一種復合微生物調(diào)剖菌劑及其制備方法與應用
【專利摘要】一種復合微生物調(diào)剖菌劑及其制備方法與應用，該復合微生物調(diào)剖菌劑，按質(zhì)量百分比組成如下：微生物調(diào)剖菌劑5～10%；玉米顆粒0.2～0.3%；高分子聚合物0.2～0.5%；助劑0～0.2%；余量的水，其中微生物調(diào)剖菌劑是調(diào)剖用可可毛色二孢菌（Lasiodiplodia theobromae）保藏登記號為：CFCC 85199在優(yōu)化后的PDA培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)得到的發(fā)酵液；這種復合微生物調(diào)剖菌劑富含微生物生長繁殖過程中自然形成的菌球體及多糖類代謝產(chǎn)物，應用到低滲透非裂縫性油藏，能夠在高分子聚合物的懸浮作用下進入低滲透油藏深部，利用緩釋營養(yǎng)成分玉米顆粒及助劑進行生長繁殖，或?qū)⒂衩最w粒作為載體附著生長，對孔滲型高滲帶、微裂縫等進行有效封堵，注入黏度低，注入性好，工藝簡單，施工安全。
【專利說明】
-種復合微生物調(diào)剖菌劑及其制備方法與應用
技術(shù)領域
[0001] 本發(fā)明設及微生物調(diào)剖菌劑領域，特別是一種復合微生物調(diào)剖菌劑及其制備方 法，W及改復合微生物調(diào)剖菌劑在低滲透非裂縫性油藏的應用。
【背景技術(shù)】
[0002] 由于油田長期的注水開發(fā)，使得儲層形成大孔道、高滲帶，出現(xiàn)油井含水上升、采 油速度降低等問題。
[0003] 目前，采用調(diào)剖劑封堵油藏高含水層的堵水調(diào)剖技術(shù)，能夠起到改善地層非均質(zhì) 性，提高水驅(qū)波及體積，提高原油開采效率的作用，已成為油田=次采油中應用最廣泛、最 常規(guī)的手段之一。但是，調(diào)剖技術(shù)使用的調(diào)剖劑一般是有機化合物或無機化合物，運些材料 價格昂貴，有些化學劑對人體有害或污染地層，有的在施工中有一定的危險性等（郭萬奎 等，2006)。微生物調(diào)剖(Microbial plugging)技術(shù)則能夠克服上述問題，對低滲透非裂縫 性油藏進行調(diào)剖，具有工藝簡單、施工安全、不污染環(huán)境等優(yōu)點，同時降低了材料和施工的 成本。
[0004] 可可毛色二抱菌(Zasioc/ijOJoc/ia tAeobromae)作為白木香（又稱±沉香，生產(chǎn)沉 香的唯一法定植物來源)產(chǎn)生倍半祗的誘導物，近年起備受關注，但不同菌株間存在差異。 例如，已報道可可毛色二抱菌可產(chǎn)生植物傷害信號分子JAs并導致植物程序性死亡 (Tsukada K,et al.2010;加 andhukia P C，et al.2008);可可毛色二抱菌（Genbank NO.JQ782210.1)能夠產(chǎn)生萊莉酸類化合物，誘導白木香愈傷產(chǎn)生巧巾沉香倍半祗（韓曉敏 等，2014);可可毛色二抱菌可對焦化廠±壤多環(huán)芳控污染進行修復(張志遠等，2012)。對于 其應用于低滲透非裂縫性油藏微生物調(diào)剖尚未見報道。
[0005] 中國專利CN101131075A提供了一種油井微生物調(diào)剖堵水方法，該方法是在油層產(chǎn) 出水中篩選一株具有調(diào)剖能力的代謝產(chǎn)出生物聚合物的菌種，然后采用此菌液與營養(yǎng)液糖 蜜段塞式注入或混合式注入環(huán)套空間，但未見菌液制備方法，也未設及調(diào)剖菌劑的復配。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種適用于低滲透非裂縫性油藏的復合微生物調(diào)剖菌劑及 制備方法，W綠色環(huán)保的方式解決低滲透非裂縫性油藏深部調(diào)剖問題。
