具有Akt抑制活性的取代嘧啶類衍生物及其制備方法與應用
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種新的具有Akt抑制活性的取代嘧啶類衍生物、它們的制備方法以及包括它們和它們鹽的藥物組合物，以及所述取代嘧啶類衍生物和它們的鹽在制備用于預防和/或治療腫瘤的藥物中的用途。該化合物的結構式為式(I)或式(II)所示：本發(fā)明的化合物結構新穎，對Akt的抑制活性效果突出，安全性高，制備成本低廉，在制備治療抗腫瘤的藥物中具有很好的應用前景。
【專利說明】
具有Akt抑制活性的取代嘧啶類衍生物及其制備方法與應用
技術領域
[0001] 本發(fā)明屬于有機化合物合成及醫(yī)藥應用技術領域，具體涉及一類具有Akt抑制活 性的取代嘧啶類衍生物及其制備方法與應用。
【背景技術】
[0002] 腫瘤以其難治愈、復發(fā)率高的特點成為威脅人類健康的嚴重疾病。目前，腫瘤的發(fā) 生機制，以及抗腫瘤藥物的開發(fā)，成為當今醫(yī)藥行業(yè)研究的熱點課題。磷酯酰肌醇-3-激酶 (phosphatidylinositol 3-kinase，PI3K)/蛋白激酶B(protein kinase Β,ΡΚΒ,也稱Akt) 信號通路與細胞的生長、增殖、存活和凋亡密切相關，研究發(fā)現(xiàn)，該通路在多種腫瘤如卵巢 癌、肺癌、乳腺癌、直腸癌等癌細胞中異?；罨ㄟ^抑制該通路的激活，能夠有效抑制腫瘤 的生長。Akt作為該通路的中心蛋白，成為抑制該通路激活的重要靶點。
[0003] Akt于1991年被發(fā)現(xiàn)，因為它與蛋白激酶A和蛋白激酶C的高度同源性，所以被稱為 蛋白激酶8，屬于六6(：激酶家族。它有三種亞型 :41^1(?仙€〇^肚2(?仙0)^1^3(?仙丫）(^1^1 (ΡΚΒα)分布廣泛，Akt2(PKBi3)存在于胰島素敏感的器官中，Akt3(PKBy)在大腦和睪丸中表 達。它們由三種獨立的基因編碼，這三種基因有超過85%的序列相似性，因此這三種蛋白質 產(chǎn)物有相似的結構，在氨基酸水平有超過80%的同源性。每一種亞型都含有三個功能域:N 末端的PH±或、激酶催化域、C末端調節(jié)域。對不同亞型的生物學研究表明，Aktl主要控制細胞 的生長和增殖，Akt2除控制細胞的生存增殖分化外，還參與胰島素的糖代謝，Akt3與維持大 腦的正常體積有關。在腫瘤細胞中，由于基因及表觀遺傳方面的改變，Akt的表達大大增加， 導致細胞抗凋亡，最終發(fā)展成腫瘤。因此，抑制Akt是治療腫瘤的一個新策略。目前，進入臨 床研究的有哌立福新、碰2206^205363、600)068、651(2110183、651(2141795等化合物。
[0004] 因此，發(fā)現(xiàn)新的具有Akt抑制活性的化合物，對于抗腫瘤藥物的研發(fā)具有十分重要 的意義。
【發(fā)明內容】
[0005] 針對上述現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的目的是提供一類具有Akt抑制活性的取代嘧 啶類衍生物及其制備方法與應用，該化合物具有結構新穎，對Akt的抑制活性效果突出，安 全性高，制備成本低廉等優(yōu)勢，可以作為治療腫瘤的很有前景的藥物。
[0006] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用下述技術方案：
[0007] -種式（I)或式（II)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，
[0009] 其中，Ri為取代苯基、苯甲酰氨基或對氯苯甲酰氨基;R2為氯、甲氨基或乙氨基;R3 為取代苯基、芐基或吲哚-3-亞甲基;R4為氨基、羥甲基或N-異丙基-氨甲基;R5為氫、醛基或 醛基〇-甲基聘，R 6為氯或氨基。
[0010] 優(yōu)選的，Ri為對氟苯基、對氯苯基、對溴苯基、2，4-二氯苯基、2，6-二氯苯基、苯甲 酰氨基或對氯苯甲酰氨基;R 2為氯、甲氨基或乙氨基;R3為苯基、對氟苯基、對氯苯基、對溴苯 基、2,4_二氯苯基、芐基或吲哚-3-亞甲基;R 4為氨基、羥甲基或N-異丙基-氨甲基;R5為氫、醛 基或醛基〇-甲基B，R6為氯或氨基。
[0011] 上述化合物的實例如下：
[0012] 卜(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-卜基)-2-(4-氟苯基）乙酮(Lai);
[0013] 卜(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-卜基)-2-(4-氯苯基）乙酮(La2);
[0014] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4-溴苯基）乙酮(La3);
[0015] 卜(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-卜基)-2-(2,4-二氯苯基）乙酮(La4);
[0016] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氯苯基）乙酮(La5);
[0017] 2-(4-氟苯基)-卜(4-(6-(甲胺基)啼啶-4-基)哌嗪-卜基）乙酮(La6);
[0018] 2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La7);
[0019] 2-(4-溴苯基)-卜(4-(6-(甲胺基)啼啶-4-基)哌嗪-卜基）乙酮(La8);
[0020] 2-(2,4-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La9);
[0021] 2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(LalO);
[0022] 2-(4-氟苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lall);
[0023] 2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal2);
[0024] 2-(4-溴苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal3);
[0025] 2-(2,4-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal4);
[0026] 2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal5);
[0027] N-(2-(4_(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(Lal6);
[0028] N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(Lal7);
[0029] N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(Lal8);
[0030] n-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(Lal9);
[0031] N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La20);
[0032] N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La21);
[0033] 4-氯-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(異丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶(Ljl);
[0034] 4-氯-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1-基)嘧啶(Lj2);
[0035] 4-氯-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(異丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)嘧啶(Lj3);
[0036] 4-氯-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1-基)嘧啶(Lj4);
[0037] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)-3-羥基-2-苯基丙-1-酮(Lj5);
[0038] 4-(4-(L-色氨酸）哌嗪-1-基)-6-氯嘧啶（Lj6);
[0039] 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氯嘧啶(Lj7);
[0040] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基）-3-(異丙氨基）丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛 (Lj8)；
[0041] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基）-3-(異丙氨基）丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛 (Lj9)；
[0042] 4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基）-3-(異丙氨基）丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛 (LjlO)；
[0043] 4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲 醛(Ljll);
[0044] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基）乙?；?哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛(Ljl2);
[0045] 4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛(Ljl3);
[0046] 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛(Ljl4);
[0047] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(異丙氨基）丙酰基)哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Ljl5);
[0048] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(異丙氨基）丙?；?哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Ljl6);
[0049] 4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(異丙氨基）丙酰基)哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Ljl7);
[0050] 4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲 醛0-甲基肟(Ljl8);
[0051 ] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基）乙?；?哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Ljl9);
[0052] 4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Lj20);
[0053] 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基肟(Lj21)。
[0054] 上述優(yōu)選的42個化合物名稱后的括號中為其相應的代號，為敘述方便和表達簡 潔，上述括號中的代號在本說明書以下內容中將被直接應用。
[0055] 本發(fā)明另外提供了制備式（I)和式（II)化合物的方法，它們可以如下面詳述地得 到。
