一株產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌及其應(yīng)用方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一株產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌及其應(yīng)用方法，將烘干后的海藻磨成粉末，海藻粉末按照一定的比例加入水中，裝入發(fā)酵罐后，在一定溫度，一定時(shí)間下滅菌；種子液制備：篩選得到一株能夠降解褐藻酸的發(fā)酵菌株YIC～BM1，接種至牛肉膏液體培養(yǎng)基過(guò)夜培養(yǎng)；將種子液按照一定質(zhì)量比加入發(fā)酵罐中，在一定條件下發(fā)酵，發(fā)酵后，得到利用微生物發(fā)酵處理褐藻原料制備海藻液。本發(fā)明發(fā)酵過(guò)程穩(wěn)定可控，發(fā)酵周期短，產(chǎn)物功效顯著，適于規(guī)?；a(chǎn)。CGMCC No1215620160302
【專(zhuān)利說(shuō)明】
-株產(chǎn)纖維素酶的巨大芽抱桿菌及其應(yīng)用方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明設(shè)及一種產(chǎn)纖維素酶的巨大芽抱桿菌，本發(fā)明還設(shè)及利用所述巨大芽抱桿 菌制備海藻液的方法W及利用所述巨大芽抱桿菌制備肥料的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 海藻肥料W天然海藻為原料，經(jīng)過(guò)特殊生化工藝處理，提取并保留海藻天然活性 成分，精煉濃縮而形成的一種新型有機(jī)肥料。海藻肥料具有提高作物產(chǎn)量和品質(zhì)，抵抗病蟲(chóng) 害及不良環(huán)境W及改良±壤保持水±的功效，其應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)有巨大的市場(chǎng)需求和良好 的發(fā)展前景。但是，要保障海藻肥料的質(zhì)量，就必須把握好海藻原料和提取工藝兩個(gè)關(guān)鍵環(huán) T。
[0003] 首先，海藻肥料質(zhì)量的優(yōu)劣取決于所用的原料。目前，海藻肥生產(chǎn)企業(yè)所用的原料 主要W褐藻為主，包括泡葉藻、昆布、海帶、馬尾藻等。其他藻類(lèi)如墨角藻、稱苔、石魏、卡帕 藻等也有少數(shù)企業(yè)在用。國(guó)外海藻肥企業(yè)絕大多數(shù)使用褐藻為原料，其中尤W泡葉藻應(yīng)用 最為廣泛如SeasoUMaxicrop等知名品牌，實(shí)際作用效果也表明泡葉藻是優(yōu)質(zhì)的海藻原料。 但是，我國(guó)沿海沒(méi)有泡葉藻分布，國(guó)內(nèi)企業(yè)采用的原料種類(lèi)繁雜，品質(zhì)參差不一，造成海藻 肥產(chǎn)品質(zhì)量良莽不齊，甚至有些廠家打著"海藻肥"的幌子，直接勾兌褐藻酸，黃腐酸、氮憐 鐘等冒充海藻肥，影響了海藻肥質(zhì)量，擾亂了海藻肥市場(chǎng)。
[0004] 其次，決定海藻肥質(zhì)量的第二個(gè)因素是提取工藝。不同的提取工藝對(duì)海藻肥活性 成分的種類(lèi)和含量影響巨大。目前，海藻活性成分的提取方法主要有化學(xué)法、物理法W及生 物法?；瘜W(xué)法主要是利用酸、堿及有機(jī)溶劑處理海藻細(xì)胞，使細(xì)胞消解或內(nèi)源物質(zhì)增溶，該 方法操作簡(jiǎn)單，容易實(shí)現(xiàn)，也是國(guó)內(nèi)外絕大多數(shù)海藻肥生產(chǎn)企業(yè)采用的方法。但是，化學(xué)試 劑對(duì)海藻細(xì)胞內(nèi)的活性物質(zhì)成分的破壞是相當(dāng)大的，并且殘留的有機(jī)試劑對(duì)環(huán)境也是潛在 的危害。物理法的原理是控制壓力，溫度等物理環(huán)境條件，利用機(jī)械力使海藻細(xì)胞破碎，內(nèi) 容物釋放。