一種依普黃酮的藥物組合物及其醫(yī)藥用圖
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種依普黃酮的藥物組合物及其醫(yī)藥用途，本發(fā)明提供的依普黃酮的藥物組合物中含有依普黃酮和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn)物化合物(Ⅰ)，依普黃酮、化合物(Ⅰ)單獨(dú)作用時(shí)，對糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松具有治療作用；依普黃酮和化合物(Ⅰ)聯(lián)合作用時(shí)，對糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松的治療效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松的藥物。
【專利說明】
一種依普黃酮的藥物組合物及其醫(yī)藥用途
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域，涉及依普黃酮的新用途，具體涉及依普黃酮的藥物組 合物及其醫(yī)藥用途。
【背景技術(shù)】
[0002] 依普黃酮為抗骨質(zhì)疏松藥，可顯著抑制骨密度、骨強(qiáng)度和甲狀鈣素的下降;還具有 增加骨量、促進(jìn)甲狀腺鈣素分泌及抑制破骨細(xì)胞數(shù)的作用。用于治療骨質(zhì)疏松癥。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003] 本發(fā)明的目的在于提供一種依普黃酮的藥物組合物，該藥物組合物中含有依普黃 酮和一種天然產(chǎn)物，依普黃酮和該天然產(chǎn)物可以協(xié)同治療糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松。
[0004] 本發(fā)明的上述目的是通過下面的技術(shù)方案得以實(shí)現(xiàn)的：
[0005] 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，
[0007] -種依普黃酮的藥物組合物，包括依普黃酮、如權(quán)利要求1所述的化合物（I)和藥 學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。
[0008] 進(jìn)一步地，藥學(xué)上可以接受的載體包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、 崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑。
[0009] 進(jìn)一步地，所述劑型包括片劑、膠囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、 膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。
[0010] 上述化合物（I)的制備方法，包含以下操作步驟：（a)將麥冬粉碎，用80~90%乙醇 熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯和水飽和的正丁醇萃取， 分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中正丁醇取物用大 孔樹脂除雜，先用30%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用85 %乙醇洗脫12個(gè)柱體積，收集85%洗脫 液，減壓濃縮得85%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中85%乙醇洗脫濃縮物用正相硅膠分離， 依次用體積比為100:1、50:1、25:1和12:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟 (c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、12:1和2:1的二氯甲烷-甲醇梯 度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反相硅膠分離，用體積百 分濃度為88 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~16個(gè)柱體積洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到 化合物(I)。
[0011]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)用85%乙醇熱回流提取，合并提取 液。
[0012]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，所述大孔樹脂為D101型大孔吸附樹脂。
[0013]進(jìn)一步地，化合物（I)的制備方法中，步驟(a)中用二氯甲烷代替乙酸乙酯進(jìn)行萃 取，得到二氯甲烷萃取物。
[0014] 上述化合物(I)在制備治療糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松的藥物中的應(yīng)用。
[0015] 上述依普黃酮的藥物組合物在制備治療糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松的藥物中的應(yīng)用。