[0056]式（I)所示的化合物的制備方法包括:使式C所示的化合物與式D1、D2或D3所示的 化合物反應，得到式(I)所示的化合物；
[0058] 其中，、R2具有如前所述的定義;X為F、C1、Br、2，4-C1或2，6-C1。
[0059] 上述式C所示的化合物的制備方法為：以4,6-二氯嘧啶(A1)為起始原料，與甲胺或 乙胺反應，得到中間體化合物A2、A3，中間體A再與1-叔丁氧羰基哌嗪反應，得到中間體化合 物B，將中間體化合B溶于HC1二氧六環(huán)溶液，室溫反應，即得式C所示的化合物。
[0060] 式（II)所示的化合物的制備方法包括:使式G1、G2或C1所示的化合物與式HI、H2、 H3、H4或H5所示的化合物反應，得到式(II)所示的化合物；
[0062] 其中，R3、R4、R5、R 6具有如前所述的定義;X為F、C1、Br或2，4-C1。
[0063] 式(I)和式(II)化合物的具體合成路線如下：
[
[0065]試劑及條件：（la)甲胺溶液，異丙醇，室溫；（lb)乙胺溶液，異丙醇，室溫；（2a)l_叔 丁氧羰基哌嗪，三乙胺，甲醇，50°C ; (2b) 1-叔丁氧羰基哌嗪，三乙胺，DMF，100°C ; (2c) 1-叔 丁氧羰基哌嗪，1，8_二氮雜二環(huán)^^一碳-7-烯(DBU)，碳酸鉀，DMF，100°C ; (3)HC1二氧六環(huán)溶 液，室溫；（4)甘氨酸鹽酸鹽，三乙胺，0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯（HBTU)，DMF，室 溫；（5)氫氧化鋰，水：甲醇：四氫呋喃（1 :1:3)，室溫；（6)HBTU，N，N-二異丙基乙胺(DIPEA); (7)氨氣，甲苯，室溫；（8)甲氧胺鹽酸鹽，冰醋酸，水，室溫；（9)1-叔丁氧羰基哌嗪，三乙胺， 甲醇，70°C ; (10)HC1二氧六環(huán)溶液，室溫；（11)二碳酸二叔丁酯，水，室溫；（12)HBTU，DIPEA， DMF，室溫；（13) HC1二氧六環(huán)溶液，室溫。
[0066]具體合成步驟如下：
[0067] (1)將4,6_二氯嘧啶(A1)溶解在異丙醇中，慢慢滴入甲胺溶液，室溫反應2h，減壓 蒸除溶劑，析出固體，加入適量水攪拌過濾，濾餅用水洗，真空干燥，得中間體A2，其中起始 原料和甲胺溶液的摩爾比為1;8.25;
[0068] (2)將4，6-二氯嘧啶(A1)溶解在異丙醇中，慢慢滴入乙胺溶液，室溫反應2h，減壓 蒸除溶劑，析出固體，加入適量水攪拌過濾，濾餅用水洗，真空干燥，得中間體A3，其中起始 原料和乙胺溶液的摩爾比為1; 8.25;
[0069] (3)將中間體A1和1-叔丁氧羰基哌嗪溶于甲醇中，加入三乙胺，升溫至50°C回流， 反應4h。減壓蒸除溶劑，加入適量水攪拌過濾，濾餅用水潤洗，真空干燥得中間體B1，其中中 間體Al、1-叔丁氧羰基哌嗪、三乙胺的摩爾比為1:1.26:1.26。
[0070] (4)將中間體A2和1-叔丁氧羰基哌嗪溶于DMF中，加入三乙胺，加熱到100°C，反應 過夜，再加入三乙胺，繼續(xù)反應48h，將反應液倒入30倍量水中，析出固體，過濾，濾餅用水多 次潤洗，真空干燥得中間體B2，其中中間體A2、1 -叔丁氧羰基哌嗪、三乙胺的摩爾比為1: 1.1：2.2〇
[0071 ] (5)將中間體A3溶于DMF中，加入1-叔丁氧羰基哌嗪，碳酸鉀，DBU，加熱到100°C，反 應72h，將反應液倒入30倍量水中，析出固體，過濾，濾餅用水反復潤洗，真空干燥得中間體 B3，其中中間體A3、1 -叔丁氧羰基哌嗪、碳酸鉀、DBU的摩爾比為1:1.2:1:1。
[0072] (6)中間體C的制備:將中間體B溶于HC1二氧六環(huán)溶液，室溫反應24h，析出固體，過 濾，濾餅用乙酸乙酯潤洗，真空干燥得中間體C。所述中間體C中，R2為氯、甲氨基、乙氨基。 [0073] (7)中間體D3的制備:將對氯苯甲酸溶于DMF中，加入0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟 磷酸酯(HBTU)，攪拌，加入甘氨酸乙酯鹽酸鹽，滴加三乙胺，室溫反應過夜，將反應液倒入30 倍量水中，析出固體，過濾，一次用10%稀鹽酸溶液，飽和碳酸氫鈉溶液，清水洗滌濾餅，真 空干燥得固體，將所得固體溶于THF: MeOH: H20(3:1:1)溶液中，加入氫氧化鋰，室溫反應過 夜。減壓蒸除溶劑，加入適量乙酸乙酯和水萃取，分出水相，水相用10%鹽酸溶液酸化至pH =1，再用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓蒸除溶劑得 中間體D3，其中對氯苯甲酸、甘氨酸鹽酸鹽、三乙胺、HBTU、氫氧化鋰的摩爾比為1:1.1:3 : 1.2:2。
[0074] (8)將中間體D溶于DMF中，加入0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，攪拌， 加入中間體C，N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)，室溫反應過夜，將反應液倒入30倍量水中，析出 固體，過濾，濾餅用水潤洗，真空干燥，再用乙酸乙酯重結晶，得目標產(chǎn)物La。上述反應中，中 間體D、中間體C、HBTU、DIPEA的摩爾比為1:1:1.13:5。所述目標化合物La中R!為對氟苯基、 對氯苯基、對溴苯基、2，4-二氯苯基、2，6-二氯苯基、苯甲酰氨基、對氯苯甲酰氨基，R2為氯、 甲氨基、乙氨基。
[0075] (9)將4,6_二氯嘧啶-5-甲醛溶于甲苯中，通入氨氣30min，室溫攪拌過夜，過濾得 固體，柱層析純化(洗脫劑為乙酸乙酯:石油醚=1:3 )，得中間體E1。
[0076] (10)將中間體E1溶于冰醋酸和水的混合溶液中，加入甲氧胺鹽酸鹽，25 °C反應過 夜。TLC監(jiān)測反應完成后，向反應液中加入適量水，用同體積乙酸乙酯萃取，有機層依次水洗 3次，10 %氫氧化鈉溶液洗，飽和食鹽水洗，無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，柱層析純 化(洗脫劑石油醚：乙酸乙酯= 3:1)，得中間體E2,其中中間體E1、甲氧胺鹽酸鹽的摩爾比為 1:1.8〇
[0077] (11)將中間體E1、E2分別溶于甲醇中，加入1-叔丁氧羰基哌嗪，N，N_二異丙基乙胺 (DIPEA)，加熱至60°C~70°C，回流反應3~4h，TLC監(jiān)測反應結束，降至室溫，減壓蒸除溶劑， 加水攪拌過濾，濾餅用水潤洗，真空干燥，得中間體FI、F2。其中，中間體E、1-叔丁氧羰基哌 嗪、N，N-二異丙基乙胺的摩爾比為1:1.1:2。
[0078] (12)中間體G的制備：將中間體F溶于HC1二氧六環(huán)溶液，室溫反應24h，析出固體， 過濾，濾餅用乙酸乙酯潤洗，真空干燥得中間體G。
[0079] (13)中間體Η的制備:分別將對氯苯甘氨酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸分別溶于水中， 加入碳酸鉀，二碳酸二叔丁酯，室溫反應過夜，TLC監(jiān)測反應結束，反應液用10 %鹽酸溶液酸 化至ΡΗ=1，再用乙酸乙酯萃取，有機層用飽和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸除 溶劑得中間體11、12、13。上述反應中，（對氯苯甘氨酸或1^-苯丙氨酸或1^-色氨酸）、碳酸鉀、 二碳酸二叔丁酯的摩爾比為1:1:1.1。
[0080] (14)將中間體Η溶于DMF中，加入0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，加入 中間體G或C1，N，N-二異丙基乙胺(DIPEA)，室溫反應過夜，倒入30倍量水中，析出固體，過 濾，用水潤洗濾餅，真空干燥，柱層析純化(洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯= 3:1~乙酸乙酯)得 白色固體，將白色固體溶于HC1二氧六環(huán)溶液中，反應24h，TLC監(jiān)測反應結束，減壓蒸除溶 劑，加乙酸乙酯潤洗，過濾，真空干燥得目標化合物Lj。上述反應中，中間體G或C1、中間體H、 HBTU、DIPEA的摩爾比為1:1:1.13:5。所述Lj中，R3為取代苯基，芐基，吲哚-3-亞甲基;R4為氨 基，羥甲基，N-異丙基-氨甲基;R 5為氫，醛基，醛基0-甲基肟，R6為氯、氨基。
[0081] 本發(fā)明還提供上述化合物或其藥學上可接受的鹽在制備預防和/或治療腫瘤的藥 物中的用途。
[0082] 本發(fā)明還提供一種藥物組合物，該藥物組合物包含上述的化合物或其藥學上可接 受的鹽。
[0083] 優(yōu)選的，所述藥物組合物還包含一種或多種藥學上可接受的載體、賦形劑和/或稀 釋劑。
[0084]優(yōu)選的，所述藥物組合物包含一種或多種藥學上或食品學上可接受的輔料。所用 的輔料可為固態(tài)或液態(tài)。固態(tài)形式的制劑包括粉劑、片劑、分散顆粒、膠囊、藥丸及栓劑。粉 劑及片劑可包含約5%至約95%的活性成分。適當?shù)墓腆w輔料可以是碳酸鎂、硬脂酸鎂、滑 石粉、糖或者乳糖。片劑、粉劑、藥丸及膠囊為適于口服用的固態(tài)劑型。液態(tài)形式的制劑包括 溶液、懸浮液及乳液，其實施例為非經(jīng)腸注射用水溶液或水-丙二醇溶液，或添加甜味劑及 造影劑的口服溶液。此外，還可制成注射用小水針、注射用凍干粉針、大輸液或小輸液。
[0085] 優(yōu)選的，所述藥物組合物為固體口服制劑、液體口服制劑或注射劑。
[0086] 進一步優(yōu)選的，所述藥物組合物為片劑、分散片、腸溶片、咀嚼片、口崩片、膠囊、糖 衣劑、顆粒劑、干粉劑、口服溶液劑、注射用小水針、注射用凍干粉針、大輸液或小輸液。
[0087] 本發(fā)明的化合物是以發(fā)明人前期研究發(fā)現(xiàn)的具有Aktl激酶抑制活性的化合物作 為先導化合物，對其進行結構改造，通過去除吡咯環(huán)，在嘧啶4上引入取代氨基、氯，同時將 苯環(huán)換用不同的鹵素取代，得到系列化合物，將得到的系列化合物進行分子對接，對接結果 顯示同樣能與Akt蛋白Glu228、Ala230形成氫鍵作用。但是活性結果顯示，La系列化合物對 Aktl激酶的抑制活性較差。通過查閱文獻，表明Aktl蛋白中存在Acid hole結構，為了增強 化合物與蛋白的作用，我們在羰基α位引入極性取代基，使其能與Glu234形成氫鍵作用。同 時，通過對蛋白結構分析，我們發(fā)現(xiàn)，在靠近嘧啶5位的地方存在一個有Thr211和Thr291殘 基親水性口袋，為此我們在嘧啶5為引入醛基、醛基甲氧肟取代基，探討其對化合物活性的 影響。通過分子對接表明，本發(fā)明的化合物Lj9、化合物Ljl7能與Glu234、Glu228、Ala230、 Thr291形成氫鍵作用，活性結果顯示，當嘧啶5為引入醛基、醛基0-甲基肟取代時，對Aktl激 酶的抑制活性明顯提高。
[0088]本發(fā)明的有益效果：
[0089] (1)本發(fā)明的化合物結構新穎，對Akt的抑制活性效果突出，安全性高，為抗腫瘤藥 物的開發(fā)提供了新的化合物來源。
[0090] (2)本發(fā)明化合物的合成中用到的中間體4,6_二氯嘧啶，1-叔丁氧羰基哌嗪，4,6_ 二氯嘧啶-5-甲醛，0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU)，甲氧胺鹽酸鹽及其他試劑 均可從試劑公司購得，價格便宜。化合物合成中，對反應儀器要求較低，操作簡單，反應條件 溫和，除個別反應需要用油浴鍋加熱外，大部分反應都在室溫下進行，后處理方便，如由4， 6-二氯嘧啶(A1)生成中間體A2、A3的反應中，我們加入過量的胺，確保原料完全反應，由于 反應產(chǎn)物在水中溶解性較小，而未反應的胺易溶于水，所以后處理時，只需減壓蒸除反應溶 劑，然后加水攪拌過濾，濾餅用水潤洗，就可以得到比較純的中間體A2、A3,產(chǎn)率也較高，同 樣的，由中間體A生成中間體B和中間體E生成中間體F的反應中，1-叔丁氧羰基哌嗪易溶于 水，而產(chǎn)物水溶性較差，同樣可以用此方法處理。
【具體實施方式】
[0091] 結合實施例對本發(fā)明作進一步的說明，應該說明的是，下述說明僅是為了解釋本 發(fā)明，并不對其內容進行限定。
[0092] 實施例中未詳細描述的方法、試劑等，均為所屬領域常規(guī)方法、試劑。
[0093] 實施例1:目標化合物Lai~La21的制備
[0094] (1 )4_取代-6-氯嘧啶的（中間體A)的制備
[0095] 將4,6_二氯嘧啶(20.14mmol，3.0g)(Al)溶解在20ml異丙醇中，慢慢滴入10ml氨水 或甲胺或乙胺，室溫反應2h，減壓蒸除溶劑，析出固體，加入20ml水攪拌過濾，濾餅用水洗， 真空干燥，得中間體A2或A3.