該方法雖然工藝清潔、環(huán)境友好，但是對(duì)于儀器設(shè)備的要求嚴(yán)苛，反應(yīng)條件變化 劇烈，成本較高，難W實(shí)現(xiàn)大規(guī)模生產(chǎn)。生物法包括酶法降解和微生物發(fā)酵兩種方法，其主 要原理是破壞海藻細(xì)胞壁結(jié)構(gòu)并降解大分子物質(zhì)為植物容易吸收利用的小分子物質(zhì)，該方 法反應(yīng)溫和，產(chǎn)物多元化，整個(gè)生產(chǎn)過(guò)程安全環(huán)保無(wú)污染，是理想的海藻肥生產(chǎn)方法。
[0005] 利用微生物發(fā)酵法生產(chǎn)海藻肥料的研究相對(duì)較少，僅有的幾例研究是選用多種微 生物對(duì)海藻原料進(jìn)行類(lèi)似堆肥發(fā)酵或好氧發(fā)酵處理，存在發(fā)酵過(guò)程可控性差，發(fā)酵周期長(zhǎng)， 目標(biāo)產(chǎn)物不明確等問(wèn)題，難W滿足工業(yè)化生產(chǎn)要求的統(tǒng)一，穩(wěn)定，可控的標(biāo)準(zhǔn)，產(chǎn)品的質(zhì)量 難W保障。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是，第一、提供一種性能優(yōu)良的產(chǎn)纖維素酶的巨大芽 抱桿菌;第二、提供利用所述巨大芽抱桿菌制備海藻液和海藻肥的方法，該方法發(fā)酵過(guò)程穩(wěn) 定可控，發(fā)酵周期短，產(chǎn)物功效顯著，適于規(guī)?；a(chǎn)。
[0007] 為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本發(fā)明采用W下技術(shù)方案： 一株產(chǎn)纖維素酶的巨大芽抱桿菌YIC~BM1，保藏號(hào)為CGMCC N012156,保藏單位：中國(guó) 微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中屯、，保藏單位地址:北京市朝陽(yáng)區(qū)北辰西路1號(hào)院 3號(hào)中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，保藏日期:2016年3月2日，分類(lèi)命名：巨大芽抱桿菌 me 邑aterium。
[0008] 一種利用所述的巨大芽抱桿菌發(fā)酵處理褐藻原料制備海藻液的方法，其特征在于 按照W下步驟進(jìn)行： 1 )、制備海藻粉末:將烘干后的海藻磨成粉末； 2) 、制備產(chǎn)品A:海藻粉末與水按照質(zhì)量比1~10:100裝入發(fā)酵罐中，在100~150°C條件 下滅菌15~35min，得到產(chǎn)品A; 并制備種子液:將所述的巨大芽抱桿菌YIC~BM1接種至液體培養(yǎng)基培養(yǎng)20~30小時(shí)； 巨大芽抱桿菌YIC~BM1與培養(yǎng)基之間的體積比為1~10:100; 3) 、制備產(chǎn)品B:將種子液加入到產(chǎn)品A中得到產(chǎn)品B，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為1 ~10:100; 4) 、產(chǎn)品B發(fā)酵:在溫度為20°C~40°C，pH5~9的條件下對(duì)產(chǎn)品B進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間為6 ~10天； 5) 、制備海藻液和海藻渣:收集發(fā)酵液即為利用微生物發(fā)酵處理褐藻原料制備海藻液； 并收集海藻渣。
[0009] 所述液體培養(yǎng)基的抑7.0~7.4,并按照W下質(zhì)量比配成:徑甲基纖維素鋼10份，蛋 白腺3份，酵母粉0.5份，硝酸錠2份，硫酸儀0.3份，憐酸二氨鐘2份，氯化巧0.3份，蒸饋水 1000份。