[0016] 本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)：
[0017] 本發(fā)明提供的依普黃酮的藥物組合物中含有依普黃酮和一種結(jié)構(gòu)新穎的天然產(chǎn) 物，依普黃酮和該天然產(chǎn)物單獨(dú)作用時(shí)，對糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松具有保護(hù)作用;二者聯(lián)合 作用時(shí)，對糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松的保護(hù)效果進(jìn)一步提高，可以開發(fā)成治療糖皮質(zhì)激素性 骨質(zhì)疏松的藥物。本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比具有突出的實(shí)質(zhì)性特點(diǎn)和顯著的進(jìn)步。
【具體實(shí)施方式】
[0018] 下面結(jié)合實(shí)施例進(jìn)一步說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明保護(hù)范 圍。盡管參照較佳實(shí)施例對本發(fā)明作了詳細(xì)說明，本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對 本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換，而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和范圍。
[0019] 實(shí)施例1:化合物(I)分離制備及結(jié)構(gòu)確證
[0020] 試劑來源：乙醇、石油醚、乙酸乙酯、正丁醇、二氯甲烷為分析純，購自上海凌峰化 學(xué)試劑有限公司，甲醇，分析純，購自江蘇漢邦化學(xué)試劑有限公司。
[0021]分離方法：（a)將麥冬（2kg)粉碎，用85%乙醇熱回流提取（15LX 3次），合并提取 液，濃縮至無醇味（3L)，依次用石油醚（3L X 3次）、乙酸乙酯（3L X 3次）和水飽和的正丁醇 (3LX3次）萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步驟(a)中 乙酸乙酯萃取物用D101型大孔樹脂除雜，先用30%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用85%乙醇洗脫 12個(gè)柱體積，收集85%洗脫液，減壓濃縮得85%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中85%乙醇洗 脫濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為100:1 (12個(gè)柱體積）、50:1 (10個(gè)柱體積）、25:1 (8個(gè)柱體積)和12:1(8個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組 分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1(6個(gè)柱體積）、12:1(8個(gè)柱體積)和2:1(6 個(gè)柱體積)的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵 合的反相硅膠分離，用體積百分濃度為88 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~16個(gè)柱體積 洗脫液，洗脫液減壓濃縮得到化合物（I) (HPLC歸一化純度大于98% )。
[0022] 結(jié)構(gòu)確證:HR-ESI-MS顯示[M+Na]+為m/z 421.1630,結(jié)合核磁特征可得分子式為 C23H26〇6，不飽和度為11。核磁共振氫譜數(shù)據(jù)δΗ(ρρπι，DMS〇-d 6，600MHz):H-1 (1 ·03，m)，H-1 (2.64，d，J=13.2)，H-2(1.42，m)，H-2(1.51，m)，H-3(1.05，m)，H-3(1.37，m)，H-5(2.26，s)， H-6(4.87，m)，H-14(6.78，s)，H-15(3.21，m)，H-16(1.08，d，J = 6.6)，H-17(1.22，d，J = 6.6)，!1-18(1.01，8)，!1-19(0.86,8)，!1-23(2.41，8);核磁共振碳譜數(shù)據(jù)6。(卯 111，0130-(16， 150MHz):27.1(CH23-C)，19.3(CH2,2-C)，38.7(CH2,3-C)，31.2(C，4-C)，38.4(CH，5-C)， 75.1(CH，6-C)，190.7(C，7-C)，154.4(C，8-C)，132.2(C，9-C)，46.1(C，10-C)，182.4(C，n-C)，175.3(C，12-C)，147.2(C，13-C)，134.1(CH，14-C)，31.1(CH，15-C)，21.8(CH 3，16-C)， 22.1(CH3，17-C)，31.1(CH3，18-C)，22.8(CH 3，19-C)，177.6(C，20-C)，120.5(C，21-C)，204.2 (〇，22-〇,28.1(〇1 3,23-〇。