[0096] 4-甲氨基-6-氯嘧啶（A2)，白色晶體，產(chǎn)率eS^c/H-NMRHOOMHz^MSO-deMbpm): 8.28(s,lH),7.68(s,lH),6.50(s,lH),2.82(s,3H).MS(ESI)m/z:144[M+H]+.
[0097] 4-乙氨基-6-氯嘧啶(A3)，白色晶體，產(chǎn)率92% c/H-NMRHOOMHz ,DMS0-d6)S(ppm): 8.25(s，lH)，7.71(s，lH)，6.47(s，lH)，3.14(s，2H)，1.13(t，J=7.2Hz，3H).MS(ESI)m/z: 158[M+H]+.
[0098] (2)4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中間體Bl)的制備
[0099] 將4，6_二氯嘧啶(A1) (12 · 75mmol，1 · 9g)和 1-叔丁氧羰基哌嗪（16 · 13mmol，3 · 0g) 溶于20ml甲醇中，加入2.3ml三乙胺（16.13mmol)，升溫至50°C回流，反應4h。減壓蒸除溶劑， 加入20ml水攪拌過濾，濾餅用水潤洗，真空干燥得白色固體。產(chǎn)率83 %。h-NMlU 400MHz， DMS0-d6)5(ppm):8.35(s,lH),6.96(s,lH),3.65(s,4H),3.41(t,J=5.6Hz,4H),1.42(s, 9H).
[0100] (3)4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中間體B2)的制備
[0101] 將 4-甲氨基-6-氯嘧啶以2)(8.29111111〇1，1.198)和1-叔丁氧羰基哌嗪（9.12111111〇1， 1.70g)溶于lOmlDMF中，加入1.27ml三乙胺（9.12mmol)，加熱到100°C，反應過夜，再加入 1.27ml三乙胺(9.12mmol)，繼續(xù)反應48h，將反應液倒入30倍量水中，析出褐色固體，過濾， 濾餅用水多次潤洗，真空干燥得褐色固體。產(chǎn)率44 %。匪R(400MHz，DMS0-d6) δ (卯m): 7.98(s,lH),6.68(s,lH),5.54(s,lH),3.46-3.45(m,4H),3.38-3.36(m,4H),2.72(d,J= 4.8Hz,3H),1.41(s,9H).MS(ESI)m/z:294.5[M+H]+.
[0102] (4)4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中間體B3)的制備
[0103] 將4-乙氨基-6-氯嘧啶以3)(3.81臟〇1，0.68)溶于7111101^中，加入1-叔丁氧羰基哌 嗪（4.57謹〇1，0.858)，碳酸鉀（3.81111111〇1，0.538)，081](3.81111111〇1，0.571111)，加熱到100°(：，反 應72h，將反應液倒入30倍量水中，析出褐色固體，過濾，濾餅用水反復潤洗，真空干燥得褐 色固體。產(chǎn)率62%。1!1-匪1?(4001!^，015〇-(16)3( ??111):7.99(8，1!〇,6.69(^ = 5.2抱，1!1)， 5.56(s，lH),3.45-3.43(m，4H),3.37-3.36(m，4H)，3.20(m，2H)，1.42(s，9H)，1.09(t，J= 7.2Hz,3H).
[0104] (5) 6-(哌嗪-1 -基)嘧啶-4-取代鹽酸鹽（中間體C)的制備
[0105] 將4-(6-取代-嘧啶-4-基）哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中間體幻（12.4111111〇1，3.478)溶于 30ml 4mo 1/L HC1二氧六環(huán)溶液，室溫反應24h，析出固體，過濾，濾餅用乙酸乙酯潤洗，真空 干燥得中間體C。
[0106] 6_(哌嗪-1-基)嘧啶-4-氯鹽酸鹽(C1).白色固體，產(chǎn)率96%。
[0107] N-甲基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺鹽酸鹽(C2).褐色固體，產(chǎn)率99%。
[0108] N-乙基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-4-胺鹽酸鹽(C3)，褐色固體，97%。
[0109] (6)(4-氯苯甲?；?甘氨酸（中間體D3)的合成
[0110] 將對氯苯甲酸（3.19mmol，500mg)溶于5mlDMF中，加入0-苯并三氮唑-四甲基脲六 氟磷酸酯(HBTU) (3.83mmol，1.45g)，攪拌2min，加入甘氨酸乙酯鹽酸鹽（3.51mmol，491mg)， 滴加1.33ml三乙胺(9.58mmo 1)，室溫反應過夜，將反應液倒入30倍量水中，析出固體，過濾， 分別用10%稀鹽酸溶液，飽和碳酸氫鈉溶液，清水洗滌濾餅，真空干燥得米黃色固體，產(chǎn)率 70% 〇
[0111] 將(4-氯苯甲酰基)甘氨酸乙酯（2.21mmol，0.535g)溶于 15ml THF:Me0H:H20(3:l: 1)溶液中，加入氫氧化鋰(4.43mmo 1，0.106g)，室溫反應過夜。減壓蒸除溶劑，分別加入20ml 乙酸乙酯和水萃取，分出水相，水相用10 %鹽酸溶液酸化至pH = 1，再用20ml乙酸乙酯萃取， 有機層用飽和食鹽水洗，無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓蒸除溶劑得白色固體，產(chǎn)率85%。1!1-NMR(400MHz，DMS0-d6)S(pp m):12.64(br，lH)，8.93(t，J = 6Hz，lH)，7.88(d，J = 8.4Hz，2H)， 7.58(d，J = 8.4Hz，2H)，3.91(d，J = 6Hz，2H).
[0112] (7)目標化合物La的制備
[0113] 將取代苯乙酸或(取代苯甲?；?甘氨酸（中間體D) (0.4mmo 1)溶于2mlDMF中，加入 〇-苯并三氮唑_四甲基脲六氟磷酸酯(HBTU) (0.45mmol，171mg)，攪拌，加入6-(哌嗪-1-基） 嘧啶-4-取代鹽酸鹽（中間體〇(0.4臟〇1，10011^)，11二異丙基乙胺(2臟〇1，0.351111)，室溫 反應過夜，將反應液倒入30倍量水中，析出固體，過濾，濾餅用水潤洗，真空干燥，再用乙酸 乙酯重結晶，得目標產(chǎn)物La.
[0114] 所述目標化合物La具體如下：
[0115] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-1-基）-2-(4-氟苯基）乙酮（Lai)，白色固體，產(chǎn)率 56%，mp:15hl54°C<31H-Mffi(400MHz，DMS0-d6)S(pp m):8.36(s，lH)，7.27(d，J = 6Hz，lH)， 7.26(d，J = 6Hz，lH)，7.13(t，J=12.8Hz，2H)，6.98(s，lH)，3.77(s，2H)，3.64-3.56(m，8H) ? 13C-NM R(100MHz，DMS0)S(ppm) :169.56,162.56，161.41((1, J = 241Hz) ,159.58,158.38, 132 ·39(d，J = 3Hz)，131 ·49(d，J = 8Hz，2C)，115·41 (d，J = 21Hz，2C) ,102.37,44.98,44.01， 43.79,41.10,38.86.
[0116] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-1-基）-2-(4-氯苯基）乙酮（La2)，白色固體，產(chǎn)率 53%，mp:167-168°C<31H-MMR(400MHz，DMS0-d6)S(pp m):8.36(s，lH)，7.37(d，J = 8.4Hz， 2H),7.26(d ,J = 8.4Hz,2H) ,6.98(s, 1H), 3.78(s , 2H), 3.64-3.56(m,8H). 13C-NMR( 100MHz , DMS0)5(ppm):169.35,162.56,159.58,158.39,135.31,131.59(20,131.52,128.62(2C), 102.38.44.97.44.00. 43.77.41.11.39.02
[0117] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-1-基）-2-(4-溴苯基）乙酮（La3)，白色固體，產(chǎn)率 47%，mp:183-184°C<31H-MMR(400MHz，DMS0-d6)S(pp m):8.36(s，lH)，7.50(d，J = 8.4Hz， 2H),7.20(d ,J = 8.4Hz,2H) ,6.98(s, 1H), 3.76(s , 2H), 3.64-3.56(m,8H). 13C-NMR( 100MHz , DMS0)5(ppm):169.28,162.55,159.58,158.39,135.74,131.99(2C),131.54(2C),120.00, 102.38.44.97.44.00. 43.77.41.11.39.09.
[0118] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-1-基)-2-(2,4-二氯苯基）乙酮(La4)，白色固體，產(chǎn) 率69%，1^:166-167。(：。 1!1-匪1?(4001〇^，0150-(16)3(??111):8.37(8，1!〇,7.59((1，了=1.6!^， lH),7.38(dd ,Ji = 8.4Hz ,J2 = 2Hz,1H) ,7.34(d ,J = 8.4Hz,lH) ,7.00(s,lH) ,3.88(s,2H), 3.75-3.57(m，8H).13C-NMR(100MHz，DMS0)S(pp m):168.08，162.58，159.60，158.40，135.23， 134.10,133.75,132.45,128.81,127.53,102.39,44.83,44.02,43.86,41.21,37.30.