[0007] 為此，本發(fā)明提供了一種微生物調(diào)剖菌劑，其特征是:微生物調(diào)剖菌劑是調(diào)剖用可 可毛色二抱菌Uasioc/如如扣a tAeobromae)在優(yōu)化后的PDA培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)得到的發(fā)酵 液，調(diào)剖用可可毛色二抱菌如Joc/ia tAeobromae)的保藏登記號為:CFCC 85199。 [000引所述的優(yōu)化后的PDA培養(yǎng)基至少包括20%馬鈴馨、3%葡萄糖、0.2% MgS04、0 . 25% K也KkW及1%蛋白腺。
[0009] 所述的發(fā)酵液中調(diào)剖用可可毛色二抱菌的活菌數(shù)為1 X 109CFU/ml及W上。
[0010] 微生物調(diào)剖菌劑的培養(yǎng)方法，該方法包括如下步驟： 1)制備PDA優(yōu)化培養(yǎng)基； 2) 將步驟1中配制好的優(yōu)化后的PDA培養(yǎng)基放入滅菌鍋在120~12rC溫度下滅菌20~ 30min，同時放入培養(yǎng)皿與裝入培養(yǎng)基的試管，滅菌完成后，趁熱將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中； 3) 將冷藏的調(diào)剖用可可毛色二抱菌(135扣扣/7如扣3(7^6〇61'0皿26)〔?！病?85199取出活 化1 0~1 5min，用接種針挑取活化后的調(diào)剖用可可毛色二抱菌（Zasioc/ijoJoc/ia tAeo6romae)CFCC 85199表面菌絲，在步驟2)中裝有PDA平板培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿表面進行劃線 培養(yǎng)，在28~3(TC恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)2~3d; 4) 將步驟1)中配制好的PDA液體培養(yǎng)基放入滅菌鍋在120~12TC溫度下滅菌20~ 30min,接種5~10%步驟3)中得到的調(diào)剖用可可毛色二抱菌(Zasioc/i如oc/ia tAeobromae) CFCC 85199平板培養(yǎng)菌體，在溫度28~30°C、轉(zhuǎn)速120~18化pm條件下?lián)u瓶培養(yǎng)2~3d; 5) 將步驟1)中配制好的PDA液體培養(yǎng)基放入發(fā)酵罐，120~12TC溫度下滅菌20~ 30min，接種5~10%步驟4)中得到的調(diào)剖用可可毛色二抱菌(Zasioc/i如oc/ia tAeobromae) CFCC 85199菌液，發(fā)酵溫度28~30°C，每4小時間歇補充PDA液體培養(yǎng)基200ml，控制溶解氧8 ~10%培養(yǎng)7d，得到微生物調(diào)剖菌劑。
[0011] 所述的步驟1中制備PDA優(yōu)化培養(yǎng)基是按20%馬鈴馨、3%葡萄糖、0.2% MgS04、0.25% KH2P04 W及1 %蛋白腺，PDA平板培養(yǎng)基:在PDA液體培養(yǎng)基中添加1.5~2%瓊脂。
[0012] 所述的微生物調(diào)剖菌劑制備的復合微生物調(diào)剖菌劑，按質(zhì)量百分比組成如下：微 生物調(diào)剖菌劑5~10%;玉米顆粒0.2~0.3%;高分子聚合物0.2~0.5%;助劑0~0.2%;余量的 水。
[0013] 所述高分子聚合物為聚丙締酷胺中的一種，分子量200~2200萬，固含量>88%。
[0014] 所述助劑為錠鹽、憐鹽、氮鹽、膨脹淀粉、簇甲基纖維素鋼中的一種或幾種的組合。
[0015] 所述的復合微生物調(diào)剖菌劑的制備方法，包括如下步驟： 1) 按量稱取高分子聚合物，加入水中，充分攬拌，靜置熟化90~120min，備用； 2) 按量稱取助劑，加入水中，充分攬拌，備用； 3) 按量稱取微生物調(diào)剖菌劑和玉米顆粒，加入所述高分子聚合物溶液中，攬拌;之后加 入助劑溶液，攬拌;補足水量，得到復合微生物調(diào)剖菌劑成品。