[0010] 優(yōu)選地，步驟4)在溫度為35°C，p冊(cè).0的條件下對(duì)產(chǎn)品B進(jìn)行發(fā)酵。
[0011] 所述海藻是指鼠尾藻，銅藻和馬尾藻中的一種或任意比例的兩種W上。
[001 ^ 步驟1)所述粉末目數(shù)為40~60目。
[0013] 含有所述的海藻液W及氮肥、憐肥和鐘肥中的一種或者任意比例的兩種W上。
[0014] 含有所述的海藻渣W及氮肥、憐肥和鐘肥中的一種或者任意比例的兩種W上。
[0015] 所述巨大芽抱桿菌YIC~BM1的生物特性如下： 纖維素培養(yǎng)基:徑甲基纖維素鋼15g，硝酸錠Ig，硫酸儀Ig，憐酸二氨鐘2g，瓊脂20g，蒸 饋水 1000ml。
[0016] 液體發(fā)酵培養(yǎng)基:徑甲基纖維素鋼lOg，蛋白腺3g，酵母粉0.5g，硝酸錠2g，硫酸儀 0.3g，憐酸二氨鐘2g，氯化巧0.3g，蒸饋水1000ml，抑7.0-7.4。
[0017] YIC~BM1菌株在纖維素培養(yǎng)基平板上生長(zhǎng)4她后，菌落圓形，白色，表面平整。顯微 鏡觀察菌株為革蘭氏陽(yáng)性，桿狀，能運(yùn)動(dòng)，產(chǎn)芽抱。生長(zhǎng)溫度范圍20~40°C，PH范圍6-10， NaCl濃度范圍0~20%，菌株最適生長(zhǎng)溫度37°C，最適生長(zhǎng)抑7.5。觸酶，氧化酶，半乳糖巧酶 陽(yáng)性，嗎I噪，VP實(shí)驗(yàn)陰性，不還原硝酸;能夠利用葡萄糖，甘露糖，乳糖，棉子糖，薦糖，阿拉伯 糖，木糖，甘露醇，山梨醇。菌株leSrDNA序列見(jiàn)附件1，系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)如圖2所示。根據(jù)其生理生 化特征，leSrDNA序列及系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)信息，將該菌株鑒定為巨大芽抱桿菌如 me卿teriumsYIC~BM1菌株的leSrDNA序列作為本發(fā)明說(shuō)明書(shū)附件另附。
[0018] 本發(fā)明具有W下有益技術(shù)效果： 1、采用本發(fā)明得到的海洋來(lái)源的巨大芽抱桿菌YIC~BMl對(duì)海藻發(fā)酵，發(fā)酵過(guò)程穩(wěn)定可 控，發(fā)酵周期短，產(chǎn)物功效顯著，適于規(guī)?；a(chǎn)。
[0019] 2、本發(fā)明得到的發(fā)酵液具有水溶性好，易于植物吸收利用，同時(shí)作為一種重要的 信號(hào)分子，能夠參與植物的生長(zhǎng)調(diào)節(jié)和誘導(dǎo)抗病過(guò)程促進(jìn)植物的生長(zhǎng)，提高植物對(duì)不良環(huán) 境及病蟲(chóng)害的抵抗力。
[0020] 3、本發(fā)明得到的海藻肥具有肥效顯著的特點(diǎn)。
【附圖說(shuō)明】
[0021] 圖1是顯微觀察YIC~BM1菌株的革蘭氏染色及聚集成團(tuán)現(xiàn)象圖。
[0022] 圖2基于leSrDNA序列構(gòu)建的YIC~BM1菌株系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)示意圖。
[0023] 圖3是不同溫度對(duì)YIC~BM1菌株產(chǎn)酶的影響的示意圖。
[0024] 圖4是不同抑對(duì)YIC~BM1菌株產(chǎn)酶的影響示意圖。
【具體實(shí)施方式】
[0025] 下面結(jié)合具體實(shí)例進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明。
[0026] 圖1看出，YIC~BM1菌株為革蘭氏陽(yáng)性菌； 圖2看出，YIC~BM1菌株的親緣關(guān)系與巨大芽抱桿菌最近； 圖3看出，YIC~BM1菌株的最適產(chǎn)酶溫度為35°C ; 圖4看出，YIC~BM1菌株的最佳產(chǎn)酶pH為6.0。
[0027] W下是本發(fā)明海藻液制備實(shí)施例。