[0119] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基）哌嗪-1-基)-2-(2,6-二氯苯基）乙酮(La5)，白色固體，產(chǎn) 率76%，mp :198-2001:,11-匪R(400MHz，DMS0-d6)S(ppm) :8.38(s，lH)，7.46((1, J = 8Hz， 2H),7.32(dd ,Ji = 7.6Hz ,J2 = 0.8Hz,1H) ,7.02(s,lH) ,4.05(s, 2H), 3.77(s ,4H), 3.67(s, 2H) ,3.59-3.56(m，8H).13C-NMR(100MHz，DMS0)S(ppm) :167.01,162.61,159.61,158.41， 135.89(2C)，133.46,129.66,128.45(2C)，102.43,44.79,44.11,43.91,41.28,36.01.
[0120] 2-(4-氟苯基)-1-(4-(6-(甲胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La6)，褐色固體， 產(chǎn)率24%，m ρ: 172-173Γ</Η-匪R(400MHz，DMS0-d6)S(ppm) :7.99(s，lH)，7.27((1, J = 5.6Hz,lH) ,7.26(d,J = 5.6Hz,lH) ,7.12(t,J = 9.2Hz,2H) ,6.68(q,J = 4Hz,lH) ,5.54(s, lH)，3.75(s，2H)，3.57-3.54(m，4H)，3.45(s，4H)，2.73(d，J=4.8Hz，3H). 13C-NMR(100MHz, DMS0)5(ppm) :169.45,164.26,162.38,161.39(d,J = 241Hz) ,157.60,132.48(d,J = 3Hz), 131.46(d ,J = 8Hz,2C),115.42(d ,J = 21Hz,2C),45.23,44.00,43.73,41.26,38.91,28.04.
[0121] 2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La7)，褐色固體， 產(chǎn)率54%，m ρ: 174-175Γ</Η-匪R(400MHz，DMS0-d6)S(ppm) :8.00(s，lH)，7.34((1, J = 8.4Hz,2H) ,7.26(d,J = 8.4Hz,2H),6.69(q,J = 4Hz,lH) ,5.55(s,lH),3.77(s,2H) ,3.57- 3.53(m,4H),3.346(s,4H),2.73(d,J=4.8Hz,3H).13C-NMR(100MHz,DMS0)5(ppm):169.22, 164.29,162.39,157.61,135.40,131.55(20,131.49,128.62(20,45.23,44.00,43.73, 41.29.39.08.28.04.
[0122] 2-(4-溴苯基)-1-(4-(6-(甲胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La8)，褐色固體， 產(chǎn)率55%，m ρ: 183-184Γ</Η-匪R(400MHz，DMS0-d6)S(ppm) :7.99(s，lH)，7.50((1, J = 8.4Hz,2H) ,7.21(d,J = 8.4Hz,2H),6.67(q,J = 4Hz,lH) ,5.54(s,lH),3.75(s,2H) ,3.56-3.53(m，4H)，3.45(s，4H)，2.72(d，J = 4.4Hz，3H).13C-NMR(100MHz，DMS0)S(ppm) :169.15， 164.29,162.39,157.61,135.82,131.95(20,131.54(20,119.97,45.23,44.00,43.73, 41.29.39.15.28.05.
[0123] 2-(2,4-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(La9)，類白色 固體，產(chǎn)率63 %，mp: 199-200 Γ。匪R( 400MHz，DMS0-d6 )S(ppm):8.00(s，lH)，7.59(d，J = 2Hz,lH) ,7.37(dd ,Ji = 8.4Hz ,J2 = 2Hz,1H) ,7.35(d ,J = 8.4Hz,lH),6.69(q ,J = 4Hz,lH), 5.57(s,lH),3.86(s,2H),3.66-3.48(m,8H) ,2.73(d,J = 4.8Hz,3H) ,13C-NMR(100MHz,DMS 0)5(ppm):167.96,164.30,162.41,157.63,135.21,134.17,133.74,132.42,128.80, 127.52.45.08.44.01.43.81.41.40.37.32.28.05.
[0124] 2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(LalO)，類白 色固體，產(chǎn)率70%，mp:231-233°C< 31H-NMR(400MHz，DMS0-d6)S(ppm):8.02(s，lH)，7.46(d，J = 8Hz,2H),7.32(dd ,Ji = 7.6Hz ,J2 = 0.8Hz,1H) ,6.70(d ,J = 4.8Hz , lH), 5.58(s , lH) ,4.04 (s,2H),3.73-3.72(m,2H),3.62(m,2H),3.55-3.54(m,2H),3.50-3.48(m,2H),2.74(d,J= 4.8Hz , 3H). 13C-NMR(100MHz,DMS0)δ(ppm):166.86,164.32,162.42,157.64,135.89(2C), 133.53,129.64,128.45(20,45.05,44.12,43.89,41.49,40.20,36.02,28.05.
[0125] 2-(4-氟苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lall)，褐色固體， 產(chǎn)率41%，mp:162-164cC<31H-NMR(400MHz，DMS0-d6)S(pp m):7.99(s，lH)，7.27(s，2H)，7.14 (t，J = 8.4Hz，2H)，6.71(s，lH)，5.56(s，lH)，3.75(s，2H)，3.53(d，J=14Hz，4H)，3.43(s， 4H)，3.20(m，2H)，1.09(t，J=6.4Hz，3H). 13C-NMR(100MHz，DMS0)S(ppm):169.46,163.54， 162.36,161.40(d,J = 241Hz) ,157.71,132.48(d,J = 3Hz), 131.45(d,J = 8Hz,2C),115.41 (d,J = 21Hz, 2C),45.22,44.02,43.74,41.26,38.92,35.53,15.11.
[0126] 2-(4-氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal2)，褐色固體， 產(chǎn)率 90 %，mp: 171-173 Γ,Η-匪 R(400MHz，DMS0-d6) δ (ppm) :7.99( s，lH)，7.36((1, J = 8.4Hz，2H)，7.26(d，J = 8.4Hz，2H)，6.70(t，J = 5.6Hz，lH)，5.56(s，lH)，3.76(s，2H)，3.57-3.52(m，4H)，3.45-3.43(m，4H)，3.20(m，2H)，1.09(t，J = 7.2Hz，3H).13C-NMR(100MHz，DMS0) 5(ppm):169.21,163.54,162.35,157.71,135.39,131.55(20,131.49,128.62(2C),45.22, 44.01.43.74.41.28.39.08.35.53.15.11.
[0127] 2-(4-溴苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal3)，褐色固體， 產(chǎn)率81 %，mp: 178-179 Γ,Η-匪 R(400MHz，DMS0-d6) δ (ppm) :7.99( s，lH)，7.50((1, J = 8.4Hz，2H)，7.20(d，J = 8.4Hz，2H)，6.70(t，J = 5.2Hz，lH)，5.56(s，lH)，3.75(s，2H)，3.57-3.52(m，4H)，3.45-3.43(m，4H)，3.20(m，2H)，1.09(t，J = 7.2Hz，3H).13C-NMR(100MHz，DMS0) 5(ppm):169.14,163.54,162.35,157.71,135.83,131.95(20,131.54(2C),119.97,45.22, 44.01.43.74.41.28.39.15.35.53.15.11.
[0128] 2-(2，4-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal4)，褐色 固體，產(chǎn)率 96 %，mp: 224-226 Γ。匪R( 400MHz，DMS0-d6 )S(ppm):8.01(s，lH)，7.58(d，J = 2Hz,lH) ,7.37(dd ,Ji = 8Hz j2 = 2Hz,lH),7.34(d ,J = 8.4Hz,lH) ,6.72(t ,J = 5.6Hz , 1H), 5.59(s,lH),3.86(s,2H),3.64-3.62(m,2H),3.55(m,4H),3.47-3.46(m,2H),3.19(m,2H), 1.09(t，J = 6.4Hz，3H) .13C-匪R(100MHz，DMS0)S(ppm) :167.96,163.56,162.35,157.73, 135.21,134.18,133.75,132.42,128.80,127.53,45.07,44.02,43.81,41.40,37.32, 35.53,15.12.
[0129] 2-(2,6-二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮(Lal5)，褐色 固體，產(chǎn)率61 %，mp: 183-185 Γ。h-NMlK 400MHz，DMS0-d6 )S(ppm):8.02(s，lH)，7.46(d，J = 8Hz,2H),7.32(dd ,Ji = 7.6Hz j2=1.2Hz,lH),6.72(t ,J = 5.6Hz,lH),5.60(s,lH),4.04(s, 2H),3.73(m,2H),3.60(m,2H),3.56(m,2H),3.47(m,2H),3.22(m,2H),1.10(t,J=7.2Hz, 3H). 13C-NMR(100MHz,DMS0)5(ppm):166.85,163.57,162.37,157.74,135.89(2C),133.53, 129.63,128.44(20,45.05,44.13,43.89,41.48,36.02,35.55,15.13.
[0130] N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)苯甲酰胺(Lal6)，淡黃色固體， 產(chǎn)率58 %，mp: 200-202 Γ。匪R(400MHz，DMS0-d6) δ (ppm): 8 · 60 (t，J = 5 · 6Hz，1H)，8 · 38 (s,lH) ,7.88(d,J = 7.2Hz,2H) ,7.55(t,J = 7.2Hz,lH) ,7.48(t,J = 7.6Hz,2H) ,7.01 (s, 1H) ,4.19(d，J = 5.6Hz，2H) ,3 ·75-3·57(ι?，8H) .13C-匪R(101MHz，DMS0)S(ppm): 167.85， 166.81,162.57,159.60,158.41,134.57,131.78,128.79(20,127.70(20,102.40,43.84 (2C),41.45(2C),41.25.