[0016] 所述的復合微生物調(diào)剖菌劑在低滲透非裂縫性油藏的應用，將所述復合微生物調(diào) 剖菌劑注入油藏地層，其中注入速度為1~2.0倍配注， 總注入量Q =誠2h〇 ; 式中： 31為圓周率； Q為復合微生物調(diào)剖菌劑的用量，單位是m3; R為調(diào)剖半徑； H為油層有效厚度； 〇是孔隙度）。
[0017] 本發(fā)明的有益效果： (1)本發(fā)明提供的運種復合微生物調(diào)剖菌劑富含微生物生長繁殖過程中自然形成的菌 球體及多糖類代謝產(chǎn)物，應用到低滲透非裂縫性油藏，能夠在高分子聚合物的懸浮作用下 進入低滲透油藏深部，利用緩釋營養(yǎng)成分一一玉米顆粒及助劑進行生長繁殖，或?qū)⒂衩最w 粒作為載體附著生長，對孔滲型高滲帶、微裂縫等進行有效封堵，注入黏度低，注入性好，工 藝簡單，施工安全。
[0018] (2)本發(fā)明提供的運種低滲透非裂縫性油藏復合微生物調(diào)剖菌劑不含交聯(lián)劑等有 毒成分，對人體及環(huán)境無害，符合"綠色油曲'建設需求。
[0019] W下將結(jié)合附圖對本發(fā)明做進一步詳細說明。
【附圖說明】
[0020] 圖 1 是可可毛色二抱菌（Zasioc/ijOJoc/ia tAeo6romae)CFCC 85199 PDA液體培養(yǎng)照 片。
[0021 ]圖2是可可毛色二抱菌(Zasioc/ijOJoc/ia tAeo6romae)CFCC 85199注入巖屯、后的掃 描電鏡照片。
【具體實施方式】
[0022] 實施例1 首先進行菌株的選擇 可可毛色二抱菌如Joc/ia tAeobromae)不同菌株間存在著差異，因此首先進行 菌株的選擇，按照調(diào)剖劑的一般要求，對各可可毛色二抱菌(心?5扣扣如oc/ia tAeobromae) 各不同菌株的菌球直徑、多糖類代謝產(chǎn)物含量及發(fā)酵液粘度進行考察。
[0023] 配制PDA培養(yǎng)基，配方為：馬鈴馨提取液1.化、葡萄糖20.0 g，接種各可可毛色二抱 菌菌株，28°C、120rpm條件下?lián)u瓶培養(yǎng)3d。培養(yǎng)結(jié)束后，測量菌球平均直徑，發(fā)酵液SOOOrpm 離屯、作用30min，收集上層液體，按GB/T10247-2008旋轉(zhuǎn)法測定發(fā)酵液粘度;收集下層沉淀， 加入6mol/L氨氧化鋼浸提2次，每次化，800化pm離屯、20min，收集上清，用85%乙醇醇析24h， 800化pm離屯、20min沉淀即為多糖，稱重多糖含量。
[0024] 各菌株結(jié)果見表1:
表1 由表1結(jié)果可W看出，CFCC 85199菌株的菌球平均直徑、多糖含量及發(fā)酵液粘度的檢測 結(jié)果均高于其他各菌株，說明CFCC 85199菌株成球性能較強、其發(fā)酵液粘度也較大，在實際 應用中更具有優(yōu)勢，其原因是：（1)能夠依靠菌球的空間體積對低滲透非裂縫性油藏的大孔 道進行有效封堵，并且微生物形成的菌球體均為粘彈性球體，對于小于自身球體直徑的孔 隙可W通過壓縮形變而進入、進而封堵，所W在實際應用中可W封堵菌球平均直徑及W下 的孔隙或微裂縫，應用范圍更廣；（2)由其發(fā)酵液為主要成分制備的調(diào)剖菌劑粘度較大，更 適合作為微生物調(diào)剖劑。其他各菌株在實際應用中不具優(yōu)勢的原因是：（1)菌球平均直徑較 小，對低滲透非裂縫性油藏的封堵能力較小、封堵范圍較窄；（2)其發(fā)酵液粘度較低，封堵性 能較差，不適合作為微生物調(diào)剖劑。因此選擇可可毛色二抱菌CFCC 85199作為調(diào)剖用菌株。
[0025]微生物調(diào)剖菌劑 微生物調(diào)剖菌劑是調(diào)剖用可可毛色二抱菌(心25扣扣/7如扣3 tAeobromae)保藏登記號 為:CFCC 85199，在優(yōu)化后的PDA培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)得到的發(fā)酵液，微生物調(diào)剖菌劑如圖1和 圖2所示。
[00%] 所述的優(yōu)化后的PDA培養(yǎng)基至少包括20%馬鈴馨、3%葡萄糖、0.2% MgS〇4、0.25% K出P0擬及1%蛋白腺，該PDA培養(yǎng)基的pH值無需調(diào)節(jié)。