紅外光譜表明該化合物含有羥基和羰基基團(tuán)（3440，1629和 1585cm-^,Η-ΝΜΚ 譜顯示五個(gè)甲基信號[SH1.08(3H，d，J = 6.6，Me-16)，1.22(3H，d，J = 6.6， 10-17)，1.01(3!1，8，]\^-18)，0.86(3!1，8，]^-19)和2.41(3!1，8，]\^-23)]，一個(gè)烯屬次甲基質(zhì) 子信號[陽6.78(1!1，8，!1-14)]，以及一個(gè)含氧次甲基質(zhì)子信號[6!14.87(1!1，111，!1-6)]。 13(：-匪1? 譜顯示了 23個(gè)共振碳信號，包括五個(gè)甲基，三個(gè)亞甲基，四個(gè)次甲基(一個(gè)烯烴碳，一個(gè)含氧 碳），以及十一個(gè)季碳(一個(gè)酯羰基碳，三個(gè)酮羰基碳，五個(gè)烯烴碳hHMBC譜中Η-1(δΗ2.64) 和Η-5與C-10和酯羰基碳(δα77.6)的相關(guān)性表明酯羰基位于C-20位。HMBC譜中含氧次甲基 質(zhì)子信號（SH4.87)與C-4、C-5、C-10和C-20的相關(guān)性表明含氧次甲基質(zhì)子信號為Η-6,且形 成 20,6-內(nèi)酯結(jié)構(gòu)。此外，!1-15與(：-12、(：-13和(：-14，以及!1-14與(：-7、(：-9、(：-12和(：-15的相關(guān) 性建立了 一個(gè)不飽和的七元環(huán)結(jié)構(gòu)。ROESY譜中，Me-18與H-5，H-5與H-6的相關(guān)性表明H-5和 H-6均為α構(gòu)型。綜合氫譜、碳譜、HMBC譜和ROESY譜，以及文獻(xiàn)關(guān)于相關(guān)類型核磁數(shù)據(jù)，可基 本確定該化合物如下所示，立體構(gòu)型進(jìn)一步通過ΕΟ)試驗(yàn)確定，理論值與實(shí)驗(yàn)值基本一致。 該化合物化學(xué)式及碳原子編號如下：
Q
[0024] 實(shí)施例2:藥理作用
[0025]本實(shí)施例使用地塞米松肌注法制備糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松大鼠模型，觀察藥物增 強(qiáng)骨密度、增加血清骨鈣素、降低尿羥脯氨酸/肌酐等方面的抗糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松的作 用。
[0026] 1、材料與方法
[0027] 1.1動物
[0028] 3月齡雌性Wistar大鼠，體重140~160g，由第三軍醫(yī)大學(xué)動物研究所提供。
[0029] 1.2試劑與樣品
[0030]依普黃酮購自中國藥品生物制品檢定所?；衔铮↖)自制，制備方法見實(shí)施例1。地 塞米松磷酸鈉注射液，湖北襄樊恒生藥業(yè)有限公司生產(chǎn)。血清骨鈣素放免試劑盒購自解放 軍總醫(yī)院科技開發(fā)中心放免所。羥脯氨酸測試盒購自南京建成生物工程研究所。
[0031] 1.3大鼠分組及模型制備
[0032] 大鼠隨機(jī)分為5組，每組12只，分別為正常對照組、模型對照組、依普黃酮組 (80mg · kg-"、化合物⑴組(80mg · kg-"、依普黃酮與化合物⑴組合物組【40mg · kg-1依普 黃酮+40mg · kg^1化合物（I)】。除正常對照組外，其余組大鼠予地塞米松0. lmg/100g肌肉注 射每周2次。正常對照組大鼠予等量生理鹽水肌注。實(shí)驗(yàn)時(shí)間為8w。實(shí)驗(yàn)過程中，所有動物在 同等條件下飼養(yǎng)，自由飲水和攝食。8w后，按照上述劑量每天灌胃給藥，連續(xù)灌胃給藥7d，正 常對照組與模型對照組大鼠灌胃給予純化水。
[0033] 1.5骨密度(BMD)測定實(shí)驗(yàn)
[0034] 處死前，給予大鼠腹腔注射1%戊巴比妥鈉 3ml/kg麻醉，當(dāng)大鼠呈穩(wěn)定的昏睡狀態(tài) 達(dá)到5min以上時(shí)，置于CHALLENGER雙能X線骨密度儀的探頭下，應(yīng)用動物軟件進(jìn)行腰椎和股 骨掃描，測定骨密度值。
[0035] 1.6生化指標(biāo)測定實(shí)驗(yàn)
[0036]血清骨鈣素(BGP)、尿羥脯氨酸(HOP)測定，具體參照試劑盒說明進(jìn)行。
[0037] 1.7統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
[0038]實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)用均數(shù)土標(biāo)準(zhǔn)差(X土s)表示，應(yīng)用SPSS18.0版統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差 分析和t檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
[0039] 2、實(shí)驗(yàn)結(jié)果
[0040] 2.1對糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松模型大鼠骨密度的影響
[0041] 與正常對照組相比，模型對照組大鼠腰椎、股骨骨密度結(jié)果均明顯下降(P〈0.05)， 其中腰椎骨密度下降尤為顯著(p〈0.01);與模型對照組比較，依普黃酮與化合物（I)組合物 組大鼠腰椎、股骨骨密度明顯增加(P<〇.01);與模型對照組比較，依普黃酮組、化合物（I) 組大鼠腰椎、股骨骨密度增加(P<〇. 05)。
[0042] 試驗(yàn)結(jié)果見表1。
[0043] 2.2對糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松模型大鼠生化指標(biāo)的影響