[0131] N-(2-(4-(6-(甲氨基）嘧啶-4-基）哌嗪-1-基)-2-氧乙基）苯甲酰胺(Lal7)，淡褐 色固體，產(chǎn)率60 %，mp : 204-206 °C。匪R(400MHz，DMS0-d6) δ (ppm): 8 · 59 (t，J = 5 · 6Hz， 1H)，8.02(s，lH)，7.88(d，J = 7.6Hz，2H)，7.55(t，J = 7.2Hz，lH)，7.48(t，J = 7.6Hz，2H)， 6.72(d，J = 4.8Hz，lH)，5.58(s，lH)，4.19(d，J = 5.2Hz，2H)，3.58-3.51(m，8H)，2.74(d，J = 4 · 8Hz，3H) .13C-匪R(101MHz，DMS0)δ(ppm):167.74,166.81,164.18,162.37,157.51, 134·60，131·78，128·80(2C)，127·71(2C)，43·99(2C)，43·77(2C)，41·45，28·07
[0132] N-(2-(4-(6_(乙氨基）嘧啶-4-基）哌嗪-1-基)-2-氧乙基）苯甲酰胺(Lal8)，褐色 固體，產(chǎn)率52 %，mp: 202-204Γ。匪R(400MHz，DMS0-d6) δ(ppm): 8 · 59(t，J = 5 · 6Hz，1H)， 8.02(s,lH) ,7.88(d,J = 7.2Hz,2H) ,7.55(t,J = 7.2Hz,lH) ,7.48(t,J = 7.6Hz,2H) ,6.75 (t ,J = 5.2Hz,lH) ,5.60(s,lH) ,4.18(d,J = 5.6Hz,2H) ,3.58-3.48(m,8H) ,3.21(m,2H), 1.10(t，J = 7.2Hz，3H) .13C-匪R(101MHz，DMS0)S(ppm) :167.73,166.80,163.42,162.31, 157.60,134.60,131.78,128.80(2C),127.71(2C),44.01(2C),43.78(2C),41.44,35.56, 15.11.
[0133] N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(Lal9)，黃色固 體，產(chǎn)率69%，mp: 177-17%~</Η-匪R(400MHz，DMS0-d6)S(ppm) :8.73(t，J = 5.6Hz，lH)， 8.38(s,lH) ,7.90(d,J = 8.6Hz,2H) ,7.56(d,J = 8.6Hz,2H) ,7.01(s,lH) ,4.19(d,J = 5·7Ηζ，2Η),3.75-3.57(m，8H) .13C-匪R(101MHz，DMS0)S(ppm):167.73,165.84,162.58, 159.62,158.42,136.62,133.33,129.68(20,128.91 (20,102.41,43.84(2C),41.47(2C), 41.25.
[0134] N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La20)， 褐色固體，產(chǎn)率55 %，mp: 224-227 °C。h-NMR(400MHz，DMS0-d6) δ (ppm): 8 · 70 (t，J = 5 · 6Hz， 1H) ,8.02(s,lH),7.90(d ,J = 8.6Hz,2H) ,7.56(d ,J = 8.5Hz,2H) ,6.69(d ,J = 4.8Hz , 1H), 5.58(s，lH)，4.18(d，J = 5.7Hz，2H)，3.58-3.51(m，8H)，2.74(d，J = 4.6Hz，3H) .13C-匪R (101MHz,DMS0)5(ppm):167.60,165.82,164.24,162.38,157.56,136.61,133.34,129.67 (2C),128.90(2C),43.98(2C),43.76(2C),41.47,28.06.
[0135] N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-氧乙基)-4-氯苯甲酰胺(La21)， 淡黃色固體，產(chǎn)率45%，1^:208-210°(：。 1!1-匪1?(4001〇^，0150-(16)5(??111):8.71(^ = 5.6Hz,lH),8.01(s,lH),7.90(d ,J = 8.6Hz,2H),7.56(d ,J = 8.6Hz,2H),6.72(t ,J = 5.3Hz, lH),5.59(s,lH),4.18(d ,J = 5.7Hz,2H),3.57-3.48(m,8H),3.26-3.16(m,2H),1.10(t ,J = 7. lHz，3H) .13C-匪R(101MHz，DMS0)δ(ppm):167.58,165.80,163.57,162.35,157.73, 136.59,133.35,129.66(20,128.89(2C),43.99(20,43.75(2C),41.46,35.53,15.12.
[0136] 實施例2目標化合物Ljl~Lj21的制備
[0137] (1 )4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛（中間體El)的制備
[0138] 將4,6-二氯啼啶-5-甲醛（16.951111]1〇1，38)溶于2〇1111甲苯中，通入氨氣3〇111；[11，室溫 攪拌過夜，過濾得黃色固體，柱層析純化(洗脫劑為乙酸乙酯：石油醚=1:3)，得白色固體， 產(chǎn)率60%。 1!1-匪1?(40冊!^，0150-(16)3(??111):10.25(8，1!1)，8.72(1^，1!1)，8.56(1^，1!1)， 8.40(s,lH).
[0139] (2)4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛0-甲基肟（中間體E2)的制備
[0140] 將4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛$1)(7.62111111〇1，1.28)溶于251111冰醋酸和41111水的混 合溶液中，加入甲氧胺鹽酸鹽（13.7lmmo 1，1.14g)，25°C反應過夜。TLC監(jiān)測反應完成后，向 反應液中加入20ml水，用50ml乙酸乙酯萃取，有機層依次水洗3次，10 %氫氧化鈉溶液洗，飽 和食鹽水洗，無水硫酸鎂干燥，過濾，減壓蒸除溶劑，柱層析純化(洗脫劑石油醚：乙酸乙酯 =3:1)，得白色固體，產(chǎn)率99%。 1!1-匪1?(40冊!^，0150-(16)3(??111):8.49(8,2!1)，8.26(8， 1H)，7.80(s，1H)，3.98(s，3H).
[0141 ] (3)4-(6-氨基-5-取代嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中間體F)的制備
[0142] 將4-氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛（F1)，4_氨基-6-氯嘧啶-5-甲醛0-甲基肟（F2) (9.65mmol)分別溶于20ml甲醇中，加入1-叔丁氧羰基哌嗪（10.61mmol，1.98g)，N，N-二異丙 基乙胺（19.29臟〇1，3.41111)，加熱至60°(：~70°(：，回流反應3~411，11(：監(jiān)測反應結束，降至室 溫，減壓蒸除溶劑，加20ml水攪拌過濾，濾餅用水潤洗，真空干燥，得中間體F。
[0143] 4-(6-氨基-5-醛基嘧啶-4-基）哌嗪-1-甲酸叔丁酯，白色固體（中間體F1)，產(chǎn)率 77 % . ^-N MR(400MHz,DMS〇-d6)δ(ppm):9.76(s,1H),8.28(br,1H),8.08(s,1H),7.83(br, 1H)，3·61-3·58(m，4H)，3·44(m，4H)，1·42(s，9H)·
[0144] 4-(6-氨基-5-((甲氧亞胺基）甲基）嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯，白色固體（中 間體F2)，產(chǎn)率72% ,Η-匪R(400MHz，CDCl3)S(ppm):8.20(s，lH)，8.12(s，lH)，3.96(s，3H)， 3.55-3.53(m，4H),3.35-3.33(m，4H)，l.48(s，9H).
[0145] (4) 4-氨基-6-(哌嗪-1 -基)啼啶-5-取代鹽酸鹽（中間體G)的制備
[0146] 將4-(6-氨基-5-取代嘧啶-4-基）哌嗪-1-甲酸叔丁酯（中間體G) (4.45mmol)溶于 10ml4m ol/LHCl二氧六環(huán)溶液中，室溫攪拌過夜，析出白色固體，過濾，濾餅用乙酸乙酯潤 洗，真空干燥得白色固體。
[0147] 4-氨基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛鹽酸鹽（中間體G1)，白色固體，產(chǎn)率89%。
[0148] 4-氨基-6-(哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲醛0-甲基肟鹽酸鹽（中間體G2)，白色固體，產(chǎn)率 89% 〇
[0149] (5)中間體H1、H2、H3的制備
[0150] 將對氯苯甘氨酸、L-苯丙氨酸、L-色氨酸(2.45mmol，500mg)分別溶于10ml水中，加 入碳酸鉀（2 · 45mmol，338 · 37mg)，二碳酸二叔丁酯（2 · 69mmol，587 · 76mg)，室溫反應過夜， TLC監(jiān)測反應完全。反應液用10 %鹽酸溶液酸化至pH = 1，用20ml乙酸乙酯萃取，有機層用飽 和食鹽水洗，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸除溶劑得中間體H1、H2、H3。
[0151] 2-((叔丁氧羰基)氨基)-2-(4-氯苯基）乙酸（中間體!11)，白色固體，產(chǎn)率78%。 1!1-NMR(400MHz，DMS0-d6)S(ppm): 12.88(br，lH)，7.64((1,J = 8Hz，lH)，7.41(s，4H)，5.12((1,J = 8.4Hz,lH)1.38(s,9H).
