酮的 制備
[0047]
[0048] 操作方法同實(shí)施例4,（2E，5E)-2-(4-叔丁基噻唑-2-基）亞氨基-5-(4-硝基亞芐 基）噻唑啉-4-酮為原料，反應(yīng)5h，得到黃色固體（2E，5E) -5- (4-氨基亞芐基）-2- (4-叔丁 基噻唑-2-基）亞氨基噻唑啉-4-酮，收率92%，111.?.219~220°(：。111匪1?(01^0,4001抱） S :1.35(s，9H，3XCH3)，6.07(s，2H，NH2)，6.68(d，J = 8. lHz，2H，C6H4)，6.97(s，1H，噻唑 環(huán)），7. 38 (d，J = 8. 1Hz，2H，C6H4)，7. 53 (s，1H，= CH)，12. 32 (s，1H，NH)。
[0049] 實(shí)施例6
[0050] (2E，5E)-5-(3-乙酰氨基亞芐基）-2-(4-叔丁基噻唑-2-基）亞氨基噻唑啉-4-酮 的制備
[0052] 10ml乙酸溶解0? 5mmol (2E，5E) -5- (3-氨基亞芐基）-2- (4-叔丁基噻唑-2-基） 亞氨基噻唑啉-4-酮，滴加0. 5mmol乙酰氯，常溫?cái)嚢璺磻?yīng)lh。水洗，乙酸乙酯萃取，飽和 碳酸鈉水溶液洗滌有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，脫溶得黃色固體（2E，5E)-5-(3-乙酰氨基亞 芐基）-2-(4-叔丁基噻唑-2-基）亞氨基噻唑啉-4-酮，收率64 %，m. p. 266~268 °C。 NMR(CDC13,400MHz) S : 1.37 (s，9H，3 XCH3)，2.22 (s，3H，C0CH3)，6.68 (s，lH，噻唑環(huán)）， 7. 32(s，2H，C6H4，NHAc)，7. 44(t，J = 7. 9Hz，1H，C6H4)，7. 60(d，J = 6. 4Hz，1H，C6H4)，7. 75(s， 1H，C6H4)，7. 79(s，2H，= CH)。
[0053] 實(shí)施例7
[0054] (2E，5E)-5-(4-乙酰氨基亞芐基）-2-(4-叔丁基噻唑-2-基）亞氨基噻唑啉-4-酮
的制備
[0055]
[0056] 操作方法同實(shí)施例6,（2E，5E)-5-(4-氨基亞芐基）-2-(4_叔丁基噻唑-2-基） 亞氨基噻唑啉-4-酮為原料，反應(yīng)lh，得到黃色固體（2E，5E)-5-(4-乙酰氨基亞芐 基）-2-(4_叔丁基噻唑-2-基）亞氨基噻唑啉-4-酮，收率73%，m. p. 280~282 °C。 NMR(CDC13,400MHz) S : 1.37 (s，9H，3 XCH3)，2.23 (s，3H，C0CH3)，6.68 (s，lH，噻唑環(huán)）， 7. 38(s，1H，NHAc)，7. 54(d，J = 7. lHz，2H，C6H4)，7. 67(d，J = 7. 4Hz，2H，C6H4)，7. 78(s，1H， =CH) 〇
[0057] 按照實(shí)施例1~7所述的方法制備（2E，5Z) -2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基 噻唑啉-4-酮（I )、（2Z，5Z) -2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮（II )和 (2Z，5E) -2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮（IV )。
[0059] 實(shí)施例8
[0060] 2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮抗流感病毒神經(jīng)氨酸酶活性
[0061] 1?實(shí)驗(yàn)原理