[0027]所述的發(fā)酵液中調(diào)剖用可可毛色二抱菌的活菌數(shù)為lX109CFU/ml及W上。
[00巧]該微生物調(diào)剖菌劑是調(diào)剖用可可毛色二抱菌（Zasioc/i如oc/ia tAeo6romae)CFCC 85199在馬鈴馨葡萄糖瓊脂(即PDA)優(yōu)化培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)得到的發(fā)酵液，優(yōu)化步驟如下： 1、培養(yǎng)基添加組分篩選 在PDA培養(yǎng)基基礎上，添加其他氮源或微量元素，使菌體生長更佳。
[0029] 表2 經(jīng)表2實驗現(xiàn)象觀察及菌體生長情況比較，3號與6號相對其他組別，生長較好，瓶內(nèi)菌 絲較多，有掛壁現(xiàn)象，搖床培養(yǎng)中3號瓶經(jīng)過1天培養(yǎng)即出現(xiàn)少量菌球，到第二天菌球數(shù)量增 多，最后布滿整個搖瓶，6號瓶中經(jīng)1天培養(yǎng)，瓶內(nèi)較為渾濁，在靜置數(shù)分鐘后，可明顯的看見 瓶內(nèi)菌絲，生長情況良好，經(jīng)試驗，選擇3號與6號培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基繼續(xù)優(yōu)化。
[0030] 2、正交優(yōu)化 經(jīng)試驗，選取的3號與6號作為調(diào)剖用可可毛色二抱菌生長的基本培養(yǎng)基進行繼續(xù)優(yōu) 化。分別改變其碳源、氮源及其他微量元素(如表3正交實驗)觀察菌絲(菌球)的生長狀況。
[0031] 表 3
經(jīng)觀察，如表3所示，3(1)號藥瓶中調(diào)剖用可可毛色二抱菌的菌絲生長與時間最好，其 中3(6)號藥瓶中菌絲生長過快，極易自溶，由于加入硫酸亞鐵的6號=角瓶待菌生長后比較 渾濁，所W最終選取3(1)號作為菌體生長的基本培養(yǎng)基。
[0032] 實施例2 上述實施例中的微生物調(diào)剖菌劑的培養(yǎng)方法，該方法包括如下步驟： 1) 制備PDA優(yōu)化培養(yǎng)基； 2) 將步驟1中配制好的優(yōu)化后的PDA培養(yǎng)基放入滅菌鍋在120~121°C溫度下滅菌20~ 30min，同時放入一定數(shù)量的培養(yǎng)皿與裝入培養(yǎng)基的試管，滅菌完成后，趁熱將培養(yǎng)基倒入 培養(yǎng)皿中，W免凝固； 3) 將冷藏的調(diào)剖用可可毛色二抱菌(7^35扣扣/7_/〇扣3(7^6〇61'0扭36)〔。〔〔 85199取出活 化1 0~1 5min，用接種針挑取活化后的調(diào)剖用可可毛色二抱菌（Zasioc/ijoJoc/ia tAeo6romae)CFCC 85199表面菌絲，在步驟2)中裝有PDA平板培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿表面進行劃線 培養(yǎng)，在28~30°C恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)2~3d; 在PDA平板培養(yǎng)基上，其中溫度28~35°C、相對濕度畑65~75%，菌落初為灰白色，后變 為灰褐至褐黑色，培養(yǎng)基為黑色，日生長量為4.0cm;在全光條件下，15~20d產(chǎn)生黑色近球 狀子實體，子座表面附滿菌絲。一個子座內(nèi)有多個分生抱子器，近球形，180.0~318.9X157 ~436. Own;孔口周緣細胞深褐色，未成熟分生抱子單細胞、無色，未成熟抱子壁比成熟的分 生抱子壁更厚，平均1.4皿;成熟的分生抱子雙細胞褐色至黑色，表面有黑白相間的縱條紋， 平均22. IX 12.9皿;長寬比（L/W)為1.7~1.8。