[0152] (叔丁氧羰基）-L-苯丙氨酸（中間體H2)，無色油狀物，產(chǎn)率99 %。匪R(400MHz， DMS0-d6)5(ppm):12.58(br,lH),7.30-7.18(m,5H),7.11(d,J=8.4Hz,lH),4.12-4.06(m, 1H)，3·03-2·99(m，1H)，2·85-2·79(m，1H)，1·32(s，9H)。
[0153] (叔丁氧羰基）-L-色氨酸（中間體H3)，白色固體，產(chǎn)率80 %。匪R( 400MHz，DM S0-d6)5(ppm):12.53(s,lH),10.83(s,lH),7.51(d,J = 8Hz,lH),7.32(d,J = 8Hz,lH) ,7.14 (s,lH),7.06(t ,J = 7.6Hz,lH),6.98(t ,J = 7.6Hz,2H),4.17-4.12(m,lH),3.15-3.10(m, 1H),3.00-2.94(m,1H),1.33(s,9H)〇
[0154] (6)目標化合物Lj的制備
[0155] 將中間體H(0.357mmol)溶于3mlDMF中，加入0-苯并三氮唑-四甲基脲六氟磷酸酯 (H BTU)(0.403mmol，153mg)，4-氨基-6-(哌嗪-1-基）嘧啶-5-取代鹽酸鹽（中間體G)或6-(哌嗪-1-基）嘧啶-4-氯鹽酸鹽（中間體Cl)(0·357mmol)，N，N-二異丙基乙胺（l·78mmol， 0.3 lml )，室溫反應過夜，倒入30倍量水中，析出固體，過濾，用水潤洗濾餅，真空干燥，柱層 析純化(洗脫劑為石油醚：乙酸乙酯=3:1~乙酸乙酯)得產(chǎn)物，將產(chǎn)物溶于10ml4mo 1/LHC1 二氧六環(huán)溶液，反應24h，TLC監(jiān)測反應結束，減壓蒸除溶劑，加乙酸乙酯潤洗，過濾，真空干 燥得目標化合物Lj。
[0156] 4-氯-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1-基)嘧啶鹽酸鹽，黃綠 色固體(Ljl)，產(chǎn)率 16%</H-NMR(400MHz，D2〇)S(ppm):8.16(s，lH)，7.26(dd，J = 8.4,5.2Hz， 2H)，7.07(t，J = 8.7Ηζ，2Η)，6·67(s，lH)，4.35(dd，J = 8.3，5·0Ηζ，1Η) ,3.88-3.71(m，2H)， 3.56-3.32(m,7H) ,3.22(dd,J=12.7,4.8Hz,lH) ,2.88(s,lH) ,1.22(dd,J = 6.4,4.2Hz, 6H) .13C-匪R(101MHz,D2〇)S(ppm) :170.54,162 · 46( J = 245Hz) ,161.58,155.03,154.68, 130.23(J = 3Hz),129.89(J = 9Hz,2C),116.62(J = 22Hz,2C),102.64,51.65,47.06,45.06, 44.01,43.37,43.25,41.24,18.00,17.89.MS(ESI)m/z:406[M+H]+.
[0157] 4-氯-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-i-基)嘧啶鹽酸鹽，黃綠 色固體〇^_2)，產(chǎn)率11%。1!1-匪1?(4001!^，〇2〇)3(??111):8.22(8，1!〇,7.36((1，了 = 8.4!^，2!〇， 7.22(dJ = 8.5Hz,2H),6.74(s,lH),4.33(dd,J = 8.4,4.9Hz,lH),3.92-3.74(m,2H),3.56-3.32(m,7H) ,3.22(dd,J=12.7,4.9Hz,lH) ,2.97-2.93(m,lH) ,1.21(dd,J = 6.5,4.3Hz, 6H).13C-NMR(101MHz，D2〇)S(ppm):170.37，161.65，154.88，154.35，134.19，132.88，129.80 (2C),129.45(2C),102.73,51.65,46.90,45.22,43.97,43.42,43.16,41.17,17.96, 17.85,MS(ESI)m/z:422[M+H]+.
[0158] 4-氯-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(異丙氨基）丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶鹽酸鹽，白色 固體（1^_3)，產(chǎn)率39%。 1!1-匪1?(40冊泡，〇2〇)3(??111):8.22(8，1!1)，7.48((1，了 = 8.4!^，2!1)， 7.15(dJ = 8.5Hz,2H),6.75(s,lH),4.31(dd,J = 8.5,4.8Hz,lH),3.90-3.73(m,2H),3.56-3.32(m,7H),3.21(dd,J = 12.7,4.8Hz,lH),2.94(s,lH),1.21(dd,J = 6.5,4.2H z,6H).13C-MMR(101MHz，D2〇)S(ppm):170.22，161.48，154.28，154.16，133.40，132.76(2C)，129.72 (2C),122.29,102.72,51.65,46.81,45.28,43.92,43.54,43.25,41.12,17.97,17.83. MS (ESI)m/z:466[M+H]+.
[0159] 4-氯-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)- 3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-i-基)嘧啶鹽酸鹽， 棕色固體（1^_4)，產(chǎn)率40%。1!1-匪1?(40冊!^，〇2〇)3( ??111):8.24(8，1!〇,7.56((1，了 = 1.9泡， 1H) ,7.27(dd ,J = 8.4,1.9Hz,lH) ,7.12(d ,J = 8.4Hz,lH),6.77(s,lH) ,4.63(dd ,J = 9.2, 3.6Hz,lH),3.94-3.77(m,2H),3.58-3.36(m,7H),3.16(dd,J=12.6,3.7Hz,lH),3.02(s, 1H) ,1.24(dd,J = 6.3,4.5Hz,6H) .13C-NMR(101MHz,D2〇)5(ppm): 169.93,161.55,154.45, 153.62,135.12,133.80,130.49,130.12,129.55,128.55,102.72,51.76,45.14,43.77, 43.48,43.08,42.54,41.19,18.00,17.83.MS(ESI)m/z:456[M+H]+.
[0160] 1-(4-(6-氯嘧啶-4-基)-3-羥基-2-苯基丙-1-酮，無色油狀物(Lj5)，產(chǎn)率46%。 4-匪1?(4001〇^，0150-(16)3( ??111):8.32(8，1!〇,7.32((1，了 = 4.3泡，4!1)，7.24(七(1，了 = 8.3， 3.9Hz,lH) ,6.91(s,lH),4.74(t ,J = 5.3Hz,lH) ,4.15(dd ,J = 7.9,5.6Hz , 1H), 4.04-3.94 (m,lH),3.72-3.56(m,5H),3.55-3.40(m,3H),3.18(s, 1H). 13C-NMR(101MHz,DMS0)5(ppm): 170.86,162.53,159.56,158.34,138.07,129.04(20,128.56(20,127.41,102.35,64.78, 50.59,44.71,43.96,43.77,41.23.MS(ESI)m/z:347[M+H]+.
[0161] 4-(4-(L-色氨酸）哌嗪-1-基）-6-氯嘧啶鹽酸鹽，褐色固體（Lj6)，產(chǎn)率49%。 [a]D25:+44.10° (cl, MeOH)。1!!-匪 R(400MHz，D2〇)S(ppm) :8.17(s，lH) ,7.39-7 ·34(ι?，1H)， 7.24-7.16(m，2H)，7.00(m，2H)，6.50(s，lH)，4.62(dd，J=10·7,5·2Hz，lH)，3.51(m，lH)， 3.25(m,6H) ,2.77(ddd, J=10.5,5.7,4.0Hz, 1H) ,2.64(s, 1H) ,2.18(s, 1H) ,13C-NMR (101MHz,D2〇)5(ppm):168.88,160.55,152.53,150.55,135.65,126.68,125.22,122.09, 119.61,117.83,111.80,106.32,102.67,62.45,50.40,43.60,42.51,40.72,27.11.MS (ESI)m/z:385[M+H]+.
[0162] 4-(4-(L-苯丙氨酸）哌嗪-1-基）-6-氯嘧啶鹽酸鹽，白色固體（Lj7)，產(chǎn)率57%。 [a]D25:+21.60。（c Ι,ΜθΟΗ)。1!!-匪R(400MHz，D2〇)S(ppm):8.27(s，lH)，7.30(t，J = 7.5Hz， 2H),7.25-7.18(m,3H),6.76(s,lH),3.75-3.71(m,2H),3.59-3.34(m,5H),3.22(dd,J= 13·3,5·6Ηζ，1Η)，3.06-2.96(m，2H)，2.81(s，lH) .13C-匪R(101MHz，D2〇)S(ppm) :168.14, 161.52，154.94，154.43，133.45,129.67(2C),129.21(2C),128.15,102.82,50.90,44.06， 43.21,42.88,41.13,37.10.MS(ESI)m/z:346[M+H]+.
[0163] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(異丙氨基)丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛鹽 酸鹽，白色固體（!^_8)，產(chǎn)率93%。 1!1-匪1?(4001取，〇2〇)3(??111):8.01(8，1!1)，7.26((1(1，了 = 8.7,5.2Hz,2H),7.09(t ,J = 8.8Hz,2H) ,4.34(dd ,J = 8.4,5.0Hz , 1H), 3.86-3.80(m, 1H), 3.79-3.69(m,lH),3.61-3.32(m,7H),3.22(dd,J=12.7,5.0Hz,lH),2.95-2.83(m,lH), 1.21(dd，J = 6.5,4.1Hz，6H).13C-MMR(101MHz，D2〇)S(ppm):174.65，170.58，162.45(J = 245Hz),160.32,154.47,148.28,130.19(J = 3Hz),129.87(J = 8Hz,2C),116.60(J = 22Hz, 2C),80.95,51.61,47.03,45.05,44.01,43.24,43.17,41.27,17.95,17.86.MS(ESI)m/z: 387[M+H-CO]+.
[0164] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲醛鹽 酸鹽，淡黃色固體(Lj9)，產(chǎn)率 79%<31H-NMR(400MHz，D2〇W(ppm):8.00(s，lH)，7.35(d，J = 8.4Hz,2H) ,7.21 (d,J = 8.4Hz,2H),4.31 (dd,J = 8.4,4.9Hz, 1H) ,3.89-3.80(m,lH) ,3.71 (m,lH),3.55-3.31(m,7H),3.20(dd ,J=12.7,4.7Hz,lH),2.96-2.86(m,lH),1.20(dd ,J = 6 · 4,4 · 1Hz，6H) · 13C-匪R( 101MHz，D2〇)S(ppm): 174 · 65，170 · 37，160 · 29，154· 43，148 · 26， 134.13,132.91,129.76(20,129.45(20,80.91,51.64,46.88,45.20,43.97,43.26, 42.96.41.13.17.96.17.84. MS(ESI)m/z:403[M+H-C0]+.
[0165] 4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(異丙氨基)丙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲醛鹽 酸鹽，白色固體（!^_10)，產(chǎn)率92%。 1!1-匪1?(40冊!^，020)3(??111):8.01(8，1!1)，7.50((1，了 = 8.4Hz,2H) ,7.15(d,J = 8.4Hz,2H),4.31(dd,J = 8.5,4.9Hz,lH) ,3.89-3.81(m,lH) ,3.71 (m,lH),3.44(m,7H) ,3.21(dd,J=12.7,4.8Hz,lH),2.98-2.89(m,lH) ,1.21(dd,J = 6.5, 4.0Hz，6H).13C-NMR(101MHz，D2〇)S(ppm):174.64，170.29，160.29，154.42，148.27，133.43， 132·75(2C)，129.72(2C),122.28,80.90,51.64,46.81,45.27,43.97,43.28,42.92,41.11， 17.97.17.84. MS(ESI)m/z:447[M+H-C0]+.
