一種l?纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應(yīng)用
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種L?纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應(yīng)用，其特征在于：通過(guò)1,3?偶極環(huán)加成方法在L?纈氨酸取代去甲斑蝥素結(jié)構(gòu)中C5和C6位引入吡唑環(huán)，與色酮衍生物反應(yīng)導(dǎo)入色酮結(jié)構(gòu)，合成含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類(lèi)L?纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，該衍生物對(duì)于腫瘤細(xì)胞株具有良好的抑制作用，其中對(duì)于白血病細(xì)胞具有更好的抑制率和選擇性，在制備抗腫瘤藥物等方面，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前景。
【專(zhuān)利說(shuō)明】
一種L-纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應(yīng)用
技術(shù)領(lǐng)域：
[0001]本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，具體是涉及一種含有色酮結(jié)構(gòu)的吡唑類(lèi)L-纈氨酸取代 去甲斑蝥素衍生物及其制備方法與應(yīng)用。
【背景技術(shù)】：
[0002] L-纈氨酸取代去甲斑蝥素，化學(xué)結(jié)構(gòu)式如下：
[0004] L-纈氨酸取代去甲斑蝥素 r=(s)-ch(ch3)2;
[0005] 1，3-偶極環(huán)加成反應(yīng)以其良好的區(qū)域和主體選擇性而成為合成五元雜環(huán)化合物 最主要的方法，也是雜環(huán)藥物化學(xué)研究中較為活躍的一類(lèi)反應(yīng)。近幾年來(lái)，由于色酮廣泛的 生物活性，諸如抗癌、抗菌、抑制血小板凝聚等而倍受關(guān)注。所以，無(wú)論是從藥理學(xué)還是從合 成角度考慮，這類(lèi)雜環(huán)化合物都有很高的合成價(jià)值。

【發(fā)明內(nèi)容】
：
[0006] 本發(fā)明的第一方面目的是提供一種L-纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物。
[0007] 本發(fā)明采取的技術(shù)方案如下：
[0008] 一種L-纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，其結(jié)構(gòu)式如下：
[0010] 式中:R=(S)-CH(CH3)2。
[0011] 該化合物相關(guān)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)如下：
[0014]
【申請(qǐng)人】經(jīng)研究發(fā)現(xiàn):在L-纈氨酸取代去甲斑蝥素引入五元吡唑環(huán)的基礎(chǔ)上導(dǎo)入了 色酮的結(jié)構(gòu)可以改變藥理活性。通過(guò)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)確定:使用色酮衍生物在吡唑的結(jié)構(gòu)上進(jìn) 行取代，對(duì)L-纈氨酸取代去甲斑蝥素進(jìn)行結(jié)構(gòu)改造，制備的含色酮結(jié)構(gòu)吡唑類(lèi)L-纈氨酸取 代去甲斑蝥素衍生物，具有非常好的藥物活性。
[0015] 本發(fā)明的第二方面目的是提供一種上述L-纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物的制備 方法，其特征在于，包括以下步驟：
[0016] (1)、去甲去氫斑蝥素的合成：
[0017] 將順丁烯二酸酐研細(xì)，加入乙醚，室溫條件下攪拌至溶解，滴入呋喃，室溫?cái)嚢?4 ~48小時(shí)，呋喃與順丁烯二酸酐發(fā)生Diels-Alder反應(yīng)，制得去甲去氫斑蝥素(化合物1);
[0018] (2)、L-纈氨酸取代去甲斑蝥素的合成：