[0033] 4)將步驟1)中配制好的PDA液體培養(yǎng)基放入滅菌鍋在120~121°C溫度下滅菌20~ 30111；[]1,接種5~10%步驟3)中得到的調(diào)剖用可可毛色二抱菌(/^35扣扣/7_/〇扣3(7^6〇61'〇扭36) CFCC 85199平板培養(yǎng)菌體，在溫度28~30°C、轉(zhuǎn)速120~18化pm條件下?lián)u瓶培養(yǎng)2~3d; 在PDA液體培養(yǎng)基中（溫度28~30°C、轉(zhuǎn)速120~18化pm)，菌體生長繁殖過程中自然形 成菌球體，平均2.5~3.0mm。
[0034] 5)將步驟1)中配制好的PDA液體培養(yǎng)基放入發(fā)酵罐，120~12rC溫度下滅菌20~ 30111；[]1，接種5~10%步驟4)中得到的調(diào)剖用可可毛色二抱菌(/^35扣扣/7_/〇扣3(7^6〇61'〇扭36) CFCC 85199菌液，發(fā)酵溫度28~30°C，每4小時間歇補充PDA液體培養(yǎng)基200ml，控制溶解氧8 ~10%培養(yǎng)7d，得到微生物調(diào)剖菌劑。
[0035] 本實施例使用的發(fā)酵罐為Biostat?C全自動發(fā)酵罐(德國貝朗）。
[0036] 所述的步驟1中制備PDA優(yōu)化培養(yǎng)基是按20%馬鈴馨、3%葡萄糖、0.2% MgS04、0.25% K肥P04W及1%蛋白腺，pH值為自然狀態(tài)下抑值無需調(diào)節(jié);PDA平板培養(yǎng)基:在PDA液體培養(yǎng)基 中添加1.5~2%瓊脂。
[0037] 實施例3 將實施例1中的微生物調(diào)剖菌劑制備成為復合微生物調(diào)剖菌劑，按質(zhì)量百分比組成如 下:微生物調(diào)剖菌劑5~10%;玉米顆粒0.2~0.3%;高分子聚合物0.2~0.5%;助劑0~0.2%; 余量的水。
[0038] 該微生物調(diào)剖菌劑富含微生物生長繁殖過程中自然形成的菌球體及多糖類代謝 產(chǎn)物，是該復合微生物調(diào)剖菌劑的主體物質(zhì)，發(fā)揮主要調(diào)剖功效。
[0039] 實施例4 實施例3中的高分子聚合物為陰離子型、陽離子型、非離子型或兩性離子型聚丙締酷胺 中的一種，分子量200~2200萬，固含量>88%，對微生物調(diào)剖菌劑及玉米顆粒的注入起懸浮 作用。
[0040] 助劑為錠鹽、憐鹽、氮鹽、膨脹淀粉、簇甲基纖維素鋼中的一種或幾種的組合。
[0041 ]玉米顆粒直徑0.5~1mm，為微生物調(diào)剖菌劑提供長效營養(yǎng)成分，及附著生長介質(zhì)。
[0042] 實施例5 在實施例3中所述的復合微生物調(diào)剖菌劑的制備方法，包括如下步驟： 1) 按量稱取高分子聚合物，加入水中，充分攬拌，靜置熟化90~120min，備用； 2) 按量稱取助劑，加入水中，充分攬拌，備用； 3) 按量稱取微生物調(diào)剖菌劑和玉米顆粒，加入所述高分子聚合物溶液中，攬拌;之后加 入助劑溶液，攬拌;補足水量，得到復合微生物調(diào)剖菌劑成品。
[0043] 實施例6 為了克服現(xiàn)有低滲透非裂縫性油藏中化學調(diào)剖劑的缺陷，本實施例提供了將實施例3 中制備的復合微生物調(diào)剖菌劑在低滲透非裂縫性油藏的應用，將所述復合微生物調(diào)剖菌劑 注入油藏地層，其中注入速度為1~2.0倍配注， 總注入量Q =誠2h〇 ; 式中： 31為圓周率； Q為復合微生物調(diào)剖菌劑的用量，單位是m3; R為調(diào)剖半徑； H為油層有效厚度； 〇是孔隙度）。
[0044] 本實施例提供的運種將復合微生物調(diào)剖菌劑應用在低滲透非裂縫性油藏，復合微 生物調(diào)剖菌劑富含微生物生長繁殖過程中自然形成的菌球體及多糖類代謝產(chǎn)物，能夠在高 分子聚合物的懸浮作用下進入低滲透油藏深部，利用緩釋營養(yǎng)成分一一玉米顆粒及助劑進 行生長繁殖，或?qū)⒂衩最w粒作為載體附著生長，對孔滲型高滲帶、微裂縫等進行有效封堵， 注入黏度低，注入性好，工藝簡單，施工安全;而且，該微生物調(diào)剖菌劑不含交聯(lián)劑等有毒成 分，對人體及環(huán)境無害，符合"綠色油曲'建設需求。