[0166] 4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1-基)嘧啶-5-甲 醛鹽酸鹽，白色固體(Ljll)，產(chǎn)率 88^4-^1^(40010^,020)6(^^):8.02(8,111),7.57((13 = 2.1Hz,lH),7.28(dd,J = 8.4,2.1Hz, 1H),7.11 (d,J = 8.5Hz,lH) ,4.61(dd,J = 9.3,3.8H z,lH),3.91-3.83(m,lH),3.74(m,lH),3.58-3.36(m,7H),3.15(dd,J=12.7,3.6Hz,lH), 3.03-2.92(m，lH)，1.23(dd，J = 6.5,4.3Hz，6H).13C-Mffi(101MHz，D2〇)S(ppm):174.66， 169.97,160.33,154.45,148.30,135.11,133.81,130.55,130.13,129.57,128.55,80.92， 51.77,45.16,43.83,43.26,42.86,42.55,41.23,18.02,17.85.MS(ESI)m/z:437[M+H-C0] + .
[0167] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基）乙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲醛鹽酸鹽，白色固體 (1^_12)，產(chǎn)率57%。1!1-匪1?(40冊抱，〇2〇)3(??111):8.02(8，1!〇,7.44((1，了 = 8.5!^，2!1)，7.37 (d,J=8.6Hz,2H),5.47(s,lH),3.83(m,lH),3.78-3.70(m,lH),3.56-3.41(m,4H),3.29 (ddd,J=13.5,6.1,3.9Hz,lH) ,3.01-2.92(m,lH).13C-NMR(101MHz,D2〇)5(pp m) :176.61, 166.43,160.37,154.47,148.29,136.21,130.08(20,129.92(2C),129.44,81.02,54.54, 43.84,43.19,42.88,41.53.MS(ESI)m/z:347[M+H-C0]+.
[0168] 4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛鹽酸鹽，灰白色固體(Ljl3)，產(chǎn) 率94%。[0]。 25:+29.20。（(：1，]^0!〇。1!1-匪1?(4001!^，〇2〇)3(??111):7.93(8，1!〇,7.40((1，了 = 7.6Hz,lH),7.28-7.21(m,2H),7.09-6.99(m,2H),4.63(dd,J=10.6,5.2Hz,lH),3.54(d d, J = 14.1,7.0Hz,2H) ,3.35(dd,J=13.9,5.1Hz,2H) ,3.21(m,4H) ,2.83-2.72(m,lH) ,2.65 (s，lH) ,2.27(s，lH) .13C-匪R(101MHz，D20)S(ppm): 174.66,168.88,159.60,154.22, 148.02,135.81,126.72,125.16,122.09,119.62,117.82,111.85,106.31,80.87,61.68， 50.42,43.82,42.53,41.95,40.78,27.09.MS(ESI)m/z:366[M+H-C0]+.
[0169] 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛鹽酸鹽，白色固體(Ljl4)，產(chǎn) 率72%。[0]。25:+23.90。（c l，Me0H)<31H-NMR(400MHz，D20)S(ppm):8.04(s，lH)，7.28(t，J = 7.3Hz，2H)，7.21(t，J = 7.5Hz，3H)，4.66(dd，J = 9.7,5.8Hz，lH)，3.72-3.61(m，2H)，3.49-3·31(m，4H)，3·19(dd，J=13.3,5.7Hz，1H),3.04-2.90(m，2H),2.79(s，1H). 13C-NMR (101MHz，D2〇)S(ppm):168.10,160.13,154.44,148.28,133.39,129.62,129.16,128.11， 81.00,50.86,44.05,42.99,42.70,41.15,37.04.MS(ESI)m/z:327[M+H-C0]+.
[0170] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(異丙氨基）丙?；?哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟鹽酸鹽，淡黃色固體（Ljl5)，產(chǎn)率 55%</Η-匪 R(400MHz，D20W(ppm):8.01(s，lH)， 7.86(s，lH)，7.24(dd，J = 8.7,5.2Hz，2H)，7.08(t，J = 8.8Hz，2H)，4.32(dd，J = 8.3,5.0Hz， 1H),3.85(s,3H),3.78-3.69(m,lH),3.63-3.32(m,8H),3.21(dd,J=12.7,5.ΙΗζ,ΙΗ), 2.94-2.84(m,lH) ,1.20(dd,J = 6.5,3.9Hz,6H) .13C-NMR(101MHz,D20)5(p pm) :170.63, 162.48( J = 245Hz) ,161.92,153.15,146.76,145.21,130.23( J = 4Hz) ,129.83( J = 8Hz, 2C),116.63(J=22Hz,2C),88.07,62.28,51.60,48.13,47.69,46.99,44.99,44.40,41.87, 17.94,17.85.MS(ESI)m/z:444[M+H]+.
[0171] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(異丙氨基）丙?；?哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟鹽酸鹽，白色固體(Ljl6)，產(chǎn)率 87%</H-NMR(400MHz，D20)S(ppm):8.01(s，lH)，7.84 (s,lH),7.35(d ,J = 8.2Hz,2H),7.19(d ,J = 8.3Hz,2H) ,4.31 (dd ,J = 8.0,4.7Hz , 1H), 3.86 (s,3H),3.73-3.69(m,lH),3.59-3.56(m,2H),350-3.34(m,6H),3.19(dd,J=12.6,4.6Hz, lH),2.92-2.83(m,lH),1.20(dd ,J = 6.2,3.8Hz,6H).13C-NMR(101MHz,D2〇)5(ppm):170.42, 161.96,153.16,146.82,145.14,134.22,132.96,129.80(20,129.38(20,88.05,62.29, 51.63.48.11.47.51.46.85.45.13.44.25.41.81.17.94.17.82. MS(ESI)m/z:460[M+H]+.
[0172] 4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(異丙氨基）丙酰基)哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟鹽酸鹽，白色固體(Ljl7)，產(chǎn)率 70%</H-NMR(400MHz，D20)S(ppm):8.01(s，lH)，7.83 (s,lH),7.50(d ,J = 8.4Hz,2H),7.13(d ,J = 8.5Hz,2H) ,4.30(dd ,J = 8.5,4.9Hz , 1H), 3.86 (s,3H),3.74-3.66(m,lH),3.61-3.32(m,8H),3.19(dd,J=12.7,4.9Hz,lH),2.91-2.82(m, 1H) ,1.20(dd,J = 6.5,3.9Hz,6H) .13C-NMR(101MHz,D2〇)5(ppm): 170.34,162.01,153.24, 146.95,145.14,133.48,132.79(20,129.65(20,122.38,88.11,62.30,51.63,48.17, 47.45.46.79.45.22.44.23.41.83.17.95.17.82. MS(ESI)m/z:504[M+H]+.
[0173] 4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲 醛 〇-甲基肟鹽酸鹽，黃色固體(Ljl8)，產(chǎn)率 55%<3iH-NMR(4〇〇MHZ，D 2〇W(ppm):8.07(s，lH)， 7.90(s，lH)，7.61(d，J=1.7Hz，lH)，7.31(dd，J = 8.4,2.1Hz，lH)，7.13(d，J = 8.4Hz，lH)， 4.64(dd J = 9.2,3.7Hz,lH),3.91(s,3H),3.81-3.73(m,lH),3.69-3.38(m,7H),3.26(dt ,J = 9.2,4.3Hz,lH) ,3.17(dd,J=12.8,3.8Hz,lH) ,3.00-2.91(m,lH) ,1.27(dd,J = 6.3, 4.1Hz,6H). 13C-NMR( 101MHz ,D2〇)5(ppm): 170.09,162.07,153.30,147.01,145.23,135.24, 133.85,130.69,130.26,129.72,128.61,88.17,62.39,51.84,48.08,47.51,45.20,44.17, 42.63,42.01,18.08,17.91.MS(ESI)m/z:494[M+H]+.
[0174] 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基）乙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟鹽酸鹽， 淡黃色固體(L jl9)，產(chǎn)率62%<31H-NMR(400MHz，D2〇)S(ppm):8.03(s，lH)，7.85(s，lH)，7.44 (d,J = 8.5Hz,2H) ,7.35(d,J = 8.6Hz,2H) ,5.48(s,lH) ,3.86(s,3H) ,3.78-3.69(m,lH), 3.64-3.41(m,5H),3.34(dt,J = 9.5,4.4Hz,lH),2.97-2.88(m,lH).13C-NMR(101M Hz,D20)5 (ppm):166.50,162.04,153.18,146.84,145.12,136.29,130.11,129.87,129.49,88.27, 62.32,54.49,47.93,47.55,44.15,42.19.MS(ESI)m/z:404[M+H]+.
[0175] 4-(4_(L-色氨酸）哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基肟鹽酸鹽，灰白色固體 (1^20)，產(chǎn)率56%。[0]。 25:+34.70。（(：1，]\^0!1)。1!1-匪1?(4001!^，020)3(??111):7.92(8，1!1)， 7.51(s，lH)，7.35(dd，J=17.7,8.0Hz，2H)，7.23(s，lH)，7· ll-6.99(m，2H)，4.63(dd，J = 10.6，5·1Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.53-3.45(m，2H)，3.33(dd，J=13·9,5·2Ηζ，1Η),3.24-3.12 (m，5H) ,2.82-2.72 (m，1H)，2 ·69-2·61(ι?，1H) .13C-匪 R(101MHz，D20) δ (ppm): 168.71， 161.18,152.95,146.53,144.94,135.79,126.75,125.22,122.23,119.69,117.86,111.96， 106.41，87.94,62.33,50.30,47.22,47.01,44.58,41.85,27.15.MS(ESI)m/z:423[M+H]+.