[0044]與正常對照組比較，模型對照組大鼠的血清骨鈣素顯著下降(P〈0.01)，24h尿羥脯 氨酸/肌酐顯著上升(P〈〇.01)。與模型對照組比較，依普黃酮與化合物（I)組合物組大鼠的 血清骨鈣素顯著上升(？〈0.01)，241!尿羥脯氨酸/肌酐顯著下降(？<0.01);與模型對照組比 較，依普黃酮組、化合物（I)組血清骨鈣素上升（？〈〇.〇5)，241!尿羥脯氨酸/肌酐下降（？< 0.05)。試驗(yàn)結(jié)果見表1。
[0045]表1對糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松模型大鼠骨密度和生化指標(biāo)的影響
[0046]
[0047] 糖皮質(zhì)激素可抑制骨基質(zhì)蛋白合成，尤其抑制膠原合成以及抑制成骨細(xì)胞前身向 成骨細(xì)胞的轉(zhuǎn)變，使骨形成減少;還可通過減少性激素的分泌、抑制腸道對鈣的吸收、增加 腎對鈣與磷的排泄、繼發(fā)甲狀旁腺功能亢進(jìn)等，進(jìn)一步增加骨的吸收，減少骨形成，導(dǎo)致骨 質(zhì)疏松。
[0048]上述結(jié)果表明，依普黃酮、化合物（I)單獨(dú)作用時(shí)，對糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松具有 治療作用;依普黃酮和化合物(I)聯(lián)合作用時(shí)，對糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松的治療效果進(jìn)一步 提高，可以開發(fā)成治療糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松的藥物。
[0049]上述實(shí)施例的作用在于說明本發(fā)明的實(shí)質(zhì)性內(nèi)容，但并不以此限定本發(fā)明的保護(hù) 范圍。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)理解，可以對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)行修改或者等同替換， 而不脫離本發(fā)明技術(shù)方案的實(shí)質(zhì)和保護(hù)范圍。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種具有下述結(jié)構(gòu)式的化合物（I)，2. -種依普黃酮的藥物組合物，其特征在于:包括依普黃酮、如權(quán)利要求1所述的化合 物(I)和藥學(xué)上可以接受的載體，制備成需要的劑型。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的依普黃酮的藥物組合物，其特征在于:藥學(xué)上可以接受的載體 包括稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體 或潤滑劑。4. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的依普黃酮的藥物組合物，其特征在于:所述劑型包括片劑、膠 囊劑、口服液、口含劑、顆粒劑、沖劑、丸劑、散劑、膏劑、丹劑、混懸劑、粉劑、溶液劑、注射劑、 栓劑、噴霧劑、滴劑或貼劑。5. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于，包含以下操作步驟：（a)將麥 冬粉碎，用80~90%乙醇熱回流提取，合并提取液，濃縮至無醇味，依次用石油醚、乙酸乙酯 和水飽和的正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（b)步 驟(a)中正丁醇取物用大孔樹脂除雜，先用30%乙醇洗脫6個(gè)柱體積，再用85%乙醇洗脫12 個(gè)柱體積，收集85%洗脫液，減壓濃縮得85%乙醇洗脫濃縮物；（c)步驟(b)中85%乙醇洗脫 濃縮物用正相硅膠分離，依次用體積比為1 〇〇: 1、50:1、25:1和12:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗 脫得到4個(gè)組分；（d)步驟(c)中組分4用正相硅膠進(jìn)一步分離，依次用體積比為20:1、12:1和 2:1的二氯甲烷-甲醇梯度洗脫得到3個(gè)組分；（e)步驟(d)中組分2用十八烷基硅烷鍵合的反 相硅膠分離，用體積百分濃度為88 %的甲醇水溶液等度洗脫，收集13~16個(gè)柱體積洗脫液， 洗脫液減壓濃縮得到化合物(I)。6. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)用85%乙醇熱回 流提取，合并提取液。7. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:所述大孔樹脂為D101型 大孔吸附樹脂。8. 根據(jù)權(quán)利要求5所述的化合物（I)的制備方法，其特征在于:步驟(a)中用二氯甲烷代 替乙酸乙酯進(jìn)行萃取，得到二氯甲烷萃取物。9. 權(quán)利要求1所述的化合物（I)在制備治療糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏松的藥物中的應(yīng)用。10. 權(quán)利要求2~4任一所述的依普黃酮的藥物組合物在制備治療糖皮質(zhì)激素性骨質(zhì)疏 松的藥物中的應(yīng)用。
【文檔編號】A61P19/10GK106045945SQ201610416820
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年6月7日
【發(fā)明人】劉慎權(quán)
【申請人】劉慎權(quán)