[0028] 實(shí)施例1 將洗凈烘干后的新鮮鼠尾藻磨成50~60目粉末； 海藻粉末與水按照質(zhì)量比2:100裝入發(fā)酵罐中，在115°(：條件下滅菌35111111，得到產(chǎn)品八； 并制備種子液:將所述的巨大芽抱桿菌YIC~BM1接種至液體培養(yǎng)基培養(yǎng)20小時(shí);所述巨大 芽抱桿菌YIC~BM1的保藏號(hào)為CGMCC N012156;所述液體培養(yǎng)基為:徑甲基纖維素鋼lOg，蛋 白腺3g，酵母粉0.5g，硝酸錠2g，硫酸儀0.3g，憐酸二氨鐘2g，氯化巧0.3g，蒸饋水1000ml的 混合物，pH7.0~7.4;巨大芽抱桿菌YIC~BM1和培養(yǎng)基的體積比例為2:100。將種子液加入 到產(chǎn)品A中，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為1:100，得到產(chǎn)品B;在溫度為20°C，P冊(cè).5~6.0 的條件下對(duì)產(chǎn)品B進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間為7天;收集發(fā)酵液即為利用微生物發(fā)酵處理褐藻原 料制備海藻液;并收集海藻渣。
[0029] 實(shí)施例2 將洗凈烘干后的新鮮銅藻和新鮮馬尾藻按照質(zhì)量比1:1復(fù)配，磨成50~60目粉末； 海藻粉末與水按照質(zhì)量比4:100裝入發(fā)酵罐中，在115°(：條件下滅菌25111111，得到產(chǎn)品八； 并制備種子液:將所述的巨大芽抱桿菌YIC~BM1接種至液體培養(yǎng)基培養(yǎng)22小時(shí);所述巨大 芽抱桿菌YIC~BM1的保藏號(hào)為CGMCC N012156;所述液體培養(yǎng)基為:徑甲基纖維素鋼lOg，蛋 白腺3g，酵母粉0.5g，硝酸錠2g，硫酸儀0.3g，憐酸二氨鐘2g，氯化巧0.3g，蒸饋水1000ml的 混合物，pH7.0~7.4;巨大芽抱桿菌YIC~BM1和培養(yǎng)基的體積比例為5:100。將種子液加入 到產(chǎn)品A中，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為5:100，得到產(chǎn)品B;在溫度為25°C，P冊(cè).5~7.0 的條件下對(duì)產(chǎn)品B進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間為8天;收集發(fā)酵液即為利用微生物發(fā)酵處理褐藻原 料制備海藻液;并收集海藻渣。
[0030] 實(shí)施例3 將洗凈烘干后的新鮮馬尾藻磨成50~60目粉末； 海藻粉末與水按照質(zhì)量比6:100裝入發(fā)酵罐中，在125°(：條件下滅菌35111111，得到產(chǎn)品八； 并制備種子液:將所述的巨大芽抱桿菌YIC~BM1接種至液體培養(yǎng)基培養(yǎng)24小時(shí);所述巨大 芽抱桿菌YIC~BM1的保藏號(hào)為CGMCC N012156;所述液體培養(yǎng)基為:徑甲基纖維素鋼lOg，蛋 白腺3g，酵母粉0.5g，硝酸錠2g，硫酸儀0.3g，憐酸二氨鐘2g，氯化巧0.3g，蒸饋水1000ml的 混合物，pH7.0~7.4;巨大芽抱桿菌YIC~BM1和培養(yǎng)基的體積比例為8:100。將種子液加入 到產(chǎn)品A中，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為4:100,得到產(chǎn)品B;在溫度為30°C，pH7~7.5的 條件下對(duì)產(chǎn)品B進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間為9天;收集發(fā)酵液即為利用微生物發(fā)酵處理褐藻原料 制備海藻液;并收集海藻渣。