[0019] 將去甲去氫斑蝥素4.2克(25mmol)和L-纈氨酸2.93克(25mmo 1)加入經(jīng)過(guò)分子篩干 燥的DMF溶劑15毫升中，攪拌回流12小時(shí)，冷卻至室溫后加入乙酸乙酯60毫升稀釋?zhuān)柡吐?化銨溶液洗滌6次，每次30毫升，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾后的有機(jī)相減壓蒸餾旋干， 用乙酸乙酯重結(jié)晶得白色固體產(chǎn)物(化合物3);
[0020] (3)、6_溴代色酮苯腙的合成：
[0021] 采用6-溴代色酮與苯肼脫水反應(yīng)生成席夫堿的方法，具體操作:取2mmol的苯肼加 入盛有1 OmL四氫呋喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩慢滴加入20mL溶有2mmo 16-溴代色酮的無(wú)水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攪拌lh，滴加10滴鹽酸，有淡黃色沉淀出現(xiàn)。連 續(xù)沸水浴回流攪拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水?dāng)嚢?，淡黃色沉淀顏色變深，抽濾得黃紅 色針狀產(chǎn)物。用無(wú)水乙醚沖洗多次，真空干燥得產(chǎn)物6-溴代色酮苯腙(化合物4);
[0022] (4)、導(dǎo)入色酮結(jié)構(gòu)：
[0023] 將lmmol L-纈氨酸取代去甲斑蝥素和1. lmm〇16-溴代色酮苯腙于20mL乙醇中，再 加入1.2mL氯胺T，回流9小時(shí)，TLC檢測(cè)反應(yīng)完成后，得到淡黃色沉淀，減壓過(guò)濾出沉淀，沉淀 用甲醇重結(jié)晶，真空干燥后得到產(chǎn)物(化合物5)。
[0024]本發(fā)明涉及的反應(yīng)方程式如下：
[0026]本發(fā)明的第三方面目的是提供一種L-纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物在制備抗腫 瘤藥物方面的應(yīng)用。通過(guò)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證:上述化合物，對(duì)于不同瘤株如人肝癌細(xì)胞、口腔癌細(xì)胞、 胃癌細(xì)胞、卵巢癌細(xì)胞、白血病細(xì)胞、腸癌細(xì)胞等，均具有抑制作用，其中對(duì)于HL60 (白血病 細(xì)胞)具有更佳的抑制率和選擇性，可單獨(dú)制備抗腫瘤藥物、也可以作為活性成分與其他抗 腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前景。
[0027]本發(fā)明的有益效果如下：
[0028]
【申請(qǐng)人】通過(guò)研究發(fā)現(xiàn):在L-纈氨酸取代去甲斑蝥素引入五元吡唑環(huán)的基礎(chǔ)上導(dǎo)入 了色酮的結(jié)構(gòu)，產(chǎn)生出的衍生物，具有良好的藥物活性，經(jīng)進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)及分析，研究不同雜 環(huán)在同一分子中聚集而對(duì)藥理活性所產(chǎn)生的影響，用1，3-偶極環(huán)加成方法在L-纈氨酸取代 去甲斑蝥素結(jié)構(gòu)中C5和C6位引入吡唑環(huán)，與色酮衍生物反應(yīng)導(dǎo)入色酮結(jié)構(gòu)，合成含有色酮結(jié) 構(gòu)的吡唑類(lèi)L-纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，該衍生物在制備抗腫瘤藥物方面，具有非常 好的工業(yè)應(yīng)用前景。
【具體實(shí)施方式】：
[0029] 以下結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步描述，但實(shí)施例不應(yīng)解釋為限定本發(fā)明的范 圍。
[0030] 實(shí)施例1:
[0031] (1 )、去甲去氫斑蝥素的合成:將順丁烯二酸酐研細(xì)，加入乙醚，室溫條件下攪拌至 溶解，滴入呋喃，室溫?cái)嚢?4~48小時(shí)，呋喃與順丁烯二酸酐發(fā)生Diels-Alder反應(yīng)，制得去 甲去氫斑蝥素(化合物1);
[0032] (2)、L_纈氨酸取代去甲斑蝥素的合成：