[0062] 化合物MUNANA是神經(jīng)氨酸酶的特異性底物，在神經(jīng)氨酸酶作用下產(chǎn)生的代謝產(chǎn) 物在360nm照射激發(fā)下，可產(chǎn)生450nm熒光，熒光強(qiáng)度的變化可以靈敏地反映神經(jīng)氨酸酶活 性。酶均來(lái)自A/PR/8/34(HlNl)病毒毒株。
[0063] 2.實(shí)驗(yàn)方法
[0064] 在酶反應(yīng)體系中，一定濃度樣品與流感病毒神經(jīng)氨酸酶NA懸浮于反應(yīng)緩沖液中 (pH6. 5)，加入熒光底物MUNANA啟動(dòng)反應(yīng)體系，37°C孵育40分鐘后，加反應(yīng)終止液終止反 應(yīng)。在激發(fā)波長(zhǎng)360nm和發(fā)射波長(zhǎng)為450nm的參數(shù)條件下，測(cè)定熒光強(qiáng)度值。根據(jù)熒光強(qiáng) 度的減少量可以計(jì)算化合物對(duì)NA活性的抑制率。
[0065] 3?檢測(cè)樣品：2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮（I、II、III或IV )
[0067] 其中，R1選自：氫、烷基、(：3~(：4直鏈或支鏈烷基、氟代烷基、氯代 Ci~C 2烷基、溴代C廣C 2烷基或碘代C廣C 2烷基；R2選自：氫、C廣C 2烷基、C 3~C 4直鏈 或支鏈烷基；X1、X5選自：氫、C C 2烷基、C 3~C 4直鏈或支鏈烷基、硝基、氨基或NHCOR，其 中R選自：氫、烷基、C3~C4直鏈或C3~C4支鏈烷基；X 2、X4選自：硝基、二甲氨基、 氨基或NHCOR，其中R選自：氫、烷基、C3~C4直鏈或C3~C 4支鏈烷基；X3選自：硝 基、二甲氨基、氨基或NHCOR，其中R選自：氫、烷基、C 3~C4直鏈或C3~C4支鏈烷 基。
[0068] 4.活性結(jié)果
[0069] 優(yōu)選化合物在反應(yīng)系統(tǒng)中檢測(cè)濃度40. 0 y g/mL時(shí)對(duì)神經(jīng)氨酸酶的抑制率及其 IC5。值列入表1 :
[0070] 表12-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮對(duì)神經(jīng)氨酸酶的抑制活性
[0072] 2-(噻唑-2-基）亞氨基-5-亞芐基噻唑啉-4-酮具有良好的抗流感病毒神經(jīng)氨 酸酶活性，可用于制備流感病毒神經(jīng)氨酸酶抑制劑。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 化學(xué)結(jié)構(gòu)式I、II、m或IV所示的2-(嚷挫-2-基）亞氨基-5-亞芐基嚷挫嘟-4-酬 或其混合物：其中，Ri選自：氨、C 1~C 2烷基、C 3~C 4直鏈或支鏈烷基、氣代C 1~C 2烷基、氯代C 1~ Cz烷基、漠代Cl~C 2烷基或艦代Cl~C 2烷基；R 2選自：氨、Cl~C 2烷基、C 3~C 4直鏈或 支鏈烷基；X5選自：氨、Cl~C 2烷基、C 3~C追鏈或支鏈烷基、硝基、氨基或畑COR，其 中R選自：氨、Cl~C 2烷基、C 3~C追鏈或C 3~C 4支鏈烷基；X 2、X4選自：硝基、二甲氨基、 氨基或NHCOR，其中R選自：氨、。~Cz烷基、C 3~C 4直鏈或Cs~Ca支鏈烷基；X3選自： 硝基、二甲氨基、氨基或NHCOR，其中R選自：氨、。~Cz烷基、Cs~Ca直鏈或Cs~Ca支鏈 烷基；I式所示的2-(嚷挫-2-基）亞氨基-5-亞芐基嚷挫嘟-4-酬為（2E，5Z)-2-(嚷 挫-2-基）亞氨基-5-亞芐基嚷挫嘟-4-酬；II式所示的2-(嚷挫-2-基）亞氨基-5-亞 芐基嚷挫嘟-4-酬為（2Z，5Z)-2-(嚷挫-2-基）亞氨基-5-亞芐基嚷挫嘟-4-酬；III式所 示的2-(嚷挫-2-基）亞氨基-5-亞芐基嚷挫嘟-4-酬為（2E，祀)-2-(嚷挫-2-基）亞氨 基-5-亞芐基嚷挫嘟-4-酬；IV式所示的2-(嚷挫-2-基）亞氨基-5-亞芐基嚷挫嘟-4-酬 為（2Z，祀)-2-(嚷挫-2-基）亞氨基-5-亞芐基嚷挫嘟-4-酬。