[0045] 實施例7:室內(nèi)模擬實驗 在實施例6的基礎上，本實施例利用LDY-2型高溫高壓多功能巖屯、驅(qū)替實驗裝置(江蘇 海安），50°C條件下，按照如下程序進行復合微生物調(diào)剖菌劑巖屯、模擬實驗:①3000mD人工 填砂模型飽和水、飽和油;②水驅(qū)3PV，記錄注入壓力，計算驅(qū)油效率;③將復合微生物調(diào)剖 菌劑稀釋20倍，注入0.1、0.2、0.3?￥，記錄對應注入壓力，計算驅(qū)油效率;@后續(xù)水驅(qū)1、2、 3PV，記錄對應注入壓力，計算驅(qū)油效率;⑤計算復合微生物調(diào)剖菌劑注入前后壓力上升值、 總體驅(qū)油效率提高值。實驗結(jié)果如表4所示。
[0046] 表 4 由表4可W看出，復合微生物調(diào)剖菌劑注入后，可W進入人工填砂巖屯、模型深部，提升 注入壓力，對高滲區(qū)進行有效封堵，提高水驅(qū)波及體積，提高驅(qū)油效率，有利于后續(xù)水驅(qū)或 驅(qū)油劑發(fā)揮作用。復合微生物調(diào)剖菌劑注入前后壓力上升0.5~1.4Mpa，總體采驅(qū)油效率提 高了 7.42~8.89〇/〇。
[0047] 綜上所述，本發(fā)明提供的運種微生物調(diào)剖菌劑應用到低滲透非裂縫性油藏W綠色 環(huán)保的方式解決低滲透非裂縫性油藏深部調(diào)剖問題，擴大水驅(qū)波及體積，提高了原油采收 率。
[004引 W上例舉僅僅是對本發(fā)明的舉例說明，并不構(gòu)成對本發(fā)明的保護范圍的限制，凡 是與本發(fā)明相同或相似的設計均屬于本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
[0049] 實施例8:現(xiàn)場試驗 在實施例6的基礎上，本實施例在現(xiàn)場某低滲透非裂縫性油藏進行了現(xiàn)場試驗?？傋⑷?量Q = 3tR2H?，其中31是圓周率，取3.14，Q是調(diào)剖劑用量，m3;R是調(diào)剖半徑，8m ;H是油層有效 厚度，20.4m ;〇是孔隙度，16.58%)注入速度為1~2.0倍配注。
[0050] 注入后該井調(diào)剖效果顯著，油壓、套壓上升3MPa，有效期內(nèi)累增油96.62噸。
【主權(quán)項】
1. 一種微生物調(diào)剖菌劑，其特征是：微生物調(diào)剖菌劑是調(diào)剖用可可毛色二孢菌 (Zasioc/ijC^oc/ia iAeo/7ro?ae)在優(yōu)化后的PDA培養(yǎng)基中發(fā)酵培養(yǎng)得到的發(fā)酵液，調(diào)剖用可 可毛色二抱菌(Zasiot/ij〇_/oc/ia iAeo/7ro?ae)的保藏登記號為:CFCC 85199。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種微生物調(diào)剖菌劑，其特征是:所述的優(yōu)化后的PDA培養(yǎng)基 至少包括重量百分比的20%馬鈴薯、3%葡萄糖、0.2% MgS〇4、0.25% KH2P〇4以及1%蛋白胨。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種微生物調(diào)剖菌劑，其特征是:所述的發(fā)酵液中調(diào)剖用可可 毛色二孢菌的活菌數(shù)為1 X 109CFU/ml及以上。4. 如權(quán)利要求1-3中任意一項所述的微生物調(diào)剖菌劑的培養(yǎng)方法，該方法包括如下步 驟： 1) 制備PDA優(yōu)化培養(yǎng)基； 2) 將步驟1中配制好的優(yōu)化后的PDA培養(yǎng)基放入滅菌鍋在120~121°C溫度下滅菌20~ 30min，同時放入培養(yǎng)皿與裝入培養(yǎng)基的試管，滅菌完成后，趁熱將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中； 3) 將冷藏的調(diào)剖用可可毛色二抱菌(/^5_/〇〇7/7_/〇〇^3?^6〇/71'〇咖6)0?