[0033] 將去甲去氫斑蝥素4.2克(25mmol)和L-纈氨酸2.93克(25mmo 1)加入經(jīng)過(guò)分子篩干 燥的DMF溶劑15毫升中，攪拌回流12小時(shí)，冷卻至室溫后加入乙酸乙酯60毫升稀釋?zhuān)柡吐?化銨溶液洗滌6次，每次30毫升，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾后的有機(jī)相減壓蒸餾旋干， 用乙酸乙酯重結(jié)晶得白色固體產(chǎn)物(化合物3);
[0034] (3)、6_溴代色酮苯腙的合成
[0035] 采用6-溴代色酮與苯肼脫水反應(yīng)生成席夫堿的方法，具體操作:取2mmol的苯肼加 入盛有1 OmL四氫呋喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩慢滴加入20mL溶有2mmo 16-溴代色酮的無(wú)水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攪拌lh，滴加10滴鹽酸，有淡黃色沉淀出現(xiàn)。連 續(xù)沸水浴回流攪拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水?dāng)嚢?，淡黃色沉淀顏色變深，抽濾得苯腙， 黃紅色針狀產(chǎn)物。用無(wú)水乙醚沖洗多次，真空干燥得產(chǎn)物6-溴代色酮苯腙(化合物4)。
[0036] (4)、導(dǎo)入色酮結(jié)構(gòu)：
[0037] 將lmmol L-纈氨酸取代去甲斑蝥素和1. lmm〇16-溴代色酮苯腙于20mL乙醇中，再 加入1.2mL氯胺T，回流9小時(shí)，TLC檢測(cè)反應(yīng)完成后，得到淡黃色沉淀，減壓過(guò)濾出沉淀，沉淀 用甲醇重結(jié)晶，真空干燥后得到產(chǎn)物(化合物5)。
[0038] 化合物5名稱:L-纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物；
[0039] 化學(xué)式：C29H23BrN3〇7;
[0040] 物化參數(shù):黃色結(jié)晶，產(chǎn)率51 · 5%，m· ρ · 117-119°C ;
[0041 ]結(jié)構(gòu)確認(rèn)：
[0042] 咕匪R(CD30D)S:7.32-7.16(m，8H，Ar-H)，6.47(s, 1H，C = C-H) ,5.16(d, J = 9.60Hz,lH,H5) ,4.74(d,J= 17.60Hz, 1H,H4) ,4.56(d,J= 17.60Hz, 1H,HI) ,4.02(d,J = 9.60Hz,lH,H6),3.43(d ,J = 7.20Hz,lH,H3),3.29(d ,J = 7.20Hz,lH,H2),2.63-2.75(m,lH, CH),0.74(d,3H ,J = 6.4Hz,CH3),0.96(d,3H ,J = 6.4Hz,CH3)；
[0043] IR 3457(N-C = 0) ,3085(ArH), 1722(C = 0), 1541(C = N), 1310(C-〇-C)cm_1 ；
[0044] m/e: 604(100.0% ),606(97.5% )；
[0045] Anal.calcd.for C29H23BrN3〇7:C，57.55;H，3.89;N，6.91〇
[0046] 應(yīng)用實(shí)施例:采用MTT法檢測(cè)受試化合物對(duì)不同瘤株的的抗腫瘤活性。
[0047]將上述實(shí)施例制備的化合物（5)，分別以不同瘤株（腫瘤細(xì)胞Bel_7402、KB、 SGC7901、H08901、HL-60、ECA109)為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，測(cè)試化合物（5)對(duì)于不同瘤株的體外抑制作 用：實(shí)驗(yàn)采用四甲基偶氮唑鹽微量酶反應(yīng)比色法（MTT法），活性用半數(shù)抑制濃度表示 (1〇5〇) 〇
[0048]具體實(shí)驗(yàn)步驟如下：