2. 權(quán)利要求1所述的2-(嚷挫-2-基）亞氨基-5-亞芐基嚷挫嘟-4-酬選自下列化合 物：其中，Ri、R2如權(quán)利要求1所述；n選自1、2或3;(畑2)11選自：2-畑2、3-畑2、4-畑2、 2, 4-(畑2) 2、2, 5-(畑2) 2、2, 6-(畑2) 2、3, 4-(畑2) 2、3, 5-(畑2) 2、2, 3, 4-(畑2) 3或 2, 3, 5- (NH 2) 3。3. 權(quán)利要求1所述的2-(嚷挫-2-基）亞氨基-5-亞芐基嚷挫嘟-4-酬選自下列化合 物：其中，R\ R2如權(quán)利要求1所述；R選自：氨、Cl~C 2烷基、C 3~C 4直鏈或C 3~C 4 支鏈烷基；n 選自 1、2 或 3 ; (NHCOR)n 選自：2-NHC0R、3-NHC0R、4-NHC0R、2, 4-(NHC0R)2、 2, 5-(NHC0R)2、2, 6-(NHC0R)2、3, 4-(NHC0R)2、3, 5-(NHC0R)2、2, 3, 4-(NHC0R)3或 2, 3, 5-(NHCOR) 3O4. 權(quán)利要求1所述的2-(嚷挫-2-基）亞氨基-5-亞芐基嚷挫嘟-4-酬選自：2- (4-叔 下基嚷挫-2-基）亞氨基-5-(3-硝基亞芐基）嚷挫嘟-4-酬、2-(4-叔下基嚷挫-2-基） 亞氨基-5- (4-硝基亞芐基）嚷挫嘟-4-酬、5- (3-氨基亞芐基）-2- (4-叔下基嚷挫-2-基） 亞氨基嚷挫嘟-4-酬、5- (4-氨基亞芐基）-2- (4-叔下基嚷挫-2-基）亞氨基嚷挫嘟-4-酬、 5-(3-乙酷氨基亞芐基）-2-(4-叔下基嚷挫-2-基）亞氨基嚷挫嘟-4-酬或5-(4-乙酷氨 基亞芐基）-2-(4-叔下基嚷挫-2-基）亞氨基嚷挫嘟-4-酬。5. 權(quán)利要求1所述的2-(嚷挫-2-基）亞氨基-5-亞芐基嚷挫嘟-4-酬的制備方法， 其特征在于它的制備反應(yīng)如下：式中，Ri、R2如權(quán)利要求1所述；X 1、X5選自：氨、C廣C 2烷基、C 3~C 4直鏈烷基、C 3~ Ca支鏈烷基或硝基；X 2、X4選自：硝基、二甲氨基；X 3選自：硝基或二甲氨基。 6.5-(氨基亞芐基）-2-(嚷挫-2-基）亞氨基嚷挫嘟-4-酬和5-(酷氨基亞節(jié) 基）-2-(嚷挫-2-基）亞氨基嚷挫嘟-4-酬的制備方法，其特征在于它們的制備反應(yīng)如下：式中，R選自：氨、。~C2烷基、C3~C追鏈或C3~C4支鏈烷基；R 1、R2如權(quán)利要求 1所述；(NH2)n如權(quán)利要求2所述；(NHCOR)n如權(quán)利要求3所述；n選自1、2或3 ; (N02) n 選自：2-N02、3-N02、4-N02、2,4-(N02)2、2,5-(N02)2、2,6-(N02)2、3,4-(N02)2、3,5-(N02)2、 2, 3,4-(N02) 3或 2, 3, 5-(NO 2) 3。7.權(quán)利要求1~4中任意一項(xiàng)所述的2-(嚷挫-2-基）亞氨基-5-亞芐基嚷挫嘟-4-酬 或其混合物在制備神經(jīng)氨酸酶抑制劑中的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】A61P31/16GK106032365SQ201510106603
【公開(kāi)日】2016年10月19日
【申請(qǐng)日】2015年3月11日
【發(fā)明人】胡艾希, 顏曉維, 葉姣, 肖夢(mèng)武, 劉艾林, 連雯雯
【申請(qǐng)人】湖南大學(xué)