(]0 85199取出活 化1 0~1 5min，用接種針挑取活化后的調(diào)剖用可可毛色二孢菌（Zasioc/ijC^oc/ia iAeo/7r〇ffiae)CFCC 85199表面菌絲，在步驟2)中裝有PDA平板培養(yǎng)基的培養(yǎng)皿表面進行劃線 培養(yǎng)，在28~30 °C恒溫培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)2~3d; 4) 將步驟1)中配制好的PDA液體培養(yǎng)基放入滅菌鍋在120~121°C溫度下滅菌20~ 30min，接種5~10%步驟3)中得到的調(diào)剖用可可毛色二抱菌(Zasiot/ij〇_/oc/ia iAeo/?ro?ae) CFCC 85199平板培養(yǎng)菌體，在溫度28~30°C、轉(zhuǎn)速120~180rpm條件下?lián)u瓶培養(yǎng)2~3d; 5) 將步驟1)中配制好的PDA液體培養(yǎng)基放入發(fā)酵罐，120~121°C溫度下滅菌20~ 30min，接種5~10%步驟4)中得到的調(diào)剖用可可毛色二抱菌(Zasiot/ij〇_/oc/ia iAeo/?ro?ae) CFCC 85199菌液，發(fā)酵溫度28~30°C，每4小時間歇補充PDA液體培養(yǎng)基200ml，控制溶解氧8 ~10%培養(yǎng)7d，得到微生物調(diào)剖菌劑。5. 根據(jù)權(quán)利要求4所述的微生物調(diào)剖菌劑的培養(yǎng)方法，其特征是:所述的步驟1中制備 PDA優(yōu)化培養(yǎng)基是按20%馬鈴薯、3%葡萄糖、0.2% MgS04、0.25% KH2P04以及1%蛋白胨，PDA平 板培養(yǎng)基:在PDA液體培養(yǎng)基中添加1.5~2%瓊脂。6. 根據(jù)權(quán)利要求1-3中任意一項所述的微生物調(diào)剖菌劑制備的復合微生物調(diào)剖菌劑， 按質(zhì)量百分比組成如下:微生物調(diào)剖菌劑5~10%;玉米顆粒0.2~0.3%;高分子聚合物0.2~ 0.5%;助劑0~0.2%;余量的水。7. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的復合微生物調(diào)剖菌劑，其特征是:所述高分子聚合物為聚丙烯 酰胺中的一種，分子量200~2200萬，固含量多88%。8. 根據(jù)權(quán)利要求6所述的復合微生物調(diào)剖菌劑，其特征是：所述助劑為銨鹽、磷鹽、氮 鹽、膨脹淀粉、羧甲基纖維素鈉中的一種或幾種的組合。9. 如權(quán)利要求6-8中任意一項所述的復合微生物調(diào)剖菌劑的制備方法，包括如下步驟： 1) 按量稱取高分子聚合物，加入水中，充分攪拌，靜置熟化90~120min，備用； 2) 按量稱取助劑，加入水中，充分攪拌，備用； 3) 按量稱取微生物調(diào)剖菌劑和玉米顆粒，加入所述高分子聚合物溶液中，攪拌;之后加 入助劑溶液，攪拌;補足水量，得到復合微生物調(diào)剖菌劑成品。10. 如權(quán)利要求6-8任意一項所述的復合微生物調(diào)剖菌劑在低滲透非裂縫性油藏的應 用，將所述復合微生物調(diào)剖菌劑注入油藏地層，其中注入速度為1~2.0倍配注， 總注入量Q = jtR2H? ; 式中： 31為圓周率； Q為復合微生物調(diào)剖菌劑的用量，單位是m3; R為調(diào)剖半徑； Η為油層有效厚度； Φ是孔隙度）。
【文檔編號】C12N1/14GK106047728SQ201610603082
【公開日】2016年10月26日
【申請日】2016年7月28日 公開號201610603082.8, CN 106047728 A, CN 106047728A, CN 201610603082, CN-A-106047728, CN106047728 A, CN106047728A, CN201610603082, CN201610603082.8
【發(fā)明人】李忠興, 趙繼勇, 李兆國, 李文宏, 張永強, 向中遠, 徐飛艷, 張宏強, 范偉, 陳富林, 薛姝雯
【申請人】中國石油天然氣股份有限公司