[0049] 將化合物5用DMS0溶解，稀釋?zhuān)[瘤細(xì)胞Bel-7402(人肝癌細(xì)胞）、KB(口腔癌細(xì)胞）、 SGC7901(胃癌細(xì)胞）、H08901 (卵巢癌細(xì)胞）、HL-60(白血病細(xì)胞）、ECA109(腸癌細(xì)胞)在96孔 板上種入4000個(gè)/200yL/孔，每孔加入化合物2yL，終濃度為12. ΟμΜ，6. ΟμΜ，3. ΟμΜ，1.5μΜ，共 同于37°C、5 %C02細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育72小時(shí)，以DMS0(1 % )為空白對(duì)照。72小時(shí)后，加入終濃 度為0.25mg/mL的MTT，置于37 °C、5 % C02細(xì)胞培養(yǎng)箱中4小時(shí)，之后吸干溶劑，每孔加入100μ 1 DMS0，用酶聯(lián)免疫儀于570nm處測(cè)定吸光度(0D值），所得數(shù)據(jù)用于計(jì)算IC5Q值。不同濃度的 受試化合物用96孔板進(jìn)行粗篩，根據(jù)所得的抑制率，計(jì)算IC 5Q值，結(jié)果見(jiàn)下表。
[0050]表1、L-纈氨酸取代去甲斑蝥素衍生物對(duì)六種腫瘤細(xì)胞株的1(：50值
[0052]通過(guò)上表數(shù)據(jù)可以看出：本發(fā)明制備的化合物，對(duì)于多種腫瘤細(xì)胞株均具有抑制 作用，其中對(duì)于HL60(白血病細(xì)胞)具有更好的抑制率和選擇性，可以單獨(dú)制備抗腫瘤藥物、 也可以作為活性成分與其他抗腫瘤藥物制備抗腫瘤組合物，具有非常好的工業(yè)應(yīng)用前景。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種繳氨酸取代去甲斑蝥素衍生物，其結(jié)構(gòu)式如下：2. -種繳氨酸取代去甲斑蝥素衍生物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟:將順 丁烯二酸酐和乙醚反應(yīng)合成去甲去氫斑蝥素，去甲去氫斑蝥素和k纈氨酸反應(yīng)合成k纈氨 酸取代去甲斑蝥素，然后采用6-溴代色酮與苯肼脫水反應(yīng)合成6-溴代色酮苯腙，最后將Z-纈氨酸取代去甲斑蝥素和6-溴代色酮苯腙進(jìn)行偶極加成反應(yīng)，合成U領(lǐng)氨酸取代去甲斑蝥 素衍生物。3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種繳氨酸取代去甲斑蝥素衍生物的制備方法，其特征在 于，包括以下步驟： (1 )、去甲去氫斑蝥素的合成： 將順丁烯二酸酐研細(xì)，加入乙醚，室溫條件下攪拌至溶解，滴入呋喃，室溫?cái)嚢?4~48小 時(shí)，呋喃與順丁烯二酸酐發(fā)生Diels-Alder反應(yīng)，制得去甲去氫斑蝥素； (2) 、Z-纈氨酸取代去甲斑蝥素的合成： 將去甲去氫斑蝥素4.2克和纈氨酸2.93克加入經(jīng)過(guò)分子篩干燥的DMF溶劑15毫升中， 攪拌回流12小時(shí)，冷卻至室溫后加入乙酸乙酯60毫升稀釋?zhuān)柡吐然@溶液洗滌6次，每次 30毫升，有機(jī)相用無(wú)水硫酸鎂干燥，過(guò)濾后的有機(jī)相減壓蒸餾旋干，用乙酸乙酯重結(jié)晶得白 色固體產(chǎn)物； (3) 、6_溴代色酮苯腙的合成： 取2 mmol的苯肼加入盛有10mL四氫呋喃的燒瓶中，沸水浴回流攪拌至溶解，然后緩慢 滴加入20mL溶有2mmol 6-溴代色酮的無(wú)水乙醇溶液，繼續(xù)沸水浴回流攪拌lh，滴加10滴鹽 酸，有淡黃色沉淀出現(xiàn);連續(xù)沸水浴回流攪拌5h，停止水浴，加人20mL蒸餾水?dāng)嚢?，淡黃色沉 淀顏色變深，抽濾得黃紅色針狀產(chǎn)物；用無(wú)水乙醚沖洗多次，真空干燥得產(chǎn)物6-溴代色酮 苯腺； (4) 、導(dǎo)入色酮結(jié)構(gòu)： 將lmmol 結(jié)|氨酸取代去甲斑蜜素和1 ? lmmol6-溴代色酮苯腙于20mL乙醇中，再加入 1.2mL氯胺T，回流9小時(shí)，TLC檢測(cè)反應(yīng)完成后，得到淡黃色沉淀，減壓過(guò)濾出沉淀，沉淀用甲 醇重結(jié)晶，真空干燥后得到產(chǎn)物HI!氨酸取代去甲斑蝥素衍生物。4. 一種U領(lǐng)氨酸取代去甲斑蝥素衍生物在制備抗腫瘤藥物方面的應(yīng)用。
【文檔編號(hào)】C07D493/22GK106046019SQ201610538120
【公開(kāi)日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年7月6日
【發(fā)明人】鄧?yán)蚱? 王瑋, 陳國(guó)慶, 楊群, 高曉忠, 周玉波, 胡純琦, 吳春雷, 沈潤(rùn)溥, 吳永華
【申請(qǐng)人】紹興文理學(xué)院