[0031] 實(shí)施例4 將洗凈烘干后的新鮮馬尾藻磨成50~60目粉末； 海藻粉末與水按照質(zhì)量比9:100裝入發(fā)酵罐中，在140°(：條件下滅菌15111111，得到產(chǎn)品八； 并制備種子液:將所述的巨大芽抱桿菌YIC~BM1接種至液體培養(yǎng)基培養(yǎng)20小時(shí);所述巨大 芽抱桿菌YIC~BM1的保藏號(hào)為CGMCC N012156;所述液體培養(yǎng)基為:徑甲基纖維素鋼lOg，蛋 白腺3g，酵母粉0.5g，硝酸錠2g，硫酸儀0.3g，憐酸二氨鐘2g，氯化巧0.3g，蒸饋水1000ml的 混合物，pH7.0~7.4;巨大芽抱桿菌YIC~BM1和培養(yǎng)基的體積比例為5:100。將種子液加入 到產(chǎn)品A中，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為8:100,得到產(chǎn)品B;在溫度為35°C，p冊(cè)~8.5的 條件下對(duì)產(chǎn)品B進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間為9天;收集發(fā)酵液即為利用微生物發(fā)酵處理褐藻原料 制備海藻液;并收集海藻渣。
[0032] W下是含有本發(fā)明海藻液的肥料的制備實(shí)施例。
[0033] 實(shí)施例5肥料:將海藻液與烙融尿液按照質(zhì)量比1:50混合，經(jīng)噴漿、造粒、烘干、篩 分和包裝后得到海藻氮肥。
[0034] 實(shí)施例6肥料:將海藻液與氮肥、憐肥和鐘肥按照質(zhì)量比1:20:30:35混合，經(jīng)造粒、 烘干、篩分和包裝后得到海藻復(fù)混肥。
[0035] W下是含有本發(fā)明海藻渣的肥料的制備實(shí)施例。
[0036] 實(shí)施例7肥料:將實(shí)施例一得到的海藻渣與氮肥和有機(jī)質(zhì)按照質(zhì)量比1: 20:10混 合，經(jīng)造粒、烘干、篩分和包裝后得到海藻有機(jī)肥。
[0037] 實(shí)施例8肥料:將實(shí)施例一得到的海藻渣與氮肥、憐肥、鐘肥和有機(jī)質(zhì)按照質(zhì)量比 1:15:20:25:10混合，經(jīng)造粒、烘干、篩分、包裝后得到N: 10，P2〇5:14，K20 :6，有機(jī)質(zhì)：20的有 機(jī)無(wú)機(jī)肥。
[0038] 實(shí)施例6至8中，所述氮肥是硫酸錠，憐肥是憐酸一錠，鐘肥是硫酸鐘，有機(jī)質(zhì)是磨 茹渣。
[0039] 下面結(jié)合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明海藻液的有益效果： 實(shí)驗(yàn)?zāi)康模?下面結(jié)合實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)一步說(shuō)明本發(fā)明肥料的有益效果。
[0040] 實(shí)驗(yàn)一:海藻提取液對(duì)黃瓜種子萌發(fā)影響 一材料與方法： 1.1試驗(yàn)地點(diǎn)：五洲豐農(nóng)業(yè)科技有限公司實(shí)驗(yàn)室。
[0041] 1.2黃瓜品種:津春4號(hào)。
[0042] 1.3供試肥料:實(shí)施例1所述海藻生物發(fā)酵提取液。
[0043] 1.4試驗(yàn)設(shè)計(jì)： 試驗(yàn)將海藻提取液分別稀釋200、400、600、800倍配置成海藻肥溶液，^清水為對(duì)照。共 5個(gè)處理，4次重復(fù)。將黃瓜種子放入各不同稀釋濃度的海藻溶液和清水(CK)中浸種lOh，之 后用清水沖洗。用四分法取種子100粒，W適當(dāng)間距平放在鋪有直徑為10cm濾紙的培養(yǎng)皿 中，W清水保持濕潤(rùn)，置于生化培養(yǎng)箱中28°C暗培養(yǎng)，每天及時(shí)補(bǔ)充水分及通氣，并記錄萌 發(fā)種子數(shù)，計(jì)算發(fā)芽勢(shì)和發(fā)芽率。幼苗子葉張開(kāi)后，測(cè)量幼苗的株高、根長(zhǎng)。