[0176] 4-(4_(L-苯丙氨酸）哌嗪-1-基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基肟鹽酸鹽，黃色固體 (1^21)，產(chǎn)率58%。[0]。 25:+17.70。（(：1，]\^0!1)。1!1-匪1?(4001!^，020)3(??111):8.06(8，1!1)， 7.86(s,lH) ,7.31 (d,J = 7.4Hz,2H) ,7.21 (d,J = 6.5Hz,3H) ,3.89( s,3H) ,3.56-3.31 (m, 7H)，3.19(dd，J=13.2,5.7Hz，lH)，3.04-2.96(m，2H)，2.68-2.60(m，lH). 13C-NMR(101MHz, D20)5(ppm):168.00,161.79,153.28,146.88,145.25,133.46,129.69(2C),129.25(20, 128.21,88.35,62.35,50.81,47.87,47.68,44.80,42.06,37.05.MS(ESI)m/z:384[M+H]+.
[0177] 實施例3:化合物的生物活性(Aktl激酶的抑制活性)測定
[0178] 化合物對Aktl激酶的抑制活性采用時間分辨熒光共振能量轉移(TR-FRET)的方法 進行測定。
[0179] (1)待測藥物溶液的配置：用萬分之一天平精密稱取化合物，用生化級DMS0將化合 物配制成濃度為2X10~4ym 〇l/L，作為儲備液，使用前，將儲備液用生化級DMS0稀釋到200μ mol/L，再用激酶緩沖溶液將其濃度稀釋至2.5ymol/L作為待測液，低溫保存，待測液需隨用 隨配，活性實驗中DMS0的濃度不得高于0.5%。
[0180] (2)工作液的配制：
[0181] ①1 X激酶緩沖溶液：用移液槍移取三蒸水2590.5yL，加入5 X激酶緩沖液660yL， DTT溶液33yL，MgCl 2溶液16.5yL，混勻后插入冰中保存。
[0182] ②Aktl激酶工作液：用移液槍移取1 X激酶緩沖液149.72yL，激酶Aktl母液0.28μ L，混勻，插入冰中保存。
[0183] ③底物工作溶液：用移液槍移取IX激酶緩沖液146.25yL，加入底物母液3.75yL， 混勻，插入冰中保存。
[0184] ④ATP工作溶液：用移液槍移取1 X激酶緩沖液147.99yL，加入ATP母液2. OlyL，混 勻，插入冰中保存。
[0185] (3)檢測溶液的配制：用移液槍移取檢測緩沖液295.50yL，加入鏈酶親和素 XL665 母液4.50yL，混勻，插入冰中保存。（使用前20分鐘配制）
[0186] 試驗中設定測試組(S)、背景組(C)、空白組(B)。測試組為待測化合物，按4μ!7孔將 待測化合物溶液加入到384孔板中，然后加入ΑΤΡ溶液2yL/孔;背景組不加化合物，加4yLl X 激酶緩沖液代替，其他與測試組相同；空白組中不加化合物和Aktl，用6yLl X激酶緩沖液代 替，其他與測試組相同。將上述各組于37°C孵育40min，加入檢測液（ΙΟμL孔），37°C孵育2h。 使用PerkinElmer公司的EnSpire多標記微孔板檢測儀檢測，激發(fā)波長為330nm，發(fā)射波長為 620nm和665nm。檢測結果用Ratio值表示，計算抑制率。 其中S表示測試組，C表示背景組，B表示空白 組。
[0188] 本發(fā)明化合物的活性試驗數(shù)據(jù)如表1所示：
[0189] 表1化合物的活性試驗數(shù)據(jù)
[0197]活性數(shù)據(jù)實驗結果顯示，本發(fā)明的6-哌嗪基-取代嘧啶類衍生物對Aktl激酶均有 一定的抑制活性。Lj系列中，當R3為對氯苯基或對溴苯基時活性優(yōu)于芐基和吲哚-3-亞甲 基，嘧啶4位氨基取代好于氯取代，R 4為N-異丙基-氨甲基時活性較氨基要好，嘧啶5位取代 對活性影響很大，為醛基甲氧肟時最好?；衔風 j9、L j 16、L j 17有明顯的Akt 1抑制活性，在1 μΜ濃度下對Aktl激酶抑制率分別為79%、82%、98% j-89是最早發(fā)現(xiàn)的具有Akt抑制活性 的化合物，它對Akt的半數(shù)抑制濃度為2.2μΜ，本發(fā)明的化合物Lj9、Ljl6、Ljl7的抑制活性均 優(yōu)于H-89。
【主權項】
1. 一種式(I)或式(II)所示的化合物或其藥學上可接受的鹽，其中，R:為取代苯基、苯甲酰氨基或對氯苯甲酰氨基;R2為氯、甲氨基或乙氨基;R3為取 代苯基、芐基或吲哚-3-亞甲基;R4為氨基、羥甲基或N-異丙基-氨甲基;R5為氫、醛基或醛基 〇-甲基肟，R6為氯或氨基。2. 根據(jù)權利要求1所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，其特征在于，所述心為對氟苯 基、對氯苯基、對溴苯基、2，4-二氯苯基、2，6-二氯苯基、苯甲酰氨基或對氯苯甲酰氨基;R 2 為氯、甲氨基或乙氨基;R3為苯基、對氟苯基、對氯苯基、對溴苯基、2,4_二氯苯基、芐基或吲 哚-3-亞甲基;R 4為氨基、羥甲基或N-異丙基-氨甲基;R5為氫、醛基或醛基0-甲基肟，R6為氯 或氨基。3. 根據(jù)權利要求1或2所述的化合物或其藥學上可接受的鹽，其特征在于，其是選自下 列化合物： 1-(4-(6_氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4_氟苯基）乙酮； 1-(4-(6_氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4_氯苯基）乙酮； 1-(4-(6_氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(4_溴苯基）乙酮； 1-(4-(6_氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,4_二氯苯基）乙酮； 1- (4-(6_氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2-(2,6_二氯苯基）乙酮； 2_(4_氟苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2_(4_氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2_(4_溴苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2- (2,4_二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2-(2,6_二氯苯基)-1-(4-(6-(甲胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2_(4_氟苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2_(4_氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2_(4_溴苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2-(2,4_二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； 2-(2,6_二氯苯基)-1-(4-(6-(乙胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基）乙酮； N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)苯甲酰胺； N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)苯甲酰胺； N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)苯甲酰胺； N-(2-(4-(6-氯嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)-4_氯苯甲酰胺； N-(2-(4-(6-(甲氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)-4_氯苯甲酰胺； N-(2-(4-(6-(乙氨基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-基)-2_氧乙基)-4_氯苯甲酰胺； 4-氯-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1-基)啼啶； 4-氯-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1-基)啼啶； 4-氯-6- (4- (2- (4-溴苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1 -基)嘧啶； 4-氯-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(異丙氨基)丙酰基)哌嗪-1-基)啼啶； 1-(4-(6_氯嘧啶-4-基)-3_羥基-2-苯基丙-1-酮； 4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6_氯嘧啶； 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6_氯嘧啶； 4-氨基-6- (4- (2- (4-氟苯基)-3-(異丙氨基)丙酰基)哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛； 4-氨基-6- (4- (2- (4-氯苯基)-3-(異丙氨基)丙酰基)哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛； 4-氨基-6- (4- (2- (4-溴苯基)-3-(異丙氨基)丙酰基)哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛； 4-氨基-6- (4- (2- (2，4-二氯苯基)-3-(異丙氨基)丙?；?哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛； 4-氨基-6- (4- (2- (4-氯苯基）乙?；?哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛； 4-(4-(L-色氨酸)哌嗪-1-基)-6_氨基嘧啶-5-甲醛； 4-(4-(L-苯丙氨酸)哌嗪-1-基)-6_氨基嘧啶-5-甲醛； 4-氨基-6-(4-(2-(4-氟苯基)-3-(異丙氨基）丙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基 肟； 4-氨基-6-(4-(2-(4-氯苯基)-3-(異丙氨基）丙?；┻哙?1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基 肟； 4-氨基-6-(4-(2-(4-溴苯基)-3-(異丙氨基）丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基 肟； 4-氨基-6-(4-(2-(2,4-二氯苯基)-3-(異丙氨基）丙酰基）哌嗪-1-基）嘧啶-5-甲醛0-甲基肟； 4-氨基-6- (4- (2- (4-氯苯基）乙?；?哌嗪-1 -基)嘧啶-5-甲醛0-甲基肟； 4- (4- (L-色氨酸)哌嗪-1 -基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基月虧； 4- (4- (L-苯丙氨酸)哌嗪-1 -基)-6-氨基嘧啶-5-甲醛0-甲基肟。4. 權利要求1-3中的任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽在制備Akt抑制劑中 的用途。5. 權利要求1-3中的任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽在制備預防和治療腫 瘤的藥物中的用途。6. -種權利要求1-3中的任一項所述的化合物或其藥學上可接受的鹽的制備方法，其 特征在于，式（I)所示的化合物的制備方法包括:使式〇所示的化合物與式D1、D2或D3所示的 化合物反應，得到式(I)所示的化合物；其中，辦、1?2具有如權利要求1所述的定義;X為F、Cl、Br、2,4-C^2,6-Cl; 式（II)所示的化合物的制備方法包括:使式G1、G2或C1所示的化合物與式HI、H2、H3、H4 或H5所示的化合物反應，得到式(II)所示的化合物；其中，R3、R4、R5、R6具有如權利要求l所述的定義;X為F、Cl、Br或2,4-Cl。7.根據(jù)權利要求6所述的制備方法，其特征在于，式C所示的化合物的制備方法為：以4， 6-二氯嘧啶(A1)為起始原料，與甲胺或乙胺反應，得到中間體化合物A2或A3，中間體A再與 1-叔丁氧羰基哌嗪反應，得到中間體化合物B，將中間體化合B溶于HC1二氧六環(huán)溶液，室溫 反應，即得式C所示的化合物。8. -種藥物組合物，其包含權利要求1-3中任一項所述的的化合物或其藥學上可接受 的鹽。9. 根據(jù)權利要求8所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物還包括一種或多種 藥學上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑。10. 根據(jù)權利要求8或9所述的藥物組合物，其特征在于，所述藥物組合物為固體口服制 劑、液體口服制劑或注射劑。
【文檔編號】C07D403/12GK106045918SQ201610494647
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月28日
【發(fā)明人】趙桂森, 陸錦杰, 王冠杰, 楊德志, 張震, 景永奎
【申請人】山東大學