[0044] 2結(jié)果與分析： 2.1不同處理對(duì)黃瓜種子萌發(fā)的影響 表1海藻液浸種對(duì)黃瓜種子萌發(fā)的影響
由表1可見(jiàn)，使用海藻提取液對(duì)黃瓜種子萌發(fā)均有不同程度的促進(jìn)作用，浸種可W是種 子萌發(fā)快而整齊，促進(jìn)幼苗的生長(zhǎng)，其中發(fā)芽率分別比對(duì)照增加3.5%、5.5%、5.0%和1.8%，發(fā) 芽勢(shì)分別比對(duì)照增加5.4%、7.2%、4.6%和1.5%，株高分別比對(duì)照增加15.5%、44.8%、36.2%和 19.0%，根長(zhǎng)分別比對(duì)照增加16.1%、51.6%、38.7%和6.4%;其作用表現(xiàn)為隨著稀釋倍數(shù)的增 大，呈現(xiàn)由低到高再到低的變化。其中稀釋200倍和800倍對(duì)黃瓜發(fā)芽率、發(fā)芽勢(shì)的影響差異 不顯著，表明海藻提取液的濃度過(guò)低或過(guò)高效果都不理想。稀釋400倍和600倍兩個(gè)處理作 用最為顯著，不僅對(duì)黃瓜種子提高發(fā)芽率和發(fā)芽勢(shì)最用明顯，而且對(duì)幼苗株高、根長(zhǎng)的促進(jìn) 也最顯著，其中又W400倍為最優(yōu)。
[0045] 實(shí)驗(yàn)二:海藻復(fù)合肥對(duì)黃瓜產(chǎn)量的影響 1材料與方法： 1.1試驗(yàn)地點(diǎn):煙臺(tái)市農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜所溫室，中性棟壤，中高肥力。
[0046] 1.2黃瓜品種:津春4號(hào)。
[0047] 1.3供試肥料：15-15-15=元復(fù)合肥，添加海藻液的15-15-15=元復(fù)合肥。
[0048] 1.4試驗(yàn)設(shè)計(jì)：試驗(yàn)設(shè)2個(gè)處理，3次重復(fù)，共6個(gè)小區(qū)，各小區(qū)隨機(jī)排列。小區(qū)面積 15m2,定植72株。小區(qū)單收分別計(jì)算產(chǎn)量。處理1畝施1000kg腐熟雞糞和lOOkgS元復(fù)合肥作 基肥，處理2畝施1000kg腐熟雞糞和100kg添加海藻液的S元復(fù)合肥作基肥。
[0049] 2結(jié)果與分析 表2海藻復(fù)合肥對(duì)黃瓜產(chǎn)量的影響
由表2可W看出，添加海藻液復(fù)合鵬與常規(guī)施鵬處理相比，小區(qū)平均增產(chǎn)21.5kg，折合 畝產(chǎn)增產(chǎn)957.化g，綜合增產(chǎn)17.2%。并且海藻肥處理區(qū)黃瓜生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)，莖粗、根系發(fā)達(dá)，耐寒 性強(qiáng)，葉肉厚，葉色濃，病蟲(chóng)害輕，特別是生長(zhǎng)中后期肥效尤其明顯。
[0050]實(shí)驗(yàn)=:海藻有機(jī)肥對(duì)黃瓜產(chǎn)量的影響 1材料與方法： 1.1試驗(yàn)地點(diǎn):煙臺(tái)市農(nóng)業(yè)科學(xué)院蔬菜所溫室，中性棟壤，中高肥力。
[0051 ] 1.2黃瓜品種:津春4號(hào)。
[0化2] 1.3供試肥料:普通有機(jī)肥，海藻渣有機(jī)肥。
[0053] 1.4試驗(yàn)設(shè)計(jì):試驗(yàn)設(shè)2個(gè)處理，3次重復(fù)，共6個(gè)小區(qū)，各小區(qū)隨機(jī)排列。小區(qū)面積 15m2,定植72株。小區(qū)單收分別計(jì)算產(chǎn)量。處理1畝施500kg普通有機(jī)肥和100kgl5-15-15S 元復(fù)合肥作基肥，處理2畝施500kg海藻渣有機(jī)肥和100kgl5-15-15S元復(fù)合肥作基肥。 [0化4] 2結(jié)果與分析 表3海藻渣有機(jī)肥對(duì)黃瓜產(chǎn)量的影響
由表3可W看出，海藻渣有機(jī)肥與晉通有機(jī)肥處理相比，小區(qū)平均增產(chǎn)26.2kg，折合畝 產(chǎn)增產(chǎn)1163.5kg，綜合增產(chǎn)18.9%。海藻渣有機(jī)肥處理的增產(chǎn)效果顯著，同時(shí)黃瓜生長(zhǎng)勢(shì)強(qiáng)， 莖粗、根系發(fā)達(dá)，葉肉厚，葉色濃綠，對(duì)黃瓜的生長(zhǎng)和產(chǎn)量有顯著的影響。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一株產(chǎn)纖維素酶的巨大芽孢桿菌YIC~BM1，保藏號(hào)為CGMCC Nol2156。2. -種利用權(quán)利要求1所述的巨大芽孢桿菌發(fā)酵處理褐藻原料制備海藻液的方法，其 特征在于按照以下步驟進(jìn)行： 1 )、制備海藻粉末:將烘干后的海藻磨成粉末； 2) 、制備產(chǎn)品A:海藻粉末與水按照質(zhì)量比1~10:100裝入發(fā)酵罐中，在100~150°C條件 下滅菌15~35min，得到產(chǎn)品A; 并制備種子液:將所述的巨大芽孢桿菌YIC~BM1接種至液體培養(yǎng)基培養(yǎng)20~30小時(shí)； 巨大芽孢桿菌HC~BM1與培養(yǎng)基之間的體積比為1~10:100; 3) 、制備產(chǎn)品B:將種子液加入到產(chǎn)品A中得到產(chǎn)品B，其中種子液與產(chǎn)品A的質(zhì)量比為1 ~10:100; 4) 、產(chǎn)品B發(fā)酵:在溫度為20°C~40°C，pH5~9的條件下對(duì)產(chǎn)品B進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵時(shí)間為6 ~10天； 5) 、制備海藻液和海藻渣:收集發(fā)酵液即為利用微生物發(fā)酵處理褐藻原料制備海藻液； 并收集海藻渣。3. 如權(quán)利要求2所述的利用微生物發(fā)酵處理褐藻原料制備海藻液的方法，其特征在于： 所述液體培養(yǎng)基的PH7.0~7.4,并按照以下質(zhì)量比配成:羥甲基纖維素鈉10份，蛋白胨3份， 酵母粉〇. 5份，硝酸銨2份，硫酸鎂0.3份，磷酸二氫鉀2份，氯化鈣0.3份，蒸餾水1000份。4. 如權(quán)利要求2所述的利用微生物發(fā)酵處理褐藻原料制備海藻液的方法，其特征在于： 步驟4)在溫度為35°C，pH6.0的條件下對(duì)產(chǎn)品B進(jìn)行發(fā)酵。5. 如權(quán)利要求2所述的利用微生物發(fā)酵處理褐藻原料制備海藻液的方法，其特征在于： 所述海藻是指鼠尾藻，銅藻和馬尾藻中的一種或任意比例的兩種以上。6. 如權(quán)利要求2所述的利用微生物發(fā)酵處理褐藻原料制備海藻液的方法，其特征在于： 步驟1)所述粉末目數(shù)為40~60目。7. 含有權(quán)利要求2~6任意一項(xiàng)所述的海藻液的肥料，其特征在于:含有所述的海藻液 以及氮肥、磷肥和鉀肥中的一種或者任意比例的兩種以上。8. 含有權(quán)利要求2~6任意一項(xiàng)所述的海藻渣的肥料，其特征在于:含有所述的海藻渣 以及氮肥、磷肥和鉀肥中的一種或者任意比例的兩種以上。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK106047775SQ201610670135
【公開(kāi)日】2016年10月26日
【申請(qǐng)日】2016年8月15日 公開(kāi)號(hào)201610670135.8, CN 106047775 A, CN 106047775A, CN 201610670135, CN-A-106047775, CN106047775 A, CN106047775A, CN201610670135, CN201610670135.8
【發(fā)明人】王學(xué)江, 王明鵬, 李峰, 劉正一, 袁蕊, 秦松
【申請(qǐng)人】五洲豐農(nóng)業(yè)科技有限公司, 中國(guó)科學(xué)院煙臺(tái)